8钝顶螺旋藻多糖对急性白血病病人NK细胞的作用
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程海保尔螺旋藻的功效介绍关于程海保尔丽江程海保尔生物开发有限公司2006年8月正式成立，经过十年的不断努力，企业得到很大的发展，形成了以螺旋藻为主，红球藻和玛咖为辅的全产业链运营模式，在研发方面，获得二十多项国家专利，成为国内同行业中专利技术最多的企业；与宁波大学、中国药科大学、云南科学发展研究院、云南师范大学进行战略合作，取得十二项科技成果；由中国工程院院士丁德文、中国螺旋藻专家胡鸿钧、宁波大学生命工程院长严小军等专家组成的程海保尔“丁德文院士（专家）工作站”，专门从事程海保尔螺旋藻、红球藻等微藻的精深研究。
关于螺旋藻的药理作用：1、抗辐射损伤作用：放射照射前、后给小鼠口服螺旋藻，均能提高小鼠存活率，有效剂量为每只3.75-15mg(156-625mg/kg体重，服用次数2-5次)。
螺旋藻预防给药3次，经7.5Gy照射后第9天，对受照射动物敏感器官的观察表明，螺旋藻可使照射小鼠的胸腺重量、骨髓DNA含量高于对照组，这表明螺旋藻对免疫器官和造血组织有保护作用，这可能是螺旋藻抗辐射损伤作用的机制之一。
2、抗菌作用：钝顶螺旋藻对革兰阳性菌有抑菌作用，含脂质和三萜类化合物的钝顶螺旋藻的乙醇提取物抑菌活性最强，含甾醇的提取物也有抑菌作用，但作用较弱。
钝顶螺旋藻对革兰阴性菌无抑制作用。
3、抗癌作用：螺旋藻对短期一次注射和长期多次注射1，2－二甲肼诱导的NIH小鼠和标准差大鼠大肠变性隐窝的形成有抑制作用。
螺旋藻多糖对体内腹水型肝癌细胞有显着的抑制率，治疗组为54.0%，防治组达91.4%，对癌细胞DNA、RNA和蛋白质的抑制作用均随作用时间延长而加强。
4、光敏作用：用含0.25mg/ml的藻蓝蛋白(藻青素)处理培养的小鼠骨髓瘤细胞，再经514nm激光辐照300J/cm2，发现癌细胞存活率仅15%；而单纯采用激光辐照或藻蓝蛋白处理，细胞存活率为69%和71%。
人大肠癌细胞株HR8348培养后分别用100μg，50μg，25μg的钝顶螺旋藻的藻蓝蛋白处理，经光波为630nm的铜激光辐照12J／cm2，用MTT法检测培养癌细胞存活率分别为22.2%，37.6%和89.7%，显示良好的剂量效应。
螺旋藻多糖体外对小鼠免疫功能的影响
螺旋藻多糖体外对小鼠免疫功能的影响王晓杨;于红【期刊名称】《实用中医药杂志》【年(卷),期】2004(020)009【摘要】目的:研究螺旋藻多糖体外对小鼠淋巴细胞转化、NK细胞活性和脾细胞分泌IL-2的影响.方法:以MTT法测定螺旋藻多糖对小鼠淋巴细胞转化的影响,乳酸脱氢酶法测定NK细胞活性,ELISA法测定螺旋藻多糖对脾细胞分泌IL-2的影响.结果:螺旋藻多糖可促进ConA诱导的体外小鼠淋巴细胞转化,且表现出剂量依赖关系.PSP对正常小鼠NK细胞活性无明显影响,但可在一定程度上对抗地塞米松的免疫抑制作用,抑制率由58.7%降低至14.92%～30.09%.ConA及不同浓度的螺旋藻多糖均能不同程度的促进小鼠脾细胞分泌IL-2,与对照组相比有显著差异,其中ConA的刺激作用强于螺旋藻多糖,呈时间依赖性.结论:螺旋藻多糖对小鼠免疫功能有一定的调节作用.【总页数】2页(P482-483)【作者】王晓杨;于红【作者单位】金华市职业技术学院医学院,浙江,金华,321000;青岛大学医学院,山东,青岛,266012【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.复合螺旋藻多糖对S180荷瘤小鼠免疫功能的影响 [J], 刘永举;贾玉辉;唐超;葛蔚;王清吉2.黄芪桂枝五物汤中总黄酮对小鼠免疫功能影响的体外研究 [J], 李树义;赵志强;张庆波;边洪荣;贾丽霞3.人参皂甙Rg3对Lewis肺癌细胞体外增殖及荷瘤小鼠免疫功能的影响 [J], 张玉梅;王家晓4.TLR7刺激对Balb/c小鼠树突状细胞免疫功能影响的体外研究 [J], 弓莉;王元占;张志丽;阳大庆;徐梅;吴砂;卢晓5.两种乳酸菌发酵液对人胃癌细胞株BGC823体外增殖及小鼠免疫功能的影响 [J], 牛琼;马云;杜镇镇;张珍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
枸杞多糖在白血病患者中的应用及对HL-60和NK细胞杀伤活性的影响
枸杞多糖在白血病患者中的应用及对HL-60和NK细胞杀伤活性的影响肖芳;吴琦【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2017(037)013【摘要】目的探讨枸杞多糖在白血病患者中的应用及对人前髓细胞HL-60表面靶细胞表面相应配体(MICA)蛋白表达水平和自然杀伤(NK)细胞杀伤活性的影响及机制.方法取白血病患者HL-60细胞,随机分为观察1组、观察2组及观察3组,分别放入浓度为6、8、10 mg/ml枸杞多糖共同培养,未经枸杞多糖作用的30例白血病患者HL-60细胞为对照组,采用流式细胞仪测定4组细胞表面MICA蛋白表达水平.将4组获得的溶液与NK细胞相互混合,20 h后采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测NK细胞对4组HL-60细胞的杀伤活性进行测定.结果观察1组MICA表达率显著低于观察2组、观察3组(P<0.05);观察1组、观察2组、观察3组MICA表达率高于对照组(P<0.05);随着靶细胞、效应细胞比的不断增加,4组NK 细胞杀伤活性均出现上升趋势;观察1组、观察2组及观察3组NK细胞杀伤活性高于对照组(P<0.05);观察3组NK细胞杀伤活性,高于观察1组、观察2组(P<0.05).结论白血病患者体内HL-60细胞在枸杞多糖的孵育下能提高细胞MICA 表达率,且呈浓度正相关性.同时,枸杞多糖能提高机体内NK细胞的杀伤活性,能清除微小病灶.【总页数】3页(P3140-3142)【作者】肖芳;吴琦【作者单位】广州中医药大学,广东广州 510000;广东医科大学【正文语种】中文【中图分类】R733.7【相关文献】1.AS2O3对CD34+白血病细胞NKG2D配体表达及NK杀伤活性的影响 [J], 牛新清;胡亮杉;郭坤元;宋朝阳;涂三芳;梅家转2.深低温冻存对正常人和白血病患者天然杀伤细胞杀伤活性的影响 [J], 陈宝安3.5-氮-2'脱氧胞苷对急性粒细胞性白血病细胞系HL-60中CDH13基因甲基化的影响 [J], 陶钧宇;王艳丽4.中药复方对L1210白血病小鼠NK细胞杀伤活性的影响 [J], 黄文玉;刘媛5.半乳糖凝集素-3(Gal-3)在卵巢癌细胞系中的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响 [J], 张蕊;张瑾;安娜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
体外扩增培养的nkinkt细胞及...
前言NK细胞（natural killer），即自然杀伤细胞,是机体固有免疫的组成细胞。
NK细胞主要来源于骨髓，在骨髓微环境中逐渐发育成熟，分布至外周血中。
当病毒感染细胞、寄生虫侵入等感染因素发生及自身细胞衰老、恶变时，NK细胞可以识别这些异常的细胞，通过穿孔素/颗粒酶途径直接裂解异常细胞，或者通过Fas-FasL、激活抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)途径达到杀伤靶细胞的目的。
iNKT细胞，即恒定自然杀伤T细胞（invariant natural killer T cell）,是体内NKT细胞的一类亚群，具有CD1d限制性。
胸腺中的CD4+CD8+双阳性的前体细胞发育为成熟的iNKT细胞后进入外周淋巴组织，主要通过分泌不同的细胞因子调节机体Th1/Th2类免疫应答的平衡，也可以通过与树突状细胞的相互作用增强NK细胞和细胞毒性T细胞的作用，以杀伤肿瘤。
γδT细胞起源于骨髓来源的CD4-CD8-双阴性前体细胞，在胸腺中经历阴性选择故获得自身免疫耐受性，不经历阳性选择故获得非MHC限制性，识别抗原谱广，类似于NK细胞，γδT细胞不仅可以直接通过穿孔素/颗粒酶途径直接杀伤靶细胞，还可以通过Fas-FasL 途径诱导靶细胞凋亡，并且可以分泌细胞因子和趋化因子，调节体液免疫和细胞免疫。
γδT细胞甚至可以作为专职的抗原提呈细胞发挥抗原呈递作用。
以上3种细胞均为人体免疫系统的重要组分，在机体抗感染、抗肿瘤等免疫反应中拥有巨大潜能，近年来相关研究热度较高，主要集中在如何提高细胞扩增效率，以及扩增后的效应细胞是否能够保持甚至提高杀伤肿瘤和抗感染的能力。
本课题中，我们采集健康供者的静脉血，分离得到外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMCs），在体外活化并大量扩增NK细胞、iNKT细胞和γδT细胞，通过对比扩增培养前后的细胞数量，及扩增培养后得到的免疫细胞的表面分子表达情况、细胞因子分泌情况、对肿瘤细胞的杀伤活性，进一步探索以上细胞体外扩增的效率及以上细胞应用于肿瘤治疗的可行性，这将为恶性肿瘤的过继性细胞免疫治疗的临床应用提供有力的实验室依据。
螺旋藻的开发利用
螺旋藻的营养价值
• 蛋白质含量高，螺旋藻中的蛋白质含量高达50%～70% • 螺旋藻中含有丰富的氨基酸，含有人体必需8种必需氨基酸，并且氨 基酸的含量完全符合联合国粮农机构（FAO）所制定的理想氨基酸组 成标准 • 微量元素和矿物质元素丰富 • 维生素含量全面
螺旋藻的应用前景
• 现代科学的研究已经证实螺旋藻含有丰富的蛋白质， 多糖、维生素和微量元素等，营养成分含量十分均衡、 合理，具有很好的营养价值。 • 在医药方面，螺旋藻中含有γ-亚麻酸，能够抑制癌细 胞的增殖，有助于治疗关节炎、心脏病、肥胖症、锌 缺乏症等。螺旋藻具有提高机体免疫力，抵抗艾滋病 的功效，有效促进人体内胰岛素的分泌，使糖尿病好 转。螺旋藻中微量元素有硒和锗的存在，对人体因缺 乏硒和锗二引起的一系列病变有一定的预防和辅助治 疗作用等。随着研究的深入，积极开发螺旋藻的食品 及药物制剂，将会更好地造福人类。
β-胡萝卜素
• 是维生素A源 机体缺乏维生素A时，一分子 β-胡萝卜素可分解为2分子维生素A • 抗衰老 清除自由基作用 • 增强机体免疫系统功能 • 对心脏和其他器官提供抗氧化保护
维生素A
β-胡萝卜素是重要的类胡萝卜素，属于维生素A源
其他成分
• 矿物质和微量元素
• 螺旋藻中还含有一些矿物质和微量元素（如钙、铁、锌、镁、钾、硒 等），人体可以更好地吸收利用这些矿物质和微量元素与有机物结合 后的复合物，可以更好地维持机体新陈代谢的平衡。
繁 殖方式
• 进行无性二分裂繁殖，繁殖结果使藻丝长度迅速 增加。钝顶螺旋藻主要靠藻丝断裂增加丝状体的 数量，有时也形成“藻殖段”，藻殖段细胞分裂 成新的螺旋状藻丝。
主要特征
螺旋藻属于原核植物，蓝藻类细胞无色素体，色 素分布在原生质体外部的色素区，蓝绿色。原生 质体内部有一无色的中央区，类似其他藻类的细 胞核，但无核仁和核膜。钝顶螺旋藻为丝状体， 藻丝螺旋状，无横隔壁，蓝绿色；藻丝宽4～5微 米，长400～600微米；藻丝的顶端细胞钝圆，无 异形胞。
NK细胞作用及效应机制
NK细胞作用及效应机制1 抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（ADCC）NK细胞低亲和力的CD16分子与靶细胞IgG抗体复合物结合后，活化蛋白酪氨酸激酶（PTK），使PLC γ的酪氨酸磷酸化，裂解膜磷酯酰肌醇为三磷酸肌醇（IP3）和二酰甘油，IP3增加细胞内游离钙浓度，进而释放细胞毒性物质（如穿孔素和颗粒酶）。
研究发现，IgG1抗体与凝集抗原作用能增强IgG1与NK细胞的结合，且去除岩藻糖的IgG1抗体更易募集和活化NK细胞，从而减少诱导ADCC所需的抗原量并且明显提高ADCC作用；当低岩藻糖抗体与靶细胞同时存在时，NK细胞尤其是CD56dim细胞群的活化标记CD69表达增高。
Forthal等报道在HIV急性感染期，病毒感染的靶细胞表达HIV糖蛋白与特异抗体结合，介导NK细胞发挥ADCC作用杀伤靶细胞。
另有研究者用HIVgp120特异的IgG1/IgA嵌合蛋白交联CD16，活化新鲜分离的NK细胞，只需pmol浓度即可溶解HIV感染的靶细胞。
2 天然细胞毒性（Natural cytotoxicity）天然细胞毒性是指不需要抗体介导,也不经预先致敏而直接杀伤靶细胞的作用,其具体机制尚未完全阐明。
与ADCC不同，该作用需要多个表面受体结合靶细胞传递溶细胞信号。
例如，CD11a/CD18、CD2、CD44、CD54、CD58、CD69均有利于NK细胞与靶细胞建立稳定连接,形成免疫突触。
在动物模型中，Lck、Fyn、ZAP70分子的缺失会引起T细胞缺陷，但却不影响天然细胞毒性，表明NK细胞发挥细胞毒性不一定需要这些激酶。
另有研究报道IFN γ和IL 12等细胞因子活化的STAT1分子提供了另一重要信号，STA T1敲除的小鼠天然细胞毒性被抑制，但不影响ADCC 作用。
Sconocchia等还发现一条不同于ADCC或传统天然细胞毒性的信号传导途径，即专一表达于NK细胞上的CD44依赖的溶细胞效应通路。
3 NK细胞介导的凋亡（NK cell mediated apoptosis）靶细胞对NK细胞诱导的凋亡很敏感，尤其大多数对自然杀伤不甚敏感的肿瘤细胞对NK细胞诱导的凋亡却很敏感。
螺旋藻多糖和含硒多糖抑癌及增强免疫作用研究进展
此， 在药理研究方面大多采用复合成分 的螺旋藻多糖 。 含硒 多糖的研究多着眼于寻找补硒 营养剂 和天然药物 。 含硒多糖在 自然界 ，尤其是在植物 中的存在 已得 到证实 ， 如 大蒜硒多糖 的生物活性 明显优 于多糖或 亚硒 酸钠 ， 它不仅 能 抑制 ＳＯ 对细胞 的毒害作用 ， ｉ： 并且还 能抑制 人胚肺 巨细胞病 毒。 陈春英等［ 高硒地 区生长 的箬竹中提取 到硒 多糖 ， ６ １ 从 它能 有效地提高血液 中的硒 含量和 Ｇ Ｘ活性 ，降低脂质过氧化 Ｐ 产物丙二醛 的含量 ， 增强红细胞抗 Ｈ Ｏ 氧化损伤 的能力 ， ：： 并 具有明显的免疫增强效应 。 周志 刚等口 从富硒 培养 的极大 、 钝 顶、 盐泽 ３ 螺旋藻 中分离 得到 胞内多糖 和胞 外多糖 ， 种 经测 定， 多糖分 子中结合硒 ， 胞外多糖 中的含硒量较大 ， 而胞 内多
（ ｌｔ ｈ ｎ ｅｏｄａｅＧ Ｘ） 家 族 、 硫 氧 还 蛋 白 还 原 酶 Ｇｕａ ｉ ｅｐｒｘ ｉ ， Ｐ ｔｏ ｓ
（ ｉ ｅ ｏｉ ｅ ｕｔｓ，Ｒ）家 族 、碘 甲腺 原 氨 酸 脱 碘 酶 ｔ ｏ ｄｘｎｒｄ ｃａｅＴ ｈｒ
（ ｄｔｙ ｎ ｅｄｉｄｎｓ ， Ｄ） 族 等 的 重 要 组 成 部 分 。 硒 ｉ ｏ ｒ ｉ ｅ ｉａｅ Ｉ ｏ ｈｏｎ ｏ Ｄ， 家 蛋 白具 有 抗 氧 化 、 高 免 疫 力 、 肿 瘤 等 生 理 作 用 。 提 防治
３个 多 糖 组 分 。 不 同 多 糖 组 分 可 能 具 有 不 同 的生 理 活 性 ， 因
种 丝 状 多 细 胞 螺 旋 形 原 核 藻 类 生 物 ，被 世 界 卫 生 组 织
nk细胞的应用原理
NK细胞的应用原理1. 什么是NK细胞？自然杀伤（Natural Killer，NK）细胞是一类重要的免疫细胞，它们属于淋巴细胞家族，主要在人体的外周血液、骨髓和脾脏中起着重要的作用。
NK细胞具有无需免疫记忆的特点，能够迅速识别并杀伤病原体或异常细胞，从而维护机体免疫平衡。
2. NK细胞的应用原理NK细胞作为一种重要的免疫细胞，其应用原理主要可以概括为以下几个方面：2.1 细胞毒性杀伤NK细胞具有很强的细胞毒性，可以通过两种机制杀伤靶细胞：细胞直接毒杀（Cell-mediated cytotoxicity）和抗体依赖性细胞毒性（Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC）。
在细胞直接毒杀中，NK细胞通过分泌毒素、活化酶和颗粒酶导致靶细胞的凋亡；而在ADCC中，NK细胞通过识别靶细胞表面的抗体（如IgG）结合位点，以抗体为桥梁，通过释放细胞毒素杀伤靶细胞。
2.2 产生并释放细胞因子NK细胞能够产生和释放多种重要的细胞因子，包括干扰素（IFN）、肿瘤坏死因子（TNF）等。
这些细胞因子在免疫应答中发挥着重要的调节作用，可以增强其他免疫细胞（如巨噬细胞和T细胞）的活性，促进炎症反应和抗病原体作用。
2.3 调节免疫应答NK细胞不仅直接参与杀伤靶细胞，同时也对其他免疫细胞起到重要的调节作用。
NK细胞可以识别和调节其他免疫细胞（如T细胞和树突状细胞）的活性，调节免疫应答的平衡。
它们能够通过分泌不同的细胞因子和免疫调节分子，调控免疫细胞的增殖、分化和活性。
3. NK细胞的应用领域由于NK细胞具有重要的免疫调节和杀伤作用，因此在临床上有着广泛的应用。
以下是一些常见的NK细胞应用领域：•抗肿瘤治疗：NK细胞可通过直接杀伤肿瘤细胞，或者激活和增强其他免疫细胞的活性，抑制肿瘤生长和扩散。
在临床上已经使用NK细胞进行肿瘤治疗的研究和应用，取得了一定的突破。
•免疫重建：在某些情况下，如造血干细胞移植后，机体的免疫功能受损，需要进行免疫重建。
螺旋藻多糖抗肿瘤作用的研究进展
螺旋藻多糖抗肿瘤作用的研究进展李杨;赖雁【摘要】@@ 螺旋藻多糖(polysaccharide of spirulina platensis,PSP)是一种从螺旋藻中分离出的水溶性酸性杂多糖.PSP由于具有抗病毒、抗肿瘤、抗辐射、抗突变、抗氧化、降血糖血脂和调节免疫功能等广泛的生物活性而成为目前螺旋藻研究的热点之一[1].特别是在抗肿瘤方面,由于它对细胞无毒性,不同于传统的抗癌药具有细胞毒性,引起了广大学者的广泛关注,现就PSP抗肿瘤作用及其机制的研究进展做一综述.【期刊名称】《临床荟萃》【年(卷),期】2011(026)002【总页数】3页(P170-172)【关键词】抗肿瘤药;多糖类;分子作用机制【作者】李杨;赖雁【作者单位】成都医学院临床医学实验教学中心,四川,成都,610083;成都医学院临床医学实验教学中心,四川,成都,610083【正文语种】中文【中图分类】R977.6螺旋藻多糖(polysaccharide of spirulina platensis,PSP)是一种从螺旋藻中分离出的水溶性酸性杂多糖。
PSP由于具有抗病毒、抗肿瘤、抗辐射、抗突变、抗氧化、降血糖血脂和调节免疫功能等广泛的生物活性而成为目前螺旋藻研究的热点之一[1]。
特别是在抗肿瘤方面,由于它对细胞无毒性,不同于传统的抗癌药具有细胞毒性,引起了广大学者的广泛关注,现就PSP抗肿瘤作用及其机制的研究进展做一综述。
1.1 PSP对不同肿瘤生长的抑制率周岩冰等[2]研究发现,PSP对体外培养的胃癌细胞、结肠及直肠癌细胞均有一定的抑制作用,且呈剂量依赖性,PSP浓度为20 mg/L 时,对胃癌细胞的抑制率达54.71%,对结肠及直肠癌细胞的抑制率达42.04%。
曲显俊等[3]在钝顶螺旋藻多糖体内外抗癌实验中发现,对B37乳腺癌细胞的抑瘤率最高可达68.0%,对K562白血病细胞抑瘤率为46.0%。
PSP以300 mg/kg灌胃给药时,对小鼠S180肉瘤的抑瘤率为55.2%,对艾氏腹水瘤(EAC)小鼠腹水癌的抑瘤率为56.95%。
NK细胞活性检测的原理及应用
NK细胞活性检测的原理及应用引言自然杀伤细胞（NK细胞）作为一种重要的免疫细胞，在机体的免疫防御中扮演着重要的角色。
NK细胞不仅可以杀死肿瘤细胞和感染病原体的细胞，还可以调节和激活其他免疫细胞的功能。
因此，研究NK细胞的活性对于预防和治疗肿瘤、感染疾病等免疫相关疾病具有重要的意义。
本文将详细介绍NK细胞活性检测的原理及其在临床和科研中的应用。
原理NK细胞的活性可以通过多种方法进行检测，其中最常用的方法是使用细胞毒性检测。
细胞毒性检测主要分为两种方法：靶细胞直接杀伤法和溶血/变性法。
靶细胞直接杀伤法靶细胞直接杀伤法是通过将靶细胞与NK细胞一起培养，观察并计算靶细胞的存活率来评估NK细胞的活性。
具体步骤如下： 1. 将靶细胞和NK细胞分别培养在细胞培养基中。
2. 将培养好的NK细胞与靶细胞按照不同的比例混合。
3. 经过一定时间的培养后，观察并计算靶细胞的存活率，即可评估NK细胞的杀伤活性。
溶血/变性法溶血/变性法是通过观察和测量NK细胞对溶血红细胞的溶血能力来评估NK细胞的活性。
具体步骤如下： 1. 准备一定浓度的溶血红细胞悬液。
2. 将溶血红细胞悬液与NK细胞按照不同的比例混合。
3. 经过一定时间的孵育，离心沉淀红细胞。
4. 通过测量上清液的吸光度来计算溶血率，即可评估NK细胞的杀伤活性。
应用NK细胞活性检测在临床和科研中都具有广泛的应用。
临床应用在临床中，检测患者的NK细胞活性可以帮助医生评估患者的免疫状态和疾病进展情况，从而制定更合理的治疗方案。
常见的临床应用包括： - 评估抗肿瘤免疫治疗的疗效：通过监测患者的NK细胞活性，可以评估抗肿瘤免疫治疗的疗效，指导治疗方案的调整。
- 检测传染病的免疫性：通过检测患者的NK细胞活性，可以评估患者对于传染病的免疫性，指导预防和治疗。
- 评估移植排斥反应：通过监测移植患者的NK细胞活性，可以评估移植排斥反应的发生和程度，指导治疗和预防。
科研应用在科研领域，NK细胞活性检测可以帮助研究人员深入了解NK细胞的免疫功能和机制，从而为免疫治疗的研发提供理论依据和实验数据。
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钝顶螺旋藻多糖对急性白血病病人NK细胞的作用曾波航 王光明 曾亚仑Ξ(广州医学院第二附属医院,广州 510260)
摘 要 目的 探讨螺旋藻多糖(
SPP)对白血病患者免疫功能的作用,观察了SPP对正常人及急性白血病
患者外周血NK细胞的影响。结果 SPP可提高不同病期白血病患者NK细胞活性,但不影响正常人NK细胞活性,毒性试验表明SPP对白血病细胞无毒性作用。结论 SPP作为生物反应调节剂用于白血病治疗可提高NK细胞活性,值得进一步研究、开发、应用。关键词 急性白血病,NK细胞,螺旋藻多糖
STUDYONEFFECTOFSPIRULINAPLATENSISPOLYSACCH-
ARIDEONNKCELLSFROMACUTELEUKEMIAPATIENTINVITROZengBohang,WangGuangming,ZengYalun(SecondAffiliatedHospitalGuangzhouMedicalCollege,Guangzhou510260)
ABSTRACT AIM:TheEffectsofSpirulinaPlatensisPolysaccharide(SPP)onperipheralNKcellfromhealthypersonsandacuteleukemiapatientswerestudied.METHODS:Theac2tivitiesofNKcellontargetcell2K562wasmeasuredwithMTTmethod.RESULTS:There2sultsshowedthatSPPcouldargumenttheNKcellactivityfromvariesperoidcaseswitha2cuteleukemia.SPPhadnoactivityonNKcellfromnormalperson.Cytotoxicitydidnotpre2sentwhentheperipheralbloodmononuclearcellwereco2incubatedwithSPP.CONCLU2SION:TheseresultssuggestedthatSPPcouldbeexploitedandutilizedasanapproachofbio2logicalresponsivemodifiertherapyinthetreatmentofacuteleukemia.KEYWORDS Acuteleukemia,NKcell,SpirulinaPlatensisPolysaccharide
螺旋藻有提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数,增加外周血液中T淋巴细胞的百分数和血清溶血素的含量[1、2]临床上广泛用于提高机体免疫力,治疗肿瘤等疾病,但其具体作用机制尚不完全明了,螺旋藻对机体起重要免疫监控作用的自然杀伤(NK)细胞作用也未见报道。本文用钝顶螺旋藻(Spirulinaplatensis)提取物螺旋藻多糖(SPP)观察其对正常人和白血病病人外周血NK细胞活性作用,现报告结果如下。1 材料与方法111 实验对象31例急性白血病病人为我院经临床和血液学确诊的住院病人,男17例,女14例,
年龄15～75岁,中位年龄41岁,按病期可分为初发复发期急性白血病23例,完全缓解期急性白血病8例,所有病人在检查前3周未用免疫抑制剂和免疫增强药物。对照组25例为我院门诊健康体检者,男15例,女10例,
年龄18～72岁,中位年龄42岁。112 实验方法11211 效应细胞取肝素抗凝血常规分离外周血单个核细
54《中国海洋药物》杂志2000年第6期(总第78期)Ξ广州市白云山中药厂胞(PBMC)用RPMI1640液(Gibco产品内
含15%来活小牛血清,L2谷氨酰胺0.3g・L21,Hepes20mM・L21,22ME5×1025M・L21)洗涤3次后计数PBMC配成2×10
9・
L21,实验组加入不同浓度SPP,对照组加1640液5%CO2,37℃孵育24h收集细胞,用1640洗涤3次重新悬浮于培养液中,配成2×109・L
21
(台盼兰计数活细胞>95%)为效
应细胞。11212 NK细胞检测用NK细胞敏感的人红白血病细胞株(K562)细胞作为NK细胞的靶细胞,在96孔
培养板中每孔加入1×108・L21对数生长期K562细胞011mL,效应细胞011mL,效靶比例为20∶1,每组3个复孔,振荡混匀后5%
CO237℃孵育24h,终止培养前4h,每孔加入MTT(5g・L21)10ΛL混匀,4h后离心200r・min21
×10min弃上清,加二甲亚砜每孔
150ΛL,振荡10min后用酶联检测仪570nm
波长测A值,取3个复孔数为样品A值,按下述公式以杀伤率%表示NK细胞活性。
NK细胞(活性%)=[1-(效+靶)孔A值-效应细胞孔A值]靶细胞孔A值×100%
2 结果211 正常人和急性白血病病人NK细胞活性25例正常人外周血NK细胞活性为42.95±7.88%。23例初发、复发急性白血病病人外周血NK细胞活性(20130±6172%)明显低于正常人NK细胞活性(P<0101)。8例
完全缓解期急性白血病病人NK细胞活性为30164±8191%,高于初发复发期(P<0101),说明急性白血病病人在初发期NK细胞活性降低,缓解后升高,复发后又降低,提示检测急性白血病病人外周血NK细胞活性可了解病情变化。212 SPP对正常人NK细胞活性作用21211 不同浓度SPP对靶细胞和效应细胞杀伤作用,如图1所示SPP浓度<01050
Λm・L
21
时无直接杀伤K562和效应细胞作用,
故本实验SPP浓度选10mg・L21。
图1 SPP对PBMC和K562细胞细胞毒作用21212 SPP作用时间与NK细胞活性关系10mg・L21SPP加入NK
效应细胞孵育
不同时间对NK细胞活性影响见图2,说明效应细胞加SPP作用12h以上始有效果,
24h达较高水平,故本实验选孵育时间为24h
。
SPP孵育时间(h)图2 SPP孵育时间与NK活性关系21213 SPP对正常人NK细胞活性影响正常人外周血单个核细胞加入SPP
10mg・L
21
后NK细胞活性为46170±
10156%与正常人NK细胞活性相比较差异无显著性(P>0105),说明该浓度SPP对正
常人NK细胞活性无明显影响。213 SPP对白血病病人NK细胞活性作用SPP使31例白血病病人外周血NK细胞活性从26141±10117%提高到38133±9145%(P<0101),但仍低于正常人NK细胞活性(P<0101),不同病期急性白血病病
人外周血单个核细胞加入SPP后NK细胞活性均有明显提高(P<0101)
。初发、复发期
病人NK细胞活性加SPP后虽有提高但仍低于正常人(P<0101),而缓解期病人
NK
细胞活性加SPP后与正常人相比较则差异无显著性(P>0105),见附表。
64《中国海洋药物》杂志2000年第6期(总第78期)附表 SPP对白血病病人NK细胞活性例数未加SPP加SPPP值初发复发期缓解期 P值238 20130±6172330164±81913<010131173±8167340181±513533<0101<01001
注:
3P<0101,33
P>0105 vs 正常人
3 讨论NK细胞是机体最重要抗肿瘤免疫细胞之一,NK细胞活性与肿瘤发生、发展有一定关系,研究表明,白血病等肿瘤病人NK细胞活性降低,NK细胞活性与病期有一定关系[3、4]。本文证实初发、复发急性白血病病人外周血NK细胞活性明显降低,而处于完全缓解期NK细胞活性则高于初发、复发病人,
提示NK细胞活性与急性白血病病情变化有关。生物治疗是继手术、放疗、化疗后又一治疗肿瘤手段,对血液肿瘤生物治疗疗效尤为可佳,许多中药多糖如猪苓多糖、香菇多糖在体外均能提高免疫细胞活性[5],用于临床治
疗肿瘤。螺旋藻多糖也有提高机体免疫功能作用[6、7],已逐步用于肿瘤辅助治疗。我们发
现SPP在体外(10mg・L
21
)时对正常人
NK
细胞活性无影响,但能不同程度提高初发、复发期急性白血病病人外周血NK细胞活性(但仍低于正常人),对处于缓解期急性白血
病病人,SPP能使其NK细胞活性恢复正常。提示SPP提高肿瘤病人NK细胞活性作用与机体带瘤状态有关,当肿瘤负荷小(缓解
期)时其作用明显,证实生物治疗(包括SPP
等药)对肿瘤负荷低患者疗效优于肿瘤负荷大的病人(初发、复发时)。我们发现较高浓度(10～50mg・L
21
)的
SPP对白血病细胞株K562
细胞无直接杀伤作
用,故其提高NK细胞活性作用并非通过杀伤靶细胞来完成,而是增强NK效应细胞作用,我们还发现10～50mg・L
21
SPP对外周
血细胞也无细胞毒作用,证实其安全可靠。我们的结果提示由于SPP可提高白血病病人NK细胞活性,故SPP可作为急性白血病特别是处于缓解期病人的辅助治疗。
参考文献1 刘力生1螺旋藻多糖对移植性癌细胞的抑制作用及其机理的研究1海洋科学,1991,9(5):33～38
2 刘力生1螺旋藻多糖对机体免疫功能的提高及其机理研究1海洋科学,1991,11(6):44～48
3 OnoK.Cliniclsignificanceofnaturalkillingactivityin
patientswithadvancedlymphoma.JClinImmunol,1998,18(2):132～1414 KatrinakisG,KvriakouD.PapadakiH,etal.Defective
naturalkillercellactivityinB2cellchroniclymphocyteleukemiaisassociatedwithimpairedreleaseofnaturallcillercytotoxicfactorsbutnotoftumournecrosisfactor.ActaHeamatol,1996,96(1):16～23.5 李金峰1猪苓多糖、香菇多糖和分枝杆菌多糖对淋巴因子活性杀伤细胞活性增强作用研究1中国中西医结合杂志,1996,16(4):22416 王俏光1钝顶螺旋藻的抗癌作用及对免疫功能的影响1癌症,1996,15(6):423～425
7 曾波航1钝顶螺旋藻多糖对白血病患者外周血LAK细胞活性的影响1中国海洋药物,2000,19(2):39～41
(收稿日期2000205215)
海峡两岸三所海洋大学联合办学 据悉,我国仅有的3所海洋大学——青岛海洋大学、湛江海洋大学、台湾海洋大学在湛江签定协议,联合办学,共同发展。海峡两岸三所海洋大学联手的主旨是充分发挥海洋大学的办学优势,加快海洋高新技术人才的培养,促进我国蓝色产业的发展。