3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法
甘油三酯（TG）试剂盒说明书
sdgsdgs成都分行东风浩荡合法规和法规和土壤突然图腾甘油三酯（TG）试剂盒说明书（酶法）【产品名称】中文名称：甘油三酯（TG）试剂盒（酶法）英文名称：TR IGL Y CE RI DES RE AGE N T K I T（Enzymatic method）【包装规格】60ml/盒（R-1：45ml×1, R-2：15ml×1），280ml/盒（R-1：70ml×3，R-2：70ml×1），300ml/盒（R-1：45ml×5，R-2：15ml×5），360ml/盒（R-1：90ml×3，R-2：90ml×1），400ml/盒(R-1：60ml×5，R-2：20ml×5)，2000ml/盒（R-1：500ml×3，R-2：500ml×1）。
【预期用途】本试剂用于测定人血清或血浆中甘油三酯（TG）的含量。
【检验原理】在第一反应中采用抗坏血酸氧化酶（AOD）消除抗坏血酸的影响；采用甘油激酶消去游离甘油的影响。
在第二反应中，通过甘油三酯生成的甘油与过氧化物酶（POD）作用生成醌系色素，由此可测得甘油三酯的含量。
第一反应：抗坏血酸氧化酶2抗坏血酸+ O2──────────→2脱氢抗坏血酸+ 2H2O甘油激酶游离甘油+ ATP ──────────→甘油-3-磷酸+ ADP甘油-3-磷酸氧化酶甘油-3-磷酸+ O2 ──────────→磷酸二羟丙酮+ H2O2（用过氧化氢酶消去）第二反应：脂蛋白酯酶甘油三酯+ H2O ──────────→甘油+ 脂肪酸甘油激酶甘油+ ATP ──────────→甘油-3-磷酸+ ADP甘油-3-磷酸氧化酶甘油-3-磷酸+ O2 ──────────→磷酸二羟丙酮+ H2O2P0D2H2O2 + 4-AA+TOOS + H3+O ─────→醌系色素+ 5H2OTOOS: N-Ethyl-N-（2-hydroxy-3-solfopropyl）-3-methylaniline, sodiumsalt, dihydrate 【主要组成成份】━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━试剂成份含量─────────────────────────────────R-1 抗坏血酸氧化酶≥3000U/L甘油激酶≥1000U/L甘油-3-磷酸氧化酶≥8000U/LTOOS 1.17mmol/L过氧化氢酶≥3000U/L─────────────────────────────────R-2 脂蛋白酯酶≥2000U/LPOD ≥20000U/L4-AA 2.5mmol/L━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━脂类校准血清人血清详见标示量，━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━*1. 不同批号试剂盒中的各组份，经检验符合产品性能指标的，可以互换。
谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性检测试剂盒说明书 微量法
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC1195规格:100T/48S 产品简介：谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px 或GPX）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。
GPX 能够催化还原型谷胱甘肽（GSH）生成氧化型谷胱甘肽（GSSG），使有毒的过氧化氢还原成无毒的羟基化合物。
GPX 催化H 2O 2氧化GSH，产生GSSG，GSH 能与DTNB 生成在412nm 处有特征吸收峰的化合物，412nm 下吸光度的下降即可反应GPX 的活性。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管。
产品内容：提取液：液体80mL×1瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5.5mL 蒸馏水溶解；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3.3mL 蒸馏水溶解备用；试剂三：液体10μL×1支，临用前按1μL 试剂三：499μL 蒸馏水的比例稀释试剂三，4℃保存。
现用现配；试剂四：液体30mL×1瓶，4℃保存；瓶底若有结晶可50℃水浴溶解，此溶液为饱和溶液，若底部最终还有结晶，吸取上清使用即可；试剂五：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5mL 蒸馏水溶解备用；标准品：粉剂×1支，10mg 还原型谷胱甘肽，4℃保存。
临用前加入1.62mL 蒸馏水溶解为20μmol/mL 的标准溶液备用。
操作步骤：一、粗酶液的提取：1、组织：按照组织质量（g）:提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取0.05g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。
10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测(如上清不清澈，再离心3min)。
凋亡细胞的诱导及检测
凋亡细胞的诱导及检测一、实验目的1、掌握培养细胞诱导凋亡的方法2、掌握凋亡细胞形态特征检测方法3、掌握基因组DNA特征及凋亡相关蛋白的检测方法4、熟悉PCR原理及技术5、熟悉凋亡相关知识、科研的基本思路二、实验内容1、培养细胞凋亡的诱导、凋亡细胞形态学、细胞增殖活力检查2、凋亡细胞的DNA ladder、caspase3活性检测3、培养细胞RNA的提取及定量、逆转录PCR4、PCR法扩增凋亡相关基因Bcl-2和Bax、琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物三、实验步骤与操作第一天（8学时）理论知识讲解：凋亡诱导方法及诱导药物剂量计算（细胞加药后诱导期间讲解）实验内容及安排：1、培养细胞的凋亡诱导（实验教材p137，p144）约需2h2、倒置相差显微镜下观察凋亡细胞的形态变化（实验教材p145）3、培养细胞的Giemsa染色、吖啶橙荧光染色、碘化丙啶（PI）/Ho.33342荧光双染检测（实验教材p146-148）4、MTT法检测细胞内琥珀酸脱氢酶活性及细胞存活率计算方法（实验教材p137）操作步骤：1）凋亡诱导：用25ml培养瓶体外培养人肿瘤细胞株（BEL-7402细胞或HepG2），2～3d传一代。
a) 实验前一天将细胞以2ⅹ104/ml接种于预先放入盖玻片的24孔板中。
在试验前2～4 h加入凋亡诱导剂大蒜素（60 mg/L），37℃、5%CO2、饱和湿度条件下继续培养，用于细胞形态观察。
设正常对照组、大蒜素诱导组。
b) 实验前一天将细胞以每孔5×104密度接种于96孔板中，在对数生长期进行分组实验：设空白组、正常对照组、大蒜素诱导组（空白组未加任何处理、正常对照组加PBS），用于MTT法测定细胞内琥珀酸脱氢酶活性。
2）凋亡细胞形态观察：体外培养的正常肝癌BEL-7402细胞为上皮形细胞，多边形，胞体丰满，核大而明显，可见多个核仁，细胞之间边界清晰，折光性好。
60 mg/L大蒜素作用2～4 h，BEL-7402细胞出现典型的细胞凋亡形态变化：细胞体积缩小，染色质浓聚边集、裂解，细胞表面凸起多个小泡。
β-葡萄糖醛酸苷酶(β-GD)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
β-葡萄糖醛酸苷酶（β-GD）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC1910规格：50T/48S产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入5mL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂仍-20℃保存；试剂三：液体37.5mL×1瓶，4℃保存；试剂四：1μmol/mL标准储备液10mL，4℃保存；产品说明：β-GD广泛存在于动物组织中，是一种参与肿瘤侵袭和转移过程的基质降解酶，具有水解固醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能。
该酶在肝细胞中含量较高。
此外在胃癌组织中含量丰富，测定胃液β-GD活性对于研究胃癌具有重要的意义。
β-GD催化苯酚β-D-葡萄糖醛酸产生游离的酚酞，通过测定苯酚含量反应该酶活性高低。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样品测定的前处理按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在EP管中加入下列试剂）试剂名称（μL）加样孔测定管标准管空白管试剂一100100100试剂二100100100样本501μmol/mL50蒸馏水50混匀后，37℃水浴30min试剂三750750750混匀，540nm下测定各管吸光值注意：标准管和空白管只需测一次。
三、β-GD活性计算（1）按样本鲜重计算：单位定义：每小时每g鲜重样品中催化产生1μmol酚酞的量为一个活力单位。
β-GD（μmol/h/g鲜重）=(C标准管×V1)×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷(W ×V1÷V2)÷T=2×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷W（2）按样本蛋白浓度计算：单位定义：每小时每mg组织蛋白催化产生1μmol酚酞的量为一个活力单位。
谷丙转氨酶(GPT)活性测定试剂盒说明书
货号: QS1900 规格：50管/24样谷丙转氨酶（GPT）活性测定试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：GPT（EC 2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。
此外，哺乳动物肝细胞GPT活性很高，当肝细胞坏死，GPT释放到血液中，血清GPT活性显著增高。
因此，GPT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。
测定原理：GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4-二硝基苯肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下呈红棕色，可以在505nm读取吸光值并计算酶活力。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：提取液：30mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体5 mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体5 mL×1瓶，4℃避光保存；试剂三：液体50 mL×1瓶，4℃保存；样品测定的准备：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定操作表：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。
还原型谷胱甘肽(GSH)含量检测试剂盒说明书__ 可见分光光度法UPLC-MS-4486
还原型谷胱甘肽（GSH）含量检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：UPLC-MS-4486规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体50mL×1瓶4℃保存试剂二液体50mL×1瓶4℃保存试剂三液体15mL×1瓶4℃保存标准品粉剂10mg×1支4℃保存溶液的配制：1、标准品：称1mg标准品用1mL蒸馏水溶解，浓度为1mg/mL。
产品说明：谷胱甘肽是由谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）和甘氨酸（Gly）组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。
谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-（2-硝基苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG）。
2-硝基-5-巯基苯甲酸为黄色产物，在波长412nm处具有最大光吸收。
技术指标：最低检出限：2.67μg/mL线性范围：3.125-250μg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：分析天平、匀浆器/研钵、低温离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织处理：新鲜组织首先用PBS冲洗2次，然后称取动物组织或者植物组织0.1g。
加入用试剂一润洗过的匀浆器中（匀浆器提前放冰上预冷）；然后加入1mL试剂一（组织/试剂一比例保持不变即可），迅速冰上充分研磨（使用液氮研磨效果更好）；8000g，4℃离心10min；取上清液放置于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。
2、血液处理血浆：将收集的抗凝血于4℃，600g离心10分钟，吸取上层血浆到另一支试管中，加入等体积的试剂一, 4℃，8000g离心10分钟,将上清移入新的试管中放置于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。
gapdh基因表达
Gapdh基因表达
Gapdh（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，甘油醛-3-磷酸脱氢酶）基因表达是一个重要的生物过程，涉及到细胞能量代谢、糖酵解途径的关键酶。
Gapdh在多种生物体中具有高度保守性，其在细胞内参与糖酵解过程，将葡萄糖转化为丙酮酸，并产生大量的能量。
此外，Gapdh还具有其他功能，如调控细胞凋亡、氧化应激反应、细胞周期等。
Gapdh基因表达的研究主要集中在以下几个方面：
1. 基因表达调控：研究Gapdh在不同生物体、不同组织、不同发育阶段的特异性表达，以及表达调控机制，如转录因子、microRNA 等。
2. 酶活性与糖酵解：研究Gapdh酶活性与糖酵解速率的关系，以及Gapdh在能量代谢中的作用。
3. 细胞功能与疾病：研究Gapdh在细胞功能调控中的作用，如细胞凋亡、氧化应激、细胞周期等，以及Gapdh在疾病（如肿瘤、神经退行性疾病等）中的作用及机制。
4. 作为内参基因：Gapdh作为内参基因，在基因表达研究中用于校正实验误差，提高实验结果的可靠性。
Gapdh基因表达研究不仅有助于深入了解细胞能量代谢及其调控机制，而且对于探讨其在疾病发生发展中的作用及潜在治疗策略具有重要意义。
谷胱甘肽还原酶(GR)活性检测试剂盒说明书 微量法
北京索莱宝科技有限公司谷胱甘肽还原酶（GR）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC1165规格：100T/96S产品内容：试剂一：液体120mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体1mL×1支，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入2.0mL蒸馏水，混匀。
产品说明：GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，GR是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一（通常昆虫中GR被TrxR取代）。
GR催化NADPH还原GSSG生成GSH，有助于维持体内GSH/GSSG比值。
GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外GR还参与抗坏血酸－谷胱甘肽循环途径。
GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH，同时NADPH脱氢生成NADP+；NADPH在340nm有特征吸收峰，相反NADP+在该波长无吸收峰；通过测定340nm吸光度下降速率来测定NADPH脱氢速率，从而计算GR活性。
自备仪器和用品：低温离心机、水浴锅、移液器、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）和蒸馏水操作步骤：一、粗酶液提取：称约0.1g组织，加入1.0mL试剂一，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清液，待测。
二、GR测定操作：1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。
2.试剂一置于25℃（普通物质）或者37℃（哺乳动物）中预热30min以上。
3.空白管：取微量石英比色皿或96孔板，加入10μL试剂二，20μL试剂三，170μL试剂一，于340nm 测定10s和190s吸光度，记为A空1和A空2。
第1页共3页4.测定管：取微量石英比色皿或96孔板，加入10μL试剂二，20μL试剂三，20μL上清液，150μL试剂一，于340nm测定10s和190s吸光度，记为A测1和A测2。
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3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC2210
规格：25T/24S50T/48S
产品内容：
提取液：30mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；
试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体15µL×1支，4℃保存；临用前加入0.5mL蒸馏水充分混匀，或根据比例现配现用；用不完的试剂4℃保存一周。
产品说明：
GAPDH（EC1.2.1.12）催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途径的关键酶，与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关，在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。
GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3-磷酸甘油醛、无机磷和NAD+，340nm处测定NADH的减少量可反映GAPDH活性的高低。
试验中所需的仪器和试剂：
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后8000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上待测。
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
血清（浆）：直接检测。
二、测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、工作液的配制：将试剂二全部倒入试剂一瓶中，充分溶解，根据需要取一定的量置于37℃(哺乳动物)
或25℃(其它物种)预热10min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3、操作表：在1mL石英比色皿中分别加入下列试剂：
试剂名称空白管测定管
样本（µL）30
蒸馏水（µL）30
试剂三（µL）2020
工作液（µL）950950
在1mL石英比色皿中分别加入上述试剂，充分混匀后于340nm处测定10s时的吸光值A1，迅速置于37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴5min，拿出迅速擦干测定5min10s时的吸光值A2，计算△A测定管=A2测定-A1测定，△A空白管=A2空白-A1空白，△A=△A测定管-△A空白管。
空白管只需做一次。
三、GAPDH酶活计算：
（1）按蛋白浓度计算
酶活定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
GAPDH酶活（U/mg prot）=△A÷（ε×d）×109×V反总÷（V样×Cpr）÷T
=1072×△A÷Cpr
（2）按样本质量计算
酶活定义：每g组织每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
GAPDH酶活（U/g鲜重）=△A÷（ε×d）×109×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T
=1072×△A÷W
（3）按照细菌或细胞数量计算
酶活定义：每104个细菌或细胞每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
GAPDH酶活（U/104cell）=△A÷（ε×d）×109×V反总÷（500×V样÷V样总）÷T
= 2.14×△A÷细胞数量
（4）按液体体积计算
酶活定义：每mL样本每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
GAPDH酶活（nmol/min/mL）=△A÷（ε×d）×109×V反总÷V样÷T
=1072×△A
ε：NADH微摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；
V反总：反应体系总体积，0.001L；V样：反应体系中样本体积，0.03mL；
V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；
Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL，蛋白浓度需自行测定；T：反应时间：5min；
500：细菌或细胞总数，500万。
注意事项：
1、当A1小于0.8或△A大于0.7时，建议将样品稀释后再进行测定。
2、空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.01。