溶菌酶综述
溶菌酶
溶菌酶在食品工业中的应、料 酒及饮料中的防腐； 固定于食品的包装纸能达到杀菌同时不破 坏食物风味的效果；
溶菌酶在医学上的应用
溶菌酶作为一种存在 于人体正常体液及组 织中的非特异性免疫 因素，具有多种药理 作用，它具有抗菌、 抗病毒、抗肿瘤的功 效； 人体溶菌酶浓度还可 以作为多种疾病的诊 断指标；
溶菌酶在畜牧上的应用
用于饲料的添加剂 在肉仔鸡中添加4mg/kg、8mg/kg、 16mg/kg和100mg/kg溶菌酶，结果表明在 肉仔鸡饲料中添加10mg/kg溶菌酶（相当于 15 000单位），可降低饲料消耗，提高日 增重。在仔猪（7~60日龄）中添加 15mg/kg溶菌酶，日增重提高4.96%，腹泻 率降低22%。
作用部位：β- 1 , 4 糖苷键
思考题：
溶菌酶对革兰氏阳性菌的破 坏力强还是对革兰氏阴性菌 的破坏力强？为什么？
答：溶菌酶对革兰氏阳性菌的破坏 力较强。G+细菌细胞壁几乎全部由 肽聚糖组成，而G-细菌只有内壁层 为肽聚糖，因此，溶菌酶对于破坏 G+细菌的细胞壁较G-细菌强。
溶菌酶的应用
溶菌酶的分类
溶菌酶按其所作用的微生物不同分两大类， 即细菌细胞壁溶菌酶和真菌细胞壁溶菌酶。 根据其来源的不同可分为动物溶菌酶 （鸡 蛋清中含量最多）、植物溶菌酶和微生物 溶菌酶。
溶菌酶的作用机理
溶菌酶能有效地水解细菌细胞壁的肽聚糖， 其水解位点是N-乙酰胞壁酸(NAM)的1位碳原 子和N-乙酰葡萄糖胺(NAG)的4位碳原子间的, β-1.4糖苷键使细胞壁不溶性黏多糖分解成可 溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使 细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋 白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形 成复盐，使病毒失活。
溶菌酶应用简介
1. 溶菌酶简介溶菌酶，又称细胞壁水解酶，广泛存在于高等动植物组织及分泌物、原生动物、昆虫和各种微生物中。
1922年Fleming等发现，在人的唾液、眼泪中存在有能够溶解细胞壁杀死细菌的酶，因而被命名为溶菌酶。
它能够水解N一乙酰葡萄糖胺与N一乙酰胞壁酸之间的β一1，4糖苷键，因此可以溶解大多数革兰氏阳性菌的细胞壁而具有溶菌作用，溶菌酶本身是一种蛋白质，安全性能高，在食品、医药、生物学中得到了广泛的应用。
2. 溶菌酶的理化性质（可要可不要）溶菌酶是一种糖苷水解酶，是由129个氨基酸残基组成的小分子碱性球蛋白，相对分子质量为14 300，分子中富含碱性氨基酸和芳香族氨基酸，其多肽链经盘绕折叠形成二级和三级结构，形成一个椭圆形的外形结构，溶菌酶纯品为白色粉末结晶，无臭、甜味，易溶于水和低浓度的盐溶液，不溶于丙酮、乙醚等有机溶剂。
正常条件下溶菌酶作用的最适温度为45--50℃，最适pH为5～7，在低温干燥条件下可长期保存，热稳定性强，耐酸性强，pH为4—7时，100℃下处理45 min仍能保持其酶活性，但在碱性条件下化学性质不稳定，易变性。
3. 溶菌酶的作用1．抗菌消炎2．抗病毒：溶菌酶能与带负电荷的病毒蛋白直接作用。
与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。
3．增强免疫力：溶菌酶作为机体非特异免疫因子之一，参与机体多种免疫反应，在机体正常防御功能和非特异免疫中，具有保持机体生理平衡的重要作用。
4．其它方面的药理作用：溶菌酶还具有激活血小板的功能。
可以改善组织局部血液循环障碍，分泌脓液，增强局部防卫功能，从而体现其止血、消肿等作用。
它还可以作为一种宿主抵抗因子，对组织局部起保护作用。
5．促进双歧乳酸杆菌增殖：溶菌酶在婴儿体内可以直接或间接促进婴儿肠道细菌双歧乳酸杆菌的增殖，促进婴儿消化吸收，可以促进人工喂养婴儿肠道细菌的正常化。
4.溶菌酶的应用在乳制品中的应用：人乳中溶菌酶的含量是牛乳的3000倍，溶菌酶是婴儿生长发育必需的抗菌蛋白。
溶菌酶的作用
溶菌酶的作用
溶菌酶是一种具有溶菌活性的酶类，主要作用是溶解细菌细胞壁。
溶菌酶能够针对某些细菌的细胞壁进行特异性作用，使细菌细胞壁发生溶解和裂解，最终导致细菌死亡。
溶菌酶的作用机制主要是通过降解细菌细胞壁的关键组分——肽聚糖（peptidoglycan），即细菌细胞壁的主要构成成分。
溶
菌酶能够切割细菌细胞壁上的肽聚糖链，使其断裂，然后通过肽链的剪切和水解作用，使肽聚糖链上的化学键断裂，导致肽链的解结和肽聚糖的降解。
在溶菌酶的降解作用下，细菌细胞壁失去了支撑作用，细菌内外压力差异失衡，导致细菌细胞壁的断裂和细菌细胞膜的塌陷。
细菌细胞膜的塌陷会导致细菌细胞内外物质的交换失去正常调控，最终导致细菌细胞的溶解和死亡。
溶菌酶作为免疫系统中的一种重要防御分子，在人体免疫反应中发挥着重要的作用。
它可以通过特异性地识别和作用于细菌细胞壁，而不会对周围的人体细胞产生损伤。
同时，溶菌酶也是细菌感染治疗中的重要药物，可以用来治疗一些细菌感染性疾病，如肺炎、葡萄球菌感染等。
总之，溶菌酶通过针对细菌细胞壁的特异性降解作用，对细菌细胞壁进行溶解和裂解，最终导致细菌死亡。
它在免疫系统中发挥着重要的防御作用，并且可以用于治疗某些细菌感染性疾病。
溶菌酶
主要内容
溶菌酶的结构、功能及其理化性质
溶菌酶的提取方法 溶菌酶的应用
溶菌酶（ 溶菌酶（lysozyme）又称胞壁质酶（muramidase）或N-乙酰胞 ）又称胞壁质酶（ ） 乙酰胞 壁质聚糖水解酶（ ），是一种 壁质聚糖水解酶（N-acetylmuramide glycanohydrlase），是一种 ）， 能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞 能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的 乙酰胞 壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的 乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖 糖苷键， 壁酸和 乙酰氨基葡糖之间的 糖苷键 分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。 分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌 酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合， 酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋 、 、 白形成复盐，使病毒失活。因此，该酶具有抗菌、消炎、 白形成复盐，使病毒失活。因此，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作 用。
2、溶菌酶的理化特性 、
溶菌酶 C由 130个氨基酸残基组成，相 对分子质量为 14．7KD。C型活性中心为 Glu一35、 Asp一52、Trp62和 Trpl08，此 结果已被x线衍射所证实。对于溶菌酶的活性 来说，最理想的条件是 pH6 0— 7 0 pH6．0— 7．0、 25℃。碱和氧化剂对它起阻遏作用，而食盐 碱和氧化剂对它起阻遏作用， 碱和氧化剂对它起阻遏作用 则相反能起活化作用。粉状溶菌酶若采用低 则相反能起活化作用 温干燥贮存，则几乎可长期不变质。即使在 pH值为中性的水溶液中，该酶也可维持数天 而不损失其活性。
溶菌酶的应用
一、溶菌酶在医药上的应用
溶菌酶的种类及其应用
溶菌酶的种类及其应用溶菌酶是一类能够降解细菌细胞壁的酶，它主要作用于细菌细胞壁上的胆甙酸和穿梭肽链，从而导致细菌细胞壁的破裂和细菌的死亡。
溶菌酶存在于许多生物中，包括哺乳动物、鸟类、爬行动物、昆虫和微生物等。
溶菌酶被广泛应用于医药、食品、农业和环境等领域。
1. 甲氧西林酶 (lysostaphin)甲氧西林酶是一种由金黄色葡萄球菌产生的溶菌酶，主要作用于革兰阳性细菌的细胞壁。
甲氧西林酶具有很高的特异性，可以高效地杀灭耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，对于治疗金黄色葡萄球菌相关感染具有重要意义。
2. 心脏溶菌酶 (lysozyme)心脏溶菌酶是一种常见的溶菌酶，存在于多种生物中，包括人类、鸡、蛋白和昆虫等。
心脏溶菌酶主要对细菌细胞壁的N-乙酰葡萄糖胺聚糖链起到溶解作用。
它具有广谱的抗菌活性，对于控制和预防细菌感染具有重要意义。
3. 乳酸菌溶菌酶 (lactic acid bacteria bacteriocin)乳酸菌溶菌酶是一类由乳酸菌产生的溶菌酶，主要作用于肠道中的细菌。
乳酸菌溶菌酶对于调节肠道菌群平衡、维持肠道健康具有重要作用。
此外，乳酸菌溶菌酶还具有抗菌活性，可以用于食品工业中的食品防腐和保鲜。
4. 枯草杆菌普查酶 (Bacillus gastrointestinal enzyme)枯草杆菌普查酶是一种由枯草杆菌产生的溶菌酶，具有广谱的抗菌活性。
枯草杆菌普查酶对于治疗和预防呼吸道和消化系统感染具有重要意义。
此外，枯草杆菌普查酶还可应用于食品工业中，用于防治食品中的致病菌。
溶菌酶的应用：1.医药领域：溶菌酶可以用于制备抗菌药物，例如利用溶菌酶破坏细菌细胞壁，从而导致细菌死亡。
此外，溶菌酶还有助于治疗耐药菌感染，如利用甲氧西林酶治疗金黄色葡萄球菌感染。
2.食品工业：溶菌酶可以用于食品防腐和保鲜。
例如，乳酸菌溶菌酶可以用于发酵食品的防腐，从而延长其保质期。
此外，溶菌酶还可以用于优化食品的风味和口感，提高食品的品质。
溶菌酶
用大小不同的NAG寡聚体作底物测定被溶 菌酶水解的相对速率，结果发现，少于4 个糖的寡聚体水解速率甚小，当由四聚体 增加到五聚体时，水解速率猛增500倍， 五聚体增加到六聚体，速率增加近8倍， 六聚体增加到八聚体，速率不再变化。这 种情况与X射线晶体结构分析结果一致， 活性部位所在的裂缝(cleft)正好被6个糖残 基所装满。
四·溶菌酶的制备.分离. 活力测试 · . .
溶菌酶（ 实验原理：溶菌酶（lysozyme）是由弗莱明在 ） 1922年发现的，它是一种有效的抗菌剂，全称 年发现的，它是一种有效的抗菌剂， 年发现的 溶菌酶， 粘肽N-乙酰基胞壁 为1，4-β-N-溶菌酶，又称作粘肽 乙酰基胞壁 ， 溶菌酶 又称作粘肽 酰水解酶或胞壁质酶。活性中心为天冬氨酸52 酰水解酶或胞壁质酶。活性中心为天冬氨酸 和谷氨酸35，是一种糖苷水解酶 糖苷水解酶， 和谷氨酸 ，是一种糖苷水解酶，能催化水解 粘多糖的N-乙酰氨基葡萄糖 乙酰氨基葡萄糖（ 粘多糖的 乙酰氨基葡萄糖（NAG）与N-乙酰 ） 乙酰 胞壁酸（ 糖苷键， 胞壁酸（NAM）间的 ，4糖苷键，相对分子 ）间的β-1， 糖苷键 质量14700Da，由129氨基酸残基构成，由于其 氨基酸残基构成， 质量 ， 氨基酸残基构成 中含有较多碱性氨基酸残基， 中含有较多碱性氨基酸残基，所以其等电点高 左右， 达10.8左右，最适温度为 左右 最适温度为50OC，最适 为6～7 ，最适PH为 ～ 左右。 的消光系数[ 左右。在280nm的消光系数 ]为13.0。该酶活 的消光系数 为 。 性可被一些金属离子Cu2+、Fe2+、Zn2+（10性可被一些金属离子 、 、 （ 5～10-3M）以及 乙酰葡萄糖胺所抑制，能被 乙酰葡萄糖胺所抑制， ～ ）以及N-乙酰葡萄糖胺所抑制 Mg2+、Ca2+（10-5～10-3M）、 ）、NaCl所激活。 所激活。 、 （ ～ ）、 所激活
溶菌酶
海洋低温溶菌酶
学生：石淑钰 指导老师：张庆芳 微生物发酵实验室
主要内容
溶菌酶的介绍
溶菌酶的应用
溶菌酶活力测定及其体外抑菌试验
溶菌酶介绍
溶菌酶(Lysozyme)，又称胞壁质酶、球蛋白G、 N-乙酰胞壁质聚糖水解酶。此后人们发现溶菌酶 广泛地存在于高等动物组织及分泌物、植物及各 种微生物中，其中在新鲜的鸡蛋清中含量最高。 溶菌酶可选择性地分解微生物细胞壁的同时不破 坏其它组织，且本身无毒无害，因而它是一种天 然的安全性能很好的杀菌剂、防腐剂，将可广泛 应用于食品防腐、医药制剂、日用化工等行业。 在我国，溶菌酶的应用范围和应用量还比较有限， 但可以预计溶菌酶将会是应用于我国食品工业中 一种重要的功能性食品添加剂。
• 溶菌酶作为天然防腐剂，在食品防腐保鲜方面有 可能代替传统防腐剂，同时也提高了食品的安全 性，随着人们食品安全性的要求不断提高和科学 技术的不断进步，一种崭新的食品保鲜技术—酶 法保鲜技术正在崛起，但是溶菌酶在应用过程中 可能存在一些问题，由于溶菌酶具有特异性，只 能抑制某些细菌，而降解真菌细胞壁的酶还没有 作为食品防腐剂。溶菌酶还存在消化过程中的过 敏反应和抗原性问题，不同的溶菌酶混合使用， 或者与其他防腐剂共同使用，则会提高扩展溶菌 酶的使用范围，提高溶菌酶防腐效果，针对溶菌 酶还存在的一些问题，溶菌酶在食品工业中的应 用有待于进一步研究和探讨。
2.溶菌酶在生物医药上的应用
• 2.1 溶菌酶在基因工程和酶工程上的应用 • 2.2具有抗菌消炎、增强免疫力的功效 • 2.3.具有改善肠道生态环境提高免疫力的功 效 • 2.4.人体血液或尿液中溶菌酶的浓度还可作 为多种疾病的诊断指标 • 2.5 溶菌酶可以预防龋齿、清除细菌 • 2.6 溶菌酶在降解壳聚糖上的应用
溶菌酶的功能主治
溶菌酶的功能主治1. 概述溶菌酶是一种可以溶解细菌细胞壁的酶，它在生物体内起着重要的保护作用。
本文将介绍溶菌酶的功能主治，包括溶菌酶的作用机制、主要途径、应用领域以及注意事项。
2. 溶菌酶的作用机制溶菌酶主要通过以下两种机制发挥作用： - 溶解细菌细胞壁：溶菌酶通过酶解作用，将细菌细胞壁中的多肽聚糖连接断裂，导致菌体的溶解和破坏。
- 促进溶菌酶释放：溶菌酶可以刺激宿主细胞产生和释放更多的溶菌酶，从而增强免疫系统对细菌的防御能力。
3. 溶菌酶的主要途径溶菌酶的主要途径包括以下几种： - 自然分泌：某些细菌可通过主动分泌将溶菌酶释放到周围环境中，以攻击潜在竞争者。
- 细菌感染：当细菌感染宿主时，机体会产生溶菌酶来对抗细菌入侵。
- 化学合成：人工合成的溶菌酶也可以应用于治疗感染性疾病。
4. 溶菌酶的主要功能溶菌酶具有以下主要功能： - 抗菌作用：溶菌酶可溶解细菌细胞壁，破坏细菌结构，从而抑制细菌生长和繁殖。
- 免疫调节：溶菌酶可以增强机体的免疫力，促进免疫细胞活性，提高抗菌能力。
- 抗炎作用：溶菌酶具有一定的抗炎效果，可减轻炎症反应，促进伤口愈合。
5. 溶菌酶的应用领域溶菌酶在医学领域有广泛的应用，包括以下几个方面： - 感染性疾病治疗：溶菌酶可以用于治疗细菌引起的感染性疾病，如肺炎、乳腺炎等。
- 食品工业：溶菌酶可用于食品工业中的细菌检测和控制，确保食品质量和安全。
- 生物工程：溶菌酶可以应用于生物工程领域，用于基因组研究、DNA提取等。
- 医药研发：溶菌酶在药物研发过程中可以用于筛选和测试抗菌药物。
6. 注意事项在使用溶菌酶时需要注意以下事项：- 剂量控制：使用溶菌酶时需要控制剂量，避免过量使用产生不良反应。
- 药物相互作用：溶菌酶可能与其他药物发生相互作用，导致药物疗效降低或产生不良反应，应避免与其他药物同时使用。
- 过敏反应：部分患者可能对溶菌酶过敏，使用时需密切观察患者的体征和症状，如有不适应立即停用并咨询医生。
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溶菌酶的知识应用与临床诊断与研究前景 作者：林鹭 地址：广西医科大学 一：摘要：本文主要介绍了溶菌酶的理化性质及分类，分离纯化方法，酶活
力测定方法，还介绍了溶菌酶在食品﹑医药上的应用及其最新研究进展。 二：关键词： 溶菌酶 分离纯化 活力测定 临床应用 研究现状 三：前言： 溶菌酶又称脆壁质酶或N 一乙酰壁质聚糖水解酶，是英国细菌学家弗莱明于1922 年在鼻粘液中发现的强力杀菌物质，此后人们在人和动物的多种组织、分泌液及某些植物、微生物中也发现了溶菌酶的存在。由于溶菌酶本身是一种天然蛋白质，抗菌、抗病毒、抗肿瘤、无毒性的优点，使得溶菌酶在食品上和医药上都有广泛的应用，在生物技术中, 溶菌酶是基因工程、细胞工程、发酵工程中必不可少的工具酶, 可以说溶菌酶的发现是近代酶化学研究的最大成果之一[2]。这里通过对溶菌酶理化性质、分离纯化方法和应用的介绍，使大家对溶菌酶有更加清晰全面的了解，以便于对溶菌酶更深入地研究和探索。 四： 溶菌酶概述 1.1 溶菌酶分布[3] 溶菌酶名称起源于1922 年，Alexander Fleming 发现人的唾液、眼泪中存在一种可溶解细菌细胞壁的酶，因其具有溶菌作用，就命名为溶菌酶。此后人们在人和动物的多种组织、分泌液及某些植物、微生物中也发现了溶菌酶的存在。溶菌酶广泛存在于动植物体内和人的外分泌液中。 1.2 溶菌酶分类[4] 国际酶学委员会根据其底物及作用特点又称其为酰胺酶或粘肽N-乙酰基胞壁酰水解酶，编号E C3.2.1.17，与常见的蛋白酶、淀粉酶一样属水解酶系列。 根据其来源不同一般可将溶菌酶分6 类：C型(chicken)、G型(goose)、无脊椎动物型(invertebrate-type)、噬菌体、细菌和植物来源溶菌酶。不同来源酶的分子量、氨基酸组成及酶特性各有不同，但三维结构显示来源于共同的进化
起源。目前对C型溶菌酶研究较多，它是由129个氨基酸残基组成的一条多肽链，含有4对二硫键，三维结构为较紧密的椭球形，它广泛存在脊椎动物如哺乳动物、鸟、爬行动物及鱼类和无脊椎动物如昆虫、甲壳类中。微生物来源的溶菌酶较多，广义上一般分以下几类：①内-N -乙酰己糖胺酶，与卵白溶菌酶一样，能分解构成细菌细胞壁骨架的聚糖；②酰胺酶，能切断连接聚糖和缩氨酸的N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸键；③内肽酶和蛋白酶，能分解细胞壁缩氨聚糖的缩氨酸键；④ β-l,3、β-1,6-葡聚糖酶和甘露糖酶(葡甘露糖酶)，能分解酵母菌细胞壁；⑤磷酸甘露糖酶，与β-1,3、β-l ,6-葡聚糖酶、甘露糖酶(葡甘露糖酶) 共同作用，能分解原生质；⑥壳多糖酶，与葡聚糖酶共同作用，能分解霉菌或酵母菌；⑦脱乙酰壳多糖酶，主要分解霉菌中的毛霉菌(Mucor) 和根(Rhizopus )。 1.3 溶菌酶基本理化性质及作用机理 ①溶菌酶由129个氨基酸构成的单纯碱性球蛋白,化学性质非常稳定。当pH值为1.2～11.3范围内剧烈变化时,其结构几乎不变。在酸性环境中,溶菌酶对热的稳定性很强；当pH值为4～7100℃处理1 min仍能保持原酶活性;当pH值为3时能耐100℃加热处理45min;在干燥条件下,溶菌酶可以长期在室温存放,其纯品为白色或微黄色。黄色的结晶体或无定形粉末,无臭,味甜。易溶于水,遭碱易破坏,不溶于丙酮和乙醚[5]。 2 溶菌酶分离纯化 [7] 2.1 材料与方法 2.1.1 原料与试剂 鲜鸡蛋(市售)、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、硫酸铵、氢氧化钠、盐酸、氯化钠、丙酮、724型阳离子交换树脂等,以上药品均为分析纯。 2.1.2 主要仪器 分光光度计(7230G型)、搅拌器(200～300rpm)、离心(4000rpm)。 2.1.3 菌种 藤黄微球菌(Micrococcus luteus) 2.1.4 培养基 液体培养基:牛肉膏0.5g,葡萄糖0.1g, 氯化钠0.5g,蛋白胨1g, 溶于1L水中, 分装于三角瓶中,121℃灭菌15min。 固体培养基:牛肉膏5g, 葡萄糖1g, 蛋白胨10g,琼脂20g,置于1L水中,加热溶解, 分装于三角瓶中,121℃灭菌15min。 2.2 工艺流程 溶菌酶分离纯化的工艺流程如下图所示： 2.3 操作步骤 2.3.1 蛋黄与蛋清的分离 取新鲜的鸡蛋,去壳,经分离器后,使蛋清与蛋黄分离。打破蛋壳时应避免蛋黄破散,使两者完全分离。 2.3.2 蛋清的预处理 将分离后的蛋清加入到搅拌器中,200～300rpm下搅拌10min, 再将蛋清搅拌稠度均匀即可,以不引起发泡为宜。最后用2～3层纱布过滤,以除去残余蛋壳和少量蛋黄。 2.3.3 吸附 将过滤后的蛋清冷至5℃后移入搪瓷捅中, 然后在搅拌下加入已处理好的树脂(14%加入),使其悬浮在蛋清中,在0～5℃下,搅拌吸附5h,然后在0～5℃静置20h以上,等分层后,弃去上清液后的树脂用清水反复冲洗2～3次,以除去杂蛋白,最后晾干树脂,移入一个搪瓷缸中。 2.3.4 酶的洗脱 在上述树脂中加入同体积的0.15mol/L的pH6.5磷酸盐缓冲液,搅拌洗脱20min,过滤洗脱液,除去一部分杂质。再重复洗脱2次。将除去杂质的树脂加入等量浓度为10%的硫酸铵溶液,搅拌洗脱30min,滤出洗脱液,重复洗脱3次,滤出的洗脱液一起倒入沉淀缸中沉淀。 2.3.5 沉淀 在沉淀缸中按洗脱液的体积加入32%固体硫酸铵,搅拌使其溶解, 在4℃放置过夜。第2天,用虹吸法取出上清,4000rpm离心10min分离沉淀物。 2.3.6 透析 将沉淀物用蒸馏水全部溶解,然后放入透析袋中,在10℃水中透析过夜,以除去沉淀中的硫酸铵,收集透析液。 2.3.7 盐析 将透析液移入一容器内,用0.1mol/L的NaOH调溶液pH至8.5～9.0, 有白色沉淀时,应立即离心除去沉淀。用2mol/LHCl调pH至3.5,搅拌, 并在0℃放置48h,同上离心收集沉淀物。 2.3.8 成品的干燥 将上述沉淀物加入到丙酮,搅拌,放置2h,收集沉淀,用冷冻干燥法干燥沉淀即得产品。干燥的溶菌酶可在室温下长期保存。其纯品为白色或微黄色的结晶体或粉末,无臭,味甜,易溶于水,不溶于丙酮、乙醚等有机溶剂。 3： 酶活力测定方法[9] 3.1 底物的制备 将微球菌接种于液体培养基扩大培养(28℃,24h),再接种于固体培养基培养( 28℃,48h),用无菌水将菌体洗涤, 4000rpm 离心10min, 弃上清,再洗菌体数次, 最后用少量无菌水制成悬液, 冷冻干燥即得干菌粉。取干菌粉5g,加入少量0.1mol/L的pH6.2磷酸缓冲液置于匀浆器或研钵中研磨2min, 倾出并稀释至20～25mL,悬液的光密度OD450在0.5～0.7范围为宜。 3.2 酶液的制备 准确称取干溶菌酶粉5mg,用0.1mol/L的pH6.2磷酸缓冲液溶解成0.05mol/L酶液。 3.3 酶活力测定 将酶液与底物悬液分别置于25℃水浴中保温10～15min, 测底物悬液的OD450 值,作为对照。然后加入酶液0.2mL(约10μg酶蛋白)迅速摇匀。从加酶时开始记时, 每30s测1次OD450值,共测3次。 3.4 酶活力的计算 以每毫克溶菌酶每分钟使吸光度降低0.001个单位为1个酶活力单位。溶菌酶活力=ΔOD450/(0.001×W)(U/mg) 式中, ΔOD450 为450nm 处每分钟吸光度的变化；W为加入的酶量(mg)。 五：小结与讨论 关于酶的纯化上, 蛋清中溶菌酶的等电点在pH=10.8 左右, 在偏酸性和偏碱性溶液中, 其稳定性都比较好, 蛋清中其他蛋白杂质的等电点约在pH4.6～5.0 左右, 适量酸的添加既不会破坏溶菌酶, 又便于蛋白杂质的沉淀, 使溶菌酶得到分离纯化。对于酶活力的高低, 温度对其影响比较大, 温度低时产品纯度低, 导致酶活力降低; 而温度过高时, 可导致酶蛋白发生不可逆变性, 同样造成酶活力下降。所以温度控制要适当。除此之外, 酶活力还与酶的纯度相关。因此, 可在透折后用超滤工艺使酶液得到浓缩, 从而提高酶的比活力, 同时又可除去大部分蛋白杂质[10]。 六：溶菌酶在医药领域上的应用 溶菌酶可作为一种具有杀菌作用的天然抗感染物质。有抗菌、抗病毒、止血、消肿止痛及加快组织恢复功能等作用。临床用于慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口腔溃疡、水痘、带状疱疹和扁平疣等。也可与抗菌药物合用治疗各种细菌和病毒感染。氯化溶菌酶医疗效果更广，有浓痰分散、出血抑制、组织修复、消炎镇痛、抗过滤性病毒等作用，因而用氯化溶菌酶的制药有消炎消痔、治感冒、皮肤病及眼、鼻、喉等用药. 七： 溶菌酶应用的最新研究进展 7.1 溶菌酶固定化 将溶菌酶固定化在食品包装材料上, 生产出有抗菌功效的食品包装材料, 以达到抗菌保鲜功能。将溶菌酶固定化在HEPA(空气过滤器)上, 作为空调的空气净化系统, 使其具有高效除尘和杀菌两大功能。当空气通过滤网时, 先滤集捕捉尘粒和细菌,然后将捕捉到的细菌杀灭[15]。 7.2 生产低聚壳聚糖 用溶菌酶非专一性地降解海洋生物高分子壳聚糖, 使其成为能被人体吸收的低分子量具有独特生理活性和功能性质的低聚壳聚糖[16]。 八： 参考文献： [1] 罗晓薇.火焰原子吸收光谱法测定茶叶中的铅铜[J].现代仪器,2004,(03):30-32. [2]GB2757-1981 蒸馏酒及配制酒卫生标准[S]. [3][4] 马立保,程时军,张 伟.溶菌酶应用研究概况[J].新进展,2010(1):26-30. [5] 何金花,刘誉,刘冠杰.溶菌酶在医药中的应用及其研究进展[J].药展,2008(2):02-04. [6] 李鹤,马力,王维香.溶菌酶的研究现状[J].食品研究与开发,食品研究与开发,2008(1)12-14. [7] 史小利，李宗谦，徐淑霞.蛋清溶菌酶提取工艺研究[J].现代农业科技，2008（6）166-168. [8] 林亲录,马美湖.鸡蛋卵清中溶菌酶的提取与纯化[J].食品科学, 2002,2(23):43-46. [9]刘源岗,邓倩莹, 廖问陶.溶菌酶的活性测定[J].食品科技, 2005(10):71- 73. [10]张灏,赵玉萍,杨严俊.超滤法提取蛋清溶菌酶[J].无锡轻工大学学报,2002,6(21):607-612.