维生素和锌营养水平与小鼠胚胎HOX基因表达的相关性

" 与正常组比较
] 与缺乏组比较 # ^ "7"$ # ^ "7"$，
表"
母鼠维生素 ) 和锌营养水平与 DEB 57$ 基因表达的相关系数
DEB 基因表达 面积密度 积分光密度 "7.[ "7\’ "7\[ "7\" "7\\ "7\\
营养指标 血清碱性磷酸酶 股骨锌 血清维生素 )
动物 ! > 锌营养水平与 DEB 基因表达的相关性： 经 $ 周的缺锌饲料喂养， 出现了脱毛、 脱须、 眼分泌 物增高等缺锌症状， 检测结果见表 5， Y。血清 )C1 与面积密度、 积分光密度呈高度正相关， 股骨锌含量 与面积密度、 积分光密度也呈高度正相关 （表 !） 。
中华预防医学杂志 0$$/ 年 // 月第 &- 卷第 " 期
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论著・ ・
维生素 ’ 和锌营养水平与小鼠胚胎 ()* 基因表达的相关性
孙秀发 朱清华 刘恭平 杨丽琛
【摘要】 目的 方法
研究不同维生素 ’、 锌营养水平与小鼠胚胎 ()* +% （&,-） 基因表达的相关关系。
缺乏组喂饲无维生素 ’ 和低锌饲料； 补充组： 开始时饲料同缺乏 昆明种雌鼠随机均分为 & 组：
组， 母鼠受孕第 . 天改为富含维生素 ’ 和锌的饲料； 正常组自始至终喂饲正常饲料。动物喂养至出现 明显维生素 ’、 锌缺乏症状后进行交配。受孕第 /0 天取出相应数量孕鼠处死， 取样测生化指标； 取胚 胎测定 ()* +% （&,-） 基因 123’ 表达量。结果 缺乏组、 补充组和正常组母鼠血清维生素 ’ 水平均 小鼠机体维生素 ’ 值分别为 $,%% ! 股骨锌含量均值分别为 /0%,& 18 6 98、 145 6 7、 /,$& ! 145 6 7 和 /,%$ ! 145 6 7， /-0,/ 18 6 98 和 /!&,: 18 6 98， 差异有显著性。胚胎 ()* +% （&,-） 基因表达也显著升高。结论 【关键词】 维生素 ’； 锌； 基因， 同源盒； 基因表达 !"##$%&’(") *$’+$$) ),’#($)’ %$-$%. "/ -(’&0() 1 &)2 3()4 &)2 567 !8 9$)$ $:;#$..(") () 0(4$ $0*#<". !"# $%&’( ，)*" +%,-.&( ，/0" 12,-3%,- ，45 (6 , 743(8594,5 2’ #&58%5%2, (,: ;22: *<-%4,4 ，=2,->% ?4:%@(6 A2664-4 2’ *&(B.2,- ",%C48D%5< 2’ !@%4,@4 (,: =4@.,262-< ，E&.(, %&$$&$，+<=>? 【 1*.’#&4’】 6*=$4’(-$ +4@@A5?B=4> CABDAA> >EB@=A>B 5AFA5G 4H F=B?1=> ’ ?>I J=>K ?>I ()* +% （&,-）8A>A ALM@AGG=4> => 1=KA A1C@N4G D?G GBEI=AI, >$’?"2. O<A PE>1=>8 HA1?5A 1=KA DA@A I=F=IAI B<@AA 8@4EMG： IAH=K=A>B 8@4EM（ QR）HAI D=B< H4IIA@ IAH=K=A>B 4H F=B?1=> ’ ?>I J=>K，@AM5A>=G<AI 8@4EM（ 2R）HAI D=B< H4IIA@ IAH=K=A>B 4H F=B?1=> ’ ?>I J=>K E>B=5 B<A .B< I?N ?HBA@ K4>KAMB=4> ?>I B<A> HAI D=B< H4IIA@ @=K< => F=B?1=> ’ ?>I （3R） ，HAI D=B< >4@1?5 H4IIA@, ’HBA@ 4CF=4EG GN1MB41G 4H F=B?1=> ’ ?>I J=>K IAH=K=A>KN J=>K，?>I >4@1?5 8@4EM ?MMA?@AI，B<A 1=KA DA@A 1?BAI, )> B<A /0B< I?N ?HBA@ K4>KAMB=4>，M@A8>?>B 1=KA DA@A 9=55AI ?>I B<A=@ 5AFA5G 4H （&,-）DA@A IABA@1=>AI H4@ B<A A1C@N4G F=B?1=> ’ ?>I J=>K DA@A IABA@1=>AI ?>I B<A K4>BA>B 4H 123’ 4H ()* +% 145 6 7，/,$& ! 145 6 7 ?>I /,%$ ! 145 6 7， D=B< G=BE <NC@=I=J?B=4>, @$.,%’. O<A 5AFA5 4H F=B?1=> ’ D?G $,%% ! @AGMAKB=FA5N ?>I B<?B 4H J=>K /0%,& 18 6 98， /-0,/ 18 6 98 ?>I /!&,: 18 6 98 => QR，2R ?>I 3R，@AGMAKB=FA5N, O<A 123’ 4H ()* +%（&,-）8A>A ALM@AGG=4> => 14EGA A1C@N4G =>K@A?GAI G=8>=H=K?>B5N => QR，2R ?>I 3R（ F S , !")4%,.("). 7AFA5G 4H F=B?1=> ’ ?>I J=>K => B<A C4IN 4H M@A8>?>B 1=KA M4G=B=FA5N K4@@A5?BAI G=8>=H=K?>B5N $,$-） （&,-）8A>A ALM@AGG=4>，D=B< K4AHH=K=A>BG 4H K4@@A5?B=4> 4H $,.: B4 $,!!, D=B< B<A=@ ()* +% 【A$< +"#2.】 T=B?1=> ’； U=>K； RA>AG， <41A4C4L； RA>A ALM@AGG=4> 和锌营养水平与胎鼠 ()* +% （&,-） 基因表达呈高度正相关， 各项指标相关系数为 $,.: ; $,!!。
体操作步骤见文献 ［5］ 。 （$） 杂交结果的定量分析： 采用 D1C)T@(""" 高 清晰度彩色病理图文分析系统， 对杂交点的阳性表 达面积千分比 （面积密度 + ( 个视野中阳性表达面 积之和 : ( 个视窗面积） 及其平均光密度进行测定。 组间用方差分析。 Y > 统计处理： 结 果
（ 57$） 基因表达的 (7 血清维生素 ) 与 DEB 2Y 相关性： 动物经长达 (’ 周的无维生素 ) 的饲料喂 养， 缺乏组和补充组雌鼠均出现皮毛干枯、 胡须脱 落、 反应淡漠、 眼部有脓性分泌物， 食量减少和不喜 活动等缺乏症状， 其血清维生素 ) 水平和 DEB 基因 表达的 934) 水平见表 (， 血清维生素 ) 水平和面 。 积密度、 积分光密度呈正相关 （表 !）
表# 孕鼠血清碱性磷酸酶活性和股骨锌浓度 （每组 Y 只， ! 8 "） !
表! 孕鼠血清维生素 ) 及小鼠胚胎中 DEB 57$ 基因的表达 （每组 [ 只， ! 8 "） !
组别 缺乏组 补充组 正常组 血清维生素 ) （! 9HI : C） "7YY 8 "7"’" (7"5 8 (7Y" 8 "75! "7(!" ] 面积密度 "7"$ 8 "7"(" "7". 8 "7(" 8 "7"$ "7"(" ] 积分光密度 Y557\ 8 (!!7"" ’[$7! 8 !"’7Y" ] \5!7Y 8 ([5’Y ・
中华预防医学杂志 !""( 年 (( 月第 5$ 卷第 ’ 期
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锈钢鼠笼喂养， 自由摄食饮水， 室温 !" # !$% ， 湿度 为 $$& # ’$& 。动物在实验第 (’ 周 （维生素 ) 缺乏 症状明显时） 按雌 * 雄 + ! * ( 合笼交配， 清晨查阴栓， 阳性者为受孕 " ,。受孕第 (! 天时， 眼眶取血后， 脱 颈椎处死， 取出胎鼠。置液氮中冷冻， 再移至 - ."% 冰箱保存。所用器具必须经高温或用焦碳酸二乙酯 （/012） 水处理， 确保无 34) 酶。 （!） 锌的研究： 昆明种小鼠 （体重 !$ # 5" 6） 由同 济医科大学动物学部提供， 数量、 性别、 饲养及分组 同前。缺锌组： 饲料含锌量仅为 （57" 8 "7$）96 : ;6； 补锌组： 在受孕第 . 天才给予补锌饲料， 饲料中含锌 量达 5" 96 : ;6； 正常组： 自始至终喂以正常饲料。动 物须用去离子水。笼具、 水瓶均用 (& 4<! 0/=) 浸 泡处理， 并定期用去离子水清洗。经 !$ , 锌耗竭性 喂养后， 按上法进行交配。受孕第 (! 天取样， 并取 胚胎作相应处理。 （日本日 ! > 孕鼠血清维生素 ) 采用荧光法测定 立公司产 ?@5""" 型荧光分光光度计） 。股骨锌含量 采用原子吸收分光光度法测定 （北京第二光学仪器 厂产光度计， 。血清碱性磷酸酶 （ )C1） A?B@(?! 型） 活性采用北中生生物工程技术公司产 )C1 试剂盒 测定。 （原位杂交 5 > 胎鼠 DEB 57$ 基因 934) 的测定 法） ： （(） 胚胎组织总 34) 的提取： 随机取正常组受 孕 (! , 胎鼠若干， 利用 =3FGHI =HJ<I 34) 提取试剂盒 （美国 KFL2E 公司产品） 提取总 34)。 （!） 探针的制备： 根据从 FMJNOMNJ 网基因库检索 的 DEB57$ 基因的 /4) 序列， 在 DEB57$ 第 ( 外显 子区 设 计 ( 对 引 物， 长 度 为 !( 个 碱 基， 由 KFL2E =Q L3C 公 司 合 成。 利 用 =PJ<M EMN =RSN 3=@123 （德国 LHNWOPM6NO Q<MMWNP9 公司） 和上述合成 TUVJN9 的引物进行 123 扩增， 获得 X/4) 片段作为 /4) 探 针， 长度为 !Y. SZ。按地高辛 /4) 标记及检测试剂 盒 （ LHNWOPM6NO Q<MMWNP9 公司） 的方法， 标记探针。 （5） 病理切片的制作： 将鼠胎从 - ."% 取出后置 于 - !"% ， 在恒冷切片机上将鼠胎沿旁矢状切面切 成 ’ # [! （每只鼠胎切 ! 张切片） ， 迅速 9 厚的切片 置于 Y& 的多聚甲醛固定 !" 9PM， 室温。磷酸盐缓冲 液洗后， 逐级酒精脱水。然后， - !"% 保存备用。 （Y） 原位杂交： 用地高辛标记的探针与鼠胎切片 进行原位杂交， 探查 DEB57$ 的 934)， 并用酶联免 万方数据 疫显色 （采用地高辛 /4) 标记及检测试剂盒） 。具