尿微量白蛋白MALB检测
尿微量白蛋白MALB检测
1检验目的
指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理
将未稀释的样品加入含有抗人血清白蛋白特异性抗体的缓冲液变浊溶液吸光度值（340nm）与尿液样品中白蛋白浓度成正相关。
3 标本：
3.1 病人准备：留取24h尿液标本（加苯防腐）混匀后记录尿液总量取少量尿液离心；清晨中段尿。
3.2 类型：尿液
3.3 标本存放尿液的稳定性：20～25℃保存可稳定1天，2～8℃保存至少可稳定2天； -20℃保存可稳定6个。
3.4 标本运输常温条件下运输。
3.5 标本拒收标准细菌污染的标本。
4 实验材料
4.1 试剂：上海倍特生物科技有限公司Malb试剂盒
4.1.1 试剂组成
R1:TRIS /HCL缓冲液：20 mmol/l，pH 7.4；氯化钠：150 mmol/L；聚乙二醇6%
R2:抗人白蛋白TRIS /HCL缓冲液：20 mmol/l，pH 7.4氯化钠：150 mmol/l
4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：2-8°C下保存期限：见试剂标签上的有效期。机上稳定期：90天。
4.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。
4.2 校准品：使用试剂盒里校准品自动分析仪进行校准。
5 仪器
AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪
6 操作步骤
6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。
6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。
7 质量控制
在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
8 计算方法
以MALB校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mg/L报告。
9 参考值范围
尿液：0-300mg/24h，随机尿<20mg/l
10注意事项：
10.1尿液的有多含细胞或浑浊，应先离心除去，取清晰透明尿的测定。
10.2避免与皮肤及粘膜接触。
11临床意义
白蛋白是一种主要的血浆蛋白质。在正常情况下，白蛋白因为其分子太大而不能穿过肾小球基底膜。因此，尿液中的蛋白通常浓度非常低。肾小球基底膜的损坏能够改变其通透性。那么白蛋白就能进入尿液。尿液中的白蛋白浓度持续升高成为微蛋白尿。
12 操作性能
12.1 线性范围：0～200mg/L。
12.2 灵敏度：批内CV：7.0 mg/L：5.8%，54.5 mg/L:1.4%。批间CV：20.5 mg/L:5.0%，51.3 mg/L:3.4%
12.3 回收率：平均回收率102.6%。
13 超出范围结果处理
本法的检测范围为200mg/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。
14 病危报警值的处理
无警告/危急值
15 方法局限性
干扰物质：尿液中的干扰成分引起的误差<2%。
16 参考文献
16.1叶应妩，王毓山，申子瑜主编·全国临床检验操作规程·中华人民共和国卫生部医政司编·(第四版)
16.2钱士匀主编.临床生物化学及生物化学检验实验指导.人民卫生出版社，2012年第5版
16.3府伟灵,徐克前主编.临床生物化学检验.北京.人民卫生出版社,2012年第5版
16.4试剂说明书。
尿微量白蛋白检测
第一部分 尿微量白蛋白（U-Albumin）的临床意义 1982年Viberti等发现了糖尿病患者尿中总蛋白在正常范围，而尿白蛋白排泄增加的现象，首先提出了尿微量白蛋白的观点，并指出了这种蛋白的出现是肾病发生的早期预兆。 随着检测技术的进步，目前主要用于对糖尿病、高血压患者早期检测发现微量蛋白尿，以便及时采取保护肾功能的措施，如限制蛋白的摄入量、禁烟、及时控制血糖和血压。 因此及时检测尿微量白蛋白，对控制和防止早期肾病的发生极为重要。 1、微量白蛋白尿的基本概念 多种疾病可引起尿白蛋白排泄率持续增加，尿中用常规方法不能检测到，叫微量白蛋白。其含量在20－200mg/L，此时如能及时治疗，肾脏损害处在尚可逆转的时期，这种常并发于糖尿病，高血压病人中的尿蛋白，称微量白蛋白。 2、尿正常代谢及尿蛋白的形成 尿是在肾脏内形成的。体内血流经肾小球毛细管时，其中的细胞、大分子蛋白质和脂类等胶体被截留，其余成份则经半透膜滤过进入肾小球中此称为原尿。原尿通过肾小管时，绝大部分水分及电介质和葡萄糖等物质又被吸收回血，同时肾小管也分泌一些物质加入尿中，最后生成终尿。经输尿管、膀胱、尿道排出体外。 病理情况下，由于肾小球内压力增高滤过增加或是基底膜改变，导致高滤过率而出现蛋白尿。 3、微量白蛋白正常值： 健康成年人尿微量白蛋白参考区间 24h尿：＜30mg/L（24h最高量） (摘自卫生部医政司“全国临床检验操作规程”2006,第三版p356) 与定性法比较有下列优点： *敏感性高，可测出定性法阴性的标本 *精密度CV5－8％ *定量结果测定范围广5－200mg/L *标本量少，20ul尿液 *特异性强能抗尿中多种物质的干扰 *测量时间快，3分钟报告结果 4、尿微量白蛋白测定的临床意义 (1) 、对高血压病的应用价值
尿微量白蛋白检测的标准操作程序
尿微量白蛋白检测的标准操作程序 【目的】掌握NEPhstar特定蛋白分析仪检测尿微量白蛋白正确方法，保证检查项目的准确性。 【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，请专业组长及科主任签字后生效。 【检测原理】 用散射比浊法，可溶性抗原与特异性的抗体反应形成不溶性复合物，当光线通过反应悬液时发生散射并由特种蛋白分析仪检测到。散射光值的多少与测试样本中的蛋白浓度成一定比列。通过刷卡将磁条中的标准曲线存储入仪器中，仪器会自动计算样品中的特定蛋白浓度。 【试剂组成】 以上试剂由深圳国赛生物科技有限公司生产 【所需其他材料】 1．NEPHSTAR特定蛋白分析仪 2．NEPHSTAR检测附件 3．电子移液器YB201 4．普通移液器 【操作步骤】 1、打开NEPHSTAR特定蛋白分析仪电源，仪器显示 2 3、输入代码61，刷磁卡按 刷磁卡，按ENTER直接进入下一步，默认仪器的序号和稀释度按此时
4、将装有搅拌子和20ul尿液样品的测量杯放入测量室。 5 移液器YB201将400ul缓冲液和40ul抗血清加入测量杯。 6、NEPHSTAR特定蛋白分析仪自动感应试剂的加入，搅拌子开始搅拌，测试开始。测试完毕后仪器自动显示打印结果。 【参考区间】 mALB<25mg/L 【临床意义】 1、正常情况下白蛋白在血液中检测出，并由肾脏过滤，当肾脏功能正常时白蛋白不会出现在尿液中，当肾小球基底膜受到损伤至通透性改变时，会有小部分白蛋白漏入尿液，形成微量白蛋白尿，高血压、糖尿病及系统性红斑狼疮等常伴有肾脏病变的缓慢进行性恶化，尿液中可较早发现异常。 2、尿液中白蛋白排泄量变动较大，随机尿标本一次尿微量白蛋白升高可能并无意义，如连续2-3次升高均超过参考区间方有诊断价值。 【注意事项】 1、不要将批号的试剂要刷磁卡，磁卡里含有重要的标准曲线信息。不同批号 试剂不能混用。 2、试剂盒未开启前应存于2-8℃冰箱。缓冲液和样品处理液在使用前放置室温 平衡至18-26℃.抗血清和质控可稳定1个月。 3、高度乳糜血都不适合用散射比浊检测。 4、如果样品中含有类风湿因子，副蛋白或免疫循环复合物，则可能影响检测的结果。 5、仪器不用时盖上测量室的舱盖，放置灰尘落入
尿微量白蛋白的临床检测的注意事项
尿微量白蛋白的临床检测的注意事项 欧阳嵘 目前，我国患糖尿病、高血压、心脑血管病的人数日益增多。随着病程的发展，肾脏受累的可能性与受累的程度也不断上升。通常情况下血尿素和血肌酐的测定值正常时并不能排除肾脏的受损, 而尿常规蛋白测定结果为阳性时,肾脏的损伤往往已达到不可恢复的阶段，尿微量白蛋白() 的测定已越来越多地用做肾组织损伤的早期诊断指标,其临床意义也已日益为临床医生所重视。若在发生微量白蛋白尿的这一阶段积极有效地控制血糖、降压、降脂、减少蛋白摄入量、改善生活方式，仍有希望阻止病情向大量蛋白尿发展或延缓其发展速度，同时也能减少心血管事件的发生[1-2]。但在临床实际操作中，尿微量白蛋白的测定亦有很多需要注意的相关事项，值得我们临床医生去关注。 1、尿微量白蛋白的定义 1982年等发现1型糖尿病时尿总蛋白在参考范围内，而尿白蛋白排泄却增加，由此提出了“微量白蛋白尿”的概念，并把它作为糖尿病早期肾损害一个敏感指标[3]。其特征是尿白蛋白浓度为20-200或白蛋白排泄率20-200μ（或30-30024小时），或白蛋白/肌酐比率30-300每克肌酐）。此时尿常规试纸条检测蛋白为阴性。尿常规试纸条检测蛋白为阳性时白蛋白浓度已大于200（或白蛋白排泄率大于200μ），称为大量白蛋白尿。因尿蛋白浓度受主客观因素影响比较大，故临床上更多采用白蛋白排泄率或尿白蛋白/肌酐比率来表示尿
白蛋白的值。国际上多采用白蛋白排泄率表示尿中白蛋白的排出量。 2、尿微量白蛋白发生的机理 白蛋白()占血浆总蛋白量的60％，分子量为69，是一种带有负电荷的大分子蛋白。正常情况下在肾小球滤过膜上有许多小孔起机械屏障作用，膜孔直径为5.5,限制大分子物质(如血细胞和大分子蛋白质)的滤过。在滤过膜上还存在着带负电荷糖蛋白和硫酸乙酰肝素，这些带负电荷的结构形成了滤过膜的电子学屏障，限制了带负电荷的分子滤过。血浆白蛋白分子量69 ，且由于其带负电荷，所以正常情况下只有极少部分能滤过，经肾小球滤过的蛋白质几乎全部被近曲小管以主动方式重吸收，因此最后随着尿液而排出的白蛋白只有极少量。正常情况下，绝大部分蛋白不能通过滤过膜。但在病理情况下[4]，如各种炎症、代谢异常和免疫损伤，使肾小球血流动力学异常，肾小球滤过膜损害是造成尿微量白蛋白排出量增加的重要原因。糖尿病病人由于长期高血糖使非酶糖酰化速率增加，导致缺氧，血液黏度增高，同时内皮细胞释放内皮素和一氧化氮等血管活性物质使肾小球毛细血管张力改变，进而引起肾血流动力学变化，使肾小球处于高滤过状态并导致肾损害，同时糖尿病患者肾小球滤过膜上硫酸乙酰肝素合成减少，硫酸肝素分子带有许多阴离子侧链，对于维持基底膜电荷和孔径的大小起重要作用，导致肾小球滤过膜电荷选择性屏障受损，使尿微量白蛋白在尿中排出增加[。再加上糖尿病病人存在三多一少症状，近曲小管内的尿流速增加，导致被滤出的白蛋白又不能被很好的重吸收，故而最终从尿液中排出的白蛋白增加。另外，对正常人群的分析
尿微量白蛋白分析
尿微量白蛋白检测 微量白蛋白尿,是指在尿中出现微量白蛋白。白蛋白是一种血液中的正常蛋白质，但在生理条件下尿液中仅出现极少量白蛋白。微量白蛋白尿反映肾脏异常渗漏蛋白质。英文缩写：mAlb 参考值：0．49～2．05mg/mmol·Cr或4．28—18．14mg/g·Cr 概念解释：病理见于糖尿病肾病、高血压、妊娠子痫前期，是肾损伤的早期敏感指标，人体代谢正常情况下，尿中的白蛋白极少，具体到每升尿白蛋白不超过20mg（<20mg/L），所以叫微量白蛋白尿微量白蛋白是评估肾脏受损程度：当发现尿微量白蛋白20mg/L-200mg/L范围内，尿常规尿蛋白的显示为阴性(-)或(+-)，就属于微量白蛋白尿，这个时候说明肾脏已经损伤。而当尿中微量白蛋白超过200mg/L时，尿常规测试尿蛋白阳性(+)~(+++)，就应该警惕了，此时证明机体已有大量白蛋白漏出，可能出现低蛋白血症，肾病发展离不可逆期只有一步之遥，如果不及时进行医治，就会进入尿毒症期。 当一名患者有高血压或糖尿病或同时患有这两种疾病(经常同时发生)时，肾脏血管会发生病变改变了肾脏滤过蛋白质(尤其是白蛋白)的功能，这使得蛋白质渗漏到尿中。微量白蛋白尿是糖尿病影响肾脏的早期征象，为糖尿病肾病。尿微量白蛋白，是糖尿病肾病、高血压肾病等的早期肾脏受损的表征。无论哪种疾病引起的尿微量白蛋白都是因起始原因不同造成的肾脏固有细胞的损伤，使肾脏固有细胞的结构发生改变，功能随结构的变化而变化，在尿液中的体现。临床检查内容一般包括免疫功能障碍评估，炎症状态监测，心血管风险评估和类风湿性关节炎及链球菌感染等各个方面。 对于微量白蛋白尿的治疗，西医应用的很广泛是激素进行抗炎，减轻肾脏固有细胞的渐进性损伤。激素治疗微量白蛋白尿，短时期内，会产生较好的效果。但是，由于已受损的肾脏固有细胞没有修复。所以，通常会在遇到感冒、感染的影响时，导致病情反复并进行性加重。微量白蛋白尿也是整个血管系统改变的征象，并可认为是动脉病变的“窗口”，因为它是肾脏和心血管系统改变的早期指征。定期检测尿微量白蛋白(U-MA)，普通人应当每年一次，而已增高的患者应每3个月测试一次。这样，对于肾病的预防及早期治疗都起的了积极作用。 临床应用：
尿微量白蛋白、尿肌酐、尿β2-微球蛋白等肾早期损伤检测项目及临床意义和参考值
尿微量白蛋白、尿肌酐、尿β2-微球蛋白等肾早期损伤检测项目及临床意义和参考值 传统肾功能检查项目反映肾小球滤过率变化，且只有当GFR下降到正常的1/2—1/3时才有病理性的升高。一旦血浆尿素、肌酐水平升高，肾脏病变多进入不可逆期。 项目组成 肾早期损伤检测项目 1、尿微量白蛋白； 2、尿β2-微球蛋白（β2-m）； 3、尿N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）； 4、尿肌酐。 标本及要求 标本类型：晨尿、随意尿或24h尿，最好用晨尿。 临床意义 一、尿微量白蛋白 1、糖尿病肾病：mAlb是肾小球滤过膜电荷选择性屏障损伤的重要标志蛋白质，其测定的应用被称为80年代对糖尿病学的两大贡献之一。随着糖尿病病程的进展，糖尿病人的慢性并发症特别是血管并发症，已成为糖尿病人死亡的主要原因。DN没有特殊的临床和实验室表现，尿蛋白仍是诊断DN的主要线索。 尿蛋白排出率＜20ug/min，为正常白蛋白尿期；若尿蛋白排出率20~200ug/min，为微量蛋白尿期，临床诊断为早期糖尿病肾病，目前主张用晨尿标本，测定时至少应在6个月内连续查2—3次尿，取平均值达到20~200ug/min方可诊断；当尿蛋白排出率持续＞200ug/min
或常规尿蛋白定量＞0.5g/24h，即可诊断DN。值得注意的是，即使是大量蛋白尿，对DN也不具有特异性。临床诊断DN必须仔细排除其它引起蛋白尿的原因。 2、高血压肾病：研究表明，原发性高血压患者定期进行尿mAlb 测定，有助于及早发现高血压肾病，尿mAlb测定可用于判断高血压肾病的病情和预后。mAlb尿是特发性高血压病人心血管危险综合指标。 3、其它疾病：mAlb升高也见于其它情况如外伤、烧伤、急性胰腺炎和大手术后，其值与病情程度呈正比。肾外恶性肿瘤患者也有mAlb升高。 二、尿β2-微球蛋白 β2-m是由100个氨基酸组成的单链多肽，作为HLA的轻链存在于除红细胞和胎盘滋养层细胞以外的所有有核细胞，尤其在淋巴细胞和单核细胞存在丰富。正常人体内β2-m非常恒定，能自由通过肾小球滤过，99.9%由近端肾小管重吸收和降解。其临床意义为： 1、肾小管性蛋白尿的诊断与鉴别诊断：近端肾小管是处理β2-m 的唯一场所，当肾小管重吸收功能障碍时，尿中β2-m浓度明显升高，称肾小管性蛋白尿，以区别于以白蛋白为主的肾小球性蛋白尿。引起肾小管性蛋白尿的疾病有：肾盂肾炎、抗生素中毒性肾病、重金属中毒引起的肾小管损伤、肾小管酸中毒、胶原病等。 2、鉴别上、下尿路感染：上尿路感染时，尿液β2-m浓度明显升高，而下尿路感染时则基本正常。 3、判断肾移植的排斥反应：肾移植无排斥者，尿液β2-m常无明显增高，当出现急性排斥反应，在排斥期前数天即见尿β2-m明显升高，在排斥高危期，连续测定有一定预示价值。
尿微量白蛋白定量检测操作程序
尿微量白蛋白定量检测操作程序 1.目的 规范尿微量白蛋白定量检测试验，确保检测结果准确性和重复性。 2．范围 本操作规程适用于生化室工作人员、实习人员、进修人员的操作前培训。 3.术语 4．测定原理 4．1测定方法：免疫比浊法 4．2 测定原理： 样品中的微量自蛋白与特异性的抗人白蛋白抗体在液相中相遇，立即形成不溶性抗原-抗体复合物，并产生一定的浊度。j虫度高低反映样品中MAlb的含量，通过与同样处理的校准品比较，即可计算出样品中MAlb的含量。 5．标本 5．1标本种类：随机尿及24h尿，常温下1天，样品中MAlb在2~8°C保存可稳定l个月，-20·C保存可稳定6个月。 5．2标本采集：见生化标本采集程序。 6．试剂 6．1试剂来源：新成生物有限公司。 6．2组成 规格：R1 90ml*2 R2 45ml*1 6．3试剂准备 本试剂为液体双试剂，可直接使用。 6．4试剂稳定性 试剂2~8·C密闭避光贮存可稳定12个月，开瓶上机2~ 8°C避光贮存可稳定90天。 7. 检测程序
7. 1试剂的准备：加入生化分析仪试剂盘中。 7. 2检测步骤： 7. 2. 1基本参数 方法:终点法主波长:340nm 样品/试剂:6/125ul 反应温度37·C 反应时间10min 副波长:700nm 7. 2. 2校准：使用试剂盒配套的校准品；当试剂更换批号、质控出现漂移、仪器保养、重要零部件更换后应重新校准。 8.性能指标 8.1、分析灵敏度：0mg/L。 8.2、测定范围：0~400mg/L。 8.3、精密度：批内cv.=5.0%、批间相对极差=10.0%。 8.4、准确度：相对偏差=10%。 8.5、空白眼光度：试剂空白在主波长340nm、副波长700nm处，10mm光径下，吸光度值<0.500。 9. 参考范围 10. 临床意义 10. 1 正常情况下，氨在肝脏转变成尿素。严重肝脏疾病是，氨不能从循环中清除，引起血氨增高。高血氨有神经毒，引起肝性脑病。成人血氨测定主要用于肝昏迷的监测和处理。10. 2血氨测定可用于儿科诊断Rere’s综合症。 10. 3对诊断先天性代谢紊乱，如鸟氨酸循环的氨基代谢缺陷也有一定价值。 11.注意事项 11.1、本品仅用于体外诊断。 11.2、试剂与样品雨量可根据不同仪器的需要1在tit剂样品体积比例不变的条fJ下2适当增加或;成j>lItfflJ与样品的用量。 11.3、采用必要的预防措施使用试剂， t式刑使用后应立即盖紧瓶盖，避免污染。 11.4、试齐IJ变混浊或空白吸光度值>0.500，表明试刑己失效应弃去。 11.5、试剂反应后所产生的废;在及使用后的包装材料应集中收集后按照相关法规进行废物处理。 11.6、准确的结果取决于准确校正的仪器、温度及时间的控制。
微量白蛋白检测方法
微量白蛋白检测方法 微量白蛋白（microalbumin）是指在尿液中微量存在的白蛋白，通常被用作评估肾脏 损伤的指标。下面是关于微量白蛋白检测方法的详细描述： 1. 尿液微量白蛋白定量试纸法：这是一种常用的快速、便捷的微量白蛋白检测方法。试纸上有特定抗体，在与尿液中的微量白蛋白结合后，导致特定的颜色反应。根据试纸颜 色的转变，可以定量测量尿液中的微量白蛋白的浓度。 2. 免疫荧光法：这种方法利用特定的抗体与尿液中的微量白蛋白结合，在荧光显微 镜下观察和测量荧光强度来评估微量白蛋白的浓度。 3. 酶联免疫吸附测定法：这种方法利用酶与抗体结合，在酶的催化作用下产生颜色 变化，从而测量尿液中微量白蛋白的含量。 4. 免疫化学法：这种方法利用特定的抗体与尿液中的微量白蛋白结合，然后使用化 学发光、颜色反应等方法来测量微量白蛋白的浓度。 5. 固相放射免疫分析法：这种方法利用放射性同位素标记的特定抗体与尿液中的微 量白蛋白结合，然后使用放射测量技术来测量微量白蛋白的含量。 6. 毛细管电泳法：这种方法利用毛细管电泳的原理，通过对尿液样品进行电泳分离，从而分析和测量微量白蛋白的浓度。 7. 质谱法：这种方法使用质谱仪测量尿液中微量白蛋白的质量，并根据峰的强度来 计算其浓度。 8. 高效液相色谱法（HPLC）：这种方法利用高效液相色谱仪，结合特定柱和检测器，将尿液样品中的微量白蛋白分离、识别和定量。 9. 生物传感器法：这种方法利用特定的生物传感器，如电极、荧光探针等，与尿液 中的微量白蛋白相互作用，从而产生信号，通过检测信号来测量微量白蛋白的浓度。 10. 核磁共振波谱法：这种方法利用核磁共振仪对尿液中的微量白蛋白进行谱学分析，从而获得微量白蛋白的浓度和结构信息。 以上是关于微量白蛋白检测方法的10条详细描述，每种方法都有各自的优势和适用范围，可以根据实际需要选择合适的方法进行微量白蛋白的检测。
尿微量白蛋白测定方法、临床意义及参考区间
尿微量白蛋白测定方法、临床意义及参考区间 糖尿病是以高血糖为特征的代谢性疾病，其并发症较多，其中糖尿病肾病是最常见的并发症，也是导致糖尿病患者死亡的主要原因之一。相糖尿病并发肾脏性病变者约占糖尿病并发症33.6%。糖尿病肾病是一种以血管损害为主的肾小球病变，为糖尿病性肾小球硬化症。肾小球疾病和损伤首先表现为尿微量白蛋白的变化，可作为临床上预测高血压、糖尿病、心血管疾病及血管损伤的敏感指标。尿微量白蛋白的测试对于糖尿病肾病的早期诊断有着十分重要的意义。 作用 尿微量白蛋白是尿中白蛋白（Alb）排出量在30-300mg/24h范围内，即已超出正常上限（30mg/24h）但尚未达到临床蛋白尿水平的中间阶段。 测定方法 尿微量白蛋白检测方法较多，主要有放射免疫法、酶联免疫吸附法、免疫比浊法、干化学试带法、免疫胶体金法。 干化学试带法采用指示剂误差法，试剂块中主要成分为四溴酚磺酞，其检测原理是：在pH2.5的条件下，四溴酚磺酞产生的阴离子与带阳离子的蛋白质发生颜色变化。 免疫胶体金法使用层析扩散与单克隆免疫技术，其反应后颜色的深浅与尿液标本中的白蛋白含量成正比。 参考区间 健康人尿mAlb：＜30mg/24h；排除率（AER）＜20μg/min；晨尿＜20mg/L。 健康人尿白蛋白/肌酐比值：＜24mg/g Cr。
微量白蛋白尿：30—300mg/24h；排除率20—200μg/min；晨尿20—200mg/L。 尿微量白蛋白/肌酐比值：24—200mg/g Cr。 临床意义 （1）尿微量白蛋白（mAlb）是糖尿病诱发肾小球微血管病变最早期的客观指标之一，对糖尿病肾病的早期诊断有重要意义。糖尿病患者出现mAlb尿时，在病理组织学上可看到系膜的扩张或有少数结节性病变，在糖尿病肾病分期上属于早期，如能及早发现并进行干预及治疗，肾脏损伤有可能恢复；但是肾损伤的确诊必须做侵害性的肾活检，具有一定的风险性。 （2）用于评估糖尿病患者发生肾并发症的危险程度。糖尿病患者如有持续的mAlb尿，肾病的发生几率要高于尿mAlb排出量正常者。 （3）高血压性肾损伤的早期标志：由于近年微量白蛋白测定的广泛应用，得知原发性高血压肾损伤的发生率高于过去的估计，因此这一指征不仅用以早期发现高血压性肾病，也可评估高血压的治疗效果。 （4）妊娠诱发高血压肾损伤的监测：定期检测妊娠诱发高血压孕妇的尿白蛋白有重要意义。持续的微量白蛋白尿常提示妊娠后期发生子痫的危险度较大。 在尿常规检查时，尿微量白蛋白的增加是肾损伤的早期指标，其增加对各种肾脏疾病及高血压、糖尿病的早期肾损伤的诊断有重要价值，是临床诊断的标准及治疗的靶目标。
尿微量白蛋白MALB检测
尿微量白蛋白MALB检测 1检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。 2 实验原理 将未稀释的样品加入含有抗人血清白蛋白特异性抗体的缓冲液变浊溶液吸光度值（340nm）与尿液样品中白蛋白浓度成正相关。 3 标本： 3.1 病人准备：留取24h尿液标本（加苯防腐）混匀后记录尿液总量取少量尿液离心；清晨中段尿。 3.2 类型：尿液 3.3 标本存放尿液的稳定性：20～25℃保存可稳定1天，2～8℃保存至少可稳定2天； -20℃保存可稳定6个。 3.4 标本运输常温条件下运输。 3.5 标本拒收标准细菌污染的标本。 4 实验材料
4.1 试剂：上海倍特生物科技有限公司Malb试剂盒 4.1.1 试剂组成 R1:TRIS /HCL缓冲液：20 mmol/l，pH 7.4；氯化钠：150 mmol/L；聚乙二醇6% R2:抗人白蛋白TRIS /HCL缓冲液：20 mmol/l，pH 7.4氯化钠：150 mmol/l 4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存：2-8°C下保存期限：见试剂标签上的有效期。机上稳定期：90天。 4.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。 4.2 校准品：使用试剂盒里校准品自动分析仪进行校准。 5 仪器 AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪 6 操作步骤
6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。 6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。 6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。 6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。 7 质量控制 在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。 8 计算方法 以MALB校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mg/L报告。
在糖尿病性肾病诊断中尿微量白蛋白测定的意义
在糖尿病性肾病诊断中尿微量白蛋白测定的 意义 【摘要】目的：研究初期检测尿MALB对糖尿病性肾损伤初期诊断具有的诊断意义。方式：对我院收治的40例糖尿病患者，进行分组：①按患者病程分为4组，每组10例，与正常对照组比较尿微量白蛋白浓度的转变。②按患者血糖浓度分为4组，每组10例，检测每组的微量白蛋白排出量的转变。③按患者血尿素氮，肌酐的浓度与正常对照组的血尿素氮，肌酐相较较，研究患者肾功能受阻碍程度。结果：① DM患者尿MALB排出量，各病程组与正常对照组相较较具超级显著性不同(P< 。② DM患者按空肚血糖浓度的不同检测的各组尿MALB 排出量具超级显著性不同(P< 。③ 40例DM患者中仅有4例血BUN 升高，2例CR的浓度升高。结论：结果证明尿MALB关于DN的初期诊断较生化指标灵敏，只有当病情较重及病程较长时，血生化才有可能发生明显转变。 【关键词】糖尿病; 尿微量白蛋白; 血肌酐; 血尿素氮 肾脏是糖尿病(DM)中最常受累的要紧器官，常并发糖尿病性肾病(DN)，DN是糖尿病致使死亡的要紧缘故之一，因此DN的初期诊断是超级重要的。REEW等1963成立了尿微量白蛋白(Microacbumin)(MALB)的放射免疫测定法，Magensen等别离利用该法对DM患者进行研究，发此刻临床蛋白前，尿白尿白排泄已呈亚临床增
高，称之为微量白蛋白尿，持续性微量白蛋白的DM患者发生临床DN 的危险性很高。 我依照我科室连年来对糖尿病患者尿微量白蛋白(U MALB)测定结果的观看，现总结如下。 1 材料和方式 DM患者40例，男30例，女10例，年龄30～65岁，诊断标准WHO制定，DM分组：①依照病程分4组，见表1;②依照血糖浓度分4组，见表2;③依照DM患者血尿素氮(BUN)，肌酐(CR)与正常对照，见表3。正常对照组20例，无DM、肾病、高血压等疾病，男15例，女5例，年龄30～60岁。令受检者留取24小时尿液，4℃冰箱保留，假设病人尿样测得值超过线性，可用生理盐水稀释，结果乘以稀释倍数。采纳免疫比浊法，测定U MALB试剂盒(北京利德曼公司提供，操作按说明书)，同时采纳BackMan DXC800全自动生化分析仪测定血糖尿素氮、肌酐等项目。 2 结果 表1 尿MALB结果表2 血糖浓度与U MALB的关系表3 血尿素氮，肌酐与对照组结果 3 讨论
小鼠尿微量白蛋白mALB酶联免疫分析ELISA
小鼠尿微量白蛋白（mALB）酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，尿液及相关液体样本中尿微量白蛋白（mALB）的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠尿微量白蛋白（mALB）水平。用纯化的小鼠尿微量白蛋白（mALB）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入尿微量白蛋白（mALB），再与HRP标记的尿微量白蛋白（mALB）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的尿微量白蛋白（mALB）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠尿微量白蛋白（mALB）浓度。 样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/
分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标 准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为360μg/L，240μg/L ，120μg/L，60μg/L，30μg/L）。 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 注意事项： 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计