检验科PCR室作业指导书
PCR定量丙肝RNA作业指导书
丙型肝炎病毒(H C V)核酸扩增(PCR)荧光定量检测标准操作程序一、目的：明确丙肝病毒核酸定量检测的操作规程，指导检验人员正确进行丙肝病毒核酸定量的检测,保证检测结果及时可靠。
二、范围：适用于进行丙肝病毒核酸定量检测的检验人员。
三、职责：实验操作人员应严格按操作规程进行实验。
四、检测原理：本试剂盒从血清或血浆中提取HCV RNA，在逆转录酶作用下将RNA逆转录为HCV cDNA，在引物的指导下，以四种脱氧核苷酸为底物，通过耐热DNA聚合酶的酶促作用，对cDNA进行体外扩增，用Taqman探针法检测扩增产物。
通过标准曲线，即可计算出被检物的含量。
五、试剂：1. 来源：上海复星HCV核酸扩增荧光定量检测试剂盒〕。
2. 规格：32人份/盒。
3. 试剂盒组成：3.1 病毒RNA提取试剂：用于从血清或血浆中提取HCV RNA。
裂解液 4ml×1瓶含有硫氰酸胍的溶液助沉剂1瓶含有助沉剂的冻干粉末去抑制剂1瓶含有去抑制剂的冻干粉末洗涤液A 14ml×1瓶含有硫氰酸胍的溶液洗涤液B 4ml×1瓶含有Tris的溶液洗脱液1×2支含0.04% NaN3的灭菌双蒸水（无RNase）核酸提取柱32支×1包含连接套管3.2 核酸扩增（PCR）―荧光检测试剂：RT―PCR试剂PCR主反应液 250ul×1支含有一对引物和dNTP的溶液酶混合物 180ul×1支含有Taq酶、逆转录酶和RNA酶抑制剂的溶液荧光探针20ul×1支含有荧光探针的溶液250ul×1支阴性对照含有0.05% NaN的HCV RNA阴性的混和人血清3强阳性对照 250ul×1支含有约2×106 IU/ml的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA弱阳性对照 250ul×1支含有约2×104 IU/ml的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品1 250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品2 250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品3 250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品4 250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品①～④的参数和强、弱阳性对照的定值允许范围根据批号不同而不同。
PCR实验室标准操作规程
PCR实验室标准操作规程PCR实验室作业指导书⽂件编号:第1版编制:审核:批准:⽣效⽇期:2015年＊⽉＊⽇质管部PCR实验室公正性声明1、坚持公正⽴场认真对待每⼀例检测,不受任何对检测⼯作质量有不良影响得、来⾃实验室内部或外部得不正当得商业、财务与其她⽅⾯得压⼒与影响。
避免卷⼊任何可能会降低技术能⼒、公正性、判断或运作诚实性得信任得活动。
2、严格遵循实验室认可依据得国际标准,严格按标准得管理要素与技术要素得要求建⽴⾃我完善得管理体系与控制检测全过程各环节得机制,所有与检测有关得⼈员熟悉与之相关得质量⽂件,并在⼯作中执⾏这些政策与程序,真正把标准作为科学管理检测实验室得先进管理模式,尽可能把差错降到最低限度,确保检测数据准确可靠,检测结果与技术判断正确有效。
3、坚持以“客户为中⼼、质量第⼀”得服务宗旨,严格保护客户得机密与所有权,热忱提供优质服务,努⼒实现让上级放⼼、客户满意得服务标准。
4、主动开展实验室得⽐对实验与其她有效地检测质量监控⽅案,并通过⽇常检测得监督机制,持续改进、不断完善管理体系,从⽽保证其充分性与有效性、修订页⽬录前⾔ ............................................................................................................................................ 错误!未定义书签。
质量⽅针?错误!未定义书签。
质量管理体系组织结构图?错误!未定义书签。
⼀、⼯作制度............................................................................................................................. 错误!未定义书签。
PCR实验室得设置及管理规程?错误!未定义书签。
PCR实验室标准操作规程
PCR实验室标准操作规程PCR实验室作业指导书文件编号：第1版编制：审核：批准：生效日期：2015年*月*日质管部PCR实验室公正性声明1、坚持公正立场认真对待每一例检测，不受任何对检测工作质量有不良影响的、来自实验室内部或外部的不正当的商业、财务和其他方面的压力和影响。
避免卷入任何可能会降低技术能力、公正性、判断或运作诚实性的信任的活动。
2、严格遵循实验室认可依据的国际标准，严格按标准的管理要素和技术要素的要求建立自我完善的管理体系和控制检测全过程各环节的机制，所有与检测有关的人员熟悉与之相关的质量文件，并在工作中执行这些政策和程序，真正把标准作为科学管理检测实验室的先进管理模式，尽可能把差错降到最低限度，确保检测数据准确可靠，检测结果和技术判断正确有效。
3、坚持以“客户为中心、质量第一”的服务宗旨，严格保护客户的机密和所有权，热忱提供优质服务，努力实现让上级放心、客户满意的服务标准。
4、主动开展实验室的比对实验和其他有效地检测质量监控方案，并通过日常检测的监督机制，持续改进、不断完善管理体系，从而保证其充分性和有效性。
修订页目录前言 (1)质量方针 (2)质量管理体系组织结构图 (3)一、工作制度 (4)PCR实验室的设置及管理规程 (4) PCR实验室内务管理规程 (5)PCR实验室人员的配置及管理规程 (6)PCR实验室管理规程 (8)PCR实验室生物安全防护措施 (11)PCR实验室废弃物的处理管理规程 (12)PCR实验室清洁消毒管理规程 (13)PCR实验室仪器设备的管理规程 (14)试剂管理规程 (15)清洁剂、消毒剂管理规程 (16)异常情况应急处理管理规程 (17)采购管理规程 (20)仓库管理制度 (23)临床标本的管理规程 (26)PCR实验室记录管理规程 (27)检验报告单发放、保密管理规程 (28)PCR实验室岗位责任制 (29)二、操作指导书 (30)PCR实验室的清洁消毒操作规程 (30)冰箱、冷藏柜的使用操作程序 (31)冰箱、冷藏柜的维护保养操作程序 (32)洁净工作台使用操作规程 (34)洁净工作台维护、清洁操作规程 (35)ABI 7500实时跟踪荧光PCR仪使用操作规程 (37) ABI 7500实时跟踪荧光PCR仪维护保养操作规程 (38) 高速冷冻离心机使用标准操作规程 (39)高速冷冻离心机维护保养操作规程 (40)生物安全柜使用操作规程 (41)生物安全柜的维护保养操作规程 (42)加样器的使用操作规程 (43)加样器的维护保养操作规程 (44)干式恒温箱的使用操作规程 (45)干式恒温箱的维护保养操作规程 (46)紫外灯的使用操作规程 (47)紫外灯的维护保养操作规程 (48)温湿度计自行检定操作规程 (49)PCR实验室试剂的质检标准操作规程 (50)PCR实验室标本唯一标识编号编制操作规程 (51)临床标本的采集、运送、接收操作规程 (52)临床标本的保存操作规程 (54)清洁剂、消毒剂配制操作规程 (55)乙肝病毒核酸扩增荧光检测操作规程 (56)室内质量控制标准操作程序 (58)室间质评操作规程 (61)三、引用图表 (62)实验室负责人简历 (62)实验室工作人员一览表 (63)北京市医疗机构临床基因扩增检验实验室自查/审核表 (69)前言1.临床基因扩增实验室质量管理手册由以下部分组成：1.1管理性程序；1.2仪器设备标准操作程序、维护保养程序；1.3检测项目操作程序；1.4相关图表；1.5相关复印件2.现有文件编号与本公司现行ISO9001质量体系一致；3.文件管理：3.1现有的文件由公司行政办公室负责管理；3.2实验室主任保存全套文件一份；3.3各工作区保存该区使用的文件，以方便工作人员随时使用。
CBJY-PCR-SAF-003 生物安全防护作业指导书
保证实验室环境、工作人员及标本安全，使工作有序开展，防止发生生物安全事故。
2 范围适用于基因室工作人员3 内容3.1 实验室分四个区：试剂储存和准备区、标本制备区、核酸扩增区、产物分析区。
人员进入各区需遵守单一流向原则。
即：试剂储存和准备区标本制备区核酸扩增区产物分析区。
各区设备、物品有明确标识，严禁混用。
3.2 实验室人流，物流分开，实验用到的一次性消耗品储存在一区，每天实验前将所需的耗材通过传递窗传至其他各区。
3.3 基因室各区均设置有缓冲间，缓冲间的压力设置为+5Pa，实验区从一区到四区的压力依次为+10Pa，-10Pa，-15Pa，-20Pa。
3.4 实验室每个门均有互锁，防止缓冲间和实验区的门同时打开，从而出现压差为零，使得气流从污染区流向洁净区。
3.5 每个实验区配有温湿度计、固定紫外灯和移动紫外灯车。
3.6 PCR提取仪、扩增仪均配有UPS多功能稳压电源。
3.7 工作人员在操作过程中严格遵守实验室内务管理，严格执行操作程序。
3.8 实验室人员进入各工作区时须穿该区专用工作服，同时配备其它防护装备，如手套、口罩等。
3.9 严禁将各区的固定物品和工作服带离本区，以防扩增产物污染扩增前区域。
3.10 标本盖子的开闭及移液时需小心谨慎，防止液体溅出。
3.11 标本制备区配有生物安全柜，必须严格按规范操作，严防污染。
每次实验结束后或实验开始前，须用75%的酒精擦拭，并打开紫外灯消毒。
3.12 每日工作结束后，须用含氯消毒液擦拭工作台面及地面，再用清水擦拭，打开紫外消毒车及固定紫外灯消毒。
3.13 仪器设备按作业指导书要求使用维护。
可重复利用的实验耗材按《消毒标准操作规程》要求消毒。
3.14 生物污染物及医疗垃圾严格按《废弃物处理作业指导书》相关规定处理。
3.15 严格执行工作区域的封闭性与隔离性要求，进出人员限制、物品分区限制等。
4 支持文件4.1 CBJY-PCR-SAF-004 《消毒标准操作规程》4.2 CBJY-PCR-SAF-007 《废弃物处理作业指导书》。
PCR实验室标准操作规程
PCR实验室作业指导书文件编号:第1版编制:审核:批准:生效日期:2015年＊月＊日质管部PCR实验室公正性声明1、坚持公正立场认真对待每一例检测,不受任何对检测工作质量有不良影响得、来自实验室内部或外部得不正当得商业、财务与其她方面得压力与影响。
避免卷入任何可能会降低技术能力、公正性、判断或运作诚实性得信任得活动。
2、严格遵循实验室认可依据得国际标准,严格按标准得管理要素与技术要素得要求建立自我完善得管理体系与控制检测全过程各环节得机制,所有与检测有关得人员熟悉与之相关得质量文件,并在工作中执行这些政策与程序,真正把标准作为科学管理检测实验室得先进管理模式,尽可能把差错降到最低限度,确保检测数据准确可靠,检测结果与技术判断正确有效。
3、坚持以“客户为中心、质量第一”得服务宗旨,严格保护客户得机密与所有权,热忱提供优质服务,努力实现让上级放心、客户满意得服务标准。
4、主动开展实验室得比对实验与其她有效地检测质量监控方案,并通过日常检测得监督机制,持续改进、不断完善管理体系,从而保证其充分性与有效性、修订页目录前言 ............................................................................................................................................ 错误!未定义书签。
质量方针ﻩ错误!未定义书签。
质量管理体系组织结构图ﻩ错误!未定义书签。
一、工作制度............................................................................................................................. 错误!未定义书签。
PCR实验室得设置及管理规程ﻩ错误!未定义书签。
PCR法快速鉴定重组载体作业指导书
PCR法快速鉴定重组载体作业指导书实验目的掌握PCR法快速鉴定重组载体的基本操作。
实验原理PCR(polymerase chain reaction)是在体外进行的由引物介导的酶促DNA扩增反应。
在分子生物学研究中，广泛地应用于研究基因突变，获取加上酶切位点的目的基因和DNA 序列测定等方面，也可以用来鉴定重组载体，是分子生物学中一项极为常用的技术。
PCR的原理是在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸(dNTP)存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的体外酶促合成反应。
两个引物分别位于靶序列的两端，同两条模板的3＇端互补，由此限定扩增片段。
PCR反应由一系列的变性——退火——延伸反复循环构成，即在高温下模板双链DNA变性解链，然后在较低的温度下同过量的引物退火，再在适中的温度下由DNA聚合酶催化进行延伸。
由于每一循环的产物都可作为下一循环反应的模板，因此扩增产物的量以指数级方式增加。
理论上，经过n次循环可使特定片段扩增到2n-1，考虑到扩增效率不可能达到100％，实际上要少些，通常经25～30次循环可扩增106倍，这个量足够分子生物学研究的一般要求。
PCR法快速鉴定重组载体的基本原理是直接取沸水浴裂解的重组质粒DNA为摸板，通过特异引物的特异扩增来鉴定外源片段是否重组。
实验内容仪器和试剂1．仪器PCR仪，微型水平电泳槽，电泳仪，水浴锅，离心机等。
2．试剂（1）50×TAE电泳缓冲液（2）10×PCR缓冲液：（3）4种dNTP混和10mmol/L液（5U/μl）（4）Pfu DNA聚合酶（5）引物（20μM）（6）10×溴酚蓝上样缓冲液方法和步骤1 取培养过夜的转化菌液20μl，沸水浴3-5分钟。
2 12000rpm 离心2分钟。
取上清液作为PCR的摸板3在PCR仪上设置好程序。
4在1个灭菌的0.5ml离心管中，按下列顺序加样，建立20μl反应体系。
ddH20 12μl10×PCR Buffer（无Mg离子）2μl25mM Mg离子 1.5dNTP(10mM each) 0.5μlPrimer l(20μM) 0.5μlPrimer 2(20μM) 0.5μl模板DNA TaqDNA聚合酶（2.5U）2μl 1μl总体积20μl5混匀，短暂离心．6放在PCR仪上进行PCR反应。
PCR实验室SOP文件
PCR实验室作业指导书文件编号：第2版编制：审核:批准：生效日期:2012年月日目录修订页PCR实验室的设置及管理1．目的：建立实验室的合理设置和科学管理，防止实验污染，保证检测结果的可靠性。
2．适用范围:本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。
3．负责人：4．细则：4．1 分子诊断室为检验科下设的专业实验室，从事基因扩增检测及相关实验工作。
4．2 本实验室采用普通RT-PCR扩增和实时荧光定量PCR两种技术作为临床基因诊断的主要手段，实验室分为四个区：试剂准备区（第一区）、标本处理区（第二区)、扩增区(第三区）及产物分析区(第四区）。
每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识。
各区标签颜色：红色（第一区）、白色或绿色（第二区）、蓝色（第三区）；专用工作服：粉红色（第一区）、白色（第二区）、蓝色（第三区）.标本的接收则在检验科标本接收处进行。
4．3 各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等，不可混用。
4．4 各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP文件。
4．5 严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增区→产物分析区"的单一流向制度，不得逆向进入前一工作区.4．6 非本实验室工作人员,未经许可不得入内；进修、实习或其他科室人员因需要，进入实验区域(试剂准备区、标本处理区、扩增区、产物分析区）需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行,在本实验室人员监督指导下进行。
4．7 实验完毕后做好清洁消毒工作。
5. 本文涉及以下图表：1.实验室设计平面图PCR实验室工作制度1．目的：保持良好的工作环境，以确保检测结果的可靠性，防止交叉污染，防止差错、事故及纠纷的发生.2．适用范围：所有本实验室人员。
3．负责人：4．细则：4．1 本实验室用于基因扩增检测及相关实验工作,不得进行其它实验操作.4．2各区的用品不得混用。
PCR实验室标准操作规程完整
PCR实验室作业指导书文件编号：第1版编制：审核：批准：生效日期：2015年*月*日质管部PCR实验室公正性声明1、坚持公正立场认真对待每一例检测，不受任何对检测工作质量有不良影响的、来自实验室部或外部的不正当的商业、财务和其他方面的压力和影响。
避免卷入任何可能会降低技术能力、公正性、判断或运作诚实性的信任的活动。
2、严格遵循实验室认可依据的国际标准，严格按标准的管理要素和技术要素的要求建立自我完善的管理体系和控制检测全过程各环节的机制，所有与检测有关的人员熟悉与之相关的质量文件，并在工作中执行这些政策和程序，真正把标准作为科学管理检测实验室的先进管理模式，尽可能把差错降到最低限度，确保检测数据准确可靠，检测结果和技术判断正确有效。
3、坚持以“客户为中心、质量第一”的服务宗旨，严格保护客户的和所有权，热忱提供优质服务，努力实现让上级放心、客户满意的服务标准。
4、主动开展实验室的比对实验和其他有效地检测质量监控方案，并通过日常检测的监督机制，持续改进、不断完善管理体系，从而保证其充分性和有效性。
修订页目录前言 (1)质量方针 (2)质量管理体系组织结构图 (3)一、工作制度 (5)PCR实验室的设置及管理规程 (5)PCR实验室务管理规程 (6)PCR实验室人员的配置及管理规程 (7)PCR实验室管理规程 (9)PCR实验室生物安全防护措施 (12)PCR实验室废弃物的处理管理规程 (13)PCR实验室清洁消毒管理规程 (14)PCR实验室仪器设备的管理规程 (15)试剂管理规程 (16)清洁剂、消毒剂管理规程 (17)异常情况应急处理管理规程 (18)采购管理规程 (21)仓库管理制度 (24)临床标本的管理规程 (27)PCR实验室记录管理规程 (28)检验报告单发放、管理规程 (29)PCR实验室岗位责任制 (30)二、操作指导书 (31)PCR实验室的清洁消毒操作规程 (31)冰箱、冷藏柜的使用操作程序 (32)冰箱、冷藏柜的维护保养操作程序 (33)洁净工作台使用操作规程 (35)洁净工作台维护、清洁操作规程 (36)ABI 7500实时跟踪荧光PCR仪使用操作规程 (38)ABI 7500实时跟踪荧光PCR仪维护保养操作规程 (39)高速冷冻离心机使用标准操作规程 (40)高速冷冻离心机维护保养操作规程 (41)生物安全柜使用操作规程 (42)生物安全柜的维护保养操作规程 (43)加样器的使用操作规程 (44)加样器的维护保养操作规程 (45)干式恒温箱的使用操作规程 (46)干式恒温箱的维护保养操作规程 (47)紫外灯的使用操作规程 (48)紫外灯的维护保养操作规程 (49)温湿度计自行检定操作规程 (50)PCR实验室试剂的质检标准操作规程 (51)PCR实验室标本唯一标识编号编制操作规程 (52)临床标本的采集、运送、接收操作规程 (53)临床标本的保存操作规程 (55)清洁剂、消毒剂配制操作规程 (56)乙肝病毒核酸扩增荧光检测操作规程 (57)室质量控制标准操作程序 (59)室间质评操作规程 (62)三、引用图表 (63)实验室负责人简历 (63)实验室工作人员一览表 (64)市医疗机构临床基因扩增检验实验室自查/审核表 (70)前言1.临床基因扩增实验室质量管理手册由以下部分组成：1.1管理性程序；1.2仪器设备标准操作程序、维护保养程序；1.3检测项目操作程序；1.4相关图表；1.5相关复印件2.现有文件编号与本公司现行ISO9001质量体系一致；3.文件管理：3.1现有的文件由公司行政办公室负责管理；3.2实验室主任保存全套文件一份；3.3各工作区保存该区使用的文件，以方便工作人员随时使用。
PCR实验室标准操作规程
PCR实验室作业指导书文件编号：第1版编制：审核：批准：生效日期：2015年*月*日质管部PCR实验室公正性声明1、坚持公正立场认真对待每一例检测，不受任何对检测工作质量有不良影响的、来自实验室内部或外部的不正当的商业、财务和其他方面的压力和影响。
避免卷入任何可能会降低技术能力、公正性、判断或运作诚实性的信任的活动。
2、严格遵循实验室认可依据的国际标准，严格按标准的管理要素和技术要素的要求建立自我完善的管理体系和控制检测全过程各环节的机制，所有与检测有关的人员熟悉与之相关的质量文件，并在工作中执行这些政策和程序，真正把标准作为科学管理检测实验室的先进管理模式，尽可能把差错降到最低限度，确保检测数据准确可靠，检测结果和技术判断正确有效。
3、坚持以“客户为中心、质量第一”的服务宗旨，严格保护客户的机密和所有权，热忱提供优质服务，努力实现让上级放心、客户满意的服务标准。
4、主动开展实验室的比对实验和其他有效地检测质量监控方案，并通过日常检测的监督机制，持续改进、不断完善管理体系，从而保证其充分性和有效性。
修订页文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期序号1234567891011121314151617181920目录前言............................................................................................................................................错误!未指定书签。
质量方针....................................................................................................................................错误!未指定书签。
乐普全自动pcr仪作业指导书
乐普全自动pcr仪作业指导书摘要：乐普全自动pcr 仪作业指导书I.简介A.乐普全自动pcr 仪的背景和介绍B.乐普全自动pcr 仪的主要特点和功能II.操作流程A.准备工作1.检查试剂和仪器2.设置仪器参数B.样本处理1.样本的准备和处理2.样本的加样和混合C.PCR 反应1.PCR 反应的设置和运行2.反应过程中注意事项D.结果分析1.结果的解读和分析2.结果的记录和报告III.常见问题及解决方法A.操作过程中的常见问题B.仪器故障的排除和解决方法IV.维护和保养A.日常维护和清洁B.定期检查和保养V.结论A.乐普全自动pcr 仪的优势和应用B.乐普全自动pcr 仪在实验中的重要性和贡献正文：乐普全自动pcr 仪作业指导书乐普全自动pcr 仪是一款高性能的PCR 仪器，它具有高效、准确、快速等特点，被广泛应用于生物学、医学等领域。
为了帮助用户更好地使用该仪器，我们提供了以下详细的作业指导书。
一、简介乐普全自动pcr 仪是一款先进的PCR 仪器，它采用了全自动化技术，能够实现样本的自动处理、PCR 反应的自动运行和结果的自动分析。
该仪器具有操作简便、结果准确、效率高等优点，能够大大提高实验的效率和准确性。
二、操作流程乐普全自动pcr 仪的操作流程包括准备工作、样本处理、PCR 反应和结果分析四个步骤。
1.准备工作在进行实验前，需要先检查试剂和仪器是否齐全，并设置仪器参数。
试剂包括样本处理液、引物、探针、模板等，仪器包括pcr 仪、离心机、移液器等。
2.样本处理样本处理是实验的重要步骤，需要将样本进行适当的处理和加样。
首先，需要将样本进行裂解、提取等处理，然后进行核酸的扩增。
3.PCR 反应PCR 反应是实验的核心步骤，需要设置合适的反应条件，并运行反应。
根据实验目的的不同，可以选择不同的PCR 反应条件，例如温度、时间、引物、探针等。
4.结果分析结果分析是实验的最后一步，需要对实验结果进行解读和分析，并记录和报告。
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检验科PCR室作业指导书
一、背景介绍
PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种基因扩增技术，是在无需使用活性细胞的情况下通过体外扩增DNA序列，使其达到可检测的水平。
PCR技术被广泛应用于医药研究、生物学、遗传学、法医学等领域。
PCR室是PCR技术应用的关键场所，主要用于PCR反应、样品前处理和DNA制备等工作。
PCR反应是由特定的酶催化模板DNA的复制，在PCR实验中必须严格控制PCR反应的条件才能获得可靠的结果。
为了保证PCR反应结果的准确性和可靠性，PCR作业人员必须了解PCR室的操作规程和指导手册，遵守标准实验室操作程序。
二、 PCR反应的基本原理
PCR反应是通过体外扩增DNA序列的一种技术。
PCR反应主要涉及两个重要的酶，即DNA聚合酶和引物。
DNA聚合酶是催化DNA聚合反应的核心酶，在PCR反应中必不可少。
引物是一种短的DNA或RNA分子，在PCR反应中用于酶的选择性识别和复制。
PCR反应主要包括三个步骤：变性、退火和延伸。
变性：将目标DNA加热到94℃的高温，使其断裂成两条单链DNA，并使引物和单链DNA互相结合。
退火：将温度降低到50-60℃，使引物与目标DNA结合，这个温度称为退火温度。
延伸：将温度升高至72℃，此时引物与DNA被催化成链延伸，成为双链DNA。
PCR反应重复进行以上步骤几个周期，就可以得到足够多的DNA扩增产物。
三、 PCR室操作规程
1. 实验前准备
(1)检查PCR实验室设备和试剂，检查是否缺少必要试剂和器具，并确认其备份。
(2)将外部样品进入PCR实验室前进行一定的处理，如冻存、粉碎等。
(3)制作引物工作应该在正式实验之前进行，并对其进行信号静电荷、目标大小、引物配对和特异性等核酸相关参数测试，确保可靠和有效。
制备引物的地点和PCR反
应室应分开操作，单独使用平台和器具。
(4)戴上防护手套、口罩、帽子等个人防护设备，穿戴实验室制定的实验服。
(5)现场准备反应物的试剂，如样品、引物、酶、缓冲液、MgCl2等，并将所需
的试剂放置在干净、无菌的工作台上。
2. 实验操作流程
(1)样品处理
将外部样品酸溶解多个小时之后进行离心分离，并且保留上清液。
液态培养基不得污染，在样品处理过程中应避免自身的DNA和周围环境中的DNA相互污染。
实验
人员可根据实验需求自行选择比较合适的处理方法和方案，如酚/氯仿提取法、链酶扩增法等。
(2)引物设计
PCR实验中引物的序列设计非常重要。
引物序列应该是一个特定的单项序列，对目标DNA区域高度特异，确保PCR扩增所得的产物数量足够、特异度高。
(3) PCR反应
在PCR反应室内完成PCR反应的操作。
在PCR反应室的桌面上干净整齐地摆放试剂盒、扩增样品、引物、酶、缓冲液、MgCl2等，并依据所调整的PCR反应体系设置仪器。
实验人员应仔细编写PCR反应程序和软件控制方案，并记录温度计和计时器和扩增过程中的数据，保证数据可靠和有效。
对反应过程中的任何异常情况都要及时记录并处理。
反应结束后要查看PCR产物的CLEAN文件和ETH文件，确定PCR产物的选择是否符合要求。
(4)实验后处理
实验结束后，关闭PCR实验室的呼吸机，并关闭实验室内的门窗。
要将实验室中所使用的试剂和器具放回到指定的存储位置，清洁操作台面，测量和记录所产生的实验垃圾数量，并按照实验室相关规定进行处理。
四、PCR室的物品存放和清洁
(1)PCR反应室必须保持干净卫生，任何包括化学药品、试剂和垃圾以及任何压缩物在内的其它物品都不得留在PCR反应室之内，这些物品应放置到特定的存储和处理地方，必须严格按照相关规定实施管理。
(2)实验员在使用PCR反应室时，必须保持实验室整洁、干净和有序。
在每次使用过之后，必须清理实验台面、仪器仪表和工具，扔掉所有不需要的生物品。
(3)仪器和标准曲线需要定期执行检查，定期更换为空间和反应管的过滤器。
建议每季度向上升级屏幕，更新日志记录，并更新屏幕消息以获得最新的服务和功能。
务必备份反应信息和每个样品的相关数据。
五、总结
PCR室是进行PCR反应的一个有严格要求的场所，正确的操作规程和指导书对于确保PCR反应结果的准确和可靠是非常关键的。
检验科PCR室作业指导手册，涵盖了PCR反应的基本原理、操作规程、物品存放和清洁等方面，是PCR室操作人员必须遵守的规定。
PCR反应技术在医学研究、生物学、遗传学、法医学等领域应用广泛，PCR室人员必须完全遵守标准实验室操作程序，以确保实验室操作的安全、准确、可靠和卫生。