天然药物化学显色反应

0644814 许丛宇 2008/12/30

生物碱

(1)Vitali 反应

C H C H 2O H

C O O R H N O 3

C H C H 2O H

C O O R N O 2

O 2N

O 2C H O H

N

C O

O K N O 2

O 2N

C O O R

C H 2O H

紫色 (2)DDL 反应

C

CH O

HCHO

32CCH 3O O

CH COONH N H

C C H 3C

CH 3

O O H 3C

CH 3DDl

黄色 （3）沉淀反应 书本P155

糖

Molish 反应（试剂：浓硫酸，α-萘酚。常用色谱显色剂：邻苯二甲酸和苯胺） 糠醛衍生物和许多芳胺、酚类及具有活性次甲基的基团化合物缩合成有色的化合物

香豆素：

（1）异羟肟酸铁反应--------内酯的显色反应

碱性条件下，香豆素内酯开环，并与盐酸羟胺缩合成异羟肟酸，再在酸性条件下与三价铁离子络合成盐而显红色。

（2）与酚类试剂的反应

具有酚羟基，可与FeCl3试剂产生颜色反应；

若酚羟基的对位未被取代，或6-位上没有取代，其内酯环碱化开环后，可与Gibb’s 试剂、Emerson 试剂反应。机制如下： Gibb’s 反应：符合以上条件的香豆素乙醇溶液在弱碱条件下，2,6-二氯(溴）醌氯亚胺试剂与酚羟基对位活泼氢缩合成蓝色化合物。

Emerson 反应：符合以上条件的香豆素的碱性溶液中，加入2%的4-氨替比林和8%的铁氰化钾试剂与酚羟基对位活泼氢缩合成红色化合物。

醌类

颜色反应: 取决于其氧化还原性质以及分子中的酚羟基的性质。

（1）Feigl 反应----醌的通性，所有具醌核的化合物均可反应。（方法、机理：见书 312页）

醌类化合物在碱性条件下，经加热能迅速与醛类及邻二硝基苯反应，生成紫色化合物

O

O

OH

COONa

2.Cl

H O H

N H OH

O

O H

N H O

O

Fe Fe 3+

H

+

C

C

1/3

O

H H

O N Br

Br

Cl O

N

Br

Br

-O O N

Br

Br

O

+

O

H H

N N N

H 2CH 3

CH

3

O

36

N

N N

CH 3CH

3

O

O

+

氨基安替比林

（ 红 色）

（2）无色亚甲蓝显色试验----可区别蒽醌与苯醌萘醌

苯醌和萘醌因醌核上有活泼质子，可反应，而蒽醌无。

无色亚甲基蓝溶液，样品在白色背景上作为蓝色斑点出现。

（3）与碱的反应(Borntr?ger反应----可区别含羟基的蒽醌与蒽酚衍生物

反应、机理、应用：见书313 页。

羟基醌类在碱性溶液中发生颜色变化，会使颜色加深。多呈橙、红、紫红色及蓝色。

例如羟基蒽醌类遇碱显红~紫红色的反应称Borntr?ger反应

（4）与活性次甲基试剂的反应----可区别蒽醌与苯醌萘醌（Kesting-Craven法）

反应、机理、应用：见书313 页。

苯醌及萘醌类化合物当其醌环上有未被取代的位置时，可在氨碱性条件下与一些含有活性次甲基试剂（乙酰醋酸酯、丙二酸酯、丙二腈等）的醇溶液反应，生成蓝绿色或蓝紫色

（5）与金属离子的反应----可初步鉴定蒽醌的取代情况机理：见书314 页

常用0.5％醋酸镁的乙醇溶液，可根据结果初步判断取代情况：

A．母核中只有一个α-或β-酚羟基，或有两个β-酚羟基但不在同一环上，呈黄橙色至橙色。

B．邻位酚羟基的蒽醌，呈紫色－蓝紫色。

C. 对位二酚羟基蒽醌，呈紫红色－紫色。

D. 每个苯环上各有一个α-酚羟基，或含有间位二羟基者，呈红色至红色。

黄酮

1）盐酸-镁粉（或锌粉）反应：

多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红~紫红色，少数显紫~蓝色。查耳酮、橙酮、儿茶素类不显色。

异黄酮类一般不显色。

2）四氢硼钠（钾）反应：

NaBH4是对二氢黄酮类化合物专属性较高的一种还原剂。与二氢黄酮类化合物产生红~紫色。其它黄酮类化合物均不显色。二氢黄酮与磷钼酸试剂显棕褐色。

3）铝盐：

生成的络合物多为黄色（lmax=415nm），并有荧光，可用于定性及定量分析。常用试剂为1%三氯化铝或硝酸铝溶液。4）铅盐：

常用1%醋酸铅及碱式醋酸铅水溶液，碱式醋酸铅反应能力更强，可生成黄~红色沉淀。

5）锆盐：

多用2%二氯氧化锆（ZrOCl2）甲醇溶液。黄酮类化合物分子中有游离的3-或5-OH存在时，均可反应生成黄色的锆络合物。

3-OH，4-酮基络合物的稳定性>5-OH，4-酮基络合物（仅二氢黄酮醇除外）。〖当反应液中接着加入枸橼酸后，5-羟基黄酮的黄色溶液显著褪色，而3-羟基黄酮溶液仍呈鲜黄色（锆—枸橼酸反应）〗。

6）镁盐：

二氢黄酮、二氢黄酮醇类与醋酸镁的甲醇溶液，加热可显天蓝色荧光，若具有C5-OH，色泽更为明显。而黄酮、黄酮醇及异黄酮类等则显黄~橙黄~褐色。

7）氯化锶（SrCl2）：

在氨性甲醇溶液中，可与分子中具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物生成绿色~棕色乃至黑色沉淀。

8）三氯化铁反应：

多数黄酮类化合物因分子中含有游离酚羟基，与三氯化铁水溶液或醇溶液可产生正反应，呈现颜色；当含有氢键缔合的酚羟基时，颜色更明显。

9）碱性试剂显色：

二氢黄酮类在碱液中开环，转变成查尔酮类化合物，显橙黄至黄色。

黄酮醇类在碱液中先呈黄色，通入空气后变为棕色，与其他黄酮类区别。

黄酮类分子中有邻二酚羟基取代或3，4’-二羟基取代时，在碱液中不稳定，易被氧化，产生黄色—深红色—绿棕色沉淀

卓酚酮

能与多种金属离子形成络合物结晶体，并显示不同的颜色，可用于不同的颜色，可用于鉴别。如铜络合物为绿色结晶，铁络合物为赤红色结晶。

环烯醚萜

游离苷元遇酸、碱、羰基化合物和氨基酸等都能变色。

如遇到氨基酸类加热，即显深红色至深蓝色，最后变成蓝色沉淀。

还有冰醋酸-铜离子反应，shear试剂（1体积浓盐酸与1.5体积苯胺混合）反应(车前草苷：黄—棕—深绿)

藇类

挥发油分馏时，高沸点馏分如见美丽的蓝色、紫色或绿色，表明可能有藇类

三萜类

三萜化合物（苷元和苷）在无水条件下，与强酸、三氯乙酸或Lewis酸（氯化锌、三氯化铝、三氯化锑）作用，会产生颜色变化或荧光。但全饱和、且3位又无羟基或羰基的化合物呈阴性反应：

*（1）醋酐-浓硫酸反应（Liebermann-Burchard反应）

将样品溶于冰醋酸中，加硫酸-醋酐（1：20），可产生黄→红→紫→蓝等颜色变化，最后褪色。

（甾体皂苷也有此反应，但颜色变化快，在颜色变化的最后出现污绿色；而三萜皂苷颜色变化稍慢，且不出现污绿色。）*（2）五氯化锑反应（Kahlenberg反应）

将样品氯仿或醇溶液点于滤纸上，喷以20%五氯化锑的氯仿溶液，干燥后60~70℃加热，显蓝色、灰蓝色，灰紫色等多种颜色斑点。紫外灯下显蓝色荧光（甾体皂苷则显黄色荧光）另：三氯化锑（Carr-Price反应）薄层色谱显色用。其余一样。（3）三氯醋酸反应（Rosen-Heimer反应）

将样品溶液滴在滤纸上，喷25%三氯醋酸乙醇溶液，加热至100℃，生成红色渐变为紫色。（加热至100度，甾体是60度。）（4）氯仿-浓硫酸反应（Salkowski反应）

样品溶于氯仿，加入浓硫酸后，在氯仿层呈现红色或蓝色，氯仿层有绿色荧光出现。（甾体也有，一样）

（5）冰醋酸-乙酰氯反应（Tschugaeff反应）

样品溶于冰醋酸中，加乙酰氯数滴及氯化锌结晶数粒，稍加热，则呈现淡红色或紫红色。（甾体也有，一样）

三萜化合物的沉淀反应

皂苷的水溶液可以和一些金属盐类如铅盐、钡盐、铜盐等产生沉淀。三萜皂苷多含羧基，可用酸性醋酸铅沉淀，而甾体皂苷则为中性皂苷，须用碱性醋酸铅或者氧化钡沉淀。

挥发油

官能团鉴定：

酚类：将少许溶于乙醇中，加三氯化铁的乙醇溶液，如产生蓝色，蓝紫或绿色反应，表示挥发油中有酚类物质存在。

羰基化合物：银镜反应（硝酸银的氨溶液）醛类物质。挥发油的乙醇液中加2，4-二硝基苯肼，氨基脲，羟胺等试剂，若产生晶形衍生物沉淀表明有醛或酮类化合物存在。

不饱和化合物和藇类衍生物

挥发油的三氯甲烷加溴的三氯甲烷液——红色褪去——有不饱和化合物，继续加溴的三氯甲烷，若产生蓝色紫色或绿色，表明油中有藇类。此外在挥发油的无水乙醇液中加浓硫酸时，如有藇类衍生物应产生蓝色或紫色反应。

内酯类：挥发油吡啶溶液中加亚硝酰氰化钠试剂及氢氧化钠液，若出现红色并逐渐消失，则表明有~

甾体

1.Salkowski反应样品溶于氯仿，沿试管壁滴加浓硫酸，氯仿层显血红色或青色，硫酸层显绿色荧光。

2.三氯乙酸-氯胺T反应25%三氯乙酸乙醇液和3%氯胺T水液4：1混合，喷在滤纸上与强心苷反应，干后加90度加热

数分钟紫外灯下观察，显黄绿色、蓝色、灰蓝色荧光，反应较稳定，用于毛地黄强心苷类的区别。

3.α，β不饱和内酯环反应（区别甲乙型强心苷）

甲型强心苷：C17侧链上有不饱和内酯环，碱液中，双键移位形成活性次甲基，与某些试剂反应显色。

乙型无。

Legal反应亚硝酰铁氰化钠深红或蓝

【NaFe（NO）(CN)5·2H2O】

Kedde反应3，5-二硝基苯甲酸乙醇液紫红或红

Raymond反应1%间-二硝基苯乙醇液紫红或蓝

Baljet反应苦味酸（2，4，6-三硝基甲苯）橙或橙红

4.α去氧糖的反应

（1）占吨氢醇反应分子中有2-去氧糖能显色

（2）对—二甲氨基苯甲醛反应灰红色

（3）Keller—Kiliani反应（游离的2-去氧糖或者该条件下能水解得到2-去氧糖的强心苷）强心苷溶于含少量Fe3+的冰醋酸中，沿管壁滴加浓硫酸，观察界面和醋酸层的颜色变化，若有2-去氧糖，醋酸层渐呈蓝色或蓝绿色，但是对此反应不显色的，并非结构中无2-去氧糖。

（4）过碘酸—对硝基苯胺反应黄色

与强心苷有关的一些鉴别方法:

1、甲型强心苷的不饱和五元内酯环，在碱性溶液中，双键转位可产生活性次甲基，可与Legalsh试剂、Kedde试剂等发生显色反应；

2、基于2－去氧糖的显色反应：可用Keller-Kiliani试剂鉴别，显蓝绿色。

3、UV法：不饱和五元内酯环－－在220nm处不饱和六元内酯环－－在300nm处有最大吸收；

4、IR法：在1700－1800cm-1都有两个强吸收峰，但不饱和六元内酯环的，向低移40cm –1。

鞣质

（还原性）极易被氧化，为强还原剂。与高价金属离子和盐，如Fe3+、Vd6+、Ce4+、重铬酸钾、高锰酸钾、钨酸钠等发生氧化还原反应，大部分产生颜色变化，可作为鞣质的定量方法，Folin酚法：碱性条件下酚类化合物讲钨钼酸还原成蓝色化合物，在760nm处有最大吸收，可定量；普鲁士蓝法是根据在酸性介质中酚类物质讲Fe3+还原成Fe2+，后者与K3Fe（CN）6生成深蓝色配合物，在695nm处有最大吸收，测定总酚量。

特殊官能团

FeCl3 或重氮化试剂可用于酚羟基的检查；

Labat试剂或Ecgrine试剂变色酸浓硫酸试剂用于亚甲二氧基的检测。