布病试管凝集试验(人畜检测法相同)

布病试管凝集试验（人畜检测方法相同）

一、实验前准备

1、试管的准备

①把试管浸泡于带有洗涤剂的温水中30分钟，浸泡后用试管刷将其刷干净。先用自来水冲洗10遍，再用去离子水冲洗1遍

②试管冲洗干净后倒置于篮子中，等水沥干后置干燥箱中，160℃干燥3个小时（整个干燥过程需要5——6个小时）。

③实验前要配置0.5%的石炭酸生理盐水实验前要配置的石炭酸生理盐水

配置方法：称取0.5克石炭酸加入100ml的生理盐水中121℃高压30分钟。

2、试剂的准备

①标准抗原：按照说明书使用。使用时充分摇匀，用稀释液作1:20(工作浓度)稀释。

②标准阳性血清冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。

③标准阴性血清冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。

3、被检血清

①按常规方法采血分离血清

血清必须新鲜，无明显蛋白絮凝物、无溶血和无腐败气味。

②运送和保存血清样品

防止血清冻结和受热，以免影响凝集价。若3d内不能送到实验室，可用冷藏方法运送血清。

二、试验操作过程

1、确定被检血清的稀释度

牛、马、骆驼稀释用1:50、1:100、1:200、1:400（4个稀释度）；猪、山羊、绵羊和狗用1:25、1:50、1:100、1:200（4个稀释度)。大规模检疫时也可用2个稀释度，牛、马、骆驼用1:50、1:100；猪、山羊、绵羊和狗用1:25、1:50，为测定强阳性血清效价，稀释度可以增加。

2、稀释被检血清：猪、山羊、绵羊和狗血清的稀释

①每份被检血清用4支试管，标记检验编号后第I管加 1.15 mL 稀释液，第2-4管各加人0.5 m L稀释液。

②取被检血清0.1 mL，加人第1管，充分混匀后吸弃0.25 mL。

③从第1管中吸取0.5mL加人到第2管，混合均匀后，再从第2管吸取0.5mL至第3管，如此倍比稀释至第4管，从第4管弃去

0.5mL，稀释完毕。

④从第1 至第4 管的血清稀释度分别为 1：12.5,1：25,1：50,1：100。

3、加抗原

将0. 5 m L 抗原抗原(1:20)加入已稀释好的各血清管中，并振摇均匀，猪、羊或狗的血清稀释则依次变为 1 : 25,1 : 50,1 : 100,1：200；牛、马和骆驼的血清稀释度则依次变为 1：50,1：100,1：200,1:400。各反应管反应总量为1 mL。

4、设立对照：每次试验都应设立下列对照。

①阴性血清对照

阴性血清的稀释和加抗原的方法与被检血清同

②阳性血清对照

阳性血清的最高稀释度应超过其效价滴度，加抗原的方法与被检血清同。

③抗原对照

在0. 5mL稀释液中，加0.5 m L抗原（1：20)

5、比浊管的配置

每次试验均须配制比浊管，作为判定凝集反应程度的依据。先将抗原(1:20) 用等量稀释液作一倍稀释，然后按表1配制比浊管配制比浊管。

表 1 比浊管的配制

6、感作

所有试验管充分震荡后，置37℃温箱20小时

7、结果判断

确定每份被检血清效价：比照比浊管判读，出现“++”以上凝集现象的最高血清稀释度为血清凝集价。

①结果判定

当阴性血清对照和抗原对照不出现凝集(一)，阳性血清的凝集价达到其标准效价士1个滴度，则证明试验成立，可以判定。否则，试验应重做。

②牛、马和骆驼于1:10。血清稀释度，猪、山羊、绵羊和狗于1:50血清稀释度出现“++”以上的凝集现象时，被检血清判定为阳性反应。

三、试验后的处理

1、试管的处理

把所用试管必须高压处理（121℃高压30分钟），然后用自来水彻底洗涮干，再用去离子水冲洗，后放置框中沥干，干燥（160℃干燥3个小时），保存备用。

2、配置好而未用完的抗原及其盛装其瓶子的处理

瓶子连其抗原一同高压灭菌（121℃高压30分钟），后清洗干净以备用。

3、试管架的处理

把试管架上带有样品标记的符号用无水乙醇彻底清除掉，后用自来水把试管架冲洗干净，晾干、保存备用。