基因检测的临床意义-

AML是髓系原始细胞克隆性增生 疾病，WHO分型将AML分为：
1. 伴有特殊染色体的AML 2.伴有病态造血的AML 3.治疗相关的AML和MDS ※4.不伴特殊细胞遗传易位的AML
四亚型。
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1．伴有特殊细胞遗传易位的AML
（1）伴有t(8;21)(q22;q22)AML,
AML1（CBFα）/ETO的AML
➢骨髓增生性肿瘤（MPN）
PH染色体[t(9;22)(q34;q11),BCR/ABL]阳性
的慢性髓系白血病（CML） 慢性中性粒细胞白血病（CNL） 慢性嗜酸粒细胞白血病/高嗜酸粒细胞综征
（CEL/HES） 真性红细胞增多症（PV） 慢性原发性骨髓纤维化（伴髓外造血）
（CIMF） 原发性血小板增多症（ET） 不能分类骨髓增生性疾病
血细胞减少，
一系或
多系细胞增生异常；
原始细胞5%~19%
原始细胞10%~19%；
Auer小体（±）；
Auer小体（±）；
单核细胞＜1×109/L
血细胞减少，
单一髓
系细胞增生异常；
未见或罕见原始细胞； 原始细胞＜5% ；
未见Auer小体；
未见Auer
小体；
贫血； 核巨核细胞精品正课常件 或增多；
少叶
➢急性髓细胞白血病（AML）
亚型
5.难治性贫血伴 原始细胞增多1型
（RAEB-1） 6.难治性贫血伴 原始细胞增多2型 （RAEB-2） 7.未归类的MDS
（MDS-U）
8.5q-综合征
骨髓象
外周血象
血细胞减少，
一系或
多系细胞增生异常；
原始细胞＜5%
原始细胞5%~9%；
未见Auer小体；
未见Auer小体；
单核细胞＜1×109/L
骨髓增生异常综合征（MDS）
MDS也是克隆性疾病，以无效 造血为其特征引起血细胞减少，骨 髓及血象一至多系细胞病态造血。
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MDS亚型分类
亚型 骨髓象
1.难治性贫血 红系增生异常，
（ RA） 胞＜ 5%，
2. 难治性贫血伴 环形铁粒幼细胞 （ＲＡＲＳ） 3.难治性血细胞减少
细胞增生异常 伴多系增生异常
髓细胞系恶性肿瘤
根据细胞形态学、免疫学、细胞遗传学、 分子生物学以及临床特征WHO分型法将髓系肿瘤分为
➢ 骨髓增生性疾病（MPD）（肿瘤，MPN） ➢ 骨髓增生异常/骨髓增生性疾病 （肿瘤）
（MDS/MPD, MDS/MPN） ➢ 骨髓增生异常综合征（MDS） ➢ 急性髓细胞白血病（AML）
四大类
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❖ AML1-ETO定性结果不能用于评价患者MRD情况 ❖ RQ-PCR能实时反映体内AML1-ETO水平。连续
定量AML1-ETO转录本水平可判定有高复发风
险的患者，以便及早治疗干预以防血液学复 发
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PML-RARα
❖ t(15;17)(q22;q21) ，98%M3患者阳性
❖ 继t(15;17)之后，又先后发现4种M3特异的累及 RARα的变异性染色体易位：
分化至较成熟的嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，且 对化疗反应较敏感 ❖ AML1-ETO+患者对大剂量阿糖胞苷治疗效果好，具 有较高的缓解率，无病生存期长，预后较其他AML 亚型（M3除外）好
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AML1-ETO
❖ 对初发患者进行t(8;21)和AML1-ETO融合基因
的检测对其预后判断及治疗方案的制定相当 重要
＜ 5%， （RCMD）
体；
外周血象
贫血；未见或罕见
仅
原始细胞
原始细
环形铁粒幼细胞＜15%
贫血；未见或罕见
仅红系增生异常，
原始细胞
原始细胞＜ 5%，
环形铁粒幼细胞≥15%
血细胞减少（二系或
二系或多系
全系）；未见Auer小体； ≥10%；原始细胞
未见或罕见 原始细胞 ； 未见Auer小
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单核细胞＜1×109/L
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白 血 病 FA B 分 型 和 W H O 分 型 对 比
FA B 分 型
ALL— L1 L2
L3 AML— M0
M1 M 2a M 2b M3
M4
M 4EO
M 5（ M 5a、 M 5b）
M6 M7
WHO 分型
急 性 前 体 淋 巴 母 细 胞 白 血 病 /淋 巴 瘤 P recu rsor B an d T ly m p h ob lastic leuk em ia/ly m p h om a （ ALL） B urk itt 白 血 病 /淋 巴 瘤 （ B urk itt leuk em ia /lym phom a ） 极 微 分 化 A M L （ A M L ， m in im ally d ifferen tiated ） 未 成 熟 A M L （ A M L w ithout m aturation ） 成 熟 A M L （ A M L w ith m aturation ） A M L w it h t （ 8 ； 2 1 ）（ q 2 2 ； q 2 2 ），（ A M L 1 /E T O ） A P L ［ A M L w it h t （ 1 5 ； 1 7 ）（ q 2 2 ； q 1 2 ），（ P M L /R A R α ） and variants］ 急 性 粒 -单 核 细 胞 白 血 病 （ A cu te m yelom on ocytic leu k em ia ）
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碱基对替换一定会导致蛋白质结构的改变吗?
甲
乙
丙
丁
mRNA: G A U
GAC
GAA GUA
氨基酸: 天冬氨酸 天冬氨酸
谷氨酸
缬氨酸
结论: DNA碱基对替换，不一定引起蛋白质结构的改变。 精品课件
基因突变原因：
1、二战时，美国在日本的广岛、长崎投下两 颗原子弹，导致白血病患者出生率增加。
物理因素 2、苏丹红进入人体可产生致癌作用。
淋系肿瘤：
B系肿瘤和T/NK细胞系肿瘤 又可分为两大类型：
前体淋巴细胞肿瘤（淋系白血病） 外周或成熟淋巴细胞肿瘤（淋巴瘤 ） 前者指淋巴细胞分化的早期阶段起源的肿瘤 后者是分化成熟阶段来源的肿瘤
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B细胞系肿瘤
前体B细胞肿瘤
前体B淋巴母细胞白血病/淋巴瘤（B-ALL/LBL）
成熟（周围）B细胞肿瘤
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白血病分子检测的临床应用 PCR方法检测MRD常用的分子标志
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AML1-ETO
❖ t(8;21)(q22;q22) ❖ 6~8%原发性AML，在M2中的阳性率为20~40%，在M2b
中阳性率为90% ❖ 少见于M4和M1，极少见于MDS和骨髓增生综合症 ❖ AML1-ETO+白血病细胞有一定程度的分化能力，能
患者对ATRA治疗不敏感，其余三种染色体易位患者 经ATRA治疗可获完全缓解
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PML-RARα
APL累及的RARα基因及其伙伴基因结构示意图
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PML-RARα
❖ 由于PML基因断裂点不同，产生3种不同的
内（<2kb），如T-ALL中SIL-TAL1。
❖ RT-PCR：可用于染色体断裂点跨越很大的区域的
融合基因。
❖ 巢式RT-PCR：可显著提高反应的特异性，增加扩
增效率。
❖百度文库RQ-PCR：可定量扩增产物。
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白血病分子检测的临床应用
白血病的分子生物学检查对白血病诊断分型及 预后判断有以下几方面意义： ❖补充MIC检查的不足 ❖发现新的亚型 ❖监测白血病的微小残留病灶（MRD） ❖为研究白血病的发病机制打下基础
（2）伴有inv(16)(p13;q22)或 t(16;16)(p13;q22),
CBFβ/MYH11的骨髓嗜酸粒细胞增多的AML
（3）伴有t(15;17)(q22;q11-12),PML/RARα 及变异的急性早幼粒细胞白血病（APL）
（4）伴有11q23(MLL)异常增生的AML
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2．伴有多系血细胞增生异常的 急性髓细胞白血病
间变性大细胞淋巴瘤（ALCL）
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霍奇金淋巴瘤（霍奇金病）
结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤（NLPHL） 经典型霍奇金淋巴瘤
结节硬化型霍奇金淋巴瘤，1和2级（NSHL） 富于淋巴细胞经典霍奇金淋巴瘤 混合细胞型霍奇金淋巴瘤（MCHL） 淋巴细胞消减型霍奇金淋巴瘤（LDHL）
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白血病 基因检测
❖ Southern blot ❖ Northern blot ❖ Western blot ❖ FISH ❖ PCR ❖ 测序 ❖ 芯片
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白血病的分子检测
❖ PCR方法优点 快速 灵敏 特异
❖ PCR方法缺点 假阳性 假阴性
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白血病的分子检测
❖ PCR：仅适用于染色体断裂点丛集于相对小的范围
❖ t(5;17)(q35;q21)，t(11;17)(q13;q21)， dup(17)(q21.3;q23)， t(11;17)(q23;q21)
分别产生NPM-RARα，NuMA-RARα和PLZF-RARα ， STAT5b-RARα融合基因 ❖ 临床上，具有PLZF-RARα或STAT5b-RARα融合基因
（1）由MDS或MDS/MPD转化而成 （2）发病前无MDS病史
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3．治疗相关的AML和MDS
（1）与烷化剂相关
（2）与拓扑异构酶Ⅱ抑制剂相关 （一些可以是淋巴系）
（3）其他
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4．不伴特殊细胞遗传易位的AML
（1）未分化AML （2）未成熟AML （3）成熟AML （4）急性粒-单核细胞白血病 （5）急性单核细胞白血病 （6）急性红白血病 （7）急性巨核细胞白血病 （8）急性嗜碱细胞白血病 （9）伴骨髓纤维化的急性全髓增生 （10）髓细胞肉瘤
化学因素 3、乙肝病毒使肝细胞进一步变异，肝细胞 不凋亡，而且不断地再生，就形成了肝癌。
生物因素
内因：DNA复制时自身也偶尔发生错误
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基因突变的特点
大多数基因突变对生物体 是有害的，只有少数是有利的， 有些既无害也无益。
多数有害
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结果：增殖过度，分化阻断，凋亡受抑
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白血病的分子检测
T细胞和NK细胞系肿瘤
前体T细胞肿瘤
前体T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病（T-LBL/ALL）
成熟（周围）T细胞肿瘤
T-细胞幼淋巴细胞白血病（T-PLL） T-大颗粒淋巴细胞白血病（T-LGL） 侵袭性NK细胞白血病（ANKCL） 成人T细胞淋巴瘤/白血病（ATCL/L） 结外NK/T细胞淋巴瘤，鼻型（NK/TCL） 肠病型T细胞/淋巴瘤（ITCL） 肝脾γδT细胞淋巴瘤 皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤 蕈样真菌病/Sezary综合征（MF/SS）
B-慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞淋巴瘤（B-CLL/SLL） B-细胞幼淋巴性细胞白血病（B-PLL） 淋巴浆细胞淋巴瘤（LPL） Burkitt淋巴瘤（BL） 多毛细胞白血病（HCL） 浆细胞骨髓瘤/浆细胞瘤（PCM/PCL） 脾边缘区B细胞淋巴瘤，±绒毛状淋巴细胞（SMZL） 结外边缘区B细胞淋巴瘤，MALT型（MALT-MZL） 结型边缘区B细胞淋巴瘤，±单核细胞样B细胞（MZL） 滤泡性淋巴瘤（FL） 套细胞淋巴瘤（MCL） 弥漫性大B细胞淋巴瘤（精品DL课B件CL）
A M L w it h in v （ 1 6 ）（ p 1 3 q 2 2 ） o r t（ 1 6 ； 1 6 ）（ p 1 3 ； q 2 2 ）， （ C B F β /M Y H 11） 急 性 单 核 细 胞 白 血 病 （ A cu te m on ob lastic an d m on ocy tic leu k em ia ） 急 性 红 白 血 病 （ A cute erythroid leuk em ia） 急 性 巨 核 细 精胞品白课血件病 （ A c u t e m e g a k a r y o b la s t ic le u k e m ia ）
七类
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骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤 （MDS/MPN）
是一种克隆性造血干细胞疾病，特点表现为 MDS与MPD交叠，有多种“有效”造血及病态造血 存在。
慢性粒-单核细胞白血病（CMML） 不典型慢性髓系白血病（aCML） 幼年型粒-单核细胞白血病（JMML） 不能分类的MDS/MPD
四类
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•基因突变一定会导致生物性状的改变吗?
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增添
ＡＴＡＧＣ （d1）
ＴＡＴＣＧ
┯┯┯┯ ＡＴＧＣ ＴＡＣＧ ┷┷┷┷
缺失
（D）
替换
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┯┯┯ ＡＧＣ ＴＣＧ ┷┷┷ ┯┯┯┯ ＡＣＧＣ
（d2） （d3）
ＴＧＣＧ
┷┷┷┷
基因突变是指由于DNA分子中发生碱基对的
_增__添__、__缺__失__或__替__换__而引起的__基__因__结__构___的改变。