高效液相色谱法测定二甲苯磺酸拉帕替尼片有关物质2

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E-mail： ljhua123@ 126． com 中国药学杂志 2013 年 4 月第 48 卷第 8 期
格： 250 mg，批号： R520553，葛兰素史克公司） 。
2 方法与结果 2. 1 色谱条件
色谱柱（ 1） Waters Xterra MS C18 （ 4. 6 mm × 250 mm，5 μm） ，色谱柱（ 2） 大连依利特 Hypersil C18 （ 4. 6 mm × 250 mm，5 μm） 。除耐用性实验采用两根色谱 柱外，其他实验均采用色谱柱 （ 1 ） ； 以 0. 01 mol · L － 1 磷酸二氢钠溶液（ 用磷酸调节 pH 值至 3. 2） 为 流动相 A，以 乙 腈 为 流 动 相 B，流 速 为 1. 0 mL · min － 1 ，线性梯度洗脱程序见表 1，检测波长为 265 nm。柱温为 40 ℃ ，进样体积为 10 μL。 2. 2 溶液的制备
二甲苯磺酸拉帕替尼片 （ 规 格： 250 mg，批 号： Y55111208、20116401、20116402、20116403，珠 海 联 邦 制药股份有限公司中山分公司； 商品名： TykerbTM，规
作者简介： 刘俊华，女，副主任药师 研究方向： 药物分析 ·644· Chin Pharm J，2013 April，Vol. 48 No. 8
结果表明，在本色谱系统，各已知杂质间，已知 杂质与未知杂质及主成分间均能有效分离，样品中 只检出一个未知杂质，保留时间与拉帕替尼杂质 1 接近，但不是拉帕替尼杂质 1。 2. 3. 2 破坏性实验 取二甲苯磺酸拉帕替尼片、制 备该片 剂 的 原 料 药 及 其 空 白 辅 料，分 别 采 用 加 1 mol·L －1的盐酸后水浴、加 1 mol·L －1 的氢氧化钠溶 液后水浴、氧化、干热、溶液水浴及照度为（ 4 500 ± 500） lx 条件下放置 10 d 等强制破坏实验，考察降解 产物与主成分色谱峰的分离情况。色谱图见图 3。
t / min
0 5 10 25 35 35. 01 45
Mobile phase A / %
70 65 65 20 20 70 70
Mobile phase B / %
30 35 35 80 80 30 30
中国药学杂志 2013 年 4 月第 48 卷第 8 期
图 1 拉帕替尼杂质 A、拉帕替尼杂质 1、2 结构图 Fig. 1 Structured figure of lapatinib impurity A，LAPA-1 and LAPA-2
结果表明，本品原料药经干热破坏，氧化破坏及 经酸、碱破坏后，不经水浴加热，均未产生新的杂质，
表 1 高效液相色谱法测定二甲苯磺酸拉帕替尼片有关物 质线性梯度洗脱程序 Tab. 1 HPLC Determination of lapatinib ditosylate tablets related substances linear gradient elution program
Determination of Related Substances in Lapatinib Ditosylate Tablets by HPLC
LIU Jun-hua，LIANG Xing-hui，WANG Bin-rong（ Zhuhai United Laboratories Co. ，Ltd. ，Zhongshan 528467，China）
①溶剂： 0. 1% 磷酸溶液-乙腈（ 40 ∶ 60） （ V / V） ； 空白溶液： 取对甲苯磺酸约 10 mg，精密称定，置 20 mL 量瓶中，加上述溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，得 0. 442 8 mg·mL － 1 的空白溶液。②供试品溶液： 取 本品细粉适量 （ 约相当于拉帕替尼 6 mg） ，精密称 定，置 10 mL 量瓶中，加上述溶剂适量，超声使溶解， 放冷至室温，用上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即 得。③对照溶液： 精密量取供试品溶液 1 mL，置 100 mL 量瓶中，用上述溶剂稀释至刻度，摇匀。④标准 溶液： 精密称取二甲苯磺酸拉帕替尼对照品 19. 85 mg，置 10 mL 量瓶中，加上述溶剂溶解并稀释至刻 度，摇匀，得拉帕替尼质量浓度为 1. 211 mg·mL － 1 的标准溶液。⑤杂质对照品溶液： 分别取拉帕替尼 杂质 A、拉帕替尼杂质 2、拉帕替尼杂质 1 各适量，精 密称定，加上述溶剂溶解并分别稀释制成含拉帕替 尼杂质 A、拉帕替尼杂质 2、拉帕替尼杂质 1 分别为 99. 29、100. 1、99. 52 μg·mL － 1 的杂质对照品溶液。 ⑥杂质混合对照品溶液： 分别精密量取各杂质对照 品溶液 1 mL，置同一 50 mL 量瓶中，加上述溶剂稀 释至刻度，摇匀，制成含拉帕替尼杂质 A、拉帕替尼
Chin Pharm J，2013 April，Vol. 48 No. 8 ·645·
图 2 二甲苯磺酸拉帕替尼片已知杂质分离实验的色谱图
A － 空白溶液； B － 混合杂质对照品溶液； C － 片剂与已知杂质的混合溶液； 1 － 对甲苯磺酸； 2 － 拉帕替尼； 3 － 拉帕替尼杂质 A； 4 － 拉帕替尼杂质 2； 5 － 未知 杂质； 6 － 拉帕替尼杂质 1
1 仪器及试药 LC － 20A 高 效 液 相 色 谱 系 统 （ 日 本 岛 津 制 作
所，包括 DGU － 20A3 在线脱气机，LC － 20AT 输液 泵，SIL － 20AC 自 动 进 样 器，CTO － 20AC 柱 温 箱， SPD － M20A 二极管阵列检测器，CBM － 20A 系统控 制器） ； XS105DU 电子天平和 Seven Easy pH 计（ 瑞 士梅特勒-托利多公司） 。
高效液相色谱法测定二甲苯磺酸拉帕替尼片有关物质
刘俊华，梁星晖，王斌荣（ 珠海联邦制药股份有限公司，广东 中山 528467）
摘要：目的 建立测定二甲苯磺酸拉帕替尼片有关物质的高效液相色谱法。方法 采用 Waters Xterra MS C18 色谱柱（ 4. 6 mm × 250 mm，5 μm） ； 以 0. 01 mol·L －1 磷酸二氢钠溶液（ 用磷酸调节 pH 值至 3. 2） 为流动相 A，以乙腈为流动相 B，梯度洗脱， 流速 1. 0 mL·min －1 ； 检测波长 265 nm，柱温 40 ℃ 。结果 拉帕替尼杂质 A、拉帕替尼杂质 2 和拉帕替尼杂质 1 分别在 0. 02 ～ 8. 08、0. 02 ～ 8. 26 和 0. 02 ～ 8. 29 mg·mL －1 内线性关系良好，r≥0. 999 9，定量限分别为 1. 0、1. 4、2. 1 ng，杂质高、中、低 浓度的平均回收率（ n = 9） 在 100. 2% ～ 102. 9% ，RSD（ n = 9） 在 0. 02% ～ 0. 66% ，可以满足杂质分析的要求。结论 本方法简 便、准确、专属性强，可定量测定二甲苯磺酸拉帕替尼片的有关物质。 关键词：高效液相色谱法； 二甲苯磺酸拉帕替尼片； 拉帕替尼杂质 A doi： 10. 11669 / cpj. 2013. 08. 018 中图分类号：R917 文献标志码：A 文章编号：1001 － 2494（ 2013） 08 － 0644 － 05
ABSTRACT： OBJECTIVE To establish a determination method of the related substances of lapatinib ditosylate tablets by HPLC. METHODS Waters Xterra MS C18 column （ 4. 6 mm × 250 mm，5 μm） was selected； 0. 01 mol·L －1 sodium dihydrogen phosphate solution （ pH adjusted to 3. 2 with phosphoric acid） was mobile phase A，acetonitrile was mobile phase B，and gradient elution was used at a flow rate of 1. 0 mL·min －1 . The detection wavelength was set at 265 nm，and the column temperature was 40 ℃ . RESULTS Lapatinib Impurity A，LAPA-2 and LAPA-1 had good linearity in the range of 0. 02 － 8. 08 ，0. 02 － 8. 26 and 0. 02 － 8. 29 mg·mL － 1 ，respectively （ r ≥ 0. 999 9 ） . The limits of quantitation （ LOQ） were 1. 0 ，1. 4 ，and 2. 1 ng，respectively. The average recovery （ n = 9 ） was in the range of 100. 2 % － 102. 9 % ，and RSDs （ n = 9 ） were in the range of 0. 02 % － 0. 66% . CONCLUSION The method is simple，accurate，and specific and can quantitatively determine the related substances of lapatinib ditosylate tablets. KEY WORDS： HPLC； lapatinib ditosylate tablet； related substance； lapatinib impurity A
二甲苯磺酸拉帕替尼是一种口服的双靶点小分 子酪氨酸激酶抑制剂，是继曲妥珠单抗（ 赫赛汀） 后 的第 2 个乳腺癌分子靶向药物，能双重抑制表皮生 长因子 受 体 （ EGFR［ErbB1 ］） 和 人 表 皮 受 体 2 型 （ HER2［ErbB2］） 的胞内酪氨酸激酶结构区，可逆性 结合于该区域的三磷腺苷结合位点，阻断受体磷酸 化激活，终止下游的信号通路，同时亦可抑制丝氨酸 蛋白激酶与磷脂酰肌醇-3 激酶活性，促进抑癌因子 FOXO3A 的表达［1］。现行版各国药典均未收载该品 种，其有关 物 质 检 查 方 法 笔 者 未 见 相 关 文 献 报 道。 本实验建立了高效液相色谱法测定二甲苯磺酸拉帕 替尼片的有关物质，方法简便、准确、专属性强，重现 性好，适用于本品有关物质的测定。
二甲苯磺酸拉帕替尼对照品（ 批号： 111101，按 二甲苯磺酸拉帕替尼计含量为 97. 2% ，按拉帕替尼 计含量 为 61. 0% ，HPLC 检 测） ； 拉 帕 替 尼 杂 质 A （ Impurity A，批号： F154IMPC380R099） ，拉帕替尼杂 质 2（ LAPA-2，批号： F154IMPB380R097） ，拉帕替尼 杂质 1 （ LAPA-1，批 号： 20106300003 ） ，对 甲 苯 磺 酸 （ 一 水 合 物） （ 批 号： 201104180011 ） ，均 由 Formosa Laboratories，Inc 提供。
杂质 2、拉帕替尼杂质 1 分别为 1. 986、2. 002、1. 990 μg·mL － 1 的杂质混合对照品溶液。各杂质的结构 式见图 1。 2. 3 专属性实验 2. 3. 1 已 知 杂 质 的 分 离 实 验 分 别 精 密 量 取 “2. 2”项下空白溶 液、供 试 品 溶 液、杂 质 对 照 品 溶 液、杂质混合对照品溶液及“2. 10”项下 100% 已知 杂质加样回收率实验溶液各 10 μL，注入液相色谱 仪，按“2. 1”项下色谱条件测定，色谱图见图 2。