高效液相色谱法测定水性涂料中苯、甲苯、乙苯、二甲苯残留量
液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯
华南师范大学实验报告课程名称仪器分析实验实验项目液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯实验类型□验证□设计□综合实验时间2010 年 3 月31 日实验指导老师实验评分一、实验目的1.掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法；2.了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术。
二、实验原理高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内。
由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动是，经过反复多次的吸附－解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，记录成数据。
液相色谱的定性依据是保留时间的相对性，通常相对误差不能大于5%。
定量参数常常采用峰高、峰面积、相对峰高、相对峰面积等。
定量方法通常采用外标法、内标法和面积归一化法。
外标法为标准物质标准溶液制定标准曲线法；内标法为在标准溶液、样品溶液中加入内标物质，以相对峰高、相对面积对标准物质的浓度制定标准曲线；面积归一化法假定所有出峰物质的吸光系数相同，计算某物质的峰面积占所有峰面积的百分比。
三、仪器与试剂：1.仪器：SCL-10A vp紫外可见双波长检测器；SPD-M10A vp柱温箱；LC-10AT高效液相色谱仪；10μL微量注射器2.试剂：2μL/mL苯标液；2μL/mL甲苯标液；0.2μL/mL、2μL/mL、4μL/mL、10μL/mL的苯与甲苯的混合标准溶液；甲醇溶液；待测试样溶液四、实验内容与步骤：1.选择合适的流动相配比，优化色谱条件设置有关参数：控制流速为1mL/min。
柱温30℃，检测波长354nm。
设置流动相配比（甲醇：水=1：1），用10μL微量注射器注射5μL的10μL/mL苯与甲苯的混合标准溶液进行测定，观察其分离度和出峰时间。
高效液相色谱法测定化妆品中苯并芘残留(1)
*作者简介:王 浩(1969-),男,工程师;E -m a i:l hao w ang2003@高效液相色谱法测定化妆品中苯并芘残留王 浩,刘艳琴,杨红梅,郭启雷,史海良,阎龙宝,李小运(北京市海淀区产品质量监督检验所,北京100094))摘 要:建立了化妆品中苯并芘的高效液相色谱测定方法。
该方法经石油醚提取,以C18(5u m,4.6mm @250mm .i d)反相色谱柱分离,流动相为甲醇+水(87B 13),流速1.0mL /m i n ,激发波长360nm,发射波长410nm,柱温30e ,进样量50L L 。
方法的最低定量限5.0L g /kg ,加标回收率92.1%~103.2%,相对标准偏差为3.5%。
关键词:苯并芘;高效液相色谱仪;化妆品苯并(a)芘是一种强致癌物质,化妆品中苯并芘的主要来源包括:加工过程污染、贮存运输过程的污染、原料污染、环境污染等。
目前,我国尚无化妆品中苯并芘的国标测定方法,只有检测食品中苯并芘的国标测定方法[1](GB /T5009.27-2003),但该法存在操作复杂、溶剂毒性大、费时、准确度低等问题。
所以寻求准确、快速、简便的检测方法,对化妆品中苯并芘残留进行高效的定性定量分析具有重要意义。
本文在参考有关文献[1~3]的基础上,采用石油醚超声提取样品,旋转蒸发富集提取液后,使用C18反相色谱柱分离,利用荧光检测器对样品中苯并芘进行测定,获得较满意的结果。
1 实验部分1.1 仪器与试剂Ag ilent1100型液相色谱仪,配荧光检测器。
石油醚(沸程60~90e )、甲醇(北京化工厂)均为分析纯。
苯并(a)芘标准品(国家标物中心)。
化妆品购自本地超市。
1.2 色谱条件色谱柱:Ag ilen t 反相Zo r bax XDB -C 18柱(5L m,4.6mm @250mm );流速:1.0mL /m in ;柱温:30e ;流动相:甲醇+水(87:13);进样量:50L L ;激发波长:360nm ,发射波长:410nm 。
高压液相色谱仪检测药物残留量试验方法
高压液相色谱仪检测药物残留量试验方法简介本文档旨在介绍高压液相色谱仪检测药物残留量的试验方法。
高压液相色谱仪是一种广泛应用于药物分析领域的仪器，能够快速、准确地检测药物残留量。
实验步骤以下是高压液相色谱仪检测药物残留量的试验步骤：1. 样品准备：将待测样品取出并进行适当处理，确保样品的纯度和完整性。
2. 样品提取：将处理后的样品进行提取，常用方法包括固相萃取、液液萃取等。
3. 样品制备：将提取得到的溶液进行稀释或浓缩，使得样品的浓度处于高压液相色谱的检测范围内。
4. 仪器设置：根据待测药物的特性，设置高压液相色谱仪的参数，包括流速、柱温、检测波长等。
5. 样品注射：使用自动进样器或手动注射器将样品注入高压液相色谱仪的进样口。
6. 数据采集与分析：启动高压液相色谱仪，采集药物残留量的检测数据，并进行数据分析。
7. 结果判读：根据标准或限量要求，对检测结果进行判读，判断样品中药物残留量是否符合规定标准。
注意事项在进行高压液相色谱仪检测药物残留量的试验过程中，需要注意以下事项：- 严格遵守操作规程，确保实验操作的准确性和可重复性。
- 准备样品时，应尽量避免污染和样品损失。
- 在样品制备和仪器设置过程中，应根据实际情况进行优化，以获得更好的检测结果。
- 在结果判读时，应比对相关标准和法规，确保结果的可靠性和准确性。
结论高压液相色谱仪是一种有效的药物残留量检测工具。
通过合理的实验步骤和注意事项，可以准确地检测药物残留量，保证产品的质量和安全性。
以上是高压液相色谱仪检测药物残留量的试验方法的介绍。
希望本文对您有所帮助！。
实验二 利用高效液相色谱测定混合样品中苯和甲苯
三、操作步骤
1、最佳分离条件的选择 启动仪器，先注入5微升的甲醇流动相，
观察检测器当峰斜率小于1000是，设定流动 相甲醇含量为60%，注入5微升的苯与甲苯混 合液，观察检测器显示的两峰的保留时间及 分离效果。双峰显示完毕后，改变流动相甲 醇含量为80%，观察检测器显示的两峰保留 时间及分离效果。
1．色谱条件优化
2.00μ色V(x谱100,000)
1.75 1.50 1.25 1.00 0.75 0.50 0.25 0.00
0.0
2.5
5.0
7.5
10.0
12.5
15.0
17.5
min
由上图可知，当甲醇的含量为85%时，能将两者分 开，且时间较短，因此可选甲醇含量为85%作为实验 条件。
2．苯、甲苯定性分析
Y = aX + b a = 264149.7 b = 98330.34 R^2 = 0.9978541 R = 0.9989265
甲苯
浓度
在最佳分离条件下，用10μL微量注射器， 分别注射5.0μL苯、甲苯的标准溶液，观 察记录保留时间，确定苯和甲苯的峰
10.0μ色V(x谱10,000)
9.0
8.0
7.0
甲苯
6.0
苯
5.0
4.0
3.0
2.0
1.0
0.0
-1.0
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
3.5
min
样品 保留时间
苯 3.177
苯、甲苯混合标准溶液浓度分别为：1 ul/ml, 2 ul/ml,5 ul/ml, 10 ul/ml。
高效液相色谱法分析环境水样中4种苯系物
高效液相色谱法分析环境水样中4种苯系物王兴益;陈兴舟;杨燕群;刘玉兰;李明刚;陈君雨;张仟春【摘要】建立了一种高效液相色谱测定水样中4种苯系物(苯、甲苯、乙苯、对二甲苯)的方法.分析柱为Diamonsil5μmC18,250×4.6mm,检测波长为259nm,流动相比例V(乙腈):V(水)=75:25,流量大小为1.000mL/min,色谱柱温度为35℃.方法的线性范围为0.0100～10.0mg/L,相关系数大于0.9997,4种苯系物的检出限(S/N=3)为1.9μg/L～3.2μg/L,方法的重复性良好,峰面积的相对标准偏差(n=7)小于4.6％.样品中未检出,采用加标浓度为0.100mg/L和1.00mg/L进行方法验证,实际水样的加标回收率为82.3％～97.6％,表明该方法可有效用于水样中苯系物的灵敏、准确分析.【期刊名称】《兴义民族师范学院学报》【年(卷),期】2017(000)003【总页数】6页(P119-124)【关键词】苯系物;高效液相色谱;环境水样【作者】王兴益;陈兴舟;杨燕群;刘玉兰;李明刚;陈君雨;张仟春【作者单位】兴义民族师范学院, 贵州兴义 562400;兴义民族师范学院, 贵州兴义562400;兴义民族师范学院, 贵州兴义 562400;兴义民族师范学院, 贵州兴义562400;兴义民族师范学院, 贵州兴义 562400;兴义民族师范学院, 贵州兴义562400;兴义民族师范学院, 贵州兴义 562400【正文语种】中文【中图分类】O656.9Abstract:A method for the simultaneous determination offour benzenes,(benzene,toluene,ethylbenzene,and p-xylene)in water samples was established using high performance liquid chromatography.The analytical column was performed on a Diamonsil C18(5μm×4.6 mm×250 mm),the quantitation analysis of four benzenes were achieved by UV detection at 259 nm,the mobile phase used wasacetonitrile/water(75:253,v/v),the flowrate of the mobile phase was 1.000 mL/min,and the column temperature was kept on 35°C.The linear rangesof four benzenes were in the range of 0.0100 mg/L-10.0 mg/L with correlation coefficients more than 0.9997.The method detectionlimits(S/N=3)off our benzenes were between 1.9 μg/Land 3.2 μg/L.The relative standard deviations(n=7)were less than 4.6%.The spiked recoveries at twomatrixspiked concentrations were in the range of82.3%～97.6%.The results showed that the developed method was sensitive and accurate，and was suitable for the analysis ofbenzenes in water sample．Key words:Benzenes;High Performance LiquidChromatography;Environmental Water Samples苯系物是苯及其衍生物的统称，是塑料、染料、合成纤维、橡胶、药物等的重要原料和有机溶剂，广泛应用于石油化工、医药、农药、塑料、制革等工业中，排放的废水可对环境造成严重的污染[1-2]。
反相高效液相色谱法分析甲苯反相高效液相色谱法分析甲苯
24
液相色谱基础知识
流动相的选择
采用“ HPLC ” 级溶剂 溶剂 避免使用会引起柱效损失或保留特性变化 的溶剂 对样品有适宜的溶解度 溶剂的粘度要小 与检测器相匹配
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溶剂的等级
水的等级：
吸光率 纯化水 蒸馏水 去离子水 去离子水
纯化水
因为不纯物质的存在，去离子水的吸光率较高 纯化水中去除了无机和有机的污染物
3
实验任务
分离甲苯、萘、联苯3种芳烃的混合物， 由于苯环个数或分子的表面积有显著差 别，因此在反相高效液相色谱中得到很 好的分离。用保留时间定性，根据峰面 积标准工作曲线定量。
4
三、仪器与试剂 仪 与试剂
仪器：Shimadzu LC-10ATVP高效液相 色谱仪 检测器为SPD-M10Avp 色谱仪，检测器为 SPD M10A 二极管 极管 阵列检测器。
5
液相色谱流程图
进样器
流动相
输液泵
柱温箱
检测器 数据处理
6
Shimadzu LC-10ATVP LC 10ATVP高效液相色谱仪
7
三、仪器与试剂 仪 与试剂
色谱条件：
色谱柱：Shimadzu VO-ODS（4.6×150mm）C18分析柱 流动相 A液：水； 流动相： 液 水 B液：甲醇。用前用超声波脱气。 液 甲醇 用前用超声波脱气 UV-检测器，检测波长254nm。 进样体积：20uL;流动相流速：1.0mL/min。 样品：甲苯、萘、联苯的混合甲醇溶液。
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岛津VP系列输液泵
本仪器配备了两个LC-10AT vp 输液泵， 流速范围 0.001-9.999 0 001 9 999 ml/min。 l/ i 可进行等度洗脱和高压梯度洗脱。
高效液相色谱法快速测定植物油中苯并(а)芘残留量
Ｕｓ ｉ ｎ ｇ Ｃ１ ８（ ２ ５ ０ ｍｍ ×４ ． ６ ｍｍ Ｘ ５ ｍ ） ｒ ｅ ｖ ｅ ｒ ｓ ｅ ｄ — ｐ ｈ ａ ｓ ｅ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ ， ｗｉ ｔ ｈ ａ ｃ ｅ ｔ ｏ ｎ ｉ ｔ ｒ ｉ ｌ ｅ ａ ｎ ｄＨ２ ０（ ８ ８ ： １ ２ ， ｖ ／ ｖ ） ａ ｓ ｍｏ ｂ ｉ ｌ ｅ ｐ ｈ ａ ｓ ｅ ， ｌ ｆ ｏ ｗ ｒ ａ ｔ ｅ ｗａ ｓ １ ． ０ ｍｌ ／ ｍｉ ｎ ， ａ ｎ ｄ ｅ ｘ ｃ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗａ ｖ ｅ ｌ ｅ ｎ ｇ ｔ ｈ ｗａ ｓ ３ ８ ４ ｎ ｍ ａ ｎ ｄ ｅ ｍｉ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｗａ ｖ ｅ ｌ ｅ ｎ ｇ ｔ ｈ ｗａ ｓ ４ ０ ６ ｎ ｒ ｕ ， ａ ｎ ｄ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ ｔ ｅ ｍｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ｗａ ｓ ３ ５ ， ａ ｎ ｄ ｉ ｎ ｊ ｅ ｔ ’ ｄ ｏ ｎ
高效液相色谱法测定二苯醚有机溶剂残留_田辉
科技论坛高效液相色谱法测定二苯醚有机溶剂残留田辉张明（哈尔滨誉衡药业股份有限公司，黑龙江哈尔滨150000）在本公司研发某化学原料药的合成过程中用到溶剂二苯醚。
参照文献【１】中报道的检验方法，通过方法摸索，采用供试品中加入流动相超声方法提取样品中残留的二苯醚，高效液相色谱法对其进行测定，以检定其有机溶剂残留。
１试验仪器及色谱条件仪器：Ａｇｉｌｅｎｔ１２００紫外检测器色谱柱：ＺＯＲＢＡＸＳＢ－Ｃ１８（５μｍ，４．６×２５０ｍｍ）２检验方法照高效液相色谱法（中国药典２０１０年版二部附录ＶＤ）测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇：水（８５：１５）为流动相，检测波长为２６５ｎｍ，柱温为３０℃。
理论塔板数按二苯醚峰计算应不低于３０００。
测定法精密称取供试品０．１ｇ，加流动相１０ｍｌ，超声振荡，过滤，取续滤液作为供试品溶液。
精密称取二苯醚对照品，加流动相稀释制成５０μｇ／ｍｌ的溶液，作为对照品溶液。
精密量取对照品溶液及供试品溶液各２０μｌ，注入液相色谱仪，记录色谱图。
按外标法以峰面积计算供试品中二苯醚的含量。
３检验条件选择参照参考文献，拟定检验条件如下：色谱柱：ＺＯＲＢＡＸＳＢ－Ｃ１８（５μｍ，４．６×２５０ｍｍ）流动相：甲醇：水＝８５：１５流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ柱温：３０℃检测波长选择精密称取二苯醚，加流动相稀释至适当浓度，进行紫外波长扫描。
结果最大吸收波长为２６５．００ｎｍ，参照文献报道中检测波长，确定２６５ｎｍ为本品高效液相检验方法的检测波长，进行方法学考察。
４方法学考察取二苯醚，加流动相制成约２５０μｇ／ｍｌ的溶液。
精密量取２０μｌ，注入液相色谱仪，记录色谱图。
结果可见，拟定检验条件对二苯醚可检出，出峰时间为５．５分钟。
根据拟定检验条件对该方法进行方法学研究。
４．１专属性考察称取合成原料０．１ｇ，加流动相１０ｍｌ，超声振荡，过滤，取续滤液。
作为供试品溶液。
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高效液相色谱法测定水性涂料中苯、甲苯、乙苯、二甲苯残留
量
姚帮本;郭佳佳;李云;韩枫;陈碧云;宫雅雪;胡猛;丁媛丽
【摘要】苯、甲苯、乙苯和二甲苯是涂料和油漆等工业中的主要原料和溶剂,使用极其广泛,危害极其严重.苯系物在水性涂料中含量较低,检测灵敏度要求高.建立了高效液相色谱测定水性涂料中苯、甲苯、乙苯、二甲苯残留量的分析方法.样品经甲醇提取,苯、甲苯、乙苯及二甲苯检出限均为5 mg/kg.在2个浓度水平上做回收试验,回收率分别在95.9％～ 102.0％之间,相对标准偏差(n=6)≤3％.
【期刊名称】《安徽化工》
【年(卷),期】2018(044)006
【总页数】3页(P118-120)
【关键词】苯;甲苯;乙苯;二甲苯;水性涂料;液相色谱
【作者】姚帮本;郭佳佳;李云;韩枫;陈碧云;宫雅雪;胡猛;丁媛丽
【作者单位】安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051
【正文语种】中文
【中图分类】O657.71;TQ630.7
涂料使用的有机溶剂可能含有苯、甲苯、乙苯和二甲苯等有毒有害成分。
苯系物是属于极度危害的化学物质，可通过呼吸道、消化道和皮肤进入人体而产生危害，其毒性主要表现在对人体至畸、致突变和致癌等方面，可引起各种类型的白血病[1-2]。
由于气相色谱流动相单一，操作简便，分离良好，因此，关于苯系物的气相色谱检测方法层出不穷，不断成熟，并被应用在各个领域[3-4]。
气相色谱在苯系物的定性方面较为繁杂，准确性有待提高。
然而，液相色谱可以通过化合物因光学特性所产生的光谱而准确地界定属性。
目前，国内外关于液相色谱检测涂料中苯系物的方法尚无报道，因此，本研究欲建立苯系物的高效液相色谱法，达到定量准确，定性高效的目的。
拟通过对苯系物及异构体化学结构和特性的研究，利用高选择性的C30烷基硅烷色谱柱、高分辨率及高灵敏度的二极管阵列检测器，高效分离出水性涂料中的苯、甲苯、乙苯及二甲苯。
1 实验部分
1.1 仪器与材料
Agilent 1290高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；KQ-300VDB台式三频数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；XPE204分析天平，感量为0.000 1 g（梅特勒-托利仪器有限公司）。
甲醇（色谱纯，德国Merk公司）；苯、甲苯、乙苯、二甲苯（色谱纯，纯度
≥99.9%，美国Sigma公司）。
1.2 溶液配制
混合标准储备液：称取色谱纯苯、甲苯、乙苯和二甲苯各0.05 g（精确至0.000 1 g）置于100 mL容量瓶中，此溶液质量浓度（苯、甲苯、乙苯、二甲苯）为0.5
mg/mL，用甲醇溶解并稀释至刻度。
标准曲线：分别吸取苯、甲苯、乙苯和二甲苯混合标准储备液 0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、4.00 mL，置于100 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成分别含苯、甲苯、乙苯和二甲苯0.50 μg/mL、1.00 μg/mL、2.50 μg/mL、5.00μg/mL、10.00 μg/mL、20.00 μg/mL的标准溶液。
1.3 样品前处理
称取1 g（精确至0.000 1 g）经搅拌均匀的试样，置于10 mL容量瓶中，用甲醇充分溶解并稀释至刻度，超声振荡20 min，取出，来回摇匀10次，冷却至室温，经0.45 μm滤膜过滤上机测定。
若测定值超过标准曲线上限，则对提取液进行适
当稀释。
1.4 高效液相色谱分析条件
色谱柱：Acclaim C30 柱，250 mm × 3.0 mm（id），粒径3 μm；流动相：甲醇 /水溶液（70/30）；柱温：10℃；流速：0.3 mL/min；检测波长：254 nm；进样量：2 μL。
根据保留时间（RT）定性，外标法定量。
2 结果与分析
2.1 苯、甲苯、乙苯及二甲苯的色谱图
苯的保留时间（RT）为8.9 min，甲苯的保留时间（RT）为 12.4 min，乙苯的保留时间（RT）为 17.0 min，二甲苯的三种同分异构体（邻、间、对二甲苯）的保留时间（RT）分别为 17.7 min、18.9 min、19.5 min，见图 1。
图1 苯、甲苯、乙苯、二甲苯的色谱图1- 苯，2-甲苯，3-乙苯，4-邻二甲苯，5-间二甲苯，6-对二甲苯
2.2 标准曲线的线性范围、检出限
按照试验方法测定混合标准溶液系列，以各化合物的质量浓度为横坐标，对应的响应值为纵坐标，绘制标准曲线，其线性范围、线性回归方程、相关系数及方法检出
限见表1。
2.3 苯、甲苯、乙苯及二甲苯的回收率和精密度试验
分别将0.5 μg/mL、10.0 μg/mL 的苯、甲苯、乙苯、二甲苯添加到水性涂料空白样品中，平行测定6次，计算平均值，结果见表2。
表1 苯、甲苯、乙苯、二甲苯的线性参数及检出限?
表2 不同浓度的苯、甲苯、乙苯、二甲苯回收率和精密度试验?
表2结果显示：本次试验的相对标准偏差≤3%，本次加标回收率在95.9%～102.0%之间，符合加标回收率要求，说明本方法准确可靠。
3 讨论
（1）由于苯系物在水中的溶解度很小，因此，测定时将样品混匀，用甲醇溶解样品，使苯系物被甲醇充分提取，不需要其他复杂的前处理步骤。
（2）试验过程中柱温的选择，明显影响目标物的分离效果。
柱温高于10℃或低于10℃分离度均不理想，如图2。
当柱温为10℃时，六种目标物完全分离。
（3）本方法利用可以采集光谱的二极管阵列检测器，不仅可以有效定量，而且能够达到准确定性的目的。
（4）本试验采用C30色谱柱达到异构体之间的有效分离，定量更加准确，达到常规C18色谱柱达不到的分离效果。
4 结论
本文建立了高效液相色谱检测水性涂料中苯、甲苯、乙苯、二甲苯含量的方法，有效分离二甲苯异构体。
研究结果表明，该方法简单、快捷、准确，为涂料中苯、甲苯、乙苯、二甲苯含量检测提供了有效的技术方法，填补了技术方法上的空白。
图2 柱温对苯、甲苯、乙苯、二甲苯分离的影响
参考文献
【相关文献】
[1]Zhang Y,Mu Y,Mellouki A.Levels,sources and health risks of carbonyls and BTEX in the ambient air of Beijing,China[J].Journal of Environmental Sciences,2012,24（8）:102-104.
[2]庞博，王铁宇，杜立宇，等.农药企业场地苯系物污染风险及调控对策[J].环境科学，2013,34（7）：2830-2835.
[3]薛文慧,付春芝.气相色谱法检测油漆中苯、甲苯及二甲苯含量[J].分析仪器,2018（1）：68-70.
[4]薛洁.顶空气相色谱法分析溶剂型涂料中苯系物 [J].环境与发展,2018,30（3）：132-133.□。