筛选精子抗原的研究进展
精原干细胞移植技术研究进展
精原干细胞移植技术研究进展精子发生是男性生殖细胞增殖、分化的过程，始于青春期并维持终生。
精原细胞尤其是精原干细胞是持续维持精子发生的关键因素。
个体内可因缺乏精原干细胞或放疗、化疗而导致生精细胞发育障碍或产生无功能性精子等原因引起不育。
新近发展的精原干细胞移植技术为研究精子发生机理提供了新的途径。
本文简要综述这项技术的发展过程、主要方法以及最新进展和应用前景。
1 精原干细胞移植技术分类及发展过程精原干细胞同源移植技术包括自体移植和同种异体移植。
这项技术始于1994年Brinster等[1]将可育小鼠的精原干细胞注射到不育小鼠的曲细精管使受体鼠产生了具有受精能力的精子并产出了正常后代，这是精原干细胞移植的首次重要突破。
Honaramooz等[2]在实验中，将猪的生殖细胞移入自身对侧的睾丸（自体移植）和无关另外一头猪的睾丸中（同种异体移植），结果两者都未对供者的生殖细胞发生明显免疫应答，但植入猪睾丸中的小鼠生殖细胞却很快被清除，故他们认为免疫耐受现象只限于同源移植。
1996年Clonthier等[3]将大鼠睾丸细胞显微注射到无免疫应答的重度综合免疫缺陷(severe-combined immunodeficient mice，SCID)的裸小鼠的睾丸中，睾丸干细胞会继续发育，并产生带有供体细胞种属的精子发生，取得了跨物种产生精子的重大突破。
1999年Ogawa等[4]将小鼠的睾丸细胞移植到大鼠的睾丸中获得成功。
Sofikitis[5]等认为人类睾丸细胞移入小鼠或大鼠可使25%的受体产生精子，这似乎表明灵长类生殖细胞或多或少比其它非啮齿类、非灵长类种属与啮齿类动物生精小管的微环境更相容。
Napano等[6]发现人的精原干细胞能在小鼠睾丸中至少可以存活六个月，且在移植后第一个月能保持增殖但不能分化。
这种现象0gawa等认为可能是由于小鼠内源性的支持细胞缺乏足够的能力来支持系统发育距离较远的物种。
但用睾丸组织块异位移植可部分解决上述问题，2002年Honaramooz等将新生小鼠、猪或羊的睾丸组织块（0.5-1mm3）移植到阉割的裸鼠的背部皮下，结果60% 以上的移植物存活，而且体积增大，并最终产生成熟的精子。
附睾特异蛋白与精子功能的研究进展
哺 乳 动 物 睾 丸 中 产 生 的精 子 在 离 开 睾 丸 时 尚 不具备 运动 和使 卵 子受 精 的能力 。其 在 附睾运行 过 程 中经一 系列 的修饰 ， 附睾 精 子 成 熟 ， 具 备 完 即 才
的相互 作用 而 不断 成熟 ， 表现 为获 得 运 动和 受精 能
力， 而精 子 质 膜 的变 化 是精 子 获得 这 些新 功 能 的直
光 分析 显 示 ，大量 的 Ｒ ａｅ Ｎ ｓ９蛋 白还 集 中表达 于精
泌， 并参与附睾管腔液态微环境修 饰过程 密切 相关 。
参 与精子成 熟 的附睾 特异蛋 白
精 子在 附睾 运行 过 程 中 ， 过 与 附 睾液 微 环境 通
作者单位 ：０ ０ １北京， １０ ８ 国家人 口计生委科学技术研究所［ 韩丽 嫒（ 北京协和 医学院研究生 院在读 ）于和鸣】 ，
【 ｙｗ ｒｓ Ｓ ｅ ａ ｚａ Ｅ ｉｉ ｍｉ； ｐ ｒ ａ ｒｔｎ Ｅ ｉｉ ｍａ ｓｃｅ ｒ ｒ ｅ ｓ Ｋｅ ｏ ｄ 】 ｐ ｒ ｔ ｏ ； ｐｄｄ ｓ Ｓｅｍ ｍ ｔ ａｉ ； ｐｄｄ ｌｅｒｔ ｙｐｏ ｉ ｍ ｏ ｙ ｕ ｏ ｙ ｏ ｔｎ
（ ｎ Ｒｅ ｒｄＨｅｌ ／ ａ Ｐａ ２ １ ３ ５ — ７） Ｊｌｔ ｐ ｏ ａｔ Ｆ ｍ ｌｎ，０１ ， ０：４ ５ ｈ
ｔ ｖ ｌ ｇ ｔｒｕ ｈ ｔｅ ｅ ｉｉｙ ｓ ｔｂ ｓ ｏ ｒｔｉｓ ａｅ ｒｍｏ ｅ ｗａ ，ｓ ｍｅ ａｅ ｂｎ ｉｇ ｏ ，ａ ｄ ｓ ｍｅ ｒ ｅｉ ｈ ｏ ｇ ｈ ｐｄｄ ｍｉ ｕ ｅ ，ｓ ｍｅ ｐ ｏｅｎ ｒ ｅ ｖ ｄ ａ ｙ ｏ ｒ ｉｄｎ ｎ ｎ ｏ ａ ｎ
系列 不 同 的生 物 功能 ， Ｒ Ａ 的降 解 、 抗 病 原 物 如 Ｎ 抵 质 入侵 和参 与 炎 症反 应 等 。大量 的研 究 表 明 ， 睾 附 内 的 Ｒ ａｅ Ｎ ｓ９与 Ｒ ａｅ Ｎ ｓＡ超 家 族 中其 他 成 员 的 特 性 并 不 相 同 ， 要 表 现 在 ： 在 去 势 大 鼠的 实 验 中发 主 ① 现 ， 睾 的 Ｒ ｓ９表 现为 雄 激 素依 赖 性 ， 雄 激 素 附 Ｎａｅ 受
前沿综述丨精液中生殖相关酶的研究进展
前沿综述丨精液中生殖相关酶的研究进展精液由精子和精浆组成，其中精浆主要来自精囊、前列腺、睾丸和附睾以及尿道旁腺的分泌。
精子和精浆中含有大量的酶，在男性生殖过程中起到不同的作用。
精液中的酶主要由精子细胞、前列腺和附睾产生。
因此，对精液中的酶进行检测可以评估精液质量，反映附属性腺功能状况，测定相关酶含量对男性不育症的诊疗有着重要的价值。
现将与男性生殖相关酶的作用及其临床价值给予综述。
1 抗氧化酶氧化应激（OS）被认为是男性不育症的主要原因之一，OS其特征是由活性氧（ROS）衍生的自由基引起的细胞损伤增加与抗氧化剂防御间的平衡。
ROS通过单链和双链DNA断裂，交联和染色体重排引起破坏。
当ROS大于抗氧化剂能力时，会导致潜在的细胞和DNA 损伤。
为了获得最佳的精子功能和受精，必须保持ROS与抗氧化剂的平衡。
精液中抗氧化酶主要包括过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）和超氧化物歧化酶（SOD）。
SOD 是人体最重要的抗氧化酶，可以清除超氧阴离子并催化超氧化物转化为氧和过氧化氢，SOD可调控多种ROS的水平。
在支持细胞、附睾和精浆中均发现了SOD存在，SOD在精子的发育和成熟过程中发挥作用。
精浆SOD能够起到防止精子样本中磷脂和与磷脂结合的脂肪酸过氧化，保护精子免于脂质过氧化的伤害的作用［1］，SOD还可以减少氧化核酸损伤，SOD1抗氧化剂基因的缺乏会导致小鼠睾丸修复DNA损伤的机制受损。
与其他抗氧化剂相比，基于SOD 的抗氧化剂能够更好的改善精子DNA完整性［2］。
在对男性精浆的研究发现，精子密度与锰超氧化物歧化酶（MnSOD）的活性呈正相关，前向运动与铜锌超氧化物歧化酶（CuZnSOD）的活性呈强正相关［3］。
不育男性SOD活性明显低于可育男性，结果认为SOD可以作为评估精子质量和男性不育风险的有益指标［4］。
GPX应用谷胱甘肽作为电子供体催化过氧化氢和超氧阴离子。
睾丸支持细胞中存在高浓度的GPX，附睾、输精管和精囊组织中存在GPX，GPX在附睾头部表达和分泌［5］。
精子介导转基因(sperm—mediated gene transfer, SMGT)技术研究进展简
精子介导转基因（sperm—mediated gene transfer， SMGT）技术研究进展简述作者：辛念来源：《中国科技博览》2014年第24期[摘要]转基因作为基因功能研究的重要手段，在遗传育种，医疗卫生和实际生长中都起着重要的作用。
因此，获得一项有效的转基因技术就显得尤为重要。
精子介导的转基因技术（sperm-mediated gene transfer， SMGT）具有操作简单，成本低廉，适用范围广阔等优点，越来越受到人们的关注。
文章介绍了精子介导的转基因技术的原理，近年来的研究成果，发展过程，以及其改进方法。
[关键词]精子，转基因，精子介导；中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）24-0264-01引言提起转基因，常人往往将其和转基因食品联系起来，一般来说，民众对转基因的了解是从转基因食品的安全开始的。
目前普遍对转基因食品心存担忧，大有谈“转”色变的趋势。
其实，转基因技术在科学研究和实际应用上，远远不限于转基因食品这个层面，它在基因功能研究，医学病症分析，和药物开发等方面，都有重要的科研价值。
此外，转基因甚至可以繁殖带有荧光的转基因动物，将它们作为宠物。
可见转基因技术在商业价值的前景也是非常广阔的。
常用的生产转基因动植物的方法包括：显微注射法，胚胎干细胞法，逆转录病毒法，基因枪法。
目前应用广泛的是显微注射法，其主要优点是转基因后代效率高，插入基因的片段长度不受限制；但是这种方法对设备条件和人员素质要求都很高，所以应用受到限制。
而精子介导的转基因技术（sperm-mediated gene transfer，SMGT），使用的转基因载体是精子，借助精卵受精这一天然过程，因而操作简便，实验条件简单，可以在短时间内获得大量转基因个体。
本文对精子介导转基因的基本原理，最新研究进展和对此技术的改进等方面做一个简单介绍。
1、精子介导的转基因技术的基本原理目前研究表明，绝大多数种类的动物精子都具有自发结合外源DNA的能力[1]。
男性免疫性不育症的中西医结合治疗研究进展
男性免疫性不育症的中西医结合治疗研究进展（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【关键词】男性免疫性不育症；中西医结合治疗；抗精子抗体男性免疫性不育是指结婚１年以上的夫妻，有正常性生活且未采用避孕措施，女方生育能力正常，男方性功能正常，由于血清或精浆中抗原抗体阳性而致不育者。
根据大量临床观察，逐步发现男性自身的免疫反应与其生育能力密切相关［１］，抗精子抗体是免疫性不育的重要原因之一［２］，据ＷＨＯ报道，体内存在抗原抗体而致不育患者占总不育的２０％～３０％［３］。
随着生殖医学的研究发展，男性免疫性不育越来越受到人们的重视。
国内近年开展了西医现代技术诊治和中医辨证结合治疗免疫性不育的探索，取得了可喜的成果，现综述如下。
１病因探析１．１中医病因病机徐福松等［４］认为该病的病位在肝肾，次在脾肺，本为肾虚，标为湿热和瘀血。
田秉星等［５］认为，本病多为湿热蕴结下焦而致不育。
陈金荣等［６］则认为，本病病因多由损伤、感染、炎症等湿热瘀毒病邪致使气血虚损、精血亏虚；或气滞血瘀痰凝；或湿毒内蕴；或上述诸多因素互为因果导致不育。
闫乐法等［７］结合ＡｓＡｂ产生的机制认为，①兼有肾虚精亏者，多属免疫功能低下，ＳＰＩＭ降低。
②兼有瘀象者多因精道阻塞或精索静脉曲张。
③湿热蓄积多有慢性炎症。
④肝肾阴虚，阳亢化火者多伴体液反应亢进。
⑤ＡｓＡｂ的形成与细胞免疫功能低下有关，其精子成活率、活动力低下，属于脾虚气弱。
１．２精子抗原抗体（ＡｓＡｂ）的产生机制１．２．１精子抗原近几年来，许多与受精和早期胚胎发育有关的精子抗原倍受关注［８］，其中包括：①精子膜表面抗原：该研究已进入分子水平。
其中ＦＡ－１是一种精子膜抗原，可诱导体液免疫和细胞免疫，由此损伤精子和胚胎。
另外发现，抗ＦＡ－１抗体可抑制人精子与去透明带的卵的融合，并抑制人精子的顶体反应及精子获能［９］。
②精子胞浆中的抗原：精子头部胞浆中还有精蛋白、乳酸脱氢酶等，精子破坏时可以暴露胞浆抗原。
前列腺癌的早期筛查与诊断策略的研究进展
前列腺癌的早期筛查与诊断策略的研究进展前言：前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤之一，在世界范围内具有较高的发病率和死亡率。
早期筛查与准确的诊断对于提高患者的生存率和生活质量至关重要。
本文将介绍前列腺癌早期筛查和诊断策略的研究进展，包括生物标志物、影像学检查和基因检测等方面。
一、生物标志物在前列腺癌早期筛查与诊断中的应用1. 血清标志物血清标志物是目前常用于前列腺癌筛查与诊断的方法之一。
其中，最常用的生物标志物是前列腺特异性抗原（PSA）。
PSA 可以通过血液样本进行检测，其升高可能是前列腺癌存在的指示之一。
然而，单纯依据PSA 的升高来判断是否患有前列腺癌可能存在误诊和过度治疗的风险。
因此，目前研究人员正在寻找更加可靠和特异性的血清标志物。
2. 尿液标志物尿液样本作为无创且易采集的样本，一直受到前列腺癌研究的关注。
地高辛抗原3（GOLPH3）和人胚胎型干扰素抗性相关蛋白X（IFRx）等尿液标志物已被发现与前列腺癌存在相关性，可作为早期筛查和诊断候选标志物。
二、影像学检查在前列腺癌诊断中的应用1. 超声检查超声检查是前列腺癌常用的影像学检查方法之一。
通过超声波在患者身体内部的传播和反射形成图像，并结合Doppler 血流成像技术，可以检测到前列腺肿瘤。
然而，由于超声图像质量受操作者经验和设备性能影响较大，其对于小肿瘤的检测率相对较低。
2. 磁共振成像（MRI）MRI 是一种非放射性的影像检查技术，在前列腺癌的准确诊断中具有重要价值。
MRI 可以提供更高分辨率和更详细的图像信息，不仅可以显示前列腺器官本身，还可以观察肿瘤的大小、形状及其周围组织的受累情况。
同时，MRI 还可以辅助进行针对性活检。
三、基因检测在前列腺癌诊断中的应用1. 遗传突变检测一些研究表明，在前列腺癌的发生和发展中存在一些与遗传相关的突变。
通过检测这些遗传突变，可以帮助更准确地判断患者是否存在前列腺癌，尤其是那些早期疑难病例。
目前，常用的遗传突变检测方法包括多重位点DNA 测序技术和荧光原位杂交法等。
Serex技术筛选SLE新抗原临床研究进展
Serex技术筛选SLE新抗原临床研究进展甘德芳;何帮顺;陈兴国【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2012(033)002【摘要】@@ Serex技术是基于体液免疫的重组cDNA 文库的血清学分析方法,简便易行.其原理是利用分子克隆技术和将患者自体血清对抗原的自体分型技术融为一体,不仅可检测抗体反应,而且能在抗原与患者自体血清反应的基础上直接从分子水平确定具有免疫原性的抗原.此方法的流程主要是以新鲜组织或细胞样本构建cDNA 文库并连接入噬菌体表达载体,以重组的噬菌体转染大肠杆菌,将细菌表达的重组蛋白转移至膜上,与稀释后的患者自体血清共孵育,用酶联特异性抗人IgG 二抗识别与高滴度血清抗体反应的克隆,阳性克隆随后亚克隆化,分离出单个插入片段,并确定此插入cDNA的核苷酸序列,在相应的数据库中进行比对,确认其染色体定位和推测可能的功能作用,最后分析该基因的组织表达谱[1].Serex技术在科研及临床工作中应用越来越广泛,本文就Serex技术作一阐述.【总页数】3页(P180-182)【作者】甘德芳;何帮顺;陈兴国【作者单位】江苏省南京市江宁区第二人民医院检验科,211103;南京医科大学附属南京第一医院医学检验科,210006;南京医科大学附属南京第一医院医学检验科,210006【正文语种】中文【相关文献】1.SEREX筛选肿瘤抗原的研究进展 [J], 樊秋云2.应用SEREX技术筛选和鉴定非小细胞肺癌肿瘤相关抗原 [J], 岳文涛;张丽娜;郑华;王玥;孙颖;焦振峰3.应用SEREX技术筛选肿瘤抗原的研究进展 [J], 刘宇虎;张振书4.应用SEREX技术筛选和鉴定肺癌相关抗原的研究进展 [J], 曹纪伟;刘德森5.应用SEREX技术筛选和鉴定非小细胞肺癌肿瘤相关抗原 [J], 岳文涛;张丽娜;郑华;王玥;孙颖;焦振峰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
精子膜蛋白的研究进展
精子膜蛋白的研究进展精子膜表面蛋白是精子功能得以实现的最主要物质，对其进行深入研究能从蛋白质水平研究其生物学的功能、揭示其生物生殖的分子机制，进而为避孕疫苗的开发奠定了基础。
本文就近年来精子膜蛋白的研究进展作一综述。
标签：精子膜蛋白；精卵相互作用；避孕疫苗精子是一种高度分化的细胞，其膜蛋白种类繁多，是精子功能得以实现的最主要物质，与受精过程和胚胎的早期发育关系密切，可能参与精子的发生、成熟、获能、精卵粘附与识别、顶体反应、穿越透明带（ZP）、精卵融合等诸多环节。
近几年来，一些新的精子膜特异蛋白不断被发现，这些都有助于从分子水平揭示受精的过程和不育的机制，为提高不育特别是免疫性不育的诊断与治疗水平以及避孕疫苗的研发提供了必要的基础。
1 与精子发生、成熟与获能相关的精子膜蛋白1.1 精子成熟前后膜蛋白的变化精子作为哺乳动物一种特殊的具有运动能力的单倍体细胞，在发生、成熟、获能过程中，其形态结构、生化组成不断发生变化，以达到与其功能相适应。
Kaul等[1]通过碘放射标记和免疫学方法检测羊精子获能前后膜表面蛋白的变化，发现在获能前能够检测到相对分子质量（Mr）为17800、29100、33400、45600、85100、123200的蛋白条带，在获能后只能检测到Mr为26000、32100、40100、45600的蛋白条带，而在顶体反应后的精子表面只能检测到Mr为45600的1个蛋白条带。
精子获能前后一个明显的变化是高相对分子质量的蛋白质逐渐减少，而低相对分子质量的蛋白质增多。
1.2 附睾特异性分泌蛋白HongrES1 是丝氨酸蛋白酶抑制剂家族的新成员并受雄激素调控。
该蛋白分泌到附睾管腔液中后，结合到精子头部，促进精子获能及超激活运动，获能后的精子HongrES1蛋白在头部的定位消失[2]。
1.3 p34H蛋白在精子获能的过程中重新暴露出来。
p34H蛋白可能是一种透明带蛋白，它的重新暴露有利于精子膜在受精过程中与透明带的相互作用。
男性免疫性不育症的中西医结合治疗研究进展
男性免疫性不育症的中西医结合治疗研究进展（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【关键词】男性免疫性不育症；中西医结合治疗；抗精子抗体男性免疫性不育是指结婚１年以上的夫妻，有正常性生活且未采用避孕措施，女方生育能力正常，男方性功能正常，由于血清或精浆中抗原抗体阳性而致不育者。
根据大量临床观察，逐步发现男性自身的免疫反应与其生育能力密切相关［１］，抗精子抗体是免疫性不育的重要原因之一［２］，据ＷＨＯ报道，体内存在抗原抗体而致不育患者占总不育的２０％～３０％［３］。
随着生殖医学的研究发展，男性免疫性不育越来越受到人们的重视。
国内近年开展了西医现代技术诊治和中医辨证结合治疗免疫性不育的探索，取得了可喜的成果，现综述如下。
１病因探析１．１中医病因病机徐福松等［４］认为该病的病位在肝肾，次在脾肺，本为肾虚，标为湿热和瘀血。
田秉星等［５］认为，本病多为湿热蕴结下焦而致不育。
陈金荣等［６］则认为，本病病因多由损伤、感染、炎症等湿热瘀毒病邪致使气血虚损、精血亏虚；或气滞血瘀痰凝；或湿毒内蕴；或上述诸多因素互为因果导致不育。
闫乐法等［７］结合ＡｓＡｂ产生的机制认为，①兼有肾虚精亏者，多属免疫功能低下，ＳＰＩＭ降低。
②兼有瘀象者多因精道阻塞或精索静脉曲张。
③湿热蓄积多有慢性炎症。
④肝肾阴虚，阳亢化火者多伴体液反应亢进。
⑤ＡｓＡｂ的形成与细胞免疫功能低下有关，其精子成活率、活动力低下，属于脾虚气弱。
１．２精子抗原抗体（ＡｓＡｂ）的产生机制１．２．１精子抗原近几年来，许多与受精和早期胚胎发育有关的精子抗原倍受关注［８］，其中包括：①精子膜表面抗原：该研究已进入分子水平。
其中ＦＡ－１是一种精子膜抗原，可诱导体液免疫和细胞免疫，由此损伤精子和胚胎。
另外发现，抗ＦＡ－１抗体可抑制人精子与去透明带的卵的融合，并抑制人精子的顶体反应及精子获能［９］。
②精子胞浆中的抗原：精子头部胞浆中还有精蛋白、乳酸脱氢酶等，精子破坏时可以暴露胞浆抗原。
抗原抗体快速筛选解决方案
低消耗 高通量 高效率
8×8微透镜/孔 96孔/板
＜传统检测时间/30
＜传统试剂消耗/40
低成本
目录
实施例
6
1 抗体筛选技术原理
应用领域
5
2 方案概述
高通用配套仪器
4
3 技术平台优势
抗体筛选技术原理
微透镜阵列化学发光法
集成技术
国盛快速抗体筛选解决方案低消耗低消耗高效率高效率传统检测时间30传统检测时间30高通量高通量88微透镜孔96孔板88微透镜孔96孔板传统试剂消耗40传统试剂消耗40低成本低成本wwwgsbiocn目录抗体筛选技术原理方案概述技术平台优势高通用配套仪器应用领域实施例wwwgsbiocnwwwgsbiocn抗体筛选技术原理灵敏度高微透镜技术高通量微量化微阵列技术灵敏度高精确度高检测范围宽化学发光技术信号收集率高可操作性强兼容性好自动化程度高可拆96微孔板集成技术使用方式微透镜阵列化学发光法微透镜阵列化学发光法wwwgsbiocn方案概述通过模式识别点样系统将微量生物样品分配至微孔板内8x8微透镜阵列表面
技术平台优势-快
快
检测时间（T<T传统/30）
国 盛 方 案
传 统 技 术
1
30
技术平台优势-好
好
高灵敏度&自主改性工艺
基于近场光学原理设计的微米级微透镜，可将靠近透镜顶部的光学信号增强几 十倍到达CCD检测面。
自主开发的表面改性工艺
在特种高透光基质上通过专有表 面改性工艺，可实现蛋白在其表 面形成稳定的化学键结合，保证 了抗体筛选时的高特异性结合。
96孔可拆卸微孔板
①
单孔-8*8微透镜
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改变精子功能，因为同源性抗原不涉及生育的过程， 抗体也不结合在抗原表位上旧Ｊ。现就筛选精子抗原
研究发现，用受精抗原ｌ（ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ－１， ＦＡ．１）单有交叉位点。但在原有数据库并没有发现ＦＡ—ｌ序
１抗体鉴定精子抗原
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔａｓ ｆｅｍｉｎｉｓ；Ｓｐｅｒｍ；Ａｎｔｉ－ｓｐｅｒｍ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ；Ａｎｔｉｇｅｎ
范围是４．７～５．９和７．Ｏ一 １０．３。人的ＡＳＡｂ等电点范 围是５．０～６．０，与ｐ１８结合 位点比较少。荧光免疫研究 发现，这些肽出现在精子的
头部，抗ｐ３６的抗体结合在 卵细胞的透明带上。抗ｐ１８ 抗体诱导精子穿透卵母细 胞，但不能影响与精子结 合№］。单克隆抗体也可以 用来鉴定、分离和表达精子
反应本质的详细了解有助于发展避孕疫苗。
关键词：不孕症；精子；抗精子抗体；抗原
Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆＳｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆＳｐｅｒｍＡｎｔｉｇｅｎ ＺＨＵＹａｎ－ｆｅｉ，ＳＵＮ胁，ｌｇ，ＳＯＮＧＢａｏ—ｈｕｉ，ＴＡＮＧＸｉａｏ－ｙｕｎ， ＺＨＡＮＧ Ｈｏｎｇ－ｊｕｎ。ＺＨＡＮＧ Ｘｉａｏ·ｌｉ．（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＰａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｍｕｄａｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌ拓ｇｅ，Ｍｕｄａｎ－ 批，ｌｇ １５７０１ｌ。蕊ｉｎｌｚ）
疫印迹法［５】。研究发现怕Ｊ，有两条蛋白质带，其相对 子的研究发现，这种抗原位于哺乳动物精子顶体区
分子质量分别为３６×１０３和１８×１０３，可用在动物身 域的表面。用单克隆Ｂｓ一１７抗体与人类睾丸的
上作生物化学的鉴定和生产单克，ｐ３６的等电点范围是４．５—８．３，ｐ１８等电点 ｃＤＮＡ片段，包括７５８ ｂｐ的序列，开放阅读框架是
不孕症在生育期夫妇中发生率是２０％，其中多 数人（男性或者女陛）在血液中或者生殖道分泌物内
抗原的特征［＿７’８１。直接鉴定精子特异性抗原的另ｒｍ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ＡＳＡｂ）。ＡＳＡｂ 可以影响精子凝集或者精子固化以及精子一卵细胞的
列或是与它相关的氨基酸序列，推断它是一种新的
很多方法可以用来鉴定ＡＳＡｂ的同种抗原。在 蛋白质Ｈ ０Ｉ。用大鼠的重组ＦＡ．１对雌性大鼠进行免
体内精子致敏的男性和女性患者中抗体可以分泌进 入体液中，利用精子抗原的提取物进行免疫印迹和 免疫共沉淀研究【４Ｊ，发现相关精子抗原的分子质量
疫接种，能明显降低其生育能力，当抗体滴度降低到 正常水平以下时情况则相反，大鼠的抗重组ＦＡ－１抗 体阻止大鼠精子与透明带结合。抗重组ＦＡ－ｌ抗体
万方数据
堕堂绽述垫！Ｑ生！旦筮！§鲞筮！堡翅丛！ｉｉ！生坠！箜ｉ塑！！丝：型垫！！：坠！：！垒：№：！璺
·２１１９·
５５８ ｂｐ，编码的多聚肽含有１８６个氨基酸残基，与钙 蛋白酶抑素有高度的同源性¨３Ｊ。对人类睾丸进行原 位杂交研究，表明钙蛋白酶抑素ｍＲＮＡＤ的转录是只 发生在精子细胞ｕ引。抑制钙蛋白酶抑素可以引起过 早的顶体反应发生【１５１。ＢＳ．１７抗原的多克隆抗体抑 制精子穿透大鼠卵母细胞的透明带，抑制受精过程。 钙蛋白酶能在精子到达卵子之前激发精子顶体反 应，降低精子的生育能力。另一项研｝，得到ＨＥＤ－２的ｃＤＮＡ序列，编码的多肽包 含４９３的氨基酸，与斑联蛋白和黏附分子有９９％的 同源性序列，参与细胞问营养物质的交换与运 输１１｜７Ａｓ）。用人类精子抗原免疫大鼠获得多克隆血 浆，在十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳后，从聚 丙烯酰胺凝胶电泳提取并筛选，这种蛋白质的ｅＤＮＡ序列和氨基酸序列在数据 库中不存在，用ＲＮＡ印迹杂交技术对大鼠的组织分 析，揭示这种蛋白仅在睾丸组织中表达，ＮＺ一１也许是 新型的精子特异性抗原。
万方数据
·２１２０·
医堂绽述垫！Ｑ生！旦箜！！鲞筮！兰翅丛！ｉ堡型曼！！璺巳ｉ堕！坐：』坠！垫！Ｑ：！尘：！鱼：盟！：！堡
鉴定出一种新的附睾特异性糖蛋白Ｅ－３旧１。Ｅ－３抗
原出现在附睾而不是睾丸等其他组织，间接免疫荧
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ａｐｐｅａｒａｎｃｅ ｏｆ ａｎｔｉ－ｓｐｅｒｍ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｍａｙ ｂｅ ｏｎｅ ｃａｕｓｅ ０ｆ ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔａｓ ｆｅｍｉｎｉｓ．Ｓｔｕｄｙｉｎｇ ａ— ｂｏｕｔ ｓｐｅｒｍ ａｎｔｉｇｅｎ ｗｈｉｃｈ Ｃａｌｌ ｉｎｄｕｃｅ ａｎｔｉ—ｓｐｅｒｍ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｈａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｇｒａｄｕａｌｌｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｓｐｅｒｍ ａｎｔｉｇｅｎ Ｃａｌｌ ｂｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ｃｏｎｔｒａｃｅｐｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐａｓｔ ｆｅｗ ｙｅａｒｓ．Ｒｅｃｅｎｔｌｙ，ｓｏｍｅ ｓｐｅｒｍ ａｕｔｏａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ａｌｌｏａｎｔｉｇｅｎ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｆｏｕｎｄ．ｂｕｔ ｔＩＩｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎ ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔａｓ ｆｅｍｉｎｉｓ ａｒｅ ｎｏｔ ｃ日ｔｉｆｉｅｄ．Ｔｏ ｌｅａｒｎ ｍｏｒｅ ａｂｏｕｔ ｔｈｅ ｓｐｅｒｍ ａｎｔｉｇｅｎ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｗｉｌｔ ｈｅｌｐ ｔｏ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｃｏｎｔｒａｃｅｐｔｉｖｅ ｖａｃｃｉｎｅ．
外，从循环系统中ＡＳＡｂ确定的主要抗原与通过精子 种新蛋白，人类重组ＦＡ一１的抗体通过阻止ＦＡ—ｌ酪
结合抗体识别的抗原是不同的。既然抗体与精子表 氨酸残基发生磷酸化，影响精子获能和顶体反应¨１‘。
面结合是独立的，就可以用特殊抗体鉴定这些不孕
从ＡＳＡｂ阳性的不孕症女性患者血浆样品中发
症患者体内的精子抗原，这种方法称为化学发光免 现一种Ｂｓ－１７抗原ｕ川。用免疫荧光法对人、大鼠、兔
文章编号：１００６－２０８４（２０１０）１４－２１１８－０３
摘要：抗精子抗体的产生可能是引起不孕症的原因之一。近年来，对诱导抗精子抗体产生的精
子抗原的研究逐渐深入，发现利用精子抗原的免疫原性可以达到免疫法避孕的目的。最近新发现了
一些精子自身抗原和同种抗原。但是有些抗原在不孕症中的作用还没有得到证实。对精子抗原免疫
合阳］。这种方法的优势是能直接证实与组织特异性 相关的ｃＤＮＡ片段。尽管这种方法在精子质膜发生
相互作用，并且能抑制受精后期受精卵的发育“’２ Ｊ。 变化时，使用受限，但其仍可鉴定一些新出现的精子
虽然，ＡＳＡｂ是造成不孕症的原因之一，但是ＡＳＡｂ对 抗原。
人体其他组织并没有害处ＡＳＡｂ阳性的个体 与相对分子质量大约是４７×１０３的蛋白质带发生特
人群的不同而出现矛盾。免疫法显示的分子质量对 异性反应，该蛋白质恰好是睾丸的提取物。这些发
于研究抗原序列特征是不够的，还应该研究分子结 现使ＦＡ一１抗原成为研究免疫避孕的理想对象。人
构、组织特异性和对致敏区域序列的克隆测定。此 类与大鼠ＦＡ．１同源的ｃＤＮＡ序列已经明确，它是一
一些研究者认为，用双向电泳分析复杂的多肽 混合物是目前最权威的、最可信赖的方法ｍ］。如 Ｎａａｂｙ—Ｈａｎｓｅｎ等旧。的研究，获得１３７９银染蛋白质的 所有组分，形成电子数据，对相对分子质量、等电点 和位点的形状等特征进行描述，收编成目录。其中 有一些方法是筛选精浆中的精子抗体。从悬浮液中 提取入的精子蛋白用等电聚焦分离，接着采用十二 烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳转移到纤维素膜 上，对精子免疫结合阳性或免疫结合阴性的样本作 免疫印迹，寻找发生明显免疫反应的精子抗原及其 相对分子质量和等电点等。Ｓｈｅｔｔｙ等Ⅲ１的研究也在 等电聚焦或不平衡的ｐＨ（梯度）凝胶电泳基础上用 双向电泳分离人的精子蛋自，接着用聚丙烯酰胺凝 胶电泳法，选择发生免疫结合反应超过６０％的不孕 症患者的精浆进一步研究。在研究中选择与不孕症 最相关的６种自身同种抗原。这些抗原与用来鉴别 ＳＩ阳性血浆的抗原不同，可能因为通过免疫实验检 测到的ＡＳＡｂ与不孕症没有关系或者是与ＳＩ—ＡＳＡｂ 不同。Ｓｈｅｔｔｙ等Ⅲ１认为，与ＳＩ抗原对应精子表面抗 原是研究免疫性疫苗的理想靶点，但是代表精子表 面抗原的检测位点在免疫性实验之前应该测序，克 隆它们的同源ｅＤＮＡ和确定其组织特异性。
用ＹＬＰｌ２与霍乱的重组体制备疫苗，研究其对 生育率的影响。在研究中分别用肌内注射和鼻部吸 人的方式免疫雌性大鼠引起总体生育率分别下降 ７０．３％和６１．４％。致敏动物的生育能力可以通过主 动方式（阴道内给药ＹＬＰｌ２）和被动方式（在血浆中 自然降低抗体浓度）而恢复。免疫印迹揭示，由疫苗
产生的抗体是有组织特异性的，在睾丸提取物中发 现它的特异性结合蛋白的相对分子质量为７２×１０３， 在精子的提取物中的蛋白质大小大约是５０×１０３，其 他组织中没有发现结合蛋白，因此认为ＹＬＰｌ２序列 是相对分子质量为７２×１０３蛋白质的一部分［２１Ｊ。总 之，ＹＬＰｌ２具有诱导精子特异性反应的能力，达到长 期可逆的避孕效果，并可以恢复重新生育。由于它 的众多优点使其成为免疫避孕的热门候选对象。 ３双向电泳法
最近发现一种新型的人精子顶体膜相关蛋白 （ｓｐｅｒｍ ａｃｒｏｓｏｍａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ， ＳＡＭＰ３２）。用质谱法对几组疏水精子蛋白进行微序 列测定有４个位点享有同样的肽序列，克隆相应的 ｅＤＮＡ发现，它们是同一种基因的产物，位于人类的 第６号染色体㈤Ｊ。进一步研究发现ⅢＪ，ＳＡＭＰ３２表 达有睾丸特异性，精子形成高尔基体时与顶体形成 时表达，理论上它位于成熟精子顶体内膜和精子顶 体的赤道段。在顶体形成前ＳＡＭＰ３２不表达，人体中 ＳＡＭＰ３２是同种抗原旧¨。与免疫前血清相比， ＳＡＭＰ３２抗体明显抑制大鼠获能的精子与卵细胞结 合和融合。男性不孕症患者ＡＳＡｂ阳性的血浆对 ＳＡＭＰ３２发生强烈免疫反应，猜测它可能是与免疫性 不孕相关的抗原，活体研究证实，它在精子与卵膜融 合、精子内化过程中发生作用Ⅲ１。最近，从大鼠身上
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筛选精子抗原的研究进展
朱雁飞，孙 明，宋宝辉，唐小云（综述），张红军，张晓莉※（审校）