【精华】华西-新药药理学实验设计文稿
新药临床试验方案设计
在优效性检验中，一般以ITT集是主要分析集。 在非劣效研究中，PP集可能产生偏倚。 ITT与PP结论一致时，结果更好。
受试者重复入组问题
同一病人先后两次入组，间隔时间大于方案 规定的不宜参加临床试验的时间，尽管不违 反方案，可不可入组。
（绝对药效），因此存在缺陷。 既能分析量效关系，又有阳性对照和安慰剂对照是
理想的设计，但需要足够例数，有时难以实施。
阳性对照药选择原则
阳性药的选择原则应是“公认有效，类同可比” “类同可比”较“同类可比”更有可操作性，尤其
是中药临床试验。 公认有效应指公认有效的药物、公认有效的剂量、
公认有效的疗程。 公认有效的剂量是指在关因素
职业与药物耐受性相关，体力劳动者耐受性 好
职业不宜过多划分，不要重叠 男性耐受性常比女性好 病重者耐受性比病轻者好 儿童较复杂
保守估计原则
新药结论强调有较高把握，常作保守估计。 疗效性分析，有效和无效难以确定时，以无
效统计 安全性分析，可疑的不良事件，可算作不良
探索性试验
试验目的很重要，如写成探索性研究，可增加试验 的灵活性，探索内容包括：有效性、安全性、剂量 大小、疗程长短、适应症。
II期常作探索性试验，如III期的低剂量已知为有效剂 量，也可作进一步剂量探索，因例数多，有优势。
可变剂量设计在探索性试验中具有重要意义。虽然 ICH E9未提及，但ICH的其他章节，多次提到可变 剂量设计，不完全等同于“平行组设计” ，如多处 提及forced titration, optional titration。
反应
两种类型的三组平行设计
三组平行，一个对照，两个试验药，属高效 设计。
药理学实验的设计原则是什么？
药理学实验的设计原则是什么？一、实验设计的基本原则药理学研究的目的是通过动物实验来认识药物作用的特点和规律,为开发新药和评价药物提供科学依据.由于生物学研究普遍存在的个体差异,要取得精确可靠的实验结论必须进行科学的实验设计,因此必须遵循以下基本原则.1、重复:“重复”包括两方面的内容,即良好的重复稳定性(或称重现性)和足够的重复数,两者含意不同又紧密联系.有了足够的重复数才会取得较高的重现性,为了得到统计学所要求的重现性,必须选择相应的适当的重复数.统计学中的显著性检验规定的P0.05及P0.01反映了重现性的高低;“P”表示不能重现的概率.在已达到良好的重现性的条件下,如果P值相同,重复数越多的实验,其价值越小.它说明实验误差波动太大,或是两药的均数相差太小.前者提示实验方法应予改进,后者提示两药药效的差别没有临床意义.可见,靠增加实验例数来提高重现性是有一定限度的.1.1实验重复数的质量除了重复数的数量问题外,还应重视重复数的质量问题.要尽量采用精密、准确的实验方法,以减少实验误差.同时应保证每次重复都是在同等情况下进行.即实验时间、地点、条件,动物品系、批次,药品厂商、批号,临床病情的构成比或动物病理模型的轻重分布应当相同.质量不高的重复,不仅浪费人力和物力,有时还会导致错误的结论.1.2药理实验设计中的例数问题实验结论的重现性与可靠性同实验例数有关,实验质量越高、误差越小,所需例数越少,但最少也不能少于“基本例数”.实验动物的基本例数(1)小动物(小鼠、大鼠、鱼、蛙):计量资料每组10例,计数资料每组30例.(2)中动物(兔、豚鼠):计量资料每组6例,计数资料每组20例.(3)大动物(犬、猫、猴、羊):计量计数资料每组5例,计数资料每组10例.2、随机:“随机”指每个实验对象在接受处理(用药、化验、分组、抽样等等)时,都有相等的机会,随机遇而定.随机可减轻主观因素的干扰,减少或避免偏性误差,是实验设计中的重要原则之一.随机抽样的方案有以下几种:2.1单纯随机所有个体(病人或动物)完全按随机原则(随机数字表或抽签)抽样分配.本法虽然做到绝对随机,但在例数不多时,往往难以保证各组中性别、年龄、病情轻重等的构成比基本一致,在药理实验中较少应用.2.2均衡随机又称分层随机.首先将易于控制且对实验影响较大的因素作为分层指标,人为地使各组在这些指标上达到均衡一致.再按随机原则将各个体分配到各组.使各组在性别、年龄、病情轻重等的构成比上基本一致.该法在药理学实验中常用,如先将同一批次动物(种属、年龄相同)按性别分为2大组,雌雄动物总数应当相同(雌雄各半).每大组动物再分别按体重分笼,先从体重轻的笼中逐一抓取动物,按循环分组发分别放入各组的笼中,待该体重动物分配完毕后,从体重次轻的笼中继续抓取动物分组,……直至体重最重的笼中动物分配完毕.2.3均衡顺序随机该法主要用于临床或动物病理模型的抽样分组.即对病情、性别、年龄等重要因素进行均衡处理,其他次要因素则仅作记录,不作分组依据.先根据主要因素画一个分层表,然后根据病人就诊顺序依次按均衡的层次交替进行分组.例如准备将病情及性别加以均衡的临床试验分组情况见下表(病人总数22人),最后分组结果达到在病情及性别基本均衡.均衡顺序随机分组表Balanceorderingrandomgrouping均衡层次开始组别按就诊顺序分层交替分为A,B组共计Total BalancedegreeGroupNo.1Groupedalternatelyasclinicalorderingt oAandBAB病重男(M)A1A,2B,3A,4B,5A,6B,11A,13B44Bad女(F)B7B,15A,16B,17A,18B23病轻男(M)B8B,9A,10B,19A,20B,22A33Mild女(F)A12A,14B,21A213、对照:“对照”是比较的基础,没有对照就没有比较,没有鉴别.对照组的类型很多,将在后面加以介绍.对照应符合“齐同可比”的原则,除了要研究的因素(如用药)外,对照组的其他一切条件应与给药组完全相同,才具有可比性.3.1分组的类型3.1.1阴性对照组即不含研究中处理因素(用药)的对照,应产生阴性结果.(1)空白对照:不给任何处理的对照,多用于给药前后对比,两组对比时较为少用.(2)假处理对照:经过除用药外的其它一切相同处理(麻醉、注射、手术等),所用注射液体在pH、渗透压、溶媒等均与用药组相同,可比性好,两组对比时常用.(3)安慰剂对照:用于临床研究,采用外形、气味相同,但不含主药(改用乳糖或淀粉)的制剂作对照组药物,以排除病人的心理因素的影响.3.1.2阳性对照组:采用已肯定疗效的药物作为对照,应产生阳性结果.如果没有阳性结果出现,说明实验方法有待改进.(1)标准品对照:采用标准药物或典型药物作为对照,以提供对比标准,便于评定药物效价.(2)弱阳性对照:采用疗效不够理想的传统疗法或老药作为对照,可代替安慰剂使用.3.1.3实验用药组(1)不同剂量:可阐明量－效关系,证明疗效确由药物引起;还可避免因剂量选择不当而错误淘汰有价值的新药.一般采用3～5个剂量组,离体平滑肌实验组间剂量比为10,整体脏器活动为3.16或2,整体效应为1.78或1.41.(2)不同制剂:将提取的各种有效组分、不同提取部分或不同方式提取的产物,同时进行药效对比,以了解哪种最为有效.(3)不同组合:用于分析药物间的相互作用,多采用正交设计法安排组合方式.3.2对比的性质3.2.1自身对比:又称同体对比、前后对比,为同一个体用药前后、或身体左右侧用药的对比.可大幅度较少个体差异,但要注意前后两次机体状况是否有自然变异.3.2.2配对对比:采用同种、同窝、同性别、同体重的动物,一一配对.可减实验误差,提高实验效率,但要注意不可滥用.3.2.3组间对比:药理实验中应用最广的对比.注意非用药因素要尽可能一致,以减少误差.下面几种对比是对比的特殊情况.3.2.4交叉对比:同一个体前后两次分别接受甲乙两药治疗.一组动物先用甲药,后用乙药,另一组动物先用乙药,后用甲药.两次用药期间可根据实验性质休息一定时间,以避免前药对后药的影响.动物实验或临床研究中均可应用,主要适用于病程较长的疾病或病理模型.3.2.5历史对比:利用个人既往经验、过去的病历记录或历史文献资料作为对比.可比性差,除癌症、狂犬病等难治疾病外,最好不用. 3.2.6双盲对比:主要用于临床研究,可减少医师和病人两方面的心理因素影响.实验中病人和观察病情的医师都不知道谁是用药组,谁是对照组.只有主持研究者保留名单,以决定具体治疗措施和分析实验结果.为新药临床研究中必不可少的方法之一.二、药理实验设计中的剂量问题1、安全剂量的探索:首先用小鼠作急性毒性实验,求出最大耐受量(或LD1).然后按等效剂量的直接折算法计算出实验中所用动物的最大耐受量;取其1/3－1/5作为较安全的试用量.2、剂量递增方案:对于非致死性毒性反应较明显的药物,可先采用较小的剂量(例如LD1的1/50)作预试,以策安全.试用后如未出现药效,也无任何不良反应,可将药物剂量递增.每次增幅由100％递减至30％左右,直至出现明显药效或产生明显不良反应.具体方案见下表:剂量递增表:TheIncreasingofdosage实验次数(ExperimentNo)123456789101112剂量倍数(DosageTimes)123.35791216212838503、不同种属动物间的剂量换算:对于文献中有在其它种属动物使用剂量的药物,可通过剂量换算过渡到实验需用动物上来.以往常用的标准动物的等效剂量折算系数法,简便适用,但不宜用于体重不标准的动物.不同种属标准体重动物整体(只)剂量折算倍数KTimes(K)ofDosageConversionBetweenVariousStandardWeightAnima ls动物种属小鼠大鼠豚鼠兔猫猴犬人Animalsortsmouseratcavyrabbitcatmonkeydoghuman小鼠mouse(20g)17.012.2527.829.764.0124388大鼠rat(200g)0.1411.743.94.29.217.856.0豚鼠cavy(400g)0.080.5712.252.45.29.231.5兔rabbit(1.5kg)0.040.250.4411.082.44.514.2猫cat(2.0kg)0.030.230.410.9212.24.113.0猴monkey(4.0kg)0.0160.110.190.420.4511.96.1犬dog(12kg)0.0080.060.100.220.230.5213.1人human(70kg)0.00250.0180.0310.070.0780.160.321整体动物剂量(Dosageofawholeanimal):DB＝DA×KB/KA现介绍一种对任何体重动物都适用的“等效剂量直接折算法”:后面的表列出了不同动物的公斤体重剂量折算的有关系数和标准体重整体剂量折算倍数,供计算时使用.不同种属动物单位体重(kg)剂量折算系数动物种属小鼠大鼠豚鼠兔猫猴犬人剂量折算系数K10.710.620.370.300.320.210.11动物体型系数R0.0590.090.0990.0930.0820.1110.1040.1标准体重(kg)0.020.20.41.5241270标准体重动物:DB＝DA×KB/KA非标准体重动物:DB＝DA×RB/RA×(WA/WB)1/3三、药理实验设计中的预试问题在正式实验前应充分重视预实验的重要性,它可大大提高实验的效率,避免盲目性.通过预试应建立并改进实验方法、选择最佳实验对象、条件及指标.通过预试应对于干扰实验的因素有明确的了解.通过预试应尽可能提高实验的稳定性和灵敏性.1、实验的稳定性及其选择实验稳定性通常可用同一样本重复实验结果的变异系数CV表示:CV＝SD/X实验变异系数小于0.05表示稳定性好,大于0.2则表示波动太大,需改进实验方法.药理实验中可利用CV的测定选择适当的动物模型. 2、实验的灵敏性及其选择用药剂量稍有变化,反应强度即出现明显差异,说明灵敏度较高.灵敏度可用因变系数C.C.表示:C.C.＝|(R1－R2)/(logD1－logD2)|式中R1、R2为反应强度,D1、D2为相应的药物剂量.药理实验中可利用CV和C.C.的测定选择最佳的实验动物、实验脏器或实验条件.3、预试的任务及预试结果的意义预试中应有计划地查明与保证正式实验成功有关的各种重要信息,如:动物品种、脏器类型、实验条件、实验方法、药物用量、观察指标等等.用于预试所得数据是在逐步改进的过程中陆续收集的,时间差异较大,一般不宜将预试结果并入正式实验结果.通过预备实验,可拟出实验记录的内容,以保证正式实验能有条理、按顺序进行,不致遗漏重要的观察项目,便于对结果进行统计分析.实验记录一般包括以下内容(1)实验标本的条件:如动物的种类、来源、体重、性别、编号等.(2)实验药物的情况:如药物的来源、批号、剂型、浓度、剂量及给药途径等.(3)实验的环境条件:如实验日期、时间、温度、湿度等.(4)实验进度、步骤及方法的详细记录.(5)观察指标的变化情况:包括原始记录和相关描记图纸或照片.(6)资料整理、数据统计分析及其结果.(7)实验中存在的问题、改进措施,需要进一步探讨的问题.每次实验都必须随时记录,每一阶段结束时,都要对及时进行分析结果、整理数据,并画出必要的统计图表,作出结论,写出报告.。
新药实验设计
新药实验设计——对某新药抗癫痫的作用的大鼠药效学研究高青胡志强刘晓凤安莲莲杨怡君摘要目的：对比已知疗效的抗癫痫药物，明确新药抗癫痫发作的类型、效果和剂量。
关键词：抗癫痫药效学急性毒性实验LD50 量效关系背景知识我国目前有癫痫患者将近900 万人。
癫痫是一类慢性、反复性、突然发作性大脑功能失调，其特征为脑神经元突发性异常高频率放电并向周围扩散。
由于异常放电神经元所在部分（病灶）和扩散范围不同，临床就表现为不同的运动、感觉、意识和植物神经功能紊乱的症状。
1981年国际抗癫痫联盟根据临床和脑电波特点制定了癫痫发作的分类，沿用至今。
该分类将癫痫发作分为部分性发作、全面性发作、不能分类的癫痫发作三类。
癫痫的发病机制非常复杂，迄今尚未完全阐明。
部分性发作分为单纯部分性发作和复杂部分性发作。
单纯部分性发作多为症状性癫痫，脑器质性损害较为常见，发作时程较短，无意识障碍。
复杂部分性发作占成人癫痫发作50％以上，是由颞叶结构异常放电所致，海马和杏仁核在癫痫的发生、发展中起重要作用。
全面性发作的特征是发作时伴有意识障碍或以意识障碍为首发症状。
大部分全面性发作与遗传关系密切，至今已知150种以上少见的基因缺陷综合征是以癫痫大发作或肌痉挛发作为临床表现的。
癫痫发作不仅会对大脑造成不同程度的损伤，对患者的生活质量也会造成非常严重的影响。
因此，在我国，治疗癫痫病具有非常重要的意义。
前言本实验研究针对癫痫的部分性发作和全面性发作，采用了两种模型。
对于部分性发作，采用海仁酸建立颞叶癫痫模型，，并采用苯妥英钠做阳性对照药物。
对于全面性发作，采用从日本引进的具有遗传性癫痫小发作的震颤大鼠作为实验模型,观察新药对震颤大鼠癫痫小发作的影响。
同时通过向SER大鼠头面部吹风刺激产生强直抽搐发作,观察新药对SER大鼠癫痫大发作的影响,并采用丙戊酸钠做阳性对照药物。
从而对已经发现证实有抗癫痫作用的新药进行药效学实验。
本实验涉及三种观测指标。
癫痫发作时大脑异常放电，所以用脑电波观测癫痫发作是最常见的办法。
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⑴ 随机性：两组病人的分配均匀，不 随主观意志为转移。
⑵ 合理性：既要符合专业要求与统计 学要求，又要切实可行。
⑶ 代表性：受试对象的确定应符合样 本抽样符合总体的原则。
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在一种新药或药品新用途的 临床试验中，如治疗剂量尚未确 定时，所有的有害而非期望的、 与药品应用有因果关系的反应， 也应视为药品不良反应。
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⑵ 不良事件（adverse event）： 病人或临床试验受试者接受一种药 品后出现的不良医学事件，但并不 一定与治疗有因果关系。
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⑶ 严重不良事件 （serious adverse event）： 临床试验过程中发生需住院治疗、 延长住院时间、伤残、影响工作能 力、危及生命或死亡、导致先天畸 形等不良事件。
生物制品 注册分类1-12的新生物制品
其它注册分类的新药需要进行的随机对照临床 试验参照Ⅱ期临床试验的要求实施
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IV期临床试验
为新药上市后的监测，在广 泛使用条件下进一步考察新药的 疗效和不良反应（尤其注意罕见 的不良反应）。
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临床研究要求Principle Require
⒈获得国家食品药品监督管理（SFDA) 局批准
⑷ 重复性：经得起重复验证。排除系 统误差。
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⒌ 对照试验
⑴ 平行对照试验： 随机分组对照试验，最常用的是试 验药A与对照药B（或安慰剂）进行 随机对照比较。
⑵ 交叉对照试验： 拉丁方设计（latin square design）。
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⒍ 设盲（blinding／masking）： 使一方或多方不知道受试者治疗
药理学实验指导
药理学实验指导2实验报告的写作2.1实验题⽬实验题⽬⼀般应包括实验药物、实验动物、实验主要内容等。
如“⼼得安对⿇醉⽝的降压作⽤分析”，“普鲁卡因肌注对⼩⿏局⿇作⽤及中毒抢救”，“奎尼丁抗电诱发的蛙⼼⼼律失常的作⽤”等。
2.2实验⽬的2.3实验⽅法2.4实验结果实验结果是实验报告中最重要的部分，需绝对保证其真实性。
应随时将实验中观察到的现象在草稿本上记录，实验告⼀段落后⽴即进⾏整理，不可单凭记忆或搁置了长时间后再作整理，否则易致遗漏或差错。
实验报告上⼀般只列经过归纳、整理的结果。
但原始记录应予保存备查。
2.5讨论讨论应针对实验中所观察到的现象与结果，联系课堂讲授的理论知识，进⾏分析和讨论。
不能离开实验结果去空谈理论。
要判断实验结果是否为预期的。
如果属于⾮预期的，则应该分析其可能原因。
讨论的描述⼀般是：⾸先描述在实验中所观察到的现象，然后对此现象提出⾃⼰的看法或推论，最后参照教科书和⽂献资料对出现这些现象的机制进⾏分析，如实验观察到⽤药后动物出现了什么现象，提⽰了该药可能具有什么药理作⽤，⽂献曾报道该药可对什么受体有作⽤。
因此，可初步推测该药的这种药理作⽤可能与其作⽤于什么受体有关。
2.6结论实验结论是从实验结果归纳出来的概括性判断，也就是对本实验所能说明的问题、验证的概念或理论的简要总结。
不必再在结论中重述具体结果。
未获证据的理论分析不能写⼊结论。
第⼆章药理学实验设计的基本知识⼀实验设计的基本原则药理学研究的⽬的是通过动物实验来认识药物作⽤的特点和规律，为开发新药和评价药物提供科学依据。
由于⽣物学研究普遍存在的个体差异，要取得精确可靠的实验结论必须进⾏科学的实验设计，因此必须遵循以下基本原则。
1 重复“重复”包括两⽅⾯的内容，即良好的重复稳定性（或称重现性）和⾜够的重复数，两者含意不同⼜紧密联系。
有了⾜够的重复数才会取得较⾼的重现性，为了得到统计学所要求的重现性，必须选择相应的适当的重复数。
统计学中的显著性检验规定的P<0.05及P<0.01反映了重现性的⾼低；“P”表⽰不能重现的概率。
转载药理学设计性实验项目设计书
转载药理学设计性实验项目设计书原文地址：药理学设计性实验项目设计书作者：阿锋药理学设计性实验项目设计书项目名称：芦荟对家兔血压的影响申请者：刘所在专业：临床本科所在班别：2100级临床本科1班联系电话：911电子信箱：***************申请日期：2008年11月3日一、立论依据国内外研究现状分析：关于它的心血管活性,仅有一些报道,但无系统研究。
作者研究了该植物多种提取物及成分的降压作用。
①图1我国芦荟研究文献的年限分布②图2我国芦荟研究在主要期刊中的分布②研究意义：现在已经知道的库拉索芦荟凝胶的提取物，当把它注射进人体血液中时，极大的增加了氧的运输能力和血红细胞的扩散能力。
③高血压属中医学眩晕、头痛等范畴.临床上一般将其分为肝火上炎、阴虚阳亢、阴阳两虚、痰湿中阻等证型。
芦荟味苦.性寒，有清热、凉肚、泻火功能.肝火上炎型高血压病人可多用之。
现代药理研究表明.芦荟虽不具有直接的降压作用.但它所含的主要成分可以扩张毛细血管.去掉血管壁沉积的胆固醇，软化血管.恢复血管的弹性.增强心血管功能，对预防高血压病情发展与并发症的发生，能收到良好的效果。
同时，芦荟的通便、利尿、解毒作用.可以促使体内污物和杂质的排出.净化血液，使血流畅通，有助于高血压的治疗。
对高血压兼有便秘者，芦荟尤为适宜。
④由于功效神奇、稳定，并具有广泛适应性，所以芦荟被国际上公认为最佳纯天然保健品。
在国家科委推动下，从1982年起国内许多部门、科研机关和企业(包括中外合资企业)纷纷投巨资对芦荟的种植加工进行研究开发，但由于其加工技术尤其是稳定技术相当复杂，所以一直未取得突破。
介绍了芦荟的生物学功效近几年的研究结果，主要功效包括：治愈炎症；提高免疫力；增强胃肠功能，治疗胃溃疡；治疗糖尿病；抗癌活性；抗微生物特性及治疗皮肤辐射伤，调节激素水平等。
还报道了芦荟对病患可能存在的过敏性反应。
⑥芦荟中的活性水和芦荟素能促进血液循环，提高心脏机能，芦荟中的大量多糖体成分还可通过促进细胞再生来软化血管，增强血管功能以达到稳定地降低血压的目的。
新药临床试验方案设计
解放军总医院军医进修学院 医学统计教研室 姚晨
郑筱萸主编 《化学药品和治疗用生物制品研究指导原则》
（试行） 北京.中国医药科技出版社 2002.5 第一版.
“化学药品和生物制品临床试验的生物统计学 指导原则” （P85-P97）
一、前言
1. 新药临床试验必须遵守《中华人民共和国药品管理 法》、《药品注册管理办法》、《药品质量临床试 验管理规范》（GCP）、 《药品临床研究的若干规
观察指标----全局评价变量
将客观指标和研究者对病人的病情及其改变总的印象综 合起来所设定的指标称为全局评价变量(global assessment variable)，它通常是有序分类指标。全局评价变量在最后判 定(如分属不同等级)时往往含有一定的主观成份。如必须通 过全局评价变量确认疗效或安全性时，在试验方案中一定要 明确规定判断等级的方法，并提供依据和理由。全局评价变 量中的客观指标一般应该同时单独作为主要变量进行分析。
随机数重新产生。申办者应根据生物统计学专业人员产生的随机
表对试验用药品进行编码，经过编码后的药品已达到了处理的随
机分配要求，研究者应严格按照试验用药品编号的先后顺序入组，
不得随意变动。否则会破坏随机化效果。
偏倚的控制------盲法（1）
盲法(blind method)是为了控制在临床试 验的过程中以及对结果进行解释时产生有意或 无意的偏倚，这些偏倚可能来自于对治疗的了 解而对筛选和安排受试者、照顾受试者、受试 者对治疗的态度、对终点(end point)的评价、 对脱落(drop out)的处理，在分析中剔除数据 等等的影响。
随机化(randomization)是使临床试验中的受试者 有同等的机会被分配到试验组或对照组中，而不受研 究者主观意愿的影响，可以使各处理组的各种影响因 素，不论是已知或未知的，分布趋于相似。随机化包 括分组随机和试验顺序随机，与盲法合用，随机化有 助于避免在受试者的选择和分组时因处理分配可预测 性而导致的可能偏倚。
干货 新药I期、II期、III期之临床试验设计路径讲解学习
干货新药I期、I I 期、I I I期之临床试验设计路径干货新药I期、II期、III期之临床试验设计路径新药临床试验设计路径：I期临床试验1背景知识临床试验，英文为clinical trial，而不是clinical experiment。
学药童鞋肯定或多或少做过各种实验，不管是化学实验、生物实验还是制剂实验、药理实验，用的都是“实验”二字。
所谓“实验”，《现代汉语词典》的定义是为了检验某种科学理论或假设而进行某种操作或从事某种活动；而“试验”是为了察看某事的结果或某物的性能而从事某种活动。
而临床试验正是为了考察新药对目标患者的效用而展开的一系列的试验，本系列文章就和大家讲讲新药的临床试验。
新药研发过程主要包括苗头分子的发现、细胞活性评价、非临床药理毒理研究、临床试验和上市后的安全性监督。
其中临床试验耗资/耗时基本占整个新药开发的60%~80%，可谓是新药开发最耗钱耗时的阶段。
FDA将临床研究分为三期，这三期临床研究通常按期依次实施，但也可以有重叠；另外针对新药批准上市后的临床研究，FDA定义其为IV期临床试验。
ICHE8根据临床研究的目的将临床试验同样分为4期。
2006年，FDA发布了《Guidance for industry， investigators and reviewers exploratory IND studies》，提出0期临床试验概念，其受试者更少(≤10例)，研究周期更短(≤7天)，用于探索新药在人体的药代动力学和药效学研究，为I期临床提供指导。
不管是0期临床试验概念，还是传统三分法临床试验，其分期的目的是基于风险控制的哲学观。
I 期临床通常采用少量(数十人)健康志愿者作为受试者，相较于采用较多患者作为受试者的II期以及更大样本量的III期临床试验而言，具有成本低(人少)，时间短(可供的健康受试者众多)和低风险(健康受试者身体抵抗力较强)等特点。
2I期临床试验全景2.1 是什么(Who)I期临床试验是在动物药理毒理试验基本成功的基础上，首次应用在人体上，用来初步评价新药的人体耐受性和药代动力学试验。
《药理学》实验教学大纲
广东医学院《药理学》实验教学大纲课程类别: 专业必修课适用专业: 药学开课单位: 药学院药理学教研室实验项目总数15 综合性、设计性实验项目数 5主讲教师: 吴铁、崔燎、鲁澄宇一、实验目的及要求（一）实验目的1. 使学生掌握药理学的常规研究方法与技术, 以及实验数据处理分析软件的应用, 使之具有从事新药开发、理论研究和临床药学服务等工作所必备的实验技能。
2. 与药理学基础理论课紧密结合, 使学生将理性知识与感性认识有机地结合, 将书本知识用于实验, 在实验中更深地理解基础理论, 提高学生的综合能力与创新意识。
3．通过学生自选自设自做实验设计性实验, 提高学生自己动脑思考问题和解决分析问题的能力。
（二）具体要求1.掌握药理学实验的基本方法和技能以及计算机辅助实验的应用; 掌握一般性药理学动物实验的给药方法,药物剂量的计算和实验样本的处理。
第一篇 2.学习和了解药物研究的基本思路,药物作用机制的探讨方法.通过自设性实验，培养学生严谨的科学研究作风,熟悉药理学实验设计、数据统计、论文撰写的基础知识，从而提高其科学思维能力及分析问题、解决问题的综合能力，同时培养学生的团队合作精神。
第二篇药理学实验基本知识第一章药理学实验须知了解药理学实验课的目的和要求。
掌握实验结果的整理和实验报告的撰写。
第二章药理学实验设计的基本知识熟悉实验设计的基本原则和药理实验设计中的预试问题; 掌握药理实验设计中的剂量问题。
第三章药理学实验的统计处理原则掌握计量资料和计数资料的统计分析。
熟悉药效和剂量依赖关系（相关性）的统计分析和两药药效的等效性分析。
第四章常用实验动物的基本操作掌握实验动物的选择及捉拿固定和给药方法。
熟悉实验动物的编号、麻醉和取血。
第五章药理学实验常用仪器操作技术了解各种仪器设备的性能、用途和使用方法。
第六章药典、药物剂型与处方学了解药典；熟悉药物的制剂及剂型, 掌握处方的结构与书写。
第二篇药理学总论实验第七章药动学实验磺胺嘧啶在体内的分布掌握测定药物分布的步骤、方法和临床意义。
新药Ⅱ、Ⅲ期临床试验的规范化设计讲义66页PPT
71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。——韩非
新药Ⅱ、Ⅲ期临床试验的规范化设计 讲义
46、法律有权打破平静。——马·格林 47、在一千磅法律里，没有一盎司仁 爱。— —英国
4ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ、法律一多，公正就少。——托·富 勒 49、犯罪总是以惩罚相补偿；只有处 罚才能 使犯罪 得到偿 还。— —达雷 尔
50、弱者比强者更能得到法律的保护 。—— 威·厄尔
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新药药理学——支气管哮喘病特效药研究方案及临床前筛选和实验方法概述四川大学华西药学院2012级 8班周鹏翔29一、研究背景概述1．选题及意义支气管哮喘是由多种细胞（如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等）和细胞组分参与气道慢性炎症性疾患。
这种慢性炎症导致气道高反应性的产生，通常出现广泛多变的可逆性气流受限，并引起反复发作的喘息、气急、胸闷或咳嗽等症状，常在夜间和（或）凌晨发作、多数患者可自行缓解或经治疗缓解[1]。
而有关支气管哮喘，众多细胞因子参与其发作，其中白介素23（IL23）水平和哮喘发作密切相关。
IL-23是2000年发现的细胞因子，具有多种生物学功能，并在多种疾病中发挥重要作用。
近年来，IL-23 在支气管哮喘中的作用得到了关注。
因此，以IL-23为作用靶点的药物可能对支气管哮喘产生积极的疗效。
2.作用因子及靶点IL-23由p19和IL-12中的p40 两个亚基组成，它们之间以二硫键相联结。
人和鼠的p19 相应蛋白质中均含有5个半胱氨酸残基，无N-糖基化位点，两者有70％同源，其蛋白质组成大部分与IL-12p35、IL-6和G-CSF相近，因而在小鼠体内的药理学实验结果对人有一定的借鉴意义。
IL-23的受体由IL-12R中的一个亚基IL-12Rβ1和IL-23R两个亚基组成。
人IL-23R的基因定位于人1号染色体距离IL-12Rβ2大约150 kb的地方。
人T细胞、自然杀伤细胞（NK）包括NK白血病细胞均可以表达IL-23R[2]。
因此，本“新药X”（下称X药）选择以肺组织细胞中IL-23R为作用靶点，特异性竞争性地抑制IL-23和其受体结合，减少其表达蛋白产物的生成，从而缓解支气管哮喘。
3．靶点选择的文献依据通过构建动物模型，分为正常组、哮喘组，应用ELISA 法检测两组小鼠外周血IL-23 水平、RT-PCR 法检测肺组织中IL-23p19mRNA 表达、免疫组化法检测肺组织中IL-23 表达;分离小鼠脾脏T淋巴细胞进行体外培养，应用RT-PCR 法检测小鼠脾脏T淋巴细胞IL-23p19mRNA 表达水平、Western blot检测IL-23p19蛋白表达情况[3]（图片以及表格数据均引用于该文章）。
结果表明哮喘小鼠中，IL-23 在血清、肺组织、脾脏T淋巴细胞中表达均较正常小鼠明显增高（P<0.01）。
另一篇文献也做了类似的研究，将45只雌性C57/6J小鼠随机分为哮喘组、肥胖哮喘组（肥哮组）和对照组各15只。
卵白蛋白激发致敏和高脂饮食制作肥胖哮喘模型，计[1]引自百度百科“支气管哮喘”词条[2]李艳春，鲁继荣.白介素-23的生物学功能.临床儿科杂志。
2010.3：295-299[3]李艳春，孙萌，赵丽娜，鲁继荣.白细胞介素23在哮喘小鼠动物模型中表达的研究.中国免疫学杂数支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数并分类，酶联免疫吸附法法测定肺组织匀浆中白细胞介素（IL）-17、IL-23和8-异前列腺素2α（8-iso-PGF2α）水平。
结果表明：肥哮组肺组织匀浆的IL-17、IL-23和8-iso-PGF2α水平分别为(65.83±5.69)pg/ml、(141.52±14.62)pg/ml和（61.33±7.75）pg/ml均高于哮喘组和对照组（P<0.05）[4]。
二、针对特定靶点离体筛选的方法X药拟特异性阻断肺组织细胞的IL-23R，从而发挥治疗支气管哮喘的作用。
由于细胞因子必需通过与其相应的受体结合后才能具有生物活性，因此以炎症细胞因子受体为靶位建立受体拮抗剂的筛选模型，对不同来源化合物(组合化学库、天然产物等)进行筛选，有可能获得相应受体的拮抗剂，这些拮抗剂通过和受体天然配基(炎症细胞因子)竞争结合受体，从而可以达到降低细胞因子活性治疗炎症等疾病的目的[5]。
离体建立基本的药物筛选的总体思路是，从天然产物中选择适当的筛选模型，筛选得到一系列化合物，进一步优化后得到先导化合物，随后进行高通量筛选（High-throughput screening, HTS），最终得到目标几种有效的化合物，进而利用现代仪器分析的各种手段鉴定这几种化合物的结构，依据药物化学等方法的构效关系对该化合物进行结构修饰以从理论上完善其分子结构，从而指导该类化合物的全合成或半合成的进行，并且以有利于其在体内[4]王伟，高倩，唐平华.IL-17和IL-23在肥胖哮喘小鼠气道炎症中的作用及其与氧化应激的关系.当代医学.2012.5第18卷第13期[5]李元.以炎症相关细胞因子受体为靶位的受体拮抗剂筛选模型构建及受体拮抗剂研究.Bull Med Res.的药效学和药动学性质，若有明显毒性或副作用的结构则淘汰，这为进一步的临床前研究做好理论准备。
X药采用受体配体结合技术的离体筛选模型，即从细胞、分子水平进行药物筛选，其基本机制是X药阻断IL-23与其IL-23R的特异性结合，从而筛选出高效专一的肺组织细胞IL-23R拮抗剂。
具体方法可以概述为：通过文献调研，从大量土壤（四川、云南、贵州等地）真菌代谢产物中提取出具有舒张支气管平滑肌、止咳、抗肺部炎症等临床疗效的成分，将小鼠的离体肺组织细胞膜受体作为筛选模型，利用高灵敏度的放射性同位素标记X药，利用X药与IL-23R高度特异性结合形成受体-配体复合物，并通过测量该复合物的放射性，从而筛选出目标先导化合物群。
进一步利用HTS技术（是以药物作用靶点为主要对象的细胞和分子水平的筛选模型，根据样品与靶点结合的表现，判断化合物的生物活性的一种技术），更为精确地筛选出有效化合物，然后通过各种光谱手段和合成手段确定各种化合物的结构，结构修饰并进一步筛选，最后得到几种可能的有效化合物，进行进一步的临床前研究。
三、新药临床前药理学研究实验方案1.主要药效学研究方案1.1 药效学实验方案1.1.1 实验动物模型I： 2~3周龄昆明小鼠30只，均为雌性，清洁级，体重10~15g，来源于四川大学实验动物中心动物房，恒温（25度），清洁级环境，自由取水。
模型II：2~3周龄昆明小鼠30只，均为雌性，清洁级，体重10~15g，来源于四川大学实验动物中心动物房，恒温（25度），清洁级环境，自由取水。
(注明：模型I和II均为诱发性动物模型，如有条件也可选用模型III：自发性哮喘小鼠模型。
) 模型III: 2~3周龄患有自发哮喘的昆明小鼠20只，均为雌性，清洁级，体重10~15g，来源于四川大学实验动物中心动物房，恒温（25度），清洁级环境，自由取水。
)1.1.2主要试剂和仪器模型I：卵白蛋白(ovalbumin，OVA，GradeV，美国Sigma 公司)；胆固醇（广州金锐化工）；一定浓度的X药液；生理盐水；小鼠白细胞介素IL-23 酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒（ADL 公司）；雾化器（德国PARI公司）；酶标仪（美国Bio-Rad公司）；光学显微镜（日本 Olympus公司）[6]；RT-PCR检测仪器；组织抗修复液；SP试剂盒、DAB显色试剂盒。
模型II：橄榄花粉提取物溶液；一定浓度的X药液；生理盐水；小鼠白细胞介素IL-23 酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒（ADL 公司）；雾化器（德国PARI公司）；酶标仪（美国Bio-Rad 公司）；光学显微镜（日本 Olympus 公司）[6]；RT-PCR检测仪器；组织抗修复液；SP试剂盒、DAB显色试剂盒。
模型III：一定浓度的X药液；生理盐水；小鼠白细胞介素IL-23 酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒（ADL 公司）；雾化器（德国PARI公司）；酶标仪（美国Bio-Rad公司）；光学显微镜（日本 Olympus 公司）[6]；RT-PCR检测仪器；组织抗修复液；SP试剂盒、DAB显色试剂盒。
1.1.3方法1.1.3.1动物分组与造模：模型I: 将30只小鼠实验前饲养1周后随机分为3组，每组10只。
哮喘给药组：清洁级环境，普通饲料。
第10天和第20天小鼠腹腔注射致敏液（0.08%，OVA）0.25ml/10g。
第30天~50天小鼠于密闭容器中以1%的OVA溶液雾化吸入30min，第30~40天每日雾化，第40~50天隔日雾化，第60天以1%的X药溶液雾化吸入10min。
哮喘非给药组：清洁级环境，普通饲料。
OVA致敏液处理同哮喘给药组，但第60天则以生理盐水雾化吸入10min。
对照组：清洁级，普通饲料，生理盐水致敏激发，于第60天以1%的X药溶液雾化吸入10min。
模型II: 将30只小鼠实验前饲养1周后随机分为3组，每组10只。
哮喘给药组：清洁级环境，普通饲料。
第10天和第20天小鼠皮下注射致敏液（0.08%，橄榄花粉提取物）0.25ml/10g。
第30天~50天小鼠于密闭容器中以1%的橄榄花粉提取物溶液雾化吸入30min，第30~40天每日雾化，第40~50天隔日雾化，第60天以1%的X药溶液雾化吸入10min。
哮喘非给药组：清洁级环境，普通饲料。
橄榄花粉提取物致敏液处理同哮喘给药组，但第60天则以生理盐水雾化吸入10min。
对照组：清洁级，普通饲料，生理盐水致敏激发，于第60天以1%的X药溶液雾化吸入10min。
模型III：将20只小鼠实验前饲养1周后随机分为2组，每组10只。
哮喘给药组：清洁级环境，普通饲料。
第10天和第20天小鼠皮下生理盐水，0.25ml/10g。
第30天~50天小鼠于密闭容器中以生理盐水雾化吸入30min，第30~40天每日雾化，第40~50天隔日雾化，第60天以[6]实验试剂和仪器和部分方法参考文献：王伟，高倩，唐平华.IL-17和IL-23在肥胖哮喘小鼠气道炎症中的作用及其与氧化应激的关系.当代医学.2012.5第18卷第13期1%的X药溶液雾化吸入10min。
哮喘非给药组（对照组）：清洁级环境，普通饲料。
生理盐水处理同哮喘给药组，但第60天则以生理盐水雾化吸入10min。
1.1.3.2采集标本于末次激发后48h内，小鼠10%水合氯醛麻醉后称重，仰卧位固定小鼠，分离颈部组织，暴露气管，打开胸腔，分离肺脏，结扎右侧肺门后取右肺。
气管插管以PBS 液缓慢反复灌洗左肺，回收率80%以上，重复灌洗3次，收集BALF 1ml置于EP管中。
右肺上叶置于10%中性福尔马林液中固定，右肺下叶至于冰块上保持待用[6]。
1.1.3.3小鼠哮喘发作表现 OVA激发时，观察哮喘非给药组小鼠，应出现明显头面部瘙痒、烦躁不安、呼吸急促、弓背直立、前肢缩抬等哮喘急性发作表现；哮喘给药组小鼠应没有哮喘剂型发作的表现或表现不明显。
对照组小鼠应观察记录其出现的特别反应，从而为X药的不良反应提供体外动物实验依据。