下丘脑背内侧核神经肽Y表达缺失对大鼠脂肪组织脂代谢的影响研究
基于HMGCR及PPARα信号通路探究雪莲果浸膏对高脂血症大鼠脂质代谢的影响
高脂血症（HLP ）是机体脂质代谢紊乱、脂肪转运异常引起的代谢性疾病，表现为血清中的总甘油三酯（TG ）、总胆固醇（TC ）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C ）水平过高或高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C ）水平过低［1］，由于起病缓慢、隐匿，难以早发现、早干预、早治疗，易导致动脉粥样硬化、心脑血管疾病等［2,3］。
目前，治疗高脂血症的药物主要是他汀类和贝特类，但长期服用会导致横纹肌溶解，肝肾功能损害等严重不良反应［4］。
中药治疗高脂血症疗效显著且无明显机体损害，在血脂代谢异常Yacon root extract improves lipid metabolism in hyperlipidemic rats by inhibiting HMGCR expression and activating the PPAR α/CYP7A1/CPT-1pathwayGONG Shunhang,YANG Jie,ZHANG Jintao,WU Xinglin,JIANG Shan,ZHANG Yulin,GONG Guangbin,WU Ning,SUN Jianfei,WU ZunqiuLaboratory of Chemistry and Biochemistry,School of Basic Medical Sciences,Guizhou Medical University,Guiyang 550025,China摘要：目的探究雪莲果（Yacon ）浸膏对高脂血症（HLP ）大鼠脂质代谢的影响和改善血脂异常的作用机制。
方法随机数表法取10只SD 大鼠作为空白组（Normal ），正常饮食；另取50只大鼠给予高脂饮食8周建立HLP 模型，随机分为模型组（Mod ）、非诺贝特阳性对照组（FEN ，27mg/kg ），Yacon 浸膏高、中、低剂量组（5、2.5、1.25g/kg ），10只/组。
各组大鼠给予相应药物灌胃，Normal 组、Mod 组给予等体积生理盐水，干预8周。
壮骨止痛方对去卵巢骨质疏松大鼠下丘脑神经肽Y及α-促黑素的影响
壮骨止痛方对去卵巢骨质疏松大鼠下丘脑神经肽Y及α-促黑素的影响易仲媛;甘国兴;郭小玲;刘毓;饶剑花;李笔锋【摘要】目的观察壮骨止痛方对去卵巢骨质疏松大鼠下丘脑神经肽Y(NPY)及α-促黑素(α-MSH)的影响,探讨其抗骨质疏松机制. 方法 72只200 g左右的SD大鼠随机抽出假手术组12只,造模组60只,造模组采用双侧去卵巢法造模,假手术组只切除卵巢周围相应质量的脂肪. 造模成功后,将造模组大鼠随机分为模型组、壮骨止痛方高剂量组(13.2 g/kg)、壮骨止痛方中剂量组(6.6 g/kg)、壮骨止痛方低剂量组(3.3 g/kg)和戊酸雌二醇组,每组12只.术后第5天开始药物干预,模型组和假手术组给予相应体积的纯净水,持续13周.给药结束后,检测大鼠骨密度和下丘脑NPY及α-MSH含量. 结果假手术组大鼠下丘脑NPY含量为(59.6395±6.4535)ng/L,α-MSH含量为(5.8261±0.6375)ng/L,股骨骨密度为(0.3485±0.0780)g/cm2.与假手术组比较,模型组大鼠下丘脑NPY含量[(73.8488±7.0814)ng/L]显著增加,α-MSH 含量[(5.0314±0.5442)ng/L]显著降低,股骨骨密度[(0.3045±0.0650)g/cm2]显著减少,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01). 与模型组比较,壮骨止痛方高剂量组大鼠下丘脑NPY含量[(65.0930±6.3953)ng/L]显著减少,α-MSH含量[(6.0570±0.5196)ng/L]显著增加,股骨骨密度[(0.3524±0.0730)g/cm2]显著增加;壮骨止痛方中剂量组大鼠NPY含量[(58.6163±5.9419)ng/L]显著减少,α-MSH含量[(5.5766±0.5324)ng/L]显著增加,股骨骨密度[(0.3507±0.0790)g/cm2]显著增加;壮骨止痛方低剂量组大鼠NPY含量[(54.9419±4.6512)ng/L]显著减少,α-MSH 含量[(5.8743±0.4813)ng/L]显著增加,股骨骨密度[(0.3498±0.0690)g/cm2]显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01). 结论促进α-MSH合成、抑制NPY分泌可能是壮骨止痛方抗骨质疏松的作用机制之一.%Objective To observethe effect of Zhuanggu Zhitong Prescription on the neuropeptide Y (NPY) and α-melanocyte stimulating hormone (α-MSH) in the hypothalamus of ovariectomized rats with osteoporosis and to investi-gate its mechanism of anti-osteoporosis. Methods Seventy two SD rats weighed about 200 g were randomly divided into sham operation group (12 rats) and model group (60 rats), the model group was bilateral ovariectomized, the sham oper-ation group was excised equal weight fat around the ovary. After the modeling, the rats were randomly divided into model group, Zhuanggu Zhitong Prescription high-dose group (13.2 g/kg), Zhuanggu Zhitong Prescription middle-dose group (6.6 g/kg), Zhuanggu Zhitong Prescription low-dose group (3.3 g/kg) and estradiol valerate group, with 12 rats in each group. 5 days after operation, drug therapy was started, the model group and sham operation group were given equal volume of water for 13 weeks. After the drug deliv-ery, the bone mineral density and contents of NPY andα-MSH in the hypothalamus were detected. Results In the sham operation group, the content of NPY in the hypothalamus was(59.6395±6.4535) ng/L, the content ofα-MSH was (5.8261±0.6375) ng/L, and the femoral bone miner-al density was (0.3485±0.0780) g/cm2. Compared with the sham operation group, the content of NPY in the hypothala-mus of model group [(73.8488±7.0814) ng/L] was significantly increased, and theα-MSH [(5.0314±0.5442) ng/L] was significantly declined, the bone mineral density [(0.3045±0.0650) g/cm2] was significantly declined, there were statisti-cally significant differences (P < 0.05 or P < 0.01). Compared with the model group, the content of NPY in theZhuanggu Zhitong Prescription high-dose group [(65.0930±6.3953) ng/L] was significantly declined, the content of α-MSH [(6.0570±0.5196) ng/L] was significantly increased, the femoral bone mineral density[(0.3524±0.0730) g/cm2] was significantly increased (P < 0.05); the content of NPY in the Zhuanggu Zhitong Prescription middle-dose group [(58.6163±5.9419) ng/L] was significantly declined, the content ofα-MSH [(5.5766±0.5324) ng/L] was significantly in-creased, the femoral bone mineral density [(0.3507±0.0790) g/cm2] was significantly increased; the content of NPY in the Zhuanggu Zhitong Prescription low-dose group [(54.9419±4.6512) ng/L] was significantly declined, the content ofα-MSH [(5.8743 ±0.4813) ng/L] was significantly increased, the femoral bone mineral density [(0.3498 ±0.0690) g/cm2] was significantly increased, the differences were all statistically significant (P< 0.05 or P< 0.01). Conclusion Promot-ing the expression of α-MSH and restraining the secretion of NPY may be one of the mechanism of Zhuanggu Zhitong Prescription in anti-osteoporosis.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2016(013)002【总页数】4页(P20-23)【关键词】骨质疏松;壮骨止痛方;神经肽Y;α-促黑激素【作者】易仲媛;甘国兴;郭小玲;刘毓;饶剑花;李笔锋【作者单位】广东省清远市中医院药学部,广东清远 511500;广东省清远市中医院科教部,广东清远 511500;广东省清远市中医院药学部,广东清远 511500;广东省清远市中医院骨科中心,广东清远 511500;广东省清远市中医院药学部,广东清远511500;广东省清远市中医院骨科中心,广东清远 511500【正文语种】中文【中图分类】R285.5研究发现一些神经肽类物质如神经肽Y（NPY）等介导神经骨骼信号在骨代谢中发挥着重要作用，它们通过调节成骨细胞和破骨细胞活性及骨组织微循环参与骨代谢［1-2］。
神经肽Y Y1受体拮抗剂促进大鼠BMSCs成骨分化和股骨缺损修复
神经肽Y Y1受体拮抗剂促进大鼠BMSCs成骨分化和股骨缺损修复刘松;吴建群;胡稷杰;王簕;王钊;孟欢;卓灵剑;郑健雄【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2018(38)6【摘要】目的探索神经肽Y Y1受体拮抗剂(PD160170)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化以及骨缺损修复的影响.方法第三代大鼠BMSCs成骨分化诱导培养,随机分为4组,对照组(等体积PBS),终浓度分别为10-6、10-7、10-8 mol/L Y1受体拮抗剂三浓度梯度组,在干预7、14 d时,分别进行碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色;在干预7、21 d时,采用q-PCR和Westen blot检测Ⅰ型胶原(COLI)、骨钙素(OCN)和Runt相关转录因子2(Runx2)基因和蛋白的表达.采用300±20g雄性SD大鼠构建股骨髁上骨缺损模型,直径为2.5 mm,随机分为3组,每组6只,分别每日局部注射0.2 mL溶液等体积PBS(对照组)、10-6mol/L和10-8 mol/LY1受体拮抗剂溶液,28 d后处死,Micro-CT检测观察骨缺损修复情况.结果 ALP和茜素红染色发现,Y1受体拮抗剂组细胞胞浆内棕色颗粒、细胞外周基质矿化结节均高于对照组,且具有浓度特异性,以10-8 mol/L最为明显;q-PCR及Westemblot检测发现,在成骨分化诱导第7天,10-8 mol/L Y1受体拮抗剂组COLI mRNA和蛋白表达水平均显著高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05);在第21天,10-8mol/LY1受体拮抗剂组OCN、Runx2 mRNA和蛋白表达明显高于对照组(P＜0.05).通过micro-CT分析发现,在局部注射10-6 Y1受体拮抗剂28 d后,骨缺损BWTV、骨密度、骨小梁数量高于对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.05);而骨小梁厚度(P=0.07)、骨体积(P=0.35)在各组之间差异无统计学意义.结论神经肽YY1受体拮抗剂可促进BMSCs成骨分化以及骨缺损的修复,提示阻断Y1受体信号传导具有预防或治疗骨折、骨质疏松症等潜力,为临床药物研究提供一定的实验依据.【总页数】8页(P669-676)【作者】刘松;吴建群;胡稷杰;王簕;王钊;孟欢;卓灵剑;郑健雄【作者单位】广州医科大学附属第三医院骨科二区,广东广州510150;广州市花都区人民医院骨科,广东广州510800;南方医院医科大学南方医院创伤骨科,广东广州510515;南方医院医科大学南方医院创伤骨科,广东广州510515;广州医科大学附属第三医院骨科二区,广东广州510150;广州医科大学附属第三医院骨科二区,广东广州510150;南方医院医科大学南方医院创伤骨科,广东广州510515;南方医院医科大学南方医院创伤骨科,广东广州510515;南方医院医科大学南方医院创伤骨科,广东广州510515【正文语种】中文【相关文献】1.泽泻汤对代谢综合征大鼠神经肽及其Y1受体的影响 [J], 吴智春;王浩;王志宏;于华芸2.神经肽Y1受体激动药诱导大鼠心肌细胞肥大的研究 [J], 张同欣;唐发宽;董颀;刘启才;陈敏生3.神经肽Y及其Y1受体在遗传性癫痫大鼠脑内的表达及意义 [J], 徐晓雪;郭凤;王千慧;张朝东;杨军;赵久晗;蔡际群4.掺镁微弧氧化钛表面促进大鼠BMSCs成骨分化的研究 [J], 王桂芳;蒋欣泉5.模拟高原急性缺氧对大鼠下丘脑神经肽Y受体Y1 mRNA表达的影响 [J], 田秀灵;糜漫天;韦娜;周永因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
盐酸氟西汀对抑郁症模型小鼠神经肽Y表达的研究
盐酸氟西汀对抑郁症模型小鼠神经肽Y表达的研究沈悦娣;许百华【期刊名称】《全科医学临床与教育》【年(卷),期】2006(4)3【摘要】目的探讨盐酸氟西汀对慢性应激抑郁症模型小鼠下丘脑神经肽Y(NPY)的表达影响.方法采用旷场试验(Open-Field)法,比较抑郁症模型小鼠与正常对照组行为学改变方面的差异.将慢性应激抑郁症小鼠模型随机分成盐酸氟西汀和阿米替林治疗组、模型对照组,同时设立空白对照组,利用半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)法、细胞酶联免疫法和蛋白免疫印迹(Western-blot)技术,比较试验组小鼠下丘脑NPY的表达变化.结果 (1)与正常组比较,模型组在总路程缩短、活动次数减少和体重增加幅度下降等方面具有显著性差异.(2)与正常组比较,抑郁症模型组下丘脑NPY的mRNA表达下降.(3)经过3周的治疗,盐酸氟西汀组和阿米替林组小鼠下丘脑NPY的mRNA及蛋白表达没有明显差别,但是两组的表达结果显著高于模型对照组,与空白对照组的结果接近.结论脑内NPY的mRNA及蛋白的表达增加可能是盐酸氟西汀治疗抑郁症小鼠的机制之一.【总页数】4页(P185-188)【作者】沈悦娣;许百华【作者单位】310028,浙江,杭州,浙江大学心理与行为科学系;杭州师范学院临床医学院【正文语种】中文【中图分类】R9【相关文献】1.神经肽FF对类风湿关节炎小鼠模型的治疗作用研究 [J], 孙韬;王春霞;李东海;马艳云2.磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶在急性肝衰竭小鼠模型及HBV相关慢加急性肝衰竭患者肝组织中的表达及意义磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶在急性肝衰竭小鼠模型及HBV相关慢加急性肝衰竭患者肝组织中的表达及意义 [J], 陈婧;刘晓燕;杨昊臻;黄坤;胡瑾华;辛绍杰3.神经肽Y对抑郁症模型大鼠大脑皮质NE和5-HT表达的影响 [J], 王永军;贾福军;杨艳旭;朱金富4.耳针干预对儿童抑郁症模型小鼠情绪及外周催产素表达的影响 [J], 袁伟;徐晨曦;吴楠;赵晶;李杰5.PARP14在3种抑郁症模型小鼠海马区的表达升高及其与神经炎性反应的关系[J], 李辰;修建波;许琪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大鼠脑出血后继发性脑损害过程中血肿周边神经肽Y含量的变化
大鼠脑出血后继发性脑损害过程中血肿周边神经肽Y含量的变化许志强;蒋晓江;王景周;陈曼娥【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】2004(26)17【摘要】目的观察脑出血急性期血肿周边脑组织神经肽Y(neuropeptideY ,NPY)含量的动态变化 ,探讨NPY在脑出血后继发性脑损害中的作用。
方法Wistar大鼠 70只 ,采用抽签法分为手术组及假手术对照组 ,每组各 3 5只 ,每组按出血前 ,出血后 3 0min、6、12、2 4、48、72h分为 7组 ,每小组 5只。
采用胶原酶和肝素联合注入尾状核的方法建立大鼠脑出血模型 ,分别于上述各个时相点测定血肿周边NPY的含量、脑含水量。
结果脑出血后 6h血肿周边脑组织NPY的含量开始升高 ,并于2 4h达峰值 ,48h开始回落 ,但至 72hNPY 的含量仍显著高于出血前 (P <0 .0 1)。
与此同时 ,血肿周边脑组织含水量也同步升高。
结论脑出血过程中。
【总页数】3页(P1536-1538)【关键词】脑出血;神经肽Y;血肿周边;脑水肿【作者】许志强;蒋晓江;王景周;陈曼娥【作者单位】第三军医大学大坪医院野战外科研究所神经内科【正文语种】中文【中图分类】R741.02;R742【相关文献】1.实验性脑出血血肿周边及下丘脑神经肽Y含量的变化 [J], 许志强;蒋晓江;陈曼娥;王景周2.大鼠脑出血周边组织脑水含量、细胞凋亡和Bax表达的变化及粒细胞集落刺激因子的影响 [J], 关雪莲;侯丽淳;毕胜;曲红玉;杨慧;李培育;张佳月;王复新3.大鼠脑出血周边组织谷氨酸、脑水含量和细胞凋亡的变化及碱性成纤维生长因子的影响 [J], 关雪莲;侯丽淳;王辰;杨慧;王复新;和梅4.大鼠脑出血周边组织谷氨酸、脑水含量和细胞凋亡的变化及氯美噻唑的影响 [J], 关雪莲;韩凤;侯丽淳5.脑出血后继发性脑损伤的机制探讨:大鼠脑匀浆单胺类递质含量变化 [J], 许志强;蒋晓江;陈曼娥;王景周因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
影响棕色脂肪组织产热活性因素的研究进展
影响棕色脂肪组织产热活性因素的研究进展袁慧琦;侯少贞【摘要】全球性肥胖流行问题愈发严峻，而脂肪组织本身可能是解决这个问题的关键。
人和哺乳动物体内存在两种脂肪组织，发挥着截然相反的作用。
与白色脂肪组织存储机体过剩的能量不同，棕色脂肪组织中存在独特的解偶联蛋白，能将脂肪酸氧化磷酸化，释放热能，增加能量消耗。
因此，通过激活棕色脂肪组织产热，加速体内储存的脂质氧化磷酸化，成为了一种新的预防和治疗肥胖的手段。
论文阐述影响棕色脂肪产热活性的因素以及相关机制，旨在为肥胖的治疗提供新的思路和方向。
%The global obesity epidemic is increasingly serious,while the adipose tissue itself may be the key to solving it.There are two types adipose tissue in human and mammals,and they play opposite roles.Un-like white adipose tissue stores excess energy,brown adipose tissue has unique uncoupling protein,so it can oxidative phosphorylate fatty acid,then release heat,and increase energy consumption.Therefore,it be-comes a new means to prevent and treat obesity by activiting brown adipose tissue thermogenesis,then speeding the oxidative phosphorylation of fat.In present review,we explicated the factors that affect brown adipose tissue thermogenesis activity and related mechanisms,aiming at providing a new method and direction for the treatment of obesity.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2016(037)010【总页数】6页(P98-102,103)【关键词】肥胖;棕色脂肪组织;产热;解偶联蛋白 1【作者】袁慧琦;侯少贞【作者单位】广州中医药大学，广东广州 510006;广州中医药大学，广东广州510006【正文语种】中文【中图分类】S852.21肥胖及其相关代谢疾病已经成为了一个全球性的问题。
下丘脑室旁核β－内啡肽在大鼠烫伤休克中的作用
下丘脑室旁核β－内啡肽在大鼠烫伤休克中的作用
洪新如;王成海
【期刊名称】《生理学报》
【年(卷),期】1995(47)1
【摘要】以１００℃沸水接触雄性大鼠去毛的背部２０ｓ，形成占体表面积２０％的三度烫伤。
收集下丘脑室旁核推挽灌流液测定β－内啡肽免疫活性物质的含量；向下丘脑室旁核微量注射β－内啡肽或其抗血清，观察烫后心血管功能指标的改变及存活时间。
结果表明，烫后下丘脑室旁核灌流液中β－内啡肽免疫活性物质含量显著升高，有两个峰值。
烫后给予β－内啡肽抗血清，可显著改善心血管功能指标（ＭＡＰ，ｄＰ／ｄｔｍａｘ，Ｌｖｓｐ和ＨＲ），延长存活时间；给予β－内啡肽则作用相反。
上述观察表明下丘脑β－内啡肽的过量增多是促使休克加重和加快死亡的重要原因之一。
【总页数】6页(P19-24)
【关键词】β-内啡肽;下丘脑;室旁核;烫伤;休克
【作者】洪新如;王成海
【作者单位】第二军医大学神经生物学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R644.02
【相关文献】
1.下丘脑室旁核β—内啡肽在大鼠烫伤休克中的作用及其受体机制的研究 [J], 洪新如
2.烫伤对大鼠下丘脑视上核、室旁核、垂体和血浆内皮素-1含量的影响 [J],
3.下丘脑室旁核β—内啡肽在大鼠烫伤休克中的作用 [J], 洪新如
4.下丘脑室旁核μ受体在大鼠烫伤休克中的作用 [J], 洪新如;王成海;林葆城;朱鹤年
5.大鼠烫伤后下丘脑室旁核β-内啡肽的变化及δ受体的作用 [J], 洪新如;赵小林;王成海;林葆城
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神经肽Y Y5受体基因反义寡核苷酸脑室给药对大鼠血清瘦素、胰岛素及TNF-α水平的影响
神经肽Y Y5受体基因反义寡核苷酸脑室给药对大鼠血清瘦素、胰岛素及TNF-α水平的影响解建波【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2009(29)4【摘要】目的观察神经肽Y Y5(NPY Y5)受体基因反义寡核苷酸脑室给药对伴糖尿病缺血再灌注(I/R)大鼠血清瘦素、胰岛素与TNF-α水平的影响.方法链脲佐菌素空腹腹腔注射制备糖尿病大鼠模型,线栓法闭塞大脑中动脉制作脑I/R大鼠模型;治疗组经导管向脑室注入50 μg(5 μg/μl)NPY Y5受体基因反义寡核苷酸,每天3次给药,连续用药3 d;采用ELISA双抗体夹心法测定血清TNF-α与瘦素含量,放射免疫法测定胰岛素含量. 结果 I/R损伤后,大鼠血清瘦素、胰岛素、TNF-α水平较对照组显著升高(P＜0.05,P＜0.01);NPY Y5受体基因反义脱氧核苷酸侧脑室注射干预后,其血清瘦素、胰岛素水平明显下降(P＜0.05),TNF-α水平显著降低(P＜0.01).结论神经肽Y Y5受体基因反义寡核苷酸侧脑室给药可降低伴糖尿病I/R大鼠的血清瘦素、TNF-α与胰岛素水平,改善外周瘦素抵抗与胰岛素抵抗(IR),促进脑梗死恢复.【总页数】3页(P439-441)【作者】解建波【作者单位】临沂市人民医院神经内科,山东,临沂,276003【正文语种】中文【中图分类】R743【相关文献】1.神经肽Y Y5受体基因反义寡核苷酸脑室给药对糖尿病伴缺血再灌注大鼠血清瘦素与胰岛素的影响 [J], 彭焱;解建波2.神经肽Y Y5受体基因反义寡核苷酸脑室给药对伴糖尿病缺血再灌注大鼠血清瘦素与TNF-α的影响 [J], 解建波;陈玉芳;刘建民3.牙周炎对大鼠血清瘦素水平及胰岛素抵抗的影响 [J], 苏媛;轩东英;倪佳;陈蕾4.针刺治疗对肥胖模型大鼠血清瘦素、胰岛素水平的影响 [J], 唐红珍;李红阳;庞勇;李丽帆5.不同游泳时间对高脂膳食大鼠血清瘦素及胰岛素水平的影响 [J], 李翠珍;赵刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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下丘脑背内侧核神经肽Y表达缺失对大鼠脂肪组织脂代谢的影
响研究
研究背景肥胖及肥胖相关性疾病严重威胁着人类健康,已成为全世界亟待解决的课题。
人类和哺乳动物体内,白色脂肪组织(white adipose tissue,WAT)主要司储存能量,棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)增强非战栗性产热、增加胰岛素敏感性,改善胰岛素抵抗。
成年啮齿类动物体内肩胛间区存在棕色脂肪组织,而腹股沟区、附睾、内脏脂肪组织则为白色脂肪组织。
在一定干预条件下,白色脂肪组织可以发生棕色样改变。
PR结构域家族的第16个成员PRDM16(PRD1-BF1-RIZ1 homologous domain containing 16)是BAT中高表达的一种转录调节因子,在棕色脂肪细胞分化过程中起正向调节作用,参与诱导细胞线粒体数量增多和功能增强,增强线粒体氧化磷酸化,加速能量消耗和热量生成。
Ⅱ型脱碘酶(TypeⅡiodothyronine deiodinase,Dio-2)是棕色脂肪组织的分子标志之一,在棕色脂肪细胞可通过与解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)的基因特异位点结合启动转录,促进能量代谢。
下丘脑在维持能量稳态中发挥重要作用。
神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)是一种重要的促食欲肽,对摄食的调节多依赖于下丘脑中的NPY神经元,在下丘脑,NPY存在于弓状核、背内侧核等区域,以弓状核含量最丰富。
研究显示,特异性敲除高脂饮食诱导的肥胖大鼠下丘脑弓状核NPY基因可改善肥胖大鼠的能量代谢。
成纤维细胞生长因子-21(fibroblast growth
factor-21,FGF21)可表达于肝脏、脂肪组织和胰腺等器官和组织(啮齿类动物),
通过形成FGF21/b-Klotho/FGFR复合体发挥多种生物学效应,改善糖脂代谢。
FGF21经交感神经系统诱导WAT中出现米色或棕色脂肪细胞。
而下丘脑背内侧核神经肽Y表达缺失与脂肪组织内脂代谢相关基因的表达水平(如PRDM16、Dio-2、FGF21)的关系,尚未见明确报道。
目的建立下丘脑背内侧核神经肽Y表达缺失的大鼠动物模型,并给予高脂饮食干预,探讨大鼠的体重改变和脂肪组织脂代谢相关基因PRDM16、Dio-2和FGF21表达变化。
实验方法建立动物模型:4-5周龄雄性清洁级SD大鼠80只,其中体重为270-300g的大鼠20只,体重为130-150g的大鼠60只。
适应性喂养1周后,构建腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的带有荧光标记的RNAi(RNA interference)重组转运体(AAVsh NPY及AAVsh CTL),病毒滴度为1×109particles/site。
其中AAVsh NPY导致表达缺失,AAVsh CTL 是作为对照的空载体。
用270-300g的大鼠验证建模是否成功,根据Paxinos和Watson大鼠脑图谱定位DMH的位置。
随机选取15只分别接受双侧DMH的AAVsh NPY注射,并在注射病毒的1、2和4周后(每周随机选取5只)处死,再随机选取5只分别接受双侧DMH的AAVsh CTL注射,注射4周后处死。
处死后迅速取下丘脑,一部分置于液氮中保存,制作冰冻切片观察转染位置,一部分制作石蜡切片应用荧光原位杂交技术检测DMH NPY m RNA的表达,确定病毒重组体能够敲除DMH NPY即建模成功;将余60只大鼠随机均分为两组,根据Paxinos和Watson大鼠脑图谱定位DMH的位置。
上述两组分别接受双侧DMH的AAVsh NPY(AAVsh NPY组)及AAVsh CTL空载体(AAVsh CTL组)注射,完成动物模型的建立。
每周1次于固定时间对各组大鼠进行称重并记录。
实验1~4周所有大鼠给予常规饮食(regular chow,RC),第5周再从AAVsh NPY组及AAVsh CTL组各自随机选取一半大鼠给予高脂饮食(high fat diet,HF),其余大鼠仍给予常规饮食,此时所有大鼠被分为AAVsh NPY HF组、AAVsh NPY RC组、AAVsh CTL HF组、AAVsh CTL RC组。
注射病毒16周后处死大鼠,采集腹股沟区和附睾脂肪组织,液氮保存。
实时荧光定量PCR(Real time PCR)法测定大鼠腹股沟区和附睾脂肪组织FGF21m RNA、PRDM16m RNA、Dio-2 m RNA的表达。
蛋白质印迹法(Western blot,WB)测定大鼠腹股沟区和附睾脂肪组织中PRDM16蛋白表达水平。
结果1成功建立下丘脑背内侧核NPY表达缺失的动物模型携带红色荧光的病毒成功注入下丘脑背内侧核,注射后,AAVsh NPY组的NPY m RNA表达水平低于AAVsh CTL组,分别将注射1、2、4周后AAVsh NPY组与AAVsh CTL组比较,均有显著差异(P(27)0.05)。
2大鼠体重增加量第5周添加高脂饮食前AAVsh NPY组与AAVsh CTL组比较,有显著差异(P(27)0.05),提示DMH NPY缺失已开始导致体重增速减缓;第16周末:与常规饮食组大鼠相比,高脂饮食组大鼠体重增加显著,差异有统计学意义
(P(27)0.01),提示高脂饮食诱导大鼠体重增长迅速;与AAVsh CTL组相比,AAVsh NPY组体重增长量明显较低,有显著差异(P(27)0.01),提示DMH NPY缺失可引起体重增长缓慢。
3实时荧光定量PCR结果腹股沟区和附睾脂肪组织FGF21m RNA 的表达均呈现以下特征:AAVsh CTL组与AAVsh NPY组比较,差异无统计学意义(P(29)0.05),提示DMH NPY敲除对脂肪组织FGF21表达无影响;与RC组相比,HF 组大鼠均呈现低表达,差异有统计学意义(P(27)0.01),提示高脂饮食降低脂肪组
织FGF21的表达。
各组大鼠附睾脂肪组织中PRDM16和Dio-2 m RNA的表达水平均较低,两者的组间两两比较提示差异无统计学意义(P(29)0.05)。
提示DMH NPY表达缺失和高脂饮食对附睾脂肪组织PRDM16、Dio-2 m RNA的表达均无影响。
腹股沟区脂肪组织PRDM16和Dio-2 m RNA的表达一致,如下:与AAVsh CTL 相比,AAVsh NPY组的表达水平显著升高,差异有统计学意义(P(27)0.01),提示DMH NPY敲除引起PRDM16和Dio-2 m RNA高表达;与RC组相比,HF组表达水平下调,差异有统计学意义(P(27)0.01),提示高脂饮食诱导PRDM16和Dio-2 m RNA
表达下降。
4 Western blot结果与AAVsh CTL高脂饮食组相比,AAVsh NPY高脂饮食组腹股沟区脂肪组织PRDM16蛋白高表达,差异有统计学意义(P(27)0.01);与AAVsh CTL常规饮食组相比,AAVsh CTL高脂饮食组腹股沟区脂肪组织PRDM16蛋白低表达,差异有统计学意义(P(27)0.01)。
而附睾脂肪组织中,组间比较,差异无统计学意义(P(29)0.05)。
与RT-PCR
检测结果一致。
结论1.下丘脑背内侧核神经肽Y表达缺失能上调大鼠腹股沟区脂肪组织棕色脂肪相关基因PRDM16和Dio-2的表达,改善脂代谢,缓解高脂饮食诱导的肥胖。
2.高脂饮食可引起大鼠脂肪组织FGF21的表达下调,且敲除下丘脑背内侧核神经肽Y对FGF21的表达无调控作用。