精氨酸加压素翻转脂多糖引起大鼠发热及其对痛觉敏感性的影响
精氨酸加压素翻转脂多糖引起大鼠发热及其对痛觉敏感性的影响李博萍;孟立;罗蓉;胥建辉;杨永录【摘要】AIM: To investigate the effect of peripheral administration of arginine vasopressin (AVP) on lipopolysaccharide (LPS)-induced fever and hyperalgesia in rats and its relationship with interleukine-1β (IL-1β) and prostaglandin E2 (PGE2).METHODS: The core temperature (Tc), brown adipose tissue (BAT) temperature and activity were measured by telemetry in adult male Sprague-Dawley rats at an ambient temperature of 23 ℃ during a 12 h light/12 h dark photoperiod (lights on at 06:00 and lights off at 18:00).The rats were intraperitoneally injected with LPS (50 μg/kg), AVP (10 μg/kg) or V1a vasopressin receptor antagonist (V1a antagonist, 30μg/kg) at 10:00 or 11:30.Hyperalgesia was assessed by measuring the latency to withdraw a hindpaw from radiant heat (Hargreaves test).The concentrations of IL-1β and PGE2 in the serum were tested byELISA.RESULTS: Intraperitoneal administration of LPS induced periods of biphasic fever accompanied by hyperalgesia.AVP reversed LPS-induced fever, and decreased the hyperalgesia and BAT thermogenesis.Peripheral administration of V1a antagonist enhanced the fever produced by LPS, but did not affect the hyperalgesia.AVP significantly attenuated LPS-induced IL-1β and PGE2 production.CONCLUSION: Peripheral administration of AVP reverses LPS-induced fever and decreases hyperalgesia by reduction of BAT thermogenesis and inhibition of IL-1β and PGE2.Endogenous AVPattenuates the fever induced by LPS, but does not affect the nociceptive thresholds.%目的: 研究外周给精氨酸加压素(AVP)对脂多糖(LPS)引起的大鼠发热和痛觉过敏的影响,以及与血清中IL-1β和PGE2水平变化的关系.方法: 实验用成年雄性SD大鼠,在23 ℃环境温度下,明暗时间各12 h.用无线遥测系统连续测量大鼠体核温度(Tc)、棕色脂肪温度(TBAT)和活动.10:00或11:30分别给大鼠腹腔注射LPS(50 μg/kg)、AVP(10 μg/kg)或V1a受体阻断剂(30 μg/kg).用ELISA法测定血清IL-1β和PGE2的含量.用足底痛觉测试仪(Hargreaves test)测试大鼠热痛缩爪潜伏期的变化.结果: (1) 腹腔注射LPS引起大鼠双相发热过程伴有痛觉过敏现象.(2) AVP能够翻转LPS引起的Tc和TBAT升高反应,降低发热引起的痛觉敏感性.(3) 外周给V1a受体阻断剂能提高LPS引起的发热反应,但不影响发热引起的痛觉敏感性变化.(4) AVP能抑制LPS引起的发热大鼠血液中IL-1β和PGE2水平升高.结论: (1) 外周给予AVP可通过抑制棕色脂肪产热以及降低血液中IL-1β和PGE2的浓度而翻转LPS发热反应并降低发热伴随的痛觉敏感性升高现象.(2) 内源性AVP也有限制LPS发热的作用,但可能不影响发热引起的痛觉阈值降低现象.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2017(000)004【总页数】5页(P635-639)【关键词】精氨酸加压素;发热;脂多糖;痛觉过敏【作者】李博萍;孟立;罗蓉;胥建辉;杨永录【作者单位】成都医学院体温与炎症四川省高校重点实验室,四川成都 610500;陇东学院岐伯医学院, 甘肃庆阳 745000;成都医学院体温与炎症四川省高校重点实验室,四川成都 610500;成都医学院体温与炎症四川省高校重点实验室,四川成都610500;成都医学院体温与炎症四川省高校重点实验室,四川成都 610500;成都医学院体温与炎症四川省高校重点实验室,四川成都 610500【正文语种】中文【中图分类】R33-33;R364.6发热伴有疼痛和痛觉敏感性升高是临床上常见的症状。
脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)引起发热及痛觉敏感性升高与LPS引起机体释放白细胞介素1β(interleukine-1β，IL-1β)、白细胞介素6(interleukine-6，IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和前列素E2 (prostaglandin E2，PGE2)等炎性细胞因子有关[1-3]。
炎性细胞因子引起发热和作用于外周伤害感受器可引起痛觉和疼痛过敏反应[1-2]。
最近报道，组织固有巨噬细胞在炎症的发生发展、疼痛和痛觉过敏中也发挥重要的作用[3]。
精氨酸加压素(arginine vasopressin，AVP)是下丘脑视上核和室旁核神经元产生的一种九肽激素，参与维持体液平衡、血压、抗利尿、学习和记忆功能。
另外,AVP在正常体温调节、退热和痛觉调制中也发挥重要的作用[4-9]。
虽然许多学者分别对AVP的退热和镇痛作用进行了研究[6-9]，但关于AVP影响LPS引起的发热与痛觉敏感性的时间曲线变化及其机制研究不多，故本研究观察了AVP影响LPS性发热与痛觉敏感性变化的时间曲线，并测定棕色脂肪组织(brown adipose tissue，BAT)产热和血清中IL-1β和PGE2水平的变化。
1 实验动物和试剂实验用成年雄性SD大鼠(四川医学科学院实验动物研究所购买)89只，体重230～290 g。
LPS、AVP和AVP V1a受体阻断剂均购于Sigma，用无菌生理盐水分别稀释LPS、AVP和V1a受体阻断剂，分装并储存于-30 ℃待用。
大鼠IL-1β和PGE2的 ELISA试剂盒为BD产品。
2 实验方法2.1 温度和活动记录的实验方法用DSI生产的无线遥测温度传感器(modelTA10TAM2-F40-TT)连续测量大鼠体核温度(Tc)、BAT温度(TBAT)和活动的变化。
术前用1%碘伏溶液浸泡手术器械和传感器60 min以上，腹腔注射4%戊巴比妥钠溶液(40 mg/kg)麻醉动物，手术操作同以往的工作[5]。
手术后，肌肉注射青霉素(2×104 U)以防感染，然后让动物恢复7 d以上再进行实验。
2.2 实验分组与步骤实验分为4组：(1) 对照组(n=7)：生理盐水(1 mL/kg)+生理盐水(1 mL/kg)；(2) LPS组(n=8)：LPS (50 μg/kg)+生理盐水(1 mL/kg)；(3) LPS+AVP组(n=7)：LPS (50 μg/kg)+AVP (10 μg/kg)；(4) LPS+V1a阻断剂组(n=7)：LPS (50 μg/kg)+V1a阻断剂组(30 μg/kg)。
实验前一天下午，大鼠称重后置于23 ℃人工气候箱内(重庆永生实验仪器厂产品)进行适应性过夜，动物处于自由活动、进食和进水状态。
气候箱内昼光期和暗光期时间各12 h，即06:00～18:00开灯，18:00～次日06:00关灯。
实验当天06:00开始记录大鼠Tc和活动，10:00 先给动物腹腔注射盐水或LPS，11:30再次给动物注射生理盐水、AVP或V1a受体阻断剂，然后连续记录到18:00。
判定体温变化的指标：用平均体温反应曲线和体温反应最大幅度与基线体温之间的差(ΔT)表示。
2.3 大鼠足底痛觉敏感性的测定用Ugo生产的足底痛觉测试仪(Hargreaves test)测试痛觉敏感性的变化。
将3只大鼠分别放置于三格围箱的一格中，待动物适应环境后，将玻璃框下的红外发生器直接放到大鼠后足下方，移动红外发生器，用其发出的白光瞄准测试部位，动物感觉疼痛时立即缩回后足需要的时间即为热刺激痛觉反应潜伏期，缩回反应时间可以精确到0.1 s。
用痛觉反应潜伏期的变化表示痛觉阈值高低的变化。
每次测量间隔1 min，连续测量5次，取其平均值。
然后每间隔30 min,以同样方法进行下一次测量。
实验动物分组和给药方法同2.2。
2.4 血清IL-1β和PGE2水平的测定实验标本来自于3组大鼠，即对照组、LPS组和LPS+AVP组，给药时间和方法同2.2。
用含有促凝剂的一次性真空采血管经心脏穿刺抽取血液并将其放在冰中，然后用低温离心机3 000 r/min离心15 min分离血清,并分装储存于-30℃冰箱中，以备测定血清IL-1β和PGE2含量。
用ELISA 法测定血清IL-1β和PGE2的含量,具体操作严格按照试剂盒说明进行。
用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(A)。
以标准品浓度为横坐标，对应A 值为纵坐标,绘制出标准曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
3 统计学处理采用SPSS 19.0进行统计学分析。
实验数据用均数±标准误(mean±SEM)表示。
各组间采用单因素方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
大鼠烫伤休克时血浆及部分组织中精氨酸加压素免疫活性物质含量的变化
大鼠烫伤休克时血浆及部分组织中精氨酸加压素免疫活性物质
含量的变化
孙刚;林葆城;王成海;朱鹤年
【期刊名称】《第二军医大学学报》
【年(卷),期】1989(10)4
【摘要】本文报道了血浆及部分组织中精氨酸加压素免疫活性物质(ir-AVP)在大鼠烫伤休克时的动态变化。
放射免疫测定的结果表明,大鼠烫伤休克后即刻、60、120、180和240min,血浆ir-AVP含量均显著升高;而垂体后叶ir-AVP含量则显著降低。
提示烫伤休克时,垂体后叶向循环中释放加压素的量增加。
另外烫伤休克时,下丘脑、垂体前叶、桥延脑、脊髓及肾上腺等组织中的ir-AVP含量也有不同程度的变化,其意义如何有待进一步探讨。
【总页数】1页(P33-33)
【关键词】精氨酸加压素;烫伤;休克;动物
【作者】孙刚;林葆城;王成海;朱鹤年
【作者单位】第二军医大学神经生物学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R644
【相关文献】
1.新生儿休克时血浆β-内啡肽样免疫活性物质含量变化及其临床意义 [J], 郝良纯
2.急性颅脑伤大鼠脑区、垂体及血浆中精氨酸加压素免疫活性物质含量的变化 [J], 刘志敏
3.大鼠氧惊厥时血浆、垂体和下丘脑β内啡肽免疫活性物质含量的变化 [J], 陶恒沂;倪国坛;王成海
4.失血性休克时血浆β内啡肽样免疫活性物质含量变化的实验研究 [J], 陈腾;高瀚;徐宪虎
5.二甲肼诱发大鼠大肠癌时血浆β－内啡肽样免疫活性物质含量的变化 [J], 王元和;陈腾;王育红;赵荣华
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精氨酸加压素对失血性休克大鼠血管反应性的影响
精氨酸加压素对失血性休克大鼠血管反应性的影响杨光明;刘良明【期刊名称】《中国药理学与毒理学杂志》【年(卷),期】2005(19)5【摘要】目的探讨精氨酸加压素(AVP)对失血性休克大鼠血管反应性的影响,并初步探讨其与Rho激酶的关系.方法在体实验,观察大鼠失血性休克后AVP对去甲肾上腺素(NE)升压反应的影响;离体实验,测定失血性休克大鼠肠系膜上动脉(SMA)环对NE的收缩反应和去极化状态下(120mmol·L-1K+)对Ca2+的收缩反应,反映其对缩血管物质和钙的反应性.结果失血性休克(4 kPa,2 h)后大鼠对NE的升压反应显著下降.AVP 0.1和0.4 U·kg-1,iv,随后再将AVP溶于3倍失血量的复方氯化钠溶液分别以0.01和0.04U·kg-1·min-1的速度于30 min内用输液泵输注,3～4 h 后可使NE的升压反应恢复至正常组水平.失血性休克后SMA对NE和钙的反应性显著下降,对NE和Ca2+的收缩反应量-效曲线明显右移,最大反应(Emax)降低;加入NE和Ca2+前分别用0.5和5 nmol·L-1 AVP孵育10 min可使NE和Ca2+的收缩反应量-效曲线明显左移,Emax显著增高.Rho激酶拮抗剂HA-1077预处理可部分取消AVP所致的Ca2+Emax变化,使Emax回降.结论AVP能升高失血性休克大鼠血管对NE的敏感性及反应效能和血管平滑肌对钙的反应效能.【总页数】5页(P347-351)【作者】杨光明;刘良明【作者单位】第三军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400042【正文语种】中文【中图分类】R972【相关文献】1.缺血预处理对失血性休克大鼠血管反应性及钙敏感性的影响 [J], 胡弋;李涛;徐竞;唐小唪;刘良明2.Akt 在 Ang-1、Ang-2调节失血性休克大鼠血管反应性双相变化中的作用 [J], 徐竞;李涛;杨光明;刘良明3.缺血预适应诱导PKCα、PKCε活化和失血性休克大鼠血管反应性和钙敏感性保护的机制 [J], 徐竞;李涛;杨光明;刘良明4.新型钙增敏剂MCI-154对失血性休克大鼠血管反应性的影响 [J], 杨光明;刘良明5.大麻素受体1拮抗剂AM251对失血性休克大鼠血管反应性的影响 [J], 李楠;高娜;王静;侯立朝;高燕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
精氨酸加压素反转前列腺素E2引起的大鼠视前区冷敏神经元活性增强
精氨酸加压素反转前列腺素E2引起的大鼠视前区冷敏神经元活性增强侯晓钰;胥建辉;唐瑜;罗蓉;刘畅;张洁【期刊名称】《成都医学院学报》【年(卷),期】2018(013)003【摘要】目的研究精氨酸加压素(AVP)对前列腺素E2 (PGE2)引起大鼠视前区冷敏神经元活性变化的影响.方法在制作了大鼠视前区脑片以后,应用全细胞膜片钳技术记录视前区神经元的放电频率,鉴别它们的温度敏感性,然后分别记录PGE2(1μmol)、AVP(1μmol)+ PGE2(1μmol)或AVP(1μmol)+ PGE2(1μmol)+ AVPV1a受体阻断剂(1μmol)对冷敏神经元放电频率的影响.结果 1)加入PGE2后,有61.5％(8/13)的大鼠视前区冷敏神经元的放电频率明显上升,其平均增幅为(69.6±39.7)％.2)洗脱PGE2的作用后,往PGE2激活的冷敏神经元浴液中加入了PGE2和AVP混合液后,这些神经元的平均放电变化却转为下降(P＜0.05),说明AVP反转了PGE2引起的冷敏神经元放电活性增强.3)洗脱PGE2和AVP混合液的作用后,继续加入了PGE2、AVP和AVPV1a受体拮抗剂,神经元的平均放电变化与PGE2和AVP混合液引起的放电变化差异有统计学意义(P＜0.05),而且与PGE2引起的放电变化相似(P＞0.05),表明AVP V1a受体拮抗剂阻断了AVP对PGE2引起冷敏神经元放电频率变化的影响.结论 PGE2可引起大鼠视前区冷敏神经元活性增强,AVP通过激活V1a受体反转了PGE2引起的冷敏神经元活性增强.【总页数】6页(P256-261)【作者】侯晓钰;胥建辉;唐瑜;罗蓉;刘畅;张洁【作者单位】成都医学院第一附属医院产科,成都610500;成都医学院体温与炎症四川省高校重点实验室,成都610500;成都医学院体温与炎症四川省高校重点实验室,成都610500;成都医学院体温与炎症四川省高校重点实验室,成都610500;成都医学院体温与炎症四川省高校重点实验室,成都610500;成都医学院体温与炎症四川省高校重点实验室,成都610500【正文语种】中文【中图分类】R338;R339.【相关文献】1.精氨酸加压素对大鼠下丘脑视前区AMP A受体GluR1-3蛋白表达的影响 [J], 徐润;唐瑜;孙燕泥;杨冉;唐恬;陈春月;阳明芳;付贤宁;宁竣;陈灵燕2.去卵巢后雌性大鼠下丘脑视前区NOS阳性神经元形态学和突触素表达的变化[J], 赵岫峰;陈娟;潘三强;韩辉;吕来清;宿宝贵3.隔区和第Ⅲ脑室注射精氨酸加压素对家兔视前区下丘脑前部温敏神经元放电的影响 [J], 杨永录4.精氨酸加压素对大鼠下丘脑视前区NMDA受体亚单位表达的影响 [J], 孙燕泥;徐润;游凡;蒋佩文;孙玲;王思文;杨茜雅;唐瑜5.精氨酸加压素对大鼠视前区GABAA受体\r亚单位磷酸化的影响 [J], 唐瑜;孙士林;尹双双;彭哲宇;曾宪刚;姚姝婷;何钰婷;彭娜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
丁香酚对脂多糖发热大鼠血浆及脑脊液中精氨酸加压素含量的影响
丁香酚对脂多糖发热大鼠血浆及脑脊液中精氨酸加压素含量的
影响
张文彬;叶红;王晓斌
【期刊名称】《承德医学院学报》
【年(卷),期】2006(23)3
【摘要】目的:探讨丁香酚抑制脂多糖所致发热的机制.方法:建立大鼠脂多糖性发热模型,观察丁香酚对大鼠直肠温度的影响,放免法测定大鼠血浆及脑脊液中精氨酸加压素(AVP)含量的变化.结果:腹腔注射脂多糖溶液后大鼠直肠温度明显升高(P＜0.01),血浆及脑脊液中AVP的含量也明显升高(P＜0.05);丁香酚能明显抑制脂多糖所致大鼠发热反应(P＜0.01),同时血浆及脑脊液中AVP含量也进一步增加(P＜0.05).结论:丁香酚通过增加体内AVP的含量而发挥解热作用.
【总页数】3页(P227-229)
【作者】张文彬;叶红;王晓斌
【作者单位】承德医学院附属医院,河北,承德,067000;承德医学院临床技能学教研室;承德医学院临床技能学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R9
【相关文献】
1.家兔发热时脑脊液和血浆中精氨酸加压素含量的变化及禁水的抗热作用 [J], 杨永录
2.丁香酚对酵母菌发热大鼠血浆及脑脊液中精氨酸加压素含量的影响 [J], 叶红;朱丽娜;冯甲棣;闫凤霞
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5.川芎嗪对血管性痴呆患者认知功能及血浆和脑脊液中精氨酸加压素含量的提高效应 [J], 孙美波;陈秀珍
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L-精氨酸对热应激大鼠血清皮质醇变化的影响
L-精氨酸对热应激大鼠血清皮质醇变化的影响周爱军;罗海吉;卢晓翠;谭庆【期刊名称】《中国公共卫生》【年(卷),期】2005(21)5【摘要】目的观察补充L -精氨酸对热应激大鼠血清皮质醇含量的变化,探讨L -精氨酸对热应激胸腺具有保护作用的可能机制。
方法青春期雄性SD大鼠,随机分为对照组、L -精氨酸灌胃组、维生素E饲料组,观察各组常温和4 1℃应激1,2h 后及热应激后0 ,4 ,8h3个时间点的血清皮质醇的变化。
结果(1)高温应激后各组血清皮质醇含量均明显升高,其中热应激后4h升到最高,补充L -精氨酸组明显低于未补充组;(2 )补充适量L -精氨酸可减轻热应激大鼠胸腺和脾脏的急性萎缩。
结论适量的L -精氨酸能够抑制热应激引起的血清皮质醇含量的显著升高及减小胸腺和脾脏指数,适量的L -精氨酸对热应激大鼠胸腺具有明显的保护作用,可以增强机体的免疫力。
【总页数】2页(P594-595)【关键词】L-精氨酸(L-Arg);热应激;皮质醇【作者】周爱军;罗海吉;卢晓翠;谭庆【作者单位】南方医科大学【正文语种】中文【中图分类】R594.1【相关文献】1.补充L-精氨酸对热应激小鼠血清NO、NOS和T细胞亚群的影响 [J], 罗海吉;杨真;曾静;卢晓翠;孔亮2.补充L-精氨酸对热应激大鼠胸腺细胞凋亡的影响 [J], 罗海吉;张云山;吉雁鸿;卢晓翠;邓红3.L-精氨酸对热应激大鼠胸腺细胞超微结构的影响 [J], 张云山;罗海吉;乔东仿;吉雁鸿;卢晓翠4.L-精氨酸对热应激大鼠胸腺和脾脏的影响 [J], 张云山;罗海吉;吉雁鸿;卢晓翠5.宫内发育迟缓大鼠血清胰岛素样生长因子Ⅰ、Ⅱ、BP3的变化及L-精氨酸的保护作用 [J], 卢岩;刘晓梅;李书琴因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高温下补充精氨酸对小鼠体重、胸腺和脾脏重量的影响
高温下补充精氨酸对小鼠体重、胸腺和脾脏重量的影响
孙峻松;罗海吉
【期刊名称】《中国公共卫生学报》
【年(卷),期】1997(16)6
【摘要】初步观察高温下补充精氨酸对小鼠体重、胸腺和脾重量的影响。
实验结
果显示,短时间的热应激对体重影响不大,对胸腺和脾脏可造成急性萎缩;长时间受热(热习服9夭)则对体重和脾脏影响较大,对胸腺绝对重量也有明显影响。
但补充适量精氨酸后,在热应激和热习服过程中,补充组小鼠体重生长率明显高于未补充组;胸腺重量在热习服过程中,补充组明显高于未补充组,脾脏重量4组间无明显差异。
提示高温下补充适量精氨酸对保证体重正常生长,防止免疫器官急性萎缩具有较好作用。
【总页数】2页(P351-352)
【关键词】高温;氨基酸;体重;脏器;胸腺;脾脏
【作者】孙峻松;罗海吉
【作者单位】第一军医大学军队卫生教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R151.1
【相关文献】
1.FTY720与CsA联合应用对小鼠脾脏及胸腺重量的影响 [J], 孙尔维;李留洋;张雷;高伟
2.久泻灵对小鼠胸腺、脾脏重量及单核细胞吞噬功能影响的实验研究 [J], 梁永林;
吴玉泓;殷银霞
3.军蛭煎剂对小鼠胸腺、脾脏重量指数及组织结构影响的实验研究 [J], 梁锐;李俊莲;李艳彦;王永辉;贾志新
4.高温应激下补充L-精氨酸对小鼠免疫功能的影响 [J], 罗海吉;吉雁鸿;张云山;卢晓翠
5.高温下补充精氨酸对小鼠血清氨基酸代谢的影响 [J], 罗海吉;何志谦;邱仞之;孙峻松
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大鼠内生致热原性发热时不同脑区精氨酸加压素和亮氨酸脑咖啡肽含量的变化
大鼠内生致热原性发热时不同脑区精氨酸加压素和亮氨酸脑咖
啡肽含量的变化
李文
【期刊名称】《中国病理生理杂志》
【年(卷),期】1994(000)003
【摘要】无
【总页数】1页(P249)
【作者】李文
【作者单位】无
【正文语种】中文
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1.冰茶栓对骨癌痛大鼠不同脑区亮氨酸脑啡肽和β内腓肽含量的影响 [J], 严继贵;王迎新;杨宇清;蔡晶晶;
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5.戊四氮致癫痫大鼠不同脑区神经肽Y和亮氨酸-脑啡肽的表达及其意义 [J], 陈琅;陈巧彬;邹漳钰;林立芳;沈晓丽;陈新;季晓林
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精氨酸加压素在应激性体温过高中的作用
温过高 的作 用 。 ｌ 材料 与方 法 １ １ 实 验 动 物 与试 剂 ： 验 用 ２月龄 的 Ｓ 大 鼠 ． 实 Ｄ （ 美国 罗利市 Ｃ ａｌｓ ｖ ｒ实验动物 室提 供 ） ＡＶＰ ｈｒ ｅ ｅ Ｒｉ 。 和Ａ ＶＰ Ｖ１阻断剂 为 Ｓｇ 公 司产 品 。 ｉｍａ
ＣＬ ｈ ｍｂ ｒ Ｒ３ ３ ２ ｛ ６ ． Ｃ ｕ ｅ ： ６ ． ７ Ｒ３ ４ ６
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Ａｒ ｉａ Ｄ ０ ３—０ ０ （ ０ ２ ０ ｔ ｌＩ １ ０ ｃ ６ ３ ２ ０ ） ４一Ｏ ０ ２ ７一ｏ ３
实验 已经发现 ， 当移动 动物 、 换动 物笼 及将 调 动物 移入到 新的饲 养环 境 中 ， 甚至 用手触 摸动 物 ． 均
Ａ ｓ ｒ ｃ ： ｊｃｉｅ Ｔｏａ ｓ ｓ ｔ ｅｅｆｃ ｏ ｒ ｉｉｅｖ ｓ ｐ ｅｓｎ ＡＶ ｂ ｔａ ｔ Ｏｂｅ ｔ ： ｓ ｅｓ ｈ ｆ ｔ ｆ ｇｎｎ ａ ｏ ｒ ｓｉ （ Ｐ）ｐ ｐ ｉ ｎ ｓｒｓ —ｉｄ ｃｄ ｈ ｐ ｒ ｖ ｅ ａ ｅ ｔ ｅ ｏ ｔｅｓ ｎ ｕ ｅ ｙ ｅ— ｄ
精氨酸加压素对大鼠下丘脑视前区NMDA受体亚单位表达的影响
第47卷第2期第155页2018年4月 华中科技大学学报(医学版)A c t aM e dU n i vS c iT e c h n o lH u a z h o n gV o l .47 N o .2 P .155A pr . 2018*国家自然科学基金资助项目(N o .31300962);四川省教育厅项目(N o .12Z B 021);四川省卫生厅项目(N o .120492);成都医学院 大学生创新实验计划 项目(C X J S 201406,C X X S 201407)孙燕泥,女,1994年生,医学学士,E -m a i l :583215002@q q.c o m ә通讯作者,C o r r e s p o n d i n g au t h o r ,E -m a i l :y u r e n x i a o 3@n e t e a s e .c o m 精氨酸加压素对大鼠下丘脑视前区NM D A 受体亚单位表达的影响*孙燕泥1, 徐 润1, 游 凡1, 蒋佩文1, 孙 玲1, 王思文2, 杨茜雅2, 唐 瑜2,3ә成都医学院1检验医学院2基础医学院3体温与炎症四川省高校重点实验室,成都 610500摘要:目的 研究精氨酸加压素(a r g i n i n e v a s o p r e s s i n ,A V P )对大鼠下丘脑视前区(p r e o pt i c a r e a ,P O A )N -甲基-D -门冬氨酸(NM D A )受体m R N A 和蛋白质表达的影响㊂方法 腹腔注射A V P 或A V PV 1a 受体抑制剂0.5h 后,采用实时荧光定量逆转录P C R 和W e s t e r nb l o t 技术分析大鼠视前区A V P V 1a 受体㊁NM D A 受体N R 2A ㊁N R 2B ㊁N R 1亚单位m R N A 和蛋白表达的变化㊂结果 与对照组相比,注射A V P 或V 1a 受体抑制剂组大鼠视前区N R 2A ㊁N R 2B 和V 1a 受体m R N A 表达均无显著变化(均P >0.05);A V P 对N R 1m R N A 表达也无影响,但V 1a 受体抑制剂明显降低了N R 1m R N A 表达(P <0.01);A V P 能明显下调视前区NM D A 受体亚单位(N R 2A ㊁N R 2B ㊁N R 1)蛋白水平(均P <0.05),但不影响V 1a 受体蛋白表达(P >0.05)㊂结论 外源性A V P 不影响A V PV 1a 受体的表达,其主要通过抑制NM D A 受体亚单位蛋白质翻译而不是基因转录,减少大鼠视前区NM D A 受体介导的谷氨酸能突触传递㊂关键词:视前区; 精氨酸加压素; V 1a 受体; NM D A 受体中图分类号:R 338.1 D O I :10.3870/j.i s s n .1672-0741.2018.02.006E f f e c t s o fA r g i n i n eV a s o p r e s s i no n t h eE x p r e s s i o no fN M D AR e c e pt o r S u b u n i t s i nP r e o p t i cA r e a o fR a tH y po t h a l a m u s S u nY a n n i ,X uR u n ,Y o uF a n e t a lS c h o o l o f L a b o r a t o r y M e d i c i n e ,C h e n g d uM e d i c a lC o l l e g e ,C h e n gd u 610500,C h i n a A b s t r a c t O b je c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e ef f e c t s o f a rg i n i n ev a s o p r e s s i n (A V P )o n th em R N Aa n d p r o t ei ne x p r e s s i o no fN -m e t h y l -D -a s p a r t a t e (NM D A )r e c e p t o r s u b u n i t s i n t h e p r e o p t i c a r e a (P O A )o f t h e r a t h y p o t h a l a m u s .M e t h o d s A f t e r i n t r a pe r i t o -n e a l i n j e c t i o no fA V Po rA V Pr e c e p t o rV 1a a n t a g o n i s tf o r 0.5h ,t h em R N Aa n d p r o t e i ne x p r e s s i o no fA V Pr e c e pt o rV 1a a n d NM D Ar e c e p t o r s u b u n i t sN R 2A ,N R 2Ba n dN R 1i nP O A w e r ea n a l y z e db y f l u o r e s c e n c e -b a s e dr e v e r s e -t r a n s c r i p t i o nr e a l -t i m e q u a n t i t a t i v eP C R (R T -q P C R )a n d W e s t e r nb l o t t i n g .R e s u l t s T h em R N Ae x p r e s s i o n l e v e l s o fN R 2A ,N R 2Ba n dV 1a r e c e pt o r i n r a t s t r e a t e dw i t hA V Po rV 1a r e c e p t o r a n t a g o n i s tw e r en o t s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t f r o mt h o s e i n c o n t r o l g r o u p (P >0.05).A V P h a dn o s i g n i f i c a n t e f f e c t o n t h e e x p r e s s i o no fN R 1.T h e i n j e c t i o no fV 1a r e c e p t o r a n t a g o n i s t h o w e v e r s i g n i f i c a n t l yl e d t o t h e d e -c r e a s e i n t h eN R 1m R N Al e v e l (P <0.01).A d d i t i o n a l l y ,A V Pc o u l dd o w n -r e g u l a t e t h e p r o t e i n l e v e l o fP O A NM D Ar e c e pt o r s u b u n i t s (N R 2A ,N R 2B ,N R 1)(P <0.05f o r a l l ),b u t i t d i dn o t a f f e c t t h e e x p r e s s i o n o fV 1a r e c e pt o r p r o t e i n (P >0.05).C o n c l u -s i o n E x o g e n o u sA V Ph a s n o s i g n i f i c a n t e f f e c t o n t h em R N Aa n d p r o t e i n e x p r e s s i o no f P O A V 1a r e c e pt o r ;i t i s i n v o l v e d i n t h e i n h i b i t i o no f g l u t a m a t e r g i c s y n a p t i c t r a n s m i s s i o n i n t h eP O Ab y d o w n -r e g u l a t i o no f t h e t r a n s l a t i o no fNM D Ar e c e p t o r p r o t e i n s r a t h e r t h a n g e n e t r a n s c r i pt i o n .K e y wo r d s : p r e o p t i c a r e a ; a r g i n i n e v a s o p r e s s i n ; V 1a r e c e p t o r ; NM D Ar e c e p t o r 下丘脑视前区(p r e o pt i ca r e a ,P O A )分布的温度敏感神经元(热敏神经元和冷敏神经元)通过控制机体产热(棕色脂肪组织产热和战栗产热)和散热(皮肤血管舒缩),参与体温调节[1]㊂精氨酸加压素(a r g i n i n e v a s o pr e s s i n ,A V P )是一种神经肽类物质,具有激素和神经递质/调质的作用[2],由下丘脑视上核和室旁核神经元合成㊂精氨酸加压素不仅是体内一种重要的内源性退热物质,而且参与正常体温调节[3-4]㊂体内外电生理实验证明,精氨酸加压素可兴奋视前区热敏神经元,抑制冷敏神经元的放电活动[5-6],而阻断精氨酸加压素V 1a 受体该作用被抑制[6]㊂冷㊁热刺激视前区和隔区可分别引起血浆中精氨酸加压素浓度明显降低或升高[7-8]㊂内源性精氨酸加压素不仅对正常体温有紧张性负调节作用,而且也参与生理状态下体温昼夜周期性波动的调节过程[4,9]㊂在低温环境中,精氨酸加压素导致大鼠降温反应比在正常温度环境中更明显[10]㊂这些实验说明精氨酸加压素对体温的调节作用与其影响视前区温度敏感神经元的放电活动有关㊂有研究发现视前区温度敏感神经元的活动受突触传入的调制[11-12],形态学和电生理实验证实下丘脑存在局部的谷氨酸能突触环路[13]㊂脑室内给药阻断促离子型谷氨酸受体,可抑制外周注射精氨酸加压素引起的低温反应[14]㊂但是这些研究没有鉴定促离子型谷氨酸受体的类型,而阻断内侧视前区(m e d i a l p r e o p t i c a r e a,M P O)的N-甲基-D-门冬氨酸(N-m e t h y l-D-a s p a r t a t e,NM D A)受体可明显抑制皮肤温度刺激引起的体温调节反应[15],这提示NM-D A受体的激活参与了体温调节㊂精氨酸加压素V1a受体是G蛋白偶联受体,激活P L C-I P3/C a2+和D G/P K C信号通路[16]㊂在海马㊁外侧隔区㊁下丘脑室旁核㊁脑干等部位,精氨酸加压素通过激活V1a 受体抑制谷氨酸能突触传递[2,17],但精氨酸加压素是否影响视前区N M D A受体表达尚不清楚㊂因此,本实验采用荧光定量逆转录P C R和W e s t e r nb l o t研究精氨酸加压素对大鼠视前区V1a受体和N M D A受体亚单位(N R2A㊁N R2B㊁N R1)表达的影响㊂1材料与方法1.1实验动物与分组成年健康雄性S D大鼠,体重200~220g,S P F 级,由成都达硕实验动物有限公司提供㊂将大鼠随机分为4组:对照组(S a l i n e+S a l i n e)㊁A V P组(S a-l i n e+A V P)㊁阻断剂+A V P组(V1aa n t a+A V P)和阻断剂组(V1a a n t a+S a l i n e)㊂实验当天上午10点各组腹腔注射等体积生理盐水(S a l i n e)或V1a受体抑制剂(V1a a n t a,30μg/k g);20m i n后分别注射等体积生理盐水或精氨酸加压素(A V P,10μg/k g),30m i n后取材视前区组织进行分子生物学实验㊂1.2主要试剂和设备精氨酸加压素㊁V1a受体抑制剂㊁焦碳酸二乙酯(D E P C)购自于美国S i g m a公司㊂戊巴比妥钠㊁氯仿㊁异丙醇㊁无水乙醇购自成都科龙化工试剂有限公司㊂R N A L a t e r,T r i z o l由美国I n v i t r o g e n公司生产㊂P r i m e S c r i p t T M R T r e a g e n t K i t㊁F a s t S t a r tE s-s e n t i a l P r o b e sM a s t e r分别购于大连宝生物工程有限公司和R o c h e公司㊂精氨酸加压素V1a受体抗体(s c-18096,S a n t a)㊁NM D A受体N R2A抗体(A G C-002,A l o m o n e)㊁N R2B抗体(A G C-003, A l o m o n e)㊁N R1抗体(a b109182,A b c a m)㊁β-a c t i n 抗体(a b8227,A b c o m)㊁G A P D H抗体(a b181603, A b c o m),辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔I g G(H +L)(a b6721,A b c a m)㊂R I P A裂解液㊁P M S F㊁T E M E D(碧云天生物科技有限公司),P V D F膜㊁H R P化学发光试剂盒(M i l l i p o r e),B C A蛋白含量检测试剂盒(南京凯基),脱脂奶粉(伊利),预染蛋白M a r k e r(T h e r m oF i s h e r)㊂荧光定量P C R仪(C F X M a n a g e r,B i o-R a d),化学发光凝胶成像仪(C h e m i-D o cX R S+,B i o-R a d),微量紫外分光光度计(N a n o-D r o p2000,T h e r m oF i s h e r),酶标仪(B i o t e k),垂直电泳槽(B i o-R a d),优普超纯水制造系统(成都超纯科技有限公司),旋涡混合器(X H-B,江苏康健医疗用品有限公司),电子天平(美国康州H Z电子科技有限公司)㊂1.3探针和引物R T-q P C R使用探针(U P L P r o b e s)选自瑞士R o c h e公司探针库,扩增所需引物为该探针所匹配的特异引物(表1),探针成品购自R o c h e公司,引物由成都梓熙擎科生物技术公司合成㊂表1荧光定量P C R探针及引物序列T a b l e1 P r o b e a n d p r i m e r s e q u e n c e s f o r f l u o r e s c e n t q u a n t i t a t i v eP C R基因名称探针引物序列V1aNM_053019.2#107F:C G C A C T G T G A A G A T G A C C T T T R:T G G A A G G G T T T T C T G A A T C G N R2A NM_012573.3#66F:G G G A A C C C G C T A A A C C T G R:C A T G G T C G C C A C T T A G G G N R2BNM_012574.1#29F:C A T G G T A T C T C G C A G C A A T G R:C A G C G C T G A A T G G C T C T A A N R1NM_017010#69F:G C T T T T G C A G C C G T G A A C R:G G G C T C T G C T C T A C C A C T C T T β-a c t i nNM_031144.3#17F:C C C G C G A G T A C A A C C T T C T R:C G T C A T C C A T A A C G A A C T1.4取材大鼠腹腔注射戊巴比妥钠(40m g/k g)麻醉后,迅速断头取脑,在D E P C处理过的冰P B S液中修块㊂振动切片机切成300μm厚的下丘脑水平片,在体视显微镜下剥离视前区组织,迅速置于R N A-L a t e r中,4ħ过夜后,-20ħ保存备用㊂1.5总R N A提取与鉴定所有耗材均使用0.1%D E P C溶液浸泡处理以去除R N A酶污染㊂参照T r i z o l试剂说明书,取约50m g组织加入1m LT r i z o l研磨直到被充分裂解,㊃651㊃华中科技大学学报(医学版)2018年4月第47卷第2期加入0.2m L氯仿抽提,离心后小心吸取上清,加入等量异丙醇,离心后弃上清得沉淀,加入1m L75%乙醇(D E P C水配制),充分洗涤离心2次后,弃上清,室温干燥,用20μL无R N A酶水溶解,微量紫外分光光度计测定R N A浓度及纯度,A260n m/A280n m =1.8~2.0㊂立即进行琼脂糖凝胶电泳检测R N A 完整性,可见明亮的28S㊁18S及较淡5S3条带,无D N A污染条带,说明R N A质量良好,可进行后续操作㊂1.6c D N A的制备参照T a K a R a反转录试剂盒说明书,冰上操作㊂首先去基因组D N A,反应体系为:5ˑg D N A E r a s e r B u f f e r2μL,g D N A E r a s e r1μL,总R N A2μg,加无R N A酶水至总体系为10μL,混匀离心后转至P C R仪,42ħ孵育2m i n㊂然后在体系内加入10μL 的逆转录预混液,该预混液含:P r i m e S c r i p tR T E n-z y m eM i xⅠ1μL,R TP r i m e rM i x4μL,5ˑP r i m e-S c r i p tB u f f e r24μL,R N a s eF r e ed H2O1μL㊂混匀离心后在P C R仪反应:37ħ15m i n,85ħ5s,然后立即降温到4ħ,维持5m i n㊂逆转录所得c D N A 储存于-20ħ备用㊂1.7实时荧光定量P C R配置预混液比例为每10μL反应体系:F a s t-S t a r tE s s e n t i a lP r o b e s M a s t e r5μL,引物(F/R)及探针各0.15μL(10μm o l/L),R N a s eF r e ed H2O1μL,涡旋混匀后分装于8联管,加入2μLc D N A模板,再次混匀离心后上机㊂扩增条件:95ħ预变性10 m i n;然后95ħ10s,60ħ30s,读取荧光值,循环45次;最后40ħ延伸30s㊂反应结束后,以β-a c t i n的C t 值为内参,使用2-ΔΔC t法计算各组m R N A相对量㊂1.8蛋白印迹实验按照组织与裂解液(R I P AʒP M S F=100ʒ1)1 g/5m L的比例,冰上裂解组织30m i n㊂离心后取上清至新的预冷E P管,并按1ʒ20稀释㊂严格按照B C A蛋白定量试剂盒说明书稀释标准蛋白和配制B C A工作试剂(A液ʒB液=50ʒ1)并完成蛋白定量㊂P S D中加入4ˑ样品缓冲液,煮沸5m i n,取100μg蛋白上样,用8%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白并转至经甲醇活化的P V D F 膜㊂5%脱脂奶粉37ħ恒温振荡封闭1h,T B S T漂洗后,将P V D F膜放入5%脱脂奶粉稀释的一抗(V1a,1ʒ200;N R2A,1ʒ400;N R2B,1ʒ400;G A P D H,1ʒ5000;β-a c t i n,1ʒ5000)中,水平摇床4ħ孵育过夜㊂T B S T再次漂洗,用经5%脱脂奶粉稀释过的辣根过氧化物酶标记二抗(1ʒ5000)37ħ恒温孵育2h,T B S T漂洗后滴上发光液(A液ʒB 液=1ʒ1),放入凝胶成像仪中显影㊂用凝胶图像分析成像系统进行扫描分析,结果以目的蛋白相对表达量表示㊂目的蛋白相对表达量=目的蛋白积分光密度值(I O D)/内参积分光密度值(I O D)㊂1.9统计学分析采用S P S S17.0统计软件进行统计分析㊂数据以 xʃs表示,多样本均数间比较采用O n e-W a y A N O V A检验,方差齐则采用D u n n e t t t检验,方差不齐则采用T a m h a n e sT2检验,检验结果以P< 0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1精氨酸加压素不影响大鼠视前区A V P V1a受体的表达与对照组(S a l i n e+S a l i n e)相比,腹腔注射外源性精氨酸加压素,使大鼠视前区A V P V1a受体m R N A的表达从(1.000ʃ0.452)上调到(1.211ʃ0.377),但此差异并无统计学意义(P>0.05,n= 8);而注射V1a受体抑制剂阻断内源性精氨酸加压素也没有影响V1a受体m R N A表达(图1A)㊂与m R N A表达结果类似,无论是注射外源性精氨酸加压素还是阻断内源性精氨酸加压素,都不影响视前区A V PV1a受体蛋白表达(P>0.05,n=6,图1B㊁C)㊂2.2精氨酸加压素对大鼠视前区N M D A受体亚单位表达的影响如图2A所示,腹腔注射精氨酸加压素的大鼠,其视前区NM D A受体N R2A,N R2B和N R1亚单位m R N A表达量分别由(1.000ʃ0.256)㊁(1.000ʃ0.162)㊁(1.000ʃ0.138)增加到(1.569ʃ0.437)㊁(1.472ʃ0.168)㊁(1.105ʃ0.084),虽然有表达上调趋势,但与对照组的差异无统计学意义(均P>0.05,n=8);同时给予精氨酸加压素和V1a受体抑制剂,NM D A受体N R2A,N R2B亚单位m R N A表达分别升高到(1.807ʃ0.746)㊁(1.713ʃ0.638),与对照组比较,仍无统计学差异(均P>0.05,n=8);有趣的是单独使用V1a受体抑制剂处理,视前区N R1m R N A表达量减少到(0.220ʃ0.023),而给予外源性精氨酸加压素也没有减弱V1a受体抑制剂下调N R1m R N A表达的作用(0.210ʃ0.011),这两组大鼠视前区N R1m R-N A表达量与对照组相比明显降低(均P<0.01,n =8)㊂这些结果说明腹腔注射外源性精氨酸加压素不影响大鼠视前区NM D A受体N R2A㊁N R2B㊁N R1亚单位基因表达,但阻断内源性精氨酸加压㊃751㊃孙燕泥等.精氨酸加压素对大鼠下丘脑视前区NM D A受体亚单位表达的影响素,明显抑制了N R 1的基因表达,且这一作用不能被外源性精氨酸加压素所消除或反转㊂A :视前区A V PV 1a 受体m R N A 表达;B :W e s t e r nb l o t 检测大鼠视前区A V P V 1a 受体蛋白表达的代表条带,G A P D H 为内参蛋白;C :大鼠视前区A V PV 1a 受体蛋白表达统计图图1 精氨酸加压素对大鼠视前区A V PV 1a 受体m R N A 和蛋白表达的影响F i g.1E f f e c t o f a r g i n i n e v a s o p r e s s i no n t h em R N Aa n d p r o t e i ne x p r e s s i o no fA V Pr e c e p t o rV 1a i n r a t p r e o p t i c a r e a 在蛋白表达水平(图2B ㊁C ),与对照组(1.010ʃ0.079)相比,腹腔注射精氨酸加压素显著降低了大鼠视前区NM D A 受体N R 2A 亚单位的表达[(0.644ʃ0.119),P <0.01,n =6],N R 2B 和N R 1蛋白表达量分别由(1.024ʃ0.059)㊁(0.982ʃ0.065)下降到(0.539ʃ0.213)㊁(0.604ʃ0.176),这一蛋白表达变化具有统计学意义(均P <0.05,n =6)㊂预先注射V 1a 受体抑制剂再给予精氨酸加压素处理,虽然一定程度减弱了精氨酸加压素下调N R 2A ㊁N R 2B 和N R 1表达的作用,但其表达量仍均低于对照组,且差异具有统计学意义(均P <0.05,n =6)㊂而相较于对照组,仅给予V 1a 受体抑制剂的大鼠,其视前区NM D A 受体3个亚单位蛋白表达量均未出现明显变化(均P >0.05,n =6)㊂这些结果提示腹腔注射外源性精氨酸加压素可以下调大鼠视前区NM D A 受体N R 2A ,N R 2B 和N R 1的蛋白表达,这一作用不能被精氨酸加压素V 1a 受体抑制剂阻断㊂A :视前区NM D A 受体亚单位N R 2A ㊁N R 2B ㊁N R 1m R N A 表达;B :W e s t e r nb l o t 检测大鼠视前区NM D A 受体亚单位N R 2A ㊁N R 2B ㊁N R 1蛋白表达的代表条带,β-a c t i n 为内参蛋白;C :大鼠视前区NM D A 受体亚单位N R 2A ㊁N R 2B ㊁N R 1蛋白表达统计图;与对照组(S a l i n e +S a l i n e )比较,*P <0.05**P <0.01图2 精氨酸加压素对大鼠视前区NM D A 受体亚单位m R N A 和蛋白表达的影响F i g.2E f f e c t o f a r g i n i n e v a s o p r e s s i no n t h em R N Aa n d p r o t e i ne x p r e s s i o no fNM D Ar e c e p t o r s u b u n i t s i n r a t p r e o p t i c a r e a 3 讨论众所周知,下丘脑视前区作为控制体温的中枢重要部位,参与了机体维持体温恒定的调节活动㊂视前区温度敏感神经元的放电活动可以控制机体的产热(冷敏神经元兴奋)和散热(热敏神经元兴奋),而温度敏感神经元又可以感受局部和外周传入的温度信号,所以温度敏感神经元的放电活动可以受到突触传入信号的调制[1,11]㊂这提示突触传入可以通过影响视前区温度敏感神经元的放电活动,参与体温调节㊂研究发现皮肤温度热信号经脊髓上传到下丘脑正中视前核的谷氨酸能中间神经元,然后传入㊃851㊃华中科技大学学报(医学版) 2018年4月第47卷第2期到内侧视前区[11,15,18-19]㊂视前区热敏神经元接受正中视前核的谷氨酸能突触传入后,释放G A B A激活附近冷敏神经元上的G A B A A受体,直接抑制其活动,使得视前区热敏神经元兴奋,冷敏神经元抑制引起机体热防御反应(散热大于产热)[1,11,15,18-19]㊂这提示影响视前区温度敏感神经元活动的突触传入可能与激活NM D A㊁AM P A和G A B A A受体有关㊂谷氨酸作为一种中枢重要的兴奋性神经递质参与了体温调节反应[14,20-21],其促离子型受体类型包括NM-D A和AM P A㊂NM D A受体广泛分布在神经元突触后膜,激活后引起快兴奋性突触传递,其介导的电流构成了兴奋性突触后电流的主要成分[22]㊂当阻断中枢促离子型谷氨酸受体而不是促代谢型受体功能后,腹腔注射精氨酸加压素引起的大鼠低温反应消失[14],这说明外周注射精氨酸加压素引起的低温反应与中枢谷氨酸促离子型受体的激活密切相关㊂NM D A受体是重要的谷氨酸促离子型受体,包括N R1㊁N R2和N R3三个亚单位,分别由G R I N1㊁G R I N2A-D㊁G R I N3A-B基因编码[23]㊂作为异四聚体离子通道,NM D A受体一般由2个N R2亚单位和2个N R1亚单位构成㊂其中N R2亚单位是结构亚单位,在中枢神经系统最常见的是N R2A和N R2B的组合;N R1亚单位是NM D A受体的功能亚单位,对于维持离子通道的功能至关重要,N R1亚单位的缺失可导致NM D A受体功能消失[24]㊂所以本研究主要关注精氨酸加压素对NM D A受体结构亚单位N R2A㊁N R2B和功能亚单位N R1表达的作用㊂有研究认为精氨酸加压素的降温作用与其收缩外周血管,升高血压,从而通过窦弓反射抑制支配棕色脂肪组织的交感神经放电,减少产热有关[25-26]㊂但我们实验室最近整体动物实验发现,大鼠在腹腔注射精氨酸加压素0.5h后出现低温反应,且去除大鼠颈动脉窦以后,并没有完全消除精氨酸加压素引起的降温作用和交感神经放电减少[24]㊂而阻断中枢谷氨酸NM D A受体功能后,可以抑制腹腔注射精氨酸加压素引起的大鼠低温反应[14]㊂虽然没有精氨酸加压素可以通过血脑屏障的直接证据,但是上述实验结果提示腹腔注射精氨酸加压素可以通过中枢作用影响体温调节㊂因此,我们选择腹腔注射精氨酸加压素30m i n后取材,在基因和蛋白水平检测精氨酸加压素对大鼠视前区NM D A受体N R2A㊁N R2B㊁N R1表达的影响㊂实验结果显示,外源性精氨酸加压素不影响NM D A受体结构亚单位N R2A㊁N R2B基因表达,但结构亚单位的蛋白表达,明显被精氨酸加压素所抑制㊂这可能是由于精氨酸加压素使蛋白质翻译效率降低导致m R N A堆积㊂对于NM D A受体的功能亚单位N R1,外源性精氨酸加压素没有影响其m R N A的表达,但是明显抑制了N R1的蛋白表达㊂所以外源性精氨酸加压素对大鼠视前区NM D A受体N R2A㊁N R2B㊁N R1 m R N A的表达没有影响,但是却能明显减少各亚单位蛋白表达㊂由于视前区是体温调节的重要中枢,因此我们推测精氨酸加压素可能通过减少视前区神经元翻译NM D A受体N R2A㊁N R2B㊁N R1亚单位,使其离子通道蛋白表达量降低,抑制谷氨酸能突触传递,从而影响视前区温度敏感神经元的放电活动,参与调节体温㊂精氨酸加压素受体包括V1a,V1b和V2三类,都属于G蛋白偶联受体,在下丘脑主要分布的是V1a受体[16]㊂V1a受体抑制剂不但可以阻断内源性精氨酸加压素升高体温,而且可以消除外源性精氨酸加压素引起的大鼠低温反应[4-5,9]㊂电生理实验证明V1a受体抑制剂可以消除外源性精氨酸加压素对视前区神经元放电活动的影响[6]㊂这些实验说明精氨酸加压素对体温的调节作用与V1a受体激活有关㊂精氨酸加压素结合V1a受体激活P L C-I P3/C a2+和D G/P K C信号通路,引起胞内转录信号或者翻译信号,控制基因或蛋白表达[16]㊂在海马㊁外侧隔区㊁下丘脑室旁核㊁脑干等部位,精氨酸加压素通过激活V1a受体,易化G A B A能突触传递,而抑制谷氨酸能突触传递[2,13]㊂本研究结果显示无论是外源性精氨酸加压素还是阻断内源性精氨酸加压素,均不影响视前区V1a受体的基因和蛋白表达㊂这提示NM D A受体亚单位表达的变化不是精氨酸加压素V1a受体表达变化所致㊂但奇怪的是V1a 受体抑制剂预处理,并没有完全阻断外源性精氨酸加压素引起的N R2A㊁N R2B㊁N R1蛋白表达的减少㊂这可能与V1a受体抑制剂无法通过血脑屏障,阻断脑内精氨酸加压素的作用有关㊂因此,下一步研究应该考虑侧脑室注射精氨酸加压素和V1a受体抑制剂㊂注射V1a受体抑制剂阻断内源性精氨酸加压素的大鼠,无论有没有再给予外源性精氨酸加压素,其N R1的m R N A表达均显著下调,而N R2A和N R2B与对照组比较没有明显变化㊂有报道当阻断海马神经胶质细胞NM D A受体时, N R1亚单位的m R N A表达会出现明显下调[23]㊂我们推测精氨酸加压素可能会引起突触前谷氨酸释放增多,V1a受体抑制剂消除这一作用,间接阻断了NM D A受体,从而使得细胞减少了N R1的转录㊂㊃951㊃孙燕泥等.精氨酸加压素对大鼠下丘脑视前区NM D A受体亚单位表达的影响同时精氨酸加压素也可能会引起谷氨酸释放增多,导致负反馈调节NM D A受体表达减少,但其具体机制还有待进一步研究证实㊂综上所述,精氨酸加压素不影响大鼠视前区V1a受体的表达,其主要通过抑制NM D A受体N R2A,N R2B和N R1亚单位的蛋白表达而不是基因转录,从而减少大鼠视前区NM D A受体介导的谷氨酸能突触传递㊂这种对NM D A受体亚单位表达的调节作用,从突触传递角度,为在整体动物实验上观察到的精氨酸加压素对体温的调节作用,提供了一种可能的中枢机制㊂参考文献[1] B o u l a n t JA.N e u r o n a l b a s i s o fH a m m e l sm o d e l f o r s e t-p o i n tt h e r m o r e g u l a t i o n[J].J A p p lP h y s i o 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内源性精氨酸加压素在索曼引起的大鼠体温降低中的作用
内源性精氨酸加压素在索曼引起的大鼠体温降低中的作用杨永录;刘丽华;张影【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2003(019)002【摘要】目的:探讨内源性精氨酸加压素是否参与索曼引起的降温过程.方法:用数字体温计测量大鼠的体温,每次间隔60 min,观察了腹腔注射AVP V1受体阻断剂(30 μg/kg)对皮下注射索曼(60 μg/kg)引起大鼠降温效应的影响,以及给索曼后2 h血浆中AVP含量的变化.结果:给索曼后可引起明显的体温降低,在给药后7 h体温恢复到基线水平.AVP V1受体阻断剂能明显阻断索曼的降温效应.在给索曼后2 h血浆中AVP浓度明显提高.结论:实验结果证明内源性AVP参与索曼引起的降温过程.【总页数】4页(P240-243)【作者】杨永录;刘丽华;张影【作者单位】解放军兰州医学专科学校,甘肃,兰州,730020;兰州军区总医院,甘肃,兰州,730050;解放军兰州医学专科学校,甘肃,兰州,730020【正文语种】中文【中图分类】R364.6【相关文献】1.内源性精氨酸加压素在昼光期大鼠紧张性体温调节中的作用 [J], 杨永录;赖雁;唐瑜;孟立;林友胜2.氧化震颤素在精氨酸加压素引起大鼠低温中的作用与对行为性体温调节反应的影响 [J], 沈字玲;杨永录;孙兵;唐瑜;王念3.内源性精氨酸加压素在体温昼夜节律中的作用与性别差异 [J], 杨永录;沈字玲;王念;唐瑜;呼海燕;孟立4.内源性精氨酸加压素在毒扁豆碱引起大鼠低温反应中作用 [J], 杨永录;李晓明;孟立;粟颍5.中枢精氨酸加压素在大鼠促肾上腺皮质激素释放激素引起发热机制中的作用(英文) [J], 王华东;王彦平;胡巢凤;戚仁斌;严玉霞;陆大祥;李楚杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。