系统性红斑狼疮中医证型与Ag-NORs和CD8 +调节性T细胞亚群的关系

．．临床研究　系统性红斑狼疮中医证型与Ａｇ—ＮＯＲｓ和ＣＤ８＋　调节性Ｔ细胞亚群的关系　

朱云利１李娟２　（１．南方医科大学，广东广州５１０５１５；２．南方医院，广东广州５１０５１５）　

摘　要　目的：探讨系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）中医辨证分型与外周血Ｔ淋巴细胞核仁组成区嗜银蛋白（Ａｇ－ＮＯＲｓ）含量　和ＣＤ８＋ＣＤ２８一、ＣＤ８＋ＣＤ２８￣细胞亚群的相关性。方法：采用银染技术和流式细胞术，分别对２４例热毒炽盛型、１６例肝肾阴　虚型ＳＬＥ患者和２０例健康者的外周血Ｔ淋巴细胞Ａｇ—ＮＯＲｓ含量和ＣＤ８＋ＣＤ２８一、ＣＤ８　Ｄ２８＋Ｔ细胞亚群比例进行测定。结　果：与健康对照组比较，ＳＬＥ两证型组患者ＣＤ８　Ｄ２８一及ＣＤ８＋ＣＤ２８７ＣＤ８＋ＣＤ２８＋比值升高，ＣＤ８　Ｄ２８＂￣例下降，差异有显　著性意义；与肝肾阴虚组比较，热毒炽盛组患者Ａｇ—ＮＯＲｓ含量升高，ＣＤ８＋ＣＤ２８一、ＣＤ８　Ｄ２８＋比例降低，差异有显著性意义。　经直线相关性分析，Ａｇ－ＮＯＲｓ与ＣＤ８＋ＣＤ２８一、ＣＤ８　ＣＤ２８＋之间无相关性。结论：外周血Ｔ淋巴细胞Ａｇ－ＮＯＲｓ含量、ＣＤ８＋调　节性Ｔ细胞亚群的改变与ＳＬＥ中医证型具有一定相关性．可作为ＳＬＥ中医辨证分型的客观化指标　关键词　系统性红斑狼疮　中医证型Ａｇ－ＮＯＲｓ　ＣＤ８＋调节性Ｔ细胞亚群　中图分类号Ｒ５９３．２４１．０４　文献标识码　Ａ　文章编号　１６７２－３９７Ｘ（２００８）０３－００３８—０３　

目前有关系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）中医证型的客　观化、标准化研究已有众多报道．不少学者业已证实　ＳＬＥ各证型确有其客观的物质基础　但ＳＬＥ中医分　型与核仁组成区嗜银蛋白（Ａｇ—ＮＯＲｓ）和ＣＤ８　调节　性Ｔ细胞（ＣＤ８ＣＦ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　ｌｙｒｅｐｈｏｃｙｔｅｓ．ＣＤ８￣Ｆｓ）之　间的相关性分析则尚未见报道　本研究以不同中医　证型外周血Ｔ淋巴细胞Ａｇ—ＮＯＲｓ含量和ＣＤ８＋　ＣＤ２８一、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋Ｔ细胞亚群比例作为观察指标．　研究其与ＳＬＥ辨证分型的关系．为指导中医辨证施　治提供临床研究基础　１　临床资料　ｌ。ｌ研究对象全部病例来自２００７年２月至２００７　年１０月期间南方医院中医风湿科门诊及病房．共４０　例．均符合１９８２年美国风湿病学会修订的ＳＬＥ分类　标准。其中女性３８例．男性２例：年龄１３～７６岁．中　位年龄３２．７３岁：病程２个月～２０年．中位病程４．６５　年。健康对照组２０例全部为门诊健康体检者．其中　女性１９例．男性１例．中位年龄３０．９５岁　１．２　中医辨证标准　参照卫生部颁布的ＳＬＥ分型　诊断标准以及《中药新药临床研究指导原则》『Ｉ－２】。热　毒炽盛型：高热烦躁．面部蝶形红斑，皮肤紫斑，关节　肌肉酸痛，大便干结．小便短赤，舌红苔黄．脉洪或滑　数或弦数。肝肾阴虚型：头晕目眩，目睛干涩，肢麻或　肌肉掣动，腰膝酸软．梦遗或月经量少，五心烦热，低　热盗汗，舌红少苔．脉细数。以上各证型指标符合５　项以上即可辨证．每位患者的辨证均经两名职称为　目　！　竺　塑　中医茄　主治以上的医生确认。共收集热毒炽盛型２４例．肝　肾阴虚型１６例。２组患者在年龄、病程方面无显著性　差异（Ｐ＞０．０５）。　２研究方法　２．１试剂与器材ＫＬ型肿瘤免疫图像分析系统．北　京健尔康医疗设备有限公司生产　培养液（内含植物　血凝素ＰＨＡ）、低渗液、固定液、银染液。大鼠同型　ＩｇＧ１一ＦＩＴＣ、ＩｇＧ１一ＰＥ试剂与大鼠抗小鼠ＣＤ２８一　ＦＩＴＣ、ＣＤ８一ＰＥ试剂均为美国Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ公司产品：临　床型流式细胞仪为美国ＢＤ公司生产的Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ　ＦＡＣＳＣａｌｉｈｕｒ。　２－２　Ａｇ－ＮＯＲｓ检测　在无菌条件下取外周静脉血　０．５ｍＬ加入培养液中．放置３７℃恒温箱中孵育７２ｈ．　分离淋巴细胞．制片．银染．按林其燧等［３１的方法进行　涂片染色．用ＫＬ型免疫图像分析系统程序．计数３０　个Ｔ淋巴细胞银染核仁灰度面积与细胞核灰度面积　比值（Ｉ．Ｓ％）。　２．３　ＣＤ８＋调节性Ｔ细胞亚群的检测　取全血８０１ｘＬ　加入相应的荧光标记单抗１０　Ｌ，轻轻混匀，室温避　光２０ｍｉｎ；加入溶血液２ｍＬ混匀，室温避光１０ｍｉｎ，　１０００转离心５ｍｉｎ，弃上清：沉淀用２ｍＬ　ＰＢＳ重悬混　匀，１０００转离心５ｍｉｎ，弃上清：加入１％多聚甲醛　０．５ｍＬ，上机进行淋巴细胞表型测定　２ｌ４统计学处理全部数据以（　）表示．采用方差　分析，组间比较采用口检验，并进行直线相关分析，　所有统计采用ＳＰＳＳ　１１．５软件进行　

维普资讯 http://www.cqvip.com ３研究结果　３．１　各组Ａｇ—ＮＯＲｓ含量和ＣＤ８　ＣＤ２８、ＣＤ８　ＣＤ２８　比例比较见表１　从表１可知．与健康对照组比较．　ＳＬＥ两证型患者ＣＤ８　ＣＤ２８一及ＣＤ８　ＣＤ２８　７ＣＤ８　ＣＤ２８＋比值升高．ＣＤ８＋ＣＤ２８＋比例下降．差异有显著性　意义（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）：与肝肾阴虚组比较．热毒炽　盛组患者Ａｇ—ＮＯＲｓ含量升高，ＣＤ８＋ＣＤ２８一、ＣＤ８　ＣＤ２８＋比例降低．差异有显著性意义（Ｐ＜０．０５）　３．２　Ａｇ—ＮＯＲｓ与ＣＤ８　ＣＤ２８一、ＣＤ８　ＣＤ２８　之间的相　关性我们经线性相关Ｐｅａｒｍａｌｌ检验．Ａｇ—ＮＯＲｓ与　ＣＤ８＋ＣＤ２８一、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋之间的相关系数ｒ和Ｐ值分　别为一０．５３９、０．０７１，一０．５６、０．０５８，显示均无相关性。　临床研究　导致毒邪内蕴于脏腑经络．血脉瘀滞而发病．故本病　的病机为本虚标实　临床上热毒炽盛和肝肾阴虚为　两个常见证型．热毒为ＳＬＥ急性活动期的主因．阴虚　是疾病缓解期的重要病机　本研究结果显示．热毒炽盛型患者Ａｇ—ＮＯＲｓ含　量水平显著高于肝肾阴虚型，肝肾阴虚型患者Ａｇ—　ＮＯＲｓ含量接近健康人　Ａｇ－ＮＯＲｓ的活性可以反映　Ｔ细胞的功能和机体的免疫状态．提示ＳＬＥ热毒炽　盛型患者Ｔ淋巴细胞增生活跃．免疫活性亢进：肝肾　阴虚型患者Ｔ淋巴细胞增生减退．免疫功能恢复正　常。　在免疫抑制性调节细胞的比较中．与健康对照　

表１　各组ＣＤ８　ＣＤ２８，ＣＤ８　ＣＤ２８　比例和Ａｇ—ＮＯＲｓ含量比较（；　）　

注：与健康对照组比较，　Ｐ＜０．０５，　Ｐ＜０．０１；与肝肾阴虚组比较，ＡＰ＜０．０５。　４讨论　４．１　Ａｇ—ＮＯＲｓ及ＣＤ８ｑ＇ｓ与ＳＬＥ的关系　ＳＬＥ是一　种多系统、多器官组织损害的自身免疫性疾病．免疫　功能紊乱的广泛程度覆盖整个免疫系统．细胞免疫　异常是发病机制中的主要环节．尤其是Ｔ淋巴细胞　质和量的变化在ＳＬＥ发病中的作用十分重要　Ｔ淋　巴细胞是机体的主要免疫活性细胞．细胞核糖体　ＲＮＡ基因家族（ｒＤＮＡ）的转录活性水平．标志着Ｔ细　胞的免疫活性　Ａｇ—ＮＯＲｓ本质为ＲＮＡ聚合酶的亚　单位．是ｒＤＮＡ转录的调节蛋白质　Ａｇ—ＮＯＲｓ的含　量可以反映ｒＤＮＡ转录活性的高低．因而可以反映Ｔ　细胞的免疫活性状态　Ａｇ－ＮＯＲｓ早期的研究主要集　中于肿瘤病人的检测上．探讨外周血Ｔ淋巴细胞　ｒＤＮＡ转录活性在自身免疫病中的应用价值．是一个　新的视角。　免疫抑制性调节细胞是近年来发现的一类重要　的调节细胞．它们在自身免疫疾病的免疫抑制调控　中发挥着重要作用　ＣＤ８　是一种抑制性免疫调节　细胞．其表型特征为ＣＤ８＋ＣＤ２８～．具有短的端粒，是一　种终末细胞．主要发挥抑制作用．能直接作用于树突　状细胞（ＡＰＣ），引起ＡＰＣ表面协同刺激分子的下调：　也能通过细胞因子ＩＦＮ一－７、ＩＬ一６发挥其抑制作用＿５］　Ｍ０ｉｔｅｎｉ等同的研究证实了激活的ＣＤ８ｑ＇ｓ可以降低免　疫细胞的反应性．诱导免疫耐受　４．２　Ａｇ—ＮＯＲｓ及ＣＤ８ｑ＇ｓ与ＳＬＥ中医证型的关系　ＳＬＥ可归属于中医学“阴阳毒”、“温毒发斑”等范畴　本病的病因为毒邪入侵，正气不足．阴阳气血失调，　

组比较．ＳＬＥ两证型患者ＣＤ８＋　ＣＤ２８一及ＣＤ８　ＣＤ２８一／ＣＤ８　ＣＤ２８　比值升高．ＣＤ８＋ＣＤ２８＋比例下　降．说明了狼疮患者体内存在　ＣＤ８＋Ｔｓ亚群比例失常．我们的　研究结果与沈敏宁等ｌ　７＿的报道　一致　ＣＤ８＋ＣＤ２８一主要参与免疫　调节和反馈抑制功能．ＣＤ８＋　ＣＤ２８＋主要执行细胞毒作用　在ＣＤ８＋ＣＤ２８　Ｔ细胞　比较中．热毒炽盛组和肝肾阴虚组均比健康对照　组升高．但肝肾阴虚组升高幅度大．提示随着ＳＬＥ　的病情活动．ＣＤ８＋ＣＤ２８一Ｔ细胞比例升高，因为活　动期患者体内可溶性分子（ＩＬ—ｌ２、ＩＬ一６）分泌失衡，　ＣＤ８＋Ｔｓ失去抑制活性，所以疾病仍呈失衡状态＿８］：　随着ＣＤ８＋ＣＤ２８一Ｔ细胞的持续升高．ＣＤ８＋Ｔｓ抑制　活性恢复和增强．ＳＬＥ病情逐渐缓解　在ＣＤ８＋　ＣＤ２８＋Ｔ细胞比较中．热毒炽盛组比健康对照组下　降．肝肾阴虚组接近正常．提示了ＳＬＥ活动期伴有　ＣＤ８＋ＣＤ２８＋效应性Ｔ细胞减少．这可能与大量自身　抗体消耗．ＣＤ２８＋Ｔ细胞过度活化后引起其凋亡异　常和迁移到局部病损有关＿９】　我们推测这也可能是　ＳＬＥ抗感染、抗肿瘤免疫功能降低的原因之一　而　肝肾阴虚组ＣＤ８＋ＣＤ２８＋比例恢复．说明疾病的缓解　也与ＣＤ８＋ＣＤ２８＋Ｔ细胞的修复、免疫功能的增强　有关。　另外，经线性相关ＰｅａｒｌＴｌａＨ检验，Ａｇ—ＮＯＲｓ与　ＣＤ８＋ＣＤ２８、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋之间无相关性。Ａｇ—ＮＯＲｓ检　测的是Ｔ细胞的增殖活性．而ＣＤ８＋ＣＤ２８一、ＣＤ８　ＣＤ２８＋检测的是Ｔ淋巴细胞亚群的分群计数．二者从　不同方面反映机体的细胞免疫功能　虽然上述两种　指标的相关性不明显．但不同证型即不同病变程度　和阶段两种指标水平各不相同．说明不同证型的病　变物质基础存在差异．提示外周血Ｔ细胞Ａｇ—ＮＯＲｓ　含量、ＣＤ８ｑ＇ｓ亚群与中医证型存在一定相关性，可作　为ＳＬＥ中医辨证分型的客观化指标　

中医；ｉ５　竺苎竺！　图　

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