黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定.
黄连中盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性研究
黄连中盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性研究一、引言黄连（Coptis chinensis Franch）是一种广泛分布在中国东南部的常见中药材，具有清热燥湿、泻火解毒的功效。
其中盐酸小檗碱是黄连的主要有效成分之一，具有抗菌、抗炎、抗肿瘤等多种药理活性。
对盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性的研究具有重要的理论和应用意义。
二、盐酸小檗碱的提取纯化1. 提取盐酸小檗碱的提取通常采用乙醇提取法，即将黄连粉碎后，用乙醇浸泡，反复浸泡、过滤，收集提取液，然后蒸发乙醇，得到黄连提取物。
2. 分离黄连提取物中含有多种成分，因此需要进一步分离得到纯化的盐酸小檗碱。
常用的方法包括硅胶柱层析、凝胶层析、反相层析等。
硅胶柱层析是一种简便有效的方法，通过不同成分在硅胶上的吸附力不同，实现了盐酸小檗碱和其他成分的分离。
3. 结晶得到纯化的盐酸小檗碱后，通过结晶、结晶重结晶等方法，可得到更纯净的盐酸小檗碱，提高药效。
三、盐酸小檗碱的抑菌活性研究1. 实验方法采用平板法测定不同浓度盐酸小檗碱对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的抑菌活性。
将分别制备不同浓度的盐酸小檗碱溶液加入琼脂平板，接种相应的细菌或真菌，培养一段时间后观察对菌落的影响。
2. 结果实验结果表明，盐酸小檗碱对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌均具有较强的抑菌活性。
随着盐酸小檗碱浓度的增加，抑菌效果也随之增强。
3. 分析盐酸小檗碱具有明显的抗菌活性，对多种细菌和真菌均具有一定的抑制作用。
这为其在临床上的应用提供了有力的依据，表明其具有广泛的抗菌潜力。
四、结论通过对黄连中盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性的研究发现，盐酸小檗碱具有显著的抑菌活性，并且其纯化技术相对简便有效。
这为盐酸小檗碱的临床应用提供了重要的理论和实验基础。
由于盐酸小檗碱的毒性较大，临床上仍需要更多的研究来确定其剂量和安全性，以实现更好的药用价值。
希望未来能有更多的研究对盐酸小檗碱的活性、毒性、药代动力学等方面进行深入探讨，为其临床应用提供更加可靠的依据。
黄连中盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性研究
黄连中盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性研究
摘要：黄连是一种广泛应用于中药和食品添加剂的植物材料，其主要活性成分之一为
盐酸小檗碱。
本研究旨在通过提取和纯化的方法获得高纯度的盐酸小檗碱，并对其抑菌活
性进行研究。
实验结果表明，通过硅胶柱层析法可以达到较高的纯化效果，所得盐酸小檗
碱的纯度超过98%。
进一步的抑菌活性研究表明，盐酸小檗碱对多种细菌具有较强的抑制
作用，尤其对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制效果最明显。
方法：采集新鲜的黄连植株，将其晒干并粉碎。
然后，采用乙醇提取法提取黄连中的
活性成分。
提取液经过浓缩后，使用硅胶柱层析法进行纯化，以获得高纯度的盐酸小檗碱。
通过红外光谱和高效液相色谱分析对提取物和纯化后的产物进行鉴定和分析。
采用平板法
和微量稀释法研究盐酸小檗碱的抑菌活性。
结论：本研究通过提取和纯化的方法成功获得高纯度的盐酸小檗碱，并对其抑菌活性
进行了研究。
结果表明盐酸小檗碱对多种细菌具有较强的抑制作用。
这为进一步开发和利
用盐酸小檗碱作为抗菌药物提供了重要的理论和实践基础。
黄连中盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性研究
黄连中盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性研究摘要黄连是一种常用的中药材，具有抗菌作用。
其中的盐酸小檗碱是其主要活性成分之一，具有广谱抑菌活性。
本研究旨在提取纯化黄连中的盐酸小檗碱，并探究其抑菌活性。
采用超声波提取法提取黄连中的活性成分，然后使用TLC和HPLC对提取物进行纯化。
通过红外光谱（IR）和质谱（MS）对纯化产物进行鉴定。
采用平板扩散法和微量平板法对盐酸小檗碱的抑菌活性进行评价。
实验结果表明，超声波提取法对黄连中的盐酸小檗碱具有高效的提取效果，提取物中的盐酸小檗碱含量较高。
TLC和HPLC纯化方法能够有效去除提取物中的杂质，提高盐酸小檗碱的纯度。
红外光谱和质谱结果表明，通过超声波提取和纯化得到的产物确实为盐酸小檗碱。
抑菌实验结果显示，盐酸小檗碱对多种常见病原菌具有一定的抑制效果，其抗菌活性与目前常用的抗菌药物相当。
本研究成功提取纯化了黄连中的盐酸小檗碱，并证明其具有一定的抑菌活性。
这为开发利用盐酸小檗碱作为抗菌剂提供了一定的理论和实验基础。
AbstractIn conclusion, this study successfully extracted and purified berberine hydrochloride from Huanglian, and demonstrated its antibacterial activity. This provides a theoretical and experimental basis for the development and utilization of berberine hydrochloride as an antibacterial agent.Keywords: Huanglian; berberine hydrochloride; extraction; purification; antibacterial activity。
小檗碱的提取分离及结构鉴定
酸水法是利用小檗碱的硫酸盐在酸性溶液中的溶解度大、而盐酸盐几乎不溶于水的性质来实现提取分离的，其提取流程为：
黄连粗粉滤液
滤液固体
滤液结晶（粗品）
滤液晶体盐酸小檗碱
四、实验所用试剂
0.2%硫酸溶液，石灰乳，浓盐酸，10%Nacl溶液，蒸馏水，乙醇。
五、鉴定方法
1显色反应：
小檗碱：（1）小檗碱(Berberine，又称黄连素)一种常见的异喹啉生物碱，分子式C20H18NO4。为黄连主要有效成分，其含量约为4%~10%，但根据野生和栽培产地的不同，其含量各异。
（2）小檗碱是黄色针状结晶体，能缓慢溶于水（1:20），乙醇（1:100），较易于溶于热水，热乙醇，微溶于丙酮、氯仿、苯、几乎不溶于石油醚中。
点样、展开、显色：取自制的盐酸小檗碱乙醇样品溶液和盐酸小檗碱乙醇对照品溶液，分别用毛细管点在薄层板上，重复点样3~5次。用甲醇-丙酮-乙酸4：5：1（或氯仿-氨-甲醇30:1:8）为展开剂，展开完毕，先观察荧光斑点，再喷改良碘化铋钾试剂显色。
参考文献：
1《黄连中小檗碱提取工艺研究》熊晓莉，陈锦锦文章编号：1672—058X(2008)04—4013—03重庆工商大学学报(自然科学版)第25卷第4期2008年8月，维普资讯。
(1)目前传统的提取技术主要是溶剂提取法。此法是从中草药中提取有效成分的常用方法，通过浸渍、渗漉、回流等方式将有效成分从药材组织内溶解，进行萃取。
传统的提取技术：酸水法提取小檗碱、石灰乳法提取小檗碱、乙醇回流提取法等
提取的新技术有：微波法提取小檗碱、微波—索氏联合工艺提取小檗碱、超声波法提取小檗碱、酶法、超临界提取法等。
2《黄连中小檗碱提取方法研究进展》席国萍，宋国斌山西大同大学,山西大同037006，文章编号10013601 2009 010003000803贵州《中药有效部位及成分提取工艺和检测方法》刘斌倪健
盐酸小檗碱实验报告
一、实验目的1. 熟悉盐酸小檗碱的提取、分离与鉴定方法；2. 掌握薄层色谱法、紫外光谱法等分析方法；3. 提高实验操作技能，培养实验思维。
二、实验原理盐酸小檗碱是从黄连、黄柏等植物中提取的一种生物碱，具有抗菌、抗炎、抗癌等药理作用。
本实验采用溶剂提取法、柱层析法等方法对盐酸小檗碱进行提取、分离，并通过薄层色谱法、紫外光谱法等对其进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：黄连、黄柏、盐酸小檗碱标准品；2. 实验仪器：电热恒温水浴锅、旋转蒸发仪、紫外分光光度计、薄层色谱仪、硅胶G薄层板、硅胶柱、微量注射器等。
四、实验方法与步骤1. 提取（1）将黄连、黄柏药材粉碎，过40目筛；（2）称取2g药材，加入20ml甲醇，超声提取30min；（3）过滤，滤液旋蒸浓缩至约1ml；（4）加入1ml盐酸溶液，搅拌，静置，沉淀完全后过滤，滤液即为粗提液。
2. 分离（1）将硅胶G加入适量甲醇，搅拌均匀，倒入玻璃层析柱中；（2）将粗提液加入层析柱中，用甲醇洗脱；（3）收集盐酸小檗碱洗脱液，旋蒸浓缩至约1ml；（4）加入1ml盐酸溶液，搅拌，静置，沉淀完全后过滤，滤液即为盐酸小檗碱精制品。
3. 鉴定（1）薄层色谱法：取盐酸小檗碱标准品和精制品适量，分别点于薄层板上，以氯仿为展开剂，展开后晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热显色，观察斑点颜色和位置；（2）紫外光谱法：取盐酸小檗碱标准品和精制品适量，分别用无水乙醇溶解，制成溶液，在紫外分光光度计上测定其在256nm处的吸光度。
五、实验结果与分析1. 薄层色谱法：盐酸小檗碱标准品和精制品在薄层板上形成相同颜色的斑点，且位置一致，证明精制品中含盐酸小檗碱。
2. 紫外光谱法：盐酸小檗碱标准品和精制品在256nm处的吸光度基本一致，证明精制品中含盐酸小檗碱。
六、实验结论本实验成功提取、分离了黄连、黄柏中的盐酸小檗碱，并通过薄层色谱法、紫外光谱法对其进行了鉴定，结果表明精制品中含盐酸小檗碱。
黄柏中盐酸小檗碱的提取与分离精制与鉴定
黄柏中盐酸小檗碱的提取与分离、精制与鉴定一、实验目的1.掌握黄柏中小檗碱的提取；2.掌握小檗碱的精制；3.掌握小檗碱的化学性质和检识方法二、实验原理1、概述生物碱是植物中含氮的碱性有机化合物,大都有明显的生理活性,是许多中草药中的有效成分。
它们是人类对植物研究得最早最多的一类有效成分,现已分离出有六千余种。
这些生物碱在植物体内一般均与有机酸或无机酸结合成盐而存在,只有弱碱性生物碱往往呈游离状态,还有一些是与糖结合成苷而存在。
小檗碱又名黄连素,是最先由毛莨科黄连（Coptis chinensis Fran）和芸香科黄柏(Phellodendron amurense Rup.)等植物中提出的一种黄色生物碱。
黄连属植物的根茎、须根、叶中等都含有小檗碱、黄连碱、药根碱、巴马亭等生物碱,我国黄连药材产量占世界第一位。
现已发现，唐松草属（Thalictrum）、小檗科的小檗属(Berberis L.)、十大功劳属(Mahomia Nuff)及防己科的天仙藤属（Fibraurea）等都可作为提取小檗碱的资源植物本实验是从黄柏皮中提取小檗碱。
黄柏皮是豆科植物黄皮树（Phellodendron chinense Schneid）或黄檗（P. amurense Rupr.）的树皮，其主要有效成分为小檗碱，小檗碱及其盐类有较好的抗菌作用，临床用以治疗菌痢和一般炎症。
小檗碱是一种季铵碱,其游离碱为黄色针晶,Mp.145℃(乙醚),微溶于水,能溶于热水和乙醇中，难溶于苯、丙酮、氯仿，几乎不溶于石油醚。
小檗碱与氯仿、丙酮、苯在碱性条件下均能形成加成物。
不同小檗碱盐类在水中的溶解度均有较大差别。
小檗碱盐酸盐难溶于冷水，易溶于热水；硫酸盐易溶于水。
溶解度分别为:小檗碱,1∶２０（冷水）,1∶100(冷乙醇);盐酸盐,1∶500(冷水);硫酸盐,1∶30(冷水),利用这些特性提取盐酸小檗碱。
小檗碱加热至110℃变为黄棕色，于160℃分解。
盐酸小檗碱
实验十八黄连中黄连素的提取及其紫外光谱分析A 黄连中黄连素的提取与鉴定一、实验目的1．通过从黄连中提取黄连素，掌握回流提取的方法。
2．通过对小檗碱的鉴定，掌握一般生物碱的鉴别方法。
二、实验原理黄连为我国名产药材之一，抗菌力很强，对急性结膜炎、口疮、急性细菌性痢疾、急性肠胃炎等均有很好的疗效。
黄连中含有多种生物碱、除以黄连素（俗称小檗碱Berberine）为主要有效成分外，尚含有黄连碱、甲基黄连碱、棕榈碱和非洲防已碱等。
随野生和栽培及产地不同，黄连中黄连素的含量约4%~10%。
含黄连素的植物很多如黄柏、三颗针、伏牛花、白屈菜、南天竹等均可作为提取黄连素的原料，但以黄连和黄柏含量为高。
小檗碱有季铵式、醛式、醇式3种能互变的结构式，以季铵式最稳定。
小檗碱的盐都是季铵盐，于硫酸小檗碱的水溶液中加入计算量的氢氧化钡，生成棕红色强碱性游离小檗碱，易溶于水，难溶于乙醚，称为季铵式小檗碱。
如果于水溶性的季铵式小檗碱水溶液中加入过量的碱，则生成游离小檗碱的沉淀，称为醇式小檗碱。
如果用过量的氢氧化钠处理小檗碱盐类则能生成溶于乙醚的游离小檗碱，能与羟胺反应生成衍生物，说明分子中有活性醛基，称为醛式小檗碱。
小檗碱的提取方法主要有溶剂法（包括水或水－有机溶剂法、醇－酸水－有机溶剂法、碱化有机溶剂法）、离子交换树脂法、沉淀法等，通过生物碱特有的沉淀反应和显色反应对其进行鉴别。
黄连素是黄色针状体，微溶于水和乙醇，较易溶于热水和热乙醇中，几乎不溶于乙醚。
黄连素的结构式以较稳定的季铵碱为主，其结构式为：在自然界黄连素多以季铵盐的形式存在，其盐酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐均难溶于水，易溶于热水，且各种盐的纯化都比较容易。
三、实验装置见图回流装置四、实验试剂与仪器1.仪器与材料100mL 园底烧瓶、冷凝管、50mL 、100mL 烧杯各1只，10mL 、25mL 量筒各1个，铁架台1个、漏斗1个、滤纸若干、滴管1个、蒸发皿、小试管三支等。
盐酸小檗碱的提取
盐酸小檗碱的提取、精制及检识小檗碱又称黄连素，是在高等植物中散布比较普遍的、有明显生理活性的化学成份。
要紧存在于黄连、黄柏、三颗针等中草药中。
小檗碱具有显著的抗微生物、抗原虫的作用，临床用其盐酸盐（即盐酸黄连素）医治细菌性感染如痢疾、急性肠胃炎、呼吸道感染等症。
黄连为毛茛科黄连属植物黄连（Coptis chinensis Franch.），三角叶黄连（ . Cheng et Hsiao ）或云连（ ）的根茎，含有小檗碱(1)、巴马汀(2)、黄连碱(3)、甲基黄连碱(4)、药根碱(5)等生物碱，其中以小檗碱含量最高，可达10%左右，小檗碱以盐酸盐的形式存在于黄连中。
目前制药工业提取小檗碱主要以三颗针为原料。
三颗针来源于小檗科小檗属（Berberis ）多种植物，其根皮含生物碱约2%，要紧含小檗碱、小檗胺、药根碱、巴马汀等生物碱。
N +OH £-R 1O OR 4OR 3R 2OR 5R 1 R 2 R 3 R 4 R 5CH 3 CH 3 HCH 3 CH 3 CH 3 CH 3 H H CH 3 H CH 3 CH 3 CH 3 HCH 212345CH 2CH 2CH 2CH 2小檗碱 (Berberine)属异喹啉类生物碱，自水和乙醇中结晶出来的小檗碱为黄色长针状结晶，含5个结晶水，在100℃干燥时即失去结晶水，转为棕黄色，加热至110℃时，其颜色加深变暗色。
℃至160℃即分解。
N HH 3NO CH 3O CH 3O HONHH 3COC H 3小檗胺小檗碱有三种互变异构体：其中以季铵碱式结构状态最稳固，能够离子化呈强碱性，用过量的氢氧化钾处置小檗碱盐类时，可转变成醇式叔胺碱和醛式仲铵碱，季铵碱式小檗碱可离子化，故有必然亲水性，因此，游离小檗碱能缓缓溶于水，在热水及热乙醇中易溶，而在冷乙醇中溶解度为1：100，但难溶于苯、氯仿、丙酮等溶剂。
醇式和醛式小檗碱那么具有一样生物碱的通性，难溶于水，易溶于有机溶剂。
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实验七 黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定
黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis
deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。
黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。
黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、
掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。其中小檗碱含量最高，可
达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。小檗碱有很强的抗菌作用，已广
泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。
[目的要求]
1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。
2．学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。
3．学习和掌握生物碱的化学检识及薄层色谱的鉴定方法。
[实验原理]
小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及
乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等
有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。盐酸盐为l：500，枸橼酸盐
1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。
小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三
种互变形式。
CHO
OCH3
3
3
季铵式（红棕色） 醇式（黄色） 醛式（黄色）
OCH3
N+
OCH3
3
小檗碱（黄连素）
掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙
醚等有机溶剂。盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。易溶于
热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。
H3CO
H3CO
OCH3
OCH3
掌叶防己碱
本实验是利用小檗碱和掌叶防己碱的硫酸盐在水中溶解度大的性质，用硫酸水提
取出来总生物碱，再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用，使生物碱盐析出，以除
去水溶性杂质。再利用两种生物碱极性不同，采用柱色谱分离。
[实验内容] 一、提取分离
黄连粗粉50g
500ml，浸渍20分钟
加石灰乳调PH值至中性
放置10分钟，抽滤
加HCl调PH2～3
加滤液体积4～5％的NaCl，放置30分钟，抽滤
沉淀 滤液
（主要含小檗碱、掌叶
加200ml水加热至澄明趁热抽滤
滤液
放置、抽滤
沉淀
二、生物碱类检识
1．化学检识：
（1）丙酮加成反应：取样品0.05g，溶于50ml热水中，加入10％NaOH溶液
2ml，混合均匀后，于水浴中加热至50℃，加入丙酮5ml，放置，即有柠檬黄色
结晶析出。此反应可用于原小檗碱型季铵生物碱的鉴别。
（2）漂白粉显色反应：小檗碱酸性水溶液中加漂白粉（或通入氯气），溶液即
变樱红色。
2．薄层色谱检识
吸附剂：硅胶G
对照品：盐酸小檗碱甲醇溶液
样品： 不同色带的甲醇溶液
展开剂： CHCl3-MeOH-冰HAc（7：1：2）
检视：先在紫外灯光（365nm）下观察荧光，再喷改良碘化铋钾试剂。
[实验说明及注意事项]
1．以硫酸盐代替盐酸盐，可增加生物碱的浸出量。
2．盐析最佳用量为4～5％。
[思考题]
1．根据小檗碱的性质，除用硫酸水溶液提取外，尚可用哪些提取方法？
请设计一个提取工艺流程。
2．掌握根据化合物结构及色谱条件推测不同化合物的Rf值的方法。在本实验色
谱条件下，请比较小檗碱和掌叶防己碱极性及Rf值。
3．查阅文献：黄连中总生物碱含量测定