D_苹果酸快速检测方法的研究_应用生物酶法检测果蔬汁中D_苹果酸含量
L-苹果酸的生产方法、生理功能及其应用
基金项目国家级大学生创新创业训练项目（20221135041）。
作者简介盛明俊（2002—），男，安徽安庆人，从事食品质量与安全研究。
通信作者马龙（1979—），男，安徽蚌埠人，博士，副教授，从事食品科学与工程研究。
收稿日期2023-11-16L-苹果酸的生产方法、生理功能及其应用盛明俊詹凯马龙（蚌埠学院食品与生物工程学院，安徽蚌埠233000）摘要L-苹果酸是一种天然有机酸，易溶于水和乙醇，其作为良好的食品酸味剂，被广泛应用于食品工业。
本文介绍了L-苹果酸的生产方法和生理功能，探究了酶转化或细胞转化法和微生物发酵法的研究进展，综述了L-苹果酸在食品工业中的应用情况，对L-苹果酸在食品工业中的应用前景和生产方法的研究方向进行了展望，为L-苹果酸的进一步研究提供参考。
关键词L-苹果酸；酶转化；细胞转化法；微生物发酵法；食品工业中图分类号TS201.2；S377文献标识码A文章编号1007-7731（2024）01-0082-06苹果酸，又名2-羟基丁二酸，分子式为C 4H 6O 5，相对分子质量为134.09。
苹果酸的分子中存在一个不对称碳原子，有2种异构体，在大自然中以D-苹果酸、DL-苹果酸和L-苹果酸3种形式存在。
D-苹果酸难以被人体吸收利用，经过化学合成法生产出来的DL-苹果酸可能具有一定的毒性，而L-苹果酸可以被人体吸收利用，并且具有一定的生理功能[1]。
本文介绍了L-苹果酸的生产方法和生理功能，探究了酶转化或细胞转化法和微生物发酵法的研究进展，综述了L-苹果酸在食品工业中的应用情况，对L-苹果酸在食品工业中的应用前景和生产方法的研究方向进行了展望，为L-苹果酸的进一步研究提供参考。
1L-苹果酸的生产方法L-苹果酸的生产方法由直接提取法、化学合成法发展到目前的酶转化或细胞转化法和微生物发酵法等。
1.1直接提取法L-苹果酸广泛存在于蔬菜和未成熟的水果中。
直接提取法的操作原理是先将未成熟的苹果、葡萄和桃的果汁或蔬菜汁煮沸，后加入石灰水，得到钙盐沉淀；随后将钙盐转变为铅盐，并经处理得到游离酸，即可得到L-苹果酸。
苹果酸含量测定方法----酸碱滴定法
苹果酸含量测定方法----酸碱滴定法
以娃哈哈果奶中苹果酸含量的测定为实训案例，介绍酸碱滴定法测定苹果酸含量的方法。
1. 测定原理
在酚酞指示剂存在的前提下，用已知浓度的碱标准溶液滴定试样中的水溶液，测出试样中的总酸度（以C4H6O5计）。
2.试剂
（1）0.1mol/L的氢氧化钠标准溶液
（2）1%的酚酞指示剂
3.仪器
（1）锥形瓶，250mL；
（2）碱式滴定管
4. 操作步骤
称取试样1.5g，精确至0.0002g，加水溶解，移至2 50mL的容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。
用移液管取25mL置于锥形瓶中，加酚酞指示剂2滴，用氢氧化钠标准溶液滴定至微红色，保持30s不退色，为滴定终点，同时做空白试验。
5. 结果计算
将实验结果记录在下表（表8）
表8：苹果酸含量测定结果记录表
相对平均偏差/%
计算公式：
w—苹果酸含量（以C4H6O5计），%
V1--试样消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，mL
V2--空白滴定消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，mL
c—氢氧化钠标准滴定溶液的浓度，mol/L
m—称取样品质量
0.06704—与1.00mL的1mol/L氢氧化钠标准溶液相当的以克表示的苹果酸质量。
25/250----从250mL溶液中取25mL溶液进行测定。
检测果蔬农残的几种快速检测技术介绍及前景展望
检测果蔬农残的几种快速检测技术介绍及前景展望作者：刘红卫来源：《中国食品》2021年第19期当前，果蔬存在农药残留严重超标的情况，因此加强对果树中农药残留的检测十分重要。
就当前所使用的果蔬农药种类来讲，依据化学的结构进行划分可分成有机磷类、有机氯类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类，而当下成熟的检测方法主要有气相色谱法、气质联用法、液质联用法、液相色谱法等等。
虽然传统的实验室检测方法具有一定的优越性，但其存在重大的缺陷，即需要使用大型的仪器设备，无法进行现场检测，并且检测步骤十分繁琐，必须具备检测资质的机构才能开展检测，进而导致检测周期增加。
因此，这些年来，各种能够在现场进行快速检测的方法越来越多，主要有酶抑制法、近红外光谱法、化学速测法、生物传感器法等等。
下面，本文就快速检测果蔬农药残留的方法进行简单介绍，并就其发展趋势进行展望。
一、快速检测果蔬残留的方法1.酶抑制法。
酶抑制法是现阶段检测果蔬农药残留比较成熟的一种方法。
此法的原理主要是依据农药对昆虫中存在的乙酰胆碱酯酶活性出现特异性抑制来进行检测。
实际的检测操作如下：将待检测的样品和乙酰胆碱酯酶进行反应测试，利用乙酰胆碱酯酶表现出的抑制程度来判断样品中所含的农药成分及含量。
依据此原理，相关研究人员开发出了快速检测卡、快速测定仪等不同的设备。
酶抑制法的优点是对操作人员要求低、前期处理比较简单，并且进行检测的时间短，非常适合现场对大量样品进行检测。
不过该方法也有局限性，首先是能够检测的农药种类不多，只能检测氨基甲酸酯类农药以及有机磷类农药;其次是其结果难以辨认;最后是这种检测方法回收率、灵敏度以及重复性不理想。
2.近红外光谱法。
介于可见光与红外光之间的电磁波即被称作近红外光，该方法通过结合计算机和传感处理技术进行果蔬农残的检测和分析。
利用该技术对果蔬当中残留的农药进行检测时，好处在于不会对样品进行破坏，同时能够做到定量和定性分析，可以同时测量多组。
但该检测技术现阶段也存在一定的缺陷，即靈敏度低、易受到干扰，当定量分析果蔬中农残时还需要拟合大量的数据模型，并且结果的可靠性有待提高。
三波长分光光度法快速测定青苹果中的苹果酸
三波长分光光度法快速测定青苹果中的苹果酸庞向东;江虹;张琴;蒋天艳【摘要】A triple wavelength spectrophotometry to measure malice acid in green apples was established in this study.The reaction be-tween malic acid and tris-hydrochloric acid buffer solution of malachite green showed that a green ionic association complex with three positive absorption peak locating in 568 nm,644 nm and 424 nm,respectively,could be found in visible light generated area. Moreover,the malic acid with triple wavelength spectrophotometry and its related reaction condition and absorption spectral character were investigated.The result showed that the molar absorption coef-ficient of performance was 5.88×104L/(mol·cm),and the quality concentration of malic acid was found to be 0.008~1.900 mg/L,con-forming to Lambert-Beer's Law.It was also found that the limit of quantitation was 0.003 2 g/100 g,and the adding standard recovery rate was 98.23% to 102.9%,with a relative standard deviationat 1.8%~2.4%.This method could be used for the determination of malic acid in green apple.%为建立快速测定青苹果中苹果酸的三波长分光光度法,利用孔雀石绿能在弱酸性的 Tris—盐酸缓冲溶液中与苹果酸反应,在可见光区生成具有3个明显正吸收峰(分别位于568,644,424 nm 波长处)的绿色离子缔合物,对用三波长法测定苹果酸进行了研究,并考察了适宜的反应条件及吸收光谱特征。
果蔬贮藏与加工试题无答案版
《果蔬贮藏与加工》试题库一、单项选择题(每题只有一个正确答案)1、植物从授粉开始至果实生长达到品种应用的大小。
该阶段是（）A、生长B、成熟C、衰老D、发育2、新鲜果蔬采后贮藏、运输的基本原则是（）A、降低温度B、提高空气湿度C、降低呼吸作用D、提高新陈代谢3、对跃变型果实而言，（）是它的贮藏期A、跃变上升期B、细胞分裂期C、跃变下降期D、后熟期4、采收下来就准备食用的果实应选择（）A、加工成熟度B、可采成熟度C、生理成熟度D、根据天气而定5、抗坏血酸就是（）。
A 维生素 CB 维生素 BC 维生素 AD 维生素E6、蔬菜加工中常利用石灰水浸泡，主要是起到（）的作用。
A 护色保绿B 防氧化C 杀菌D 防腐7、葡萄采收的适宜时期为（）。
A晴天上午晨露消失 B太阳曝晒 C阴雨连绵、浓雾未散 D 夜晚8、包装是实现果蔬商品标准化的重要措施，最便于携带的包装是：（）。
A 条筐B 塑料薄膜小包装C 木箱D 纸箱9、国内外应用的贮藏方法，可以归纳大类，低温贮藏和（）A、通风库B、气调贮藏C、机械冷藏D、简易贮藏10、产品入库贮藏在堆放时应注意（）A、一隙三离 B 一隙一离 C三离三隙 D 三离一隙11、下列属于人工气调贮藏的英文缩写是（）A、CAB、MAC、RGQTD、TPS12、机械冷藏库的贮前准备包括（）和防虫防鼠工作A、设定库内适宜的氧气和二氧化碳含量B、启动制冷系统将库温直接调到贮藏期内的最适宜温度C、对库房和用具进行彻底消毒D、喷洒异氰酸和聚醚两种材料13、果蔬有机酸含量的测定中，采用的方法是（）A.酸式滴定法B.沉淀法C.碱式滴定法D.置换法14、有机酸含量测定的试验中，滴定终点的判定是（）A.溶液呈无色B.溶液呈淡红色，15秒不退色C.溶液呈红色，15秒不退色D.溶液呈淡红色，20秒不退色15、随着贮藏时间的延长，果蔬中有机酸含量、糖酸比的变化趋势是（）A、降低、增加B、降低、降低C、增加、降低D、增加、增加16、果蔬中的鲜味主要来自一些具有鲜味的（）、氨酰和肽等含氨物质A、脂肪B、多糖C、氨基酸D、氨气17、罐头冷却的最终温度一般认为（）最合适。
果蔬有机酸含量测定(精)
果蔬有机酸含量的测定植物材料中含有丰富的有机酸，如苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、酒石酸、草酸等。
利用酸碱滴定法测定果蔬中的可滴定酸含量，可以从风味及营养的角度衡量其品质。
重点：①碱式滴定管的调零、体积读数，容量瓶、移液管的正确使用；②邻苯二甲酸氢钾及有机酸样品的正确称取（差减法）；③有效数字的取舍及确定。
难点：滴定终点的判断及掌握。
一、实验目的1.学习强碱滴定弱酸的基本原理及指示剂的选择。
2.掌握NaOH的配制和标定方法以及基准物质的选择。
二、实验原理1.大多数有机酸是弱酸，如果某有机酸易溶于水，解离常数Ka>>10-7，用标准碱溶液可直接测其含量，反应产物为强碱弱酸盐。
滴定突跃范围在弱碱性内，可选用酚酞指示剂，滴定溶液由无色变为微红色即为终点。
2. NaOH标准溶液是采用间接配制法配制的，因此必须用基准物质标定其准确浓度。
邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4），它易制得纯品，在空气中不吸水，容易保存，摩尔质量较大，是一种较好的基准物质，标定反应如下：反应产物为二元弱碱，在水溶液中显微碱性，可选用酚酞作指示剂。
邻苯二甲酸氢钾通常在105-110℃下干燥2h后备用，干燥温度过高，则脱水成为邻苯二甲酸酐。
3. 在一定温度下，用蒸馏水或乙醇将植物材料中的有机酸浸提出来，用碱溶液滴定浸出液，即可计算出样品的可滴定酸含量。
果实中的有机酸含量如柑橘类可换算成柠檬酸、葡萄可换算成酒石酸，苹果类可换算成苹果酸表示。
二、仪器设备1. 天平2. 250 mL三角瓶3. 匀浆机（或研钵）4. 恒温水浴锅5. 低速离心机（或漏斗）6. 50mL离心管（或定性滤纸）7. 碱式滴定管8. 100 mL容量瓶9. 25mL移液管三、试剂1. 0.05 mol·L–1NaOH标准溶液：在天平上取约0.5g固体NaOH（可用干燥小烧杯称取），另用大量筒量取250mL去离子水（无CO2），倒少量水入装有NaOH固体的小烧杯中，搅拌使NaOH溶解后将其倒入试剂瓶中；再将大量筒中剩余的水倒入试剂瓶中，混匀。
苹果酸含量的测定苹果酸含量
学生姓名：学号：专业：应用化学年级班级：12级C班课程名称：现代仪器分析实验实验时间：2015年4月24日0.02mo l/L KH2PO4溶液的配制：磷酸二氢钾（KH2PO4，M=136）将磷酸二氢钾溶液用蒸馏水稀释到1000ml的容量瓶中，是其浓度变为0.02mol／L，PH=2.75(用盐酸调节至PH为2.75)的 KH2PO4溶液。
计算：有公式m=cv*M=(0.02mol／L*1000ml/1000)*136需要磷酸二氢钾的质量m=2.72g苹果酸样品的配制：将果实样品破碎除籽后研磨成粉状，之后准确称取1.000g样品，加入含0.008mol／L磷酸的蒸馏水25ml,在25摄氏度的水浴中震荡浸泡10min，然后在800r／min、4摄氏度的条件下离心20min，取上清液，用0.45pm的水系滤膜过滤后用与HPLC分析。
纯甲醇CH3OH(M=34)2实验所得高效液相谱图：高效液相图特殊实验条件泵B浓度95.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐）泵A浓度5.0%（纯甲醇）标准谱图山西谱图山东谱图甘肃谱图浓度泵B浓度90.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐），泵A浓度10.0%（纯甲醇）高效液相图特殊实验条件标准图谱山西谱图山东图谱甘肃图谱3苹果酸含量计算实验1：实验2：苹果产地：山西样品称取量：1.0903g容量瓶体积：25ml苹果产地：山西样品称取量：1.0903g容量瓶体积：25ml实验条件：流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波分析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐酸调节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓冲盐，并加以适量的纯甲醇，限制最大压力17.0MPa最小压力0.0MPa。
LC停止时间10min，PDA停止时间10min，模式为二元高压梯度。
实验条件：流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波分析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐酸调节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓冲盐，并加以适量的纯甲醇，限制最大压力17.0MPa最小压力0.0MPa。
苹果酸的研究 最终版
敬请批评指正！
一、简介
● L-苹果酸（L-Ma）又名羟基 琥珀酸或羟基丁二酸，是一种 天然的有机酸，广泛存在于水 果和蔬菜中，尤其以未成熟的 水果中为多。 ● L-苹果酸口感接近天然苹果 的酸味,与柠檬酸相比，具有酸 度大、味道柔和、滞留时间长 等特点 。
二、研究发展史
• 早在本世纪60年代,美、英等国就已开始采 用化学合成法生产DL一苹果酸。 • 1959年日本的Ki-tahara等，利用短乳杆菌 产生的富马酸酶催化化学合成的富马酸转 化为L一苹果酸 • 1967年美国FDA正式宣布苹果酸为安全食 用酸。 • 1974年，日本采用固定化富马酸酶的方法 开始建厂进行小批量生产，产品主要应用 于医药工业，但尚不能满足食品工业的大 量需求。
由于l一苹果酸可调节ph值因此可作烟草的调味剂焊锡助焊剂空气清新剂洗涤剂助剂和废气脱硫剂还可代替柠檬酸作为各种金属容器及表面的除在建材上添加适量的l一苹果酸剂于水泥中可缩短凝固时间防止碱性凝聚反应的发生提高混凝土的强度
L-苹果酸的研究
L-苹果酸
• 简介
• 研究发展史
• 功能 • 应用 • 前景展望
化学工业
• 由于L一苹果酸具• 由于L一苹果酸可调节pH值,因此可作 烟草的调味剂、焊锡助焊剂、空气清新 剂、洗涤剂助剂和废气脱硫剂,还可代 替柠檬酸作为各种金属容器及表面的除 锈剂。
建筑材料
• 在建材上,添加适量的L一苹果酸剂于水泥 中,可缩短凝固时间，防止碱性凝聚反应的 发生,提高混凝土的强度。 L-苹果酸还可以 代替草酸作为石块的表面清洗剂，使其表 面变得光滑、平整和美观。
五、发展前景
• 由于L-苹果酸属于发酵生产的产品，安全 性能有保障，因此国际市场上需求量快速 增加，近年来需求量保持年均10%左右高 速度增长。 • L-苹果酸的开发与应用是采用酶生物工程 化技术，这项技术已取得突破性进展,其产 量增长很快,在工业、医药及食品、日用化 妆品等方面的应用越来越广泛,新的应用正 被不断开拓。
苹果酸检测方法
制Hale Waihona Puke 每 1ml 中约含富马酸 10µg，马来酸 4µg，DL－苹果酸 1mg 的溶液，作为系统适用性溶液，精密量取 20µl，注入液相色谱仪，理论板数按 DL－苹果酸峰计算不低于 2000，富马酸和马来酸及 DL－苹果酸峰的 分离度均应符合规定。 测定法 取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每 1ml 中约含 1mg 的溶液，作为供试品溶 液；另取富马酸和马来酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每 1ml 中含富马酸 5µg，马来 酸 2µg 的溶液，作为对照品溶液。精密量取上述两种溶液各 20µl 注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保 留时间的 4.5 倍。 供试品溶液的色谱图中如有与富马酸和马来酸峰保留时间一致的峰， 按外标法以峰面积 计算，其含量分别不得过 1.0％和 0.05％。其它单个杂质峰面积不得过对照品溶液中马来酸峰面积的 0.5
DL－苹果酸检测方法介绍
——恒信检测
O HO O OH OH
C4H6O5 恒信检测拥有全面的光谱、色谱、质谱、热学、生物培养实验室等国内外最先进的现代分析检测仪 器设备，可以根据客户的需求，根据相关标准，制定专业的技术解决方法，提供一站式专业检测服务，以 下是根据《中国药典》中苹果酸检测方法介绍： 【性状】本品为白色结晶性粉末；无臭，无 味。 本品在水和乙醇中易溶，在丙酮中微溶。 熔点 本品的熔点（中国药典 2005 年版二部附录 VI C）为 128℃～132℃。
【鉴别】 （1） 取本品约 0.5g，加水 10ml 使溶解，用氨水调 pH 值至中性，加 1%对氨基苯磺酸溶液 1ml，在沸水浴中加热 5 分钟，加 20%亚硝酸钠溶液 5ml，置水浴中加热 3 分钟，加 4%氢氧化钠溶液 5ml， 溶液应立即呈红色。 （2） 本品的红外光吸收图谱应与 DL－苹果酸对照品的图谱一致 （中国药典 2005 年版二部附录Ⅳ C） 。 【检查】 比旋度 取本品， 精密称定， 加水溶解并稀释制成每 1ml 中含 0.2g 的溶液， 依法测定 （中国药典 2005 年版二部附录 VI E） ，比旋度为－0.10～＋0.10。 有关物质 照高效液相色谱法（中国药典 2005 年版二部附录 V D）测定。 色谱条件与系统适用性试验 用磺酸基阳离子交换树脂为填充剂， 以 0.005mol/L 硫酸溶液为流动相； 检测波长为 210nm；柱温为 37℃；取富马酸、马来酸、DL-苹果酸对照品适量，加流动相溶解并稀释
苹果及苹果汁指标测定方法
01单果重采用德国Sartorius公司生产的CPA-1245型万分之一电子天平。
每个品种选取10个果个大小基本一致的果实，分别测定其单果重，最终取平均值即为该品种苹果平均单果重（白沙沙，2012）。
02单果体积采用英国Stable MicroSystem公司生产的Volscan Profiler VSP 3000045食品体积自动测定仪。
将食品体积自动测定仪开机预热30min，启动分析软件，参数设置为：转速1转/秒，垂直步长2mm，扫描数据获取率400点/秒。
每个产地选取10个具有代表性的果实，分别测定其体积，其平均值代表每个产地红富士苹果单果体积（白沙沙，2012）。
03果实密度鲜食苹果果实密度计算方法为：将某个品种已测定的单果重与对应体积的比值作为该果实密度。
以10个苹果果实密度平均值作为该产地果实密度指标值（白沙沙，2012）。
04果心大小采用数显游标卡尺测定。
每个品种苹果选取10个具有代表性的果实，沿果实赤道位置横切，用游标卡尺直接测定果心半径和果实半径，每个果实进行3次测量，取平均值。
果心大小=果心半径/果实半径05果形指数[9]采用日本日立公司的数显游标卡尺。
每个品种选取10个具有代表性的果实，分别测量其最大纵径和最大横径，计算果形指数。
以10个果实果形指数平均值作为该品种苹果果形指数指标值。
果实的最大纵径与横径的比值，精确到0.01。
06果实形状果实形状用于筛选畸形果，选择特征果实形状，异于此形状的果实为畸形果。
1 近圆形2 扁圆形3 长圆形4 椭圆形5 卵圆形6 圆锥形7 短圆锥形8 长圆锥形9 圆柱形 10 偏斜形07淀粉-碘指数-确定苹果成熟度[10]碘溶液的配置：用30ml温水溶解8.8g碘化钾，缓慢搅拌至溶解。
加入2.2g碘晶体至溶解。
用水稀释至1L。
浓度为2.2g/L。
取样：选取具有典型大小和颜色的果实。
每种样品选取至少10个果实，每棵树上不多于2个。
测定：1.收获后24小时内测定；2.沿赤道位置将苹果切成二分；3.将苹果浸入碘液；4.等待至少一分钟；5.拍照；6.与图片对比；7.计算平均数，用1-10表示。
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D-苹果酸快速检测方法的研究———应用生物酶法检测果蔬汁中D-苹果酸含量蒋宏伟,李建华,姚敏杰,薛国伟(陕西出入境检验检疫局,陕西西安 710068)提 要:国际果汁市场中,苹果汁是仅次于橙汁的第二大果汁产品,苹果汁中添加苹果酸是比较常见的掺假现象。
天然苹果汁只含有L一苹果酸,通过测定D一苹果酸含量可检测掺假苹果汁,若样品中存在D-苹果酸,则说明样品为掺杂果汁。
笔者通过对D一苹果酸测定的研究,利用生物酶快速反应技术,建立适宜我省果蔬汁中D-苹果酸快速检测方法。
关键词:果蔬汁;D一苹果酸;生物酶法;掺假;检测1 前言随着我国经济和贸易的发展,以及人们对食品安全意识的逐步提高,食品检验工作已经并在继续发生着深刻的变革,新的检验工作领域、方式和检验技术的拓展、引进和发展,都使检验技术面临着提高科学性、前瞻性、适应性和快速反应的需求和目标。
,国际贸易中以技术性贸易措施为主的贸易战愈演愈烈,检验部门在保国安民,维护国家经济安全方面承担着重要的职责,担负着历史的使命。
但是,检验技术与经济高速发展的矛盾越来越突出,有的尚不能满足检验部门依法施检与质量控制的需要,不能满足我国经济迅猛发展的需要,不能满足由技术进步、人们生活质量提高以及中国入世后建立我国的技术性贸易措施和破除国外技术性贸易措施等对检验技术的需求,不能满足检验工作重点转移要求。
国际果汁市场中,苹果汁是第二大果汁产品,全球浓缩苹果汁年均产量90万t,但远远满足不了国际市场的需求,国际苹果汁市场空间十分巨大,陕西省每年出口到世界各大洲多个国家的苹果汁超过40万t,已成为浓缩苹果汁生产大省,果业生产成为陕西省六大支柱产业之一,出口量位居全国首位。
在饮料加工过程中,由于利益驱动,会出现假冒伪劣行为,如苹果汁中添加苹果酸是比较常见的掺假现象,天然苹果汁只含有L一苹果酸,而合成苹果酸中L一苹果酸和D一苹果酸各占一半。
通过测定D一苹果酸含量可检测掺假苹果汁。
为了适应检验工作需求,为我国经济社会的全面健康协调发展,同时,也为了打击食品加工中掺假、造假等行为,提高食品饮料品质,我们瞄准国外食品安全检测技术发展动向和国际上对食品的新要求,查阅国内外有关信息,借鉴国外先进技术,利用酶法快速反应的特点,开展了样品前处理、检验方法等相关实验研究工作。
应用此方法对来自陕西省境内近二十个果汁生产企业的40批苹果汁、梨汁等果汁实施D一苹果酸含量检测检测,未发现添加D一苹果酸。
2 检测方法2.1 检测原理D-苹果酸(D-苹果酸盐)在D苹果酸盐脱氢酶(D-MD H)存在的情况下,通过NAD氧化变成草酰乙酸盐。
草酰乙酸盐立即由同样的酶催化分解成丙酮酸盐和二氧化碳。
D-苹果酸盐+NAD+D-MD H,decarb丙酮酸盐+CO2+NAD H+H+NAD H的总量由D-苹果酸盐的总量计算NAD H的增量由340nm条件下的吸光度值的平均数获得。
2.2 设备移液枪(5ml、1ml、50-200μl、10-50μl)、比色皿:光径1.0cm、紫外分光光度计、折叠滤纸,孔径10μm、离心机、离心管、烧杯、容量瓶、移液枪配套滴头、玻璃棒等。
・23・陕 西 农 业 科 学2009(3)3收稿日期:2009202218 作者简介:蒋宏伟(19592),1982年毕业于云南农业大学,研究员,从事进出境检验检疫工作。
2.3 试剂Hepes缓冲液、NAD工作液、D-MD H工作液、NaCl、KCl、Na2HPO4.・2H2O、葡萄糖、HCl (2mol/l)、NaO H(2mol/l)、KO H(2mol/l)、重蒸水。
也可使用德国等生产的商品试剂盒。
2.4 方法步骤2.4.1 试剂配制(略)2.4.2 试样制备 ①无色或浅色果汁。
用KO H调整25ml果汁p H值至7-8,加重蒸水稀释,使用1.000至1.800ml滤液进行检测。
②浑浊果汁样品。
过滤浑浊样品,离心,取上清液25ml,用KO H调整p H值至7-8,加重蒸水稀释,使用1.000至1.800ml滤液进行检测。
③含CO2气体果汁样品。
除去样品中的CO2气体,添加NaO H或KO H,调节p H至7-8,并孵育大约15min,使用1.000至1.800ml滤液进行检测。
2.4.3 检测(按表1进行) ①设空白对照。
取比色皿,依次加入1.000ml hepes缓冲液、0.100 ml NAD工作液、1.800ml重蒸水,混合置6min 后读取吸光度值(A1),再加入0.050ml D-MD H工作液,待混合反应完成(大约20min),读取吸光度值(A2),空白吸光度值差=(A2-A1)空白。
②样品检测。
取比色皿,依次加入1.000 ml hepes缓冲液、0.100ml NAD工作液、0.100 ml试样液、1.700ml重蒸水混合置6min后读取吸光度值(A1),再加入0.050ml D-MD H工作液,待混合反应完成(大约20min),读取吸光度值(A2),样品吸光度值差=(A2-A1)样品。
表1 检测程序加入比色皿的溶液空白对照样品检测hepes缓冲液NAD工作液样品溶液双蒸水1.000mL0.100ml-1.800ml1.000ml0.100ml0.100ml1.700ml混合,大约6min后读取吸光度值(A1)。
加入以下溶液后开始反应D-MD H工作液0.050ml0.050ml 混合,等待反应完成(大约20min),读取空白和样品的吸光度值(A2) 分别测样品与空白对照的吸光度值差,用样品吸光度值差减去空白吸光度值差可以得到公式(1):△A=(A2-A1)样品-(A2-A1)空白(1)2.4.4 结果计算 根据公式(2)计算浓度:C=V1×M Wε×d×V2×1000×ΔA×f(2)式中:C为要检测物质的浓度:g/l;MW为要检测物质的摩尔质量。
D-苹果酸摩尔质量:134.09 g/mol、D苹果酸盐摩尔质量:132.07g/mol;V1为比色皿中测试溶液的总体积,单位是ml;V2为由试样制备的样品溶液的总体积,单位是ml;f为样品溶液的稀释倍数;d为比色皿的光程,单位是cm;ε为NADP H的消光系数:在340nm= 6.3(l×mmol-1×cm-1);ΔA为吸光度值差。
3 检测结果对40份样品检测的结果每升果汁中D-苹果酸含量在0.0032g以下,见表2。
4 小结(1)应用生物酶反应特点检测D-苹果酸含量,检测样品只需30min即可出结果,快速、省时、简单易操作。
(2)在研究过程中,为检测样品中含有的物质是否造成干扰,通过添加标准物质计算回收率试验,其回收率为99.7%。
(3)我们用生物酶法,检测了来自陕西省近20个出口果汁加工企业的40份果汁样品中D-苹果酸含量,其结果均未添加D-苹果酸,即无一例掺假行为。
・33・蒋宏伟等:D-苹果酸快速检测方法的研究表2 40份样品中D-苹果酸检测结果序号品名批号生产企业检测结果(g/l)1苹果汁xx060912C A0.014994252 2梨汁xx060321X02-01B-0.002976246 3梨汁xx051130X02-01B-0.009682218 4苹果汁xx06100513A-0.002712528 5苹果汁xx070527B C-0.01149057 6苹果汁xx060916B B-0.000828828 7苹果汁xx070323A-4117D-0.000715806 8苹果汁xx061228A-4094D-0.00640458 9苹果汁xx070302B E-0.005877144 10苹果汁xx061127A-6105F0.001657656 11苹果汁xx060909A-6018G0.01431612 12苹果汁xx/07FA0195H-0.029800134 13苹果汁xx/07B1A0365H-0.007007364 14苹果汁xx070428A01-01B0.00339066 15苹果汁xx070127A01-01I0.00282555 16苹果汁xx070111X01-01B-0.018686304 17苹果汁xx070110B01-01I-0.009079434 18苹果汁xx070527C J0.00301392 19苹果汁xx070428C J-0.000263718 20苹果汁xx070212B K0.005764122 21苹果汁xx0428A L0.01036035 22苹果汁xx070211A M-0.00131859 23苹果汁xx061210C N-0.001770678 24苹果汁xx070114C O0.004596228 25苹果汁xx070422B M-0.003277638 26苹果汁xx070103A P0.000715806 27苹果汁xx060926B P-0.000791154 28苹果汁xx070203C Q-0.005161338 29苹果汁xx070121A Q0.008250606 30苹果汁xx070414B R0.021775572 31苹果汁xx070406A S0.011603592 32苹果汁xx070212B K-0.011754288 33苹果汁xx070203C Q0.000979524 34苹果汁xx070414C M-0.008627346 35苹果汁xx070203A M-0.002034396 36苹果汁xx070421A M0.001431612 37苹果汁xx070103C M-0.003880422 38苹果汁xx070206C K0.002561832 39苹果汁xx061116B01-01I-0.02599506 40苹果汁xx070128A01-01I-0.068566685 讨论通过研究,我们有几点体会供大家参考:(1)所有试剂不能含D-苹果酸。
(2)如果检测到的吸光度值差偏小(如< 0.1000),样品溶液应重新处理(称量更多样品或稀释)。
加到比色皿中的样品体积可增加到1.800 ml,加入的水的体积减少,使得样品和空白溶液的最终体积相同。
新的样品体积V必须计算到最后结果中。
(3)处理深色样品时,在使用未稀释样品或更大的样品体积时,可使用活性炭或PV PP脱色;(4)目前在果汁贸易中,无论是国际还是国内市场均未提出对D-苹果酸检测要求,但是,发达国家已有相应技术,为应对各种技术壁垒,我们需有一定的前瞻性,同时也为打击食品中的掺假行为、提高产品质量、保障食品安全,建立此类快速的食品检测方法,可提高技术储备能力。
・43・陕 西 农 业 科 学2009(3)。