一种从土壤中分离产淀粉酶的微生物的方法
实验六十淀粉酶产生菌株的筛选
实验六十淀粉酶产生菌株的筛选实验项目性质：设计性涉及的知识点：无菌技术、浓缩培养、纯种子分离、淀粉酶特性和酶活性测定。
计划学时：8学时一、实验目的1.掌握从环境中采集样本并从中分离纯化某些微生物的完整操作步骤。
2.巩固之前所学的微生物学实验技术。
3.掌握产酶微生物的筛选方法。
二、实验原理α-淀粉酶是一种液化淀粉酶。
其产生菌芽孢杆菌广泛分布于自然界，尤其是在含有淀粉的土壤样品中。
从自然界筛选菌株的具体方法大致可分为以下四个步骤：取样、增殖培养、纯种子分离和性能测定。
1、采样：即采集含菌的样品在收集含有细菌的样本之前，你应该调查和研究你打算筛选的微生物分布在哪里，然后你可以开始做各种具体的工作。
几乎所有种类的微生物都可以在土壤中找到，因此土壤可以说是微生物的基础。
在土壤中，细菌数量最多，其次是放线菌、第三种霉菌和酵母。
除土壤外，各种物体上都有相应的优势微生物。
例如，枯枝、腐叶、腐土和腐木中的纤维素分解细菌较多，厨房土壤、面粉加工厂和菜园土壤中的淀粉分解细菌较多，水果和蜜饯表面的酵母较多；植物奶中含有较多的乳酸菌，油田和炼油厂附近的土壤中含有较多的石油分解菌。
2、增殖培养（又称丰富培养）增殖培养是在采集的土壤和其他含有细菌的样本中添加一些物质，并创造一些其他有利于待分离微生物生长的条件，以便能够分解和利用这些物质的微生物能够大量繁殖，以便我们从中分离出这些微生物。
因此，增殖培养实际上是选择性培养基的实际应用。
3、纯种分离在生产实践中，一般都应用纯种微生物进行生产。
通过上述的增殖培养只能说我们要分离的微生物从数量上的劣势转变为优势，从而提高了筛选的效率，但是要得到纯种微生物就必须进行纯种分离。
纯种分离的方法很多，主要有：平板划线分离法、稀释分离法、单孢子或单细胞分离法、菌丝尖端切割法等。
4.业绩衡量分离得到纯种这只是选种工作的第一步。
所分得的纯种是否具有生产上所要求的性能，还必须要进行性能测定后才能决定取舍。
淀粉酶产生菌的筛选注意事项
淀粉酶产生菌的筛选注意事项淀粉酶是一种重要的酶类，在食品加工、制药和生物技术等领域有着广泛的应用。
而淀粉酶产生菌则是淀粉酶发酵的关键微生物，因此筛选合适的淀粉酶产生菌对于淀粉酶的生产至关重要。
下面将从以下几个方面介绍淀粉酶产生菌的筛选注意事项。
一、筛选前的准备工作1. 确定筛选目标：在进行淀粉酶产生菌筛选之前，需要明确自己所需要的菌株特性，如产量、稳定性、适应性等。
2. 了解基础知识：在筛选之前需要对淀粉酶发酵过程中微生物代谢途径、营养需求等基础知识有一定了解，以便于更好地设计实验方案。
3. 准备培养基：根据所需菌株特性选择合适的培养基，并进行消毒和质量检测。
二、筛选方法选择1. 传统方法：传统方法包括平板法、液体培养法等，这些方法简单易行，但筛选效率较低。
2. 高通量筛选：高通量筛选方法可以同时对大量菌株进行筛选，具有快速、高效的优点，但需要较高的设备和技术要求。
3. 分子生物学方法：分子生物学方法通过扩增和检测目标基因来确定淀粉酶产生菌，具有高灵敏度、高特异性和快速等优点。
三、菌株的来源选择1. 野生菌株：采集自然环境中的微生物进行筛选，可以获得多样性较高的菌株，但需要进行适应性培养和改良。
2. 已知菌株：已知菌株包括文献报道的、已经商业化应用的等，在筛选时可以优先选择这些已知稳定可靠的菌株。
3. 自体分离：自体分离是指从淀粉酶发酵中分离出产酶微生物进行筛选，这种方法具有与发酵过程相适应、稳定性好等特点。
四、实验设计与操作注意事项1. 设计合理实验方案：实验方案需要考虑到微生物营养需求、培养条件等因素，同时需要进行对照实验和重复实验以确保结果的可靠性。
2. 严格控制操作条件：操作过程中需要严格控制温度、pH值、氧气含量等因素，以确保微生物的正常生长和代谢。
3. 合理选择筛选指标：筛选指标需要与淀粉酶产生相关，如淀粉酶活力、淀粉酶产量等。
4. 筛选后的确认和评价：在筛选出淀粉酶产生菌后，需要进行进一步的确认和评价，包括菌株稳定性、代谢途径分析等。
淀粉酶产生菌的筛选、培养与选育
功能微生物（淀粉酶产生菌）的筛选、培养与选育22100934 程雅楠摘要：以产淀粉酶细菌的筛选和选育为目标，通过培养基制备及灭菌、菌种的分离筛选与纯化、菌种的鉴定、培养条件的优化以及淀粉酶产生菌的紫外诱变育种等五个过程，并测定了诱变后菌株的16s序列，初步掌握了对某菌种进行筛选、选育及诱变的必需步骤。
关键词：产淀粉酶细菌筛选选育诱变育种淀粉酶是最早用于工业生产并且迄今仍是用途最广、产量最大的酶制剂产品之一，为了提高淀粉酶的生产水平，首先通过淀粉培养基从土壤中筛选出产淀粉酶的活性菌株，对菌株初步鉴定后进行紫外线诱变，筛选出产量高、性状优良的突变菌株。
淀粉酶主要来源于植物和微生物，并通过发酵完成生产，因此筛选出高产、稳定的淀粉酶产生菌是淀粉酶生产的尤为重要。
此次试验试图从土壤中分离出产淀粉酶的细菌，通过紫外线诱变育种等条件优化来得到高产、稳定的淀粉酶产生菌株。
以达到加深对菌种选育的认识、掌握紫外线诱变育种的原理和方法、掌握初步纯化淀粉酶的方法的实验目的。
1材料和方法1.1材料1.1.1 来源：南师大北区教学楼附近的土壤。
1.1..2培养基：淀粉培养基的配制①固体培养基膏 3g/L，蛋白胨 10g/L，NaCl 5g/L，可溶性淀粉2g/L，琼脂 20g/L，pH7.0～7.2。
②液体培养基：牛肉膏 3g/L，蛋白胨 10g/L，NaCl 5g/L，可溶性淀粉2g/L，琼脂 20g/L，pH7.0～7.2。
优化条件培养基配制：①淀粉3g/L，蛋白胨 10g/L，K2HPO4 1.5g，MgSO4·7H2O 1.5g， pH 4.0 。
②淀粉3g/L，蛋白胨 10g/L， K2HPO4 1.5g，MgSO4·7H2O 1.5g， pH 7.2 。
碳源培养基：①淀粉 3g，蛋白胨 10g，K2HPO4 1.5g，MgSO4·7H2O 1.5g，去离子水 1000mL pH 7.2。
生物技术综合实验——淀粉酶产生菌的初步筛选
生物技术综合实验——淀粉酶产生菌的初步筛选一、实验目的学习从自然界中筛选分离淀粉酶产生菌株。
二、实验内容淀粉酶产生菌的筛选和分离。
三、实验原理在筛选培养基平板上，可溶性淀粉被目的菌株产生的淀粉酶水解，形成透明圈。
不同种类的微生物产生的淀粉酶的种类和活力各不相同，对可溶性淀粉的水解能力各不相同，所形成的水解圈与菌落大小比值故而不同，因而根据其比值可初步断定其对可溶性淀粉的水解能力。
许多细菌和霉菌产生淀粉酶，特别是一些芽孢杆菌，因此，本实验将土壤样品加热处理后，将其接种到筛选培养基平板进行培养，根据平板的水解圈做初筛，从中筛选出产淀粉酶活性较好的菌株进行保藏。
四、实验材料和用具1、材料：土壤样品2、试剂：牛肉膏蛋白胨筛选培养基平板（含可溶性淀粉1%）、45mL无菌水瓶3、仪器及用具：恒温培养箱、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、摇床、酒精灯、牙签、移液枪、试管、涂布器、量筒等。
五、操作步骤（一）准备材料1、筛选固体培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入可溶性淀粉（1%），配制600mL，制备30个平板。
2、含45mL水的三角瓶5瓶，200ul枪头及枪头盒3盒，牙签3瓶，涂布器3包，灭菌处理。
（二）菌种分离1、土壤采集选取采集地点地表植被根系周围的土壤，首先去除地表浮土，然后挖取2-5cm深的土壤样品，每个样品约取20g土壤，装入塑料袋内，备用。
2、制备菌悬液取5g土壤样品置于含45ml无菌水的三角瓶中，用振荡器震荡10分钟，在90度水浴锅中处理15分钟。
3、涂布平板培养与分离吸取100ul悬浮液，用涂布器涂布于筛选培养基平板，待液体充分被吸收后，置于37℃培养箱中培养48h。
每组做2个平板。
（三）菌种初步筛选在平板中加入少量卢戈氏碘液，观察菌落形成透明水解圈情况，用无菌牙签挑取产水解圈的菌落，转接到新的筛选培养基中，每个平板上接种16个菌种，每组接种2个平板，置于37℃培养24h。
在平板内加入卢戈氏碘液，根据单菌落透明圈直径与菌落直径比值(H/C)大小进行初筛，选择水解圈直径与菌落直径比值大的菌株，从中选取淀粉酶活力相对较高的菌株。
实验方案范文实验方案范文
实验方案范文实验方案范文想要写好实验方案，首先要知道实验目的，然后找到适合的实验方法，再根据实验方法设计实验实施方案，下面WTT给大家介绍关于实验方案范文的相关资料，希望对您有所帮助。
实验方案范文一一、实验名称：临时装片、切片、涂片的制作、观察和指导二、实验目标：让学生通过独立自主的制作临时装片、切片、涂片的方法来感知细胞的形态和结构，从而使学生对细胞达到一定的认识，为以后的教学作下铺垫。
制作临时装片的成功，对提高学生的生物学兴趣和生物科学素养都起着重要的作用。
同时，这样锻炼了学生的动手能力，也培养了学生的自己动脑思考的能力。
三、实验方法及步骤：(一)实验材料：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、吸水纸、解剖针、毛笔、滴管、擦镜纸;清水、碘酒溶液;西红柿、空心莲子草、洋葱;创可贴(切片时可能会有人受伤)(二)实验步骤：1、临时装片的制作⑴准备擦用擦镜纸把载玻片和盖玻片擦拭干净改进：将洁净的纱布改为擦镜纸，擦拭玻片时要注意用左手的拇指和食指夹住玻片的两端，右手的拇指和食指衬垫上洁净的纱布后，夹在玻片两面，同时擦拭，以防将玻片损坏，滴用滴管在载玻片中央滴1-2滴清水改进：在制片时至少滴2滴清水，这样加盖玻片时，盖玻片下的空间中水较充盈，气泡就少，细胞的活性也较好取用刀片在洋葱表面上划“井”字(大约0.5cm2)，用镊子撕取外表皮问题：由于叶表皮皱缩、学生不熟练等，导致撕下的表皮薄膜过厚，在显微镜视野中难以找到理想的观察对象,致使实验效果较差。
改进：首先将洋葱鳞片叶切成宽1.0-1.5cm的纵向窄条,再用刀片将洋葱鳞片叶内侧表皮划成小块(切忌划透),然后用镊子夹住所划表皮的边缘,将其轻轻取下(洋葱鳞片叶内侧表皮易与叶肉分离,操作简便)即可。
这一改进降低了实验操作难度,提高了制片质量。
放把撕取的表皮浸入载玻片上的水滴中，并展平⑵盖盖玻片盖用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上的水滴，然后缓缓地放下，盖在要观察的材料上⑶染色染：将玻片倾斜10度左右，从高的一侧滴入碘液，让其自己流入玻片。
浙江师范大学微生物实验报告 产淀粉酶芽孢杆菌的分离与初步鉴定
产淀粉酶芽孢杆菌的分离与初步鉴定吴月婷摘要：从土壤中分离得到一株产淀粉酶的芽孢杆菌X-1，对其进行形态学鉴定和生理生化特性分析，包括菌落形态、菌体形态、糖利用情况、生长pH范围、耐盐范围、明胶液化和酪素的水解等，初步鉴定为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）或地衣芽孢杆菌（Bacillus lentus）。
关键词：产淀粉酶；芽孢杆菌；分离；初步鉴定淀粉酶(Amylase)是指能分解淀粉糖苷键的一类酶，主要包括α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶和异淀粉酶等，在生物体的糖类代谢中起重要的作用。
其中α-淀粉酶（1,4-α-D-glucan glucanohydrolase）能水解淀粉大分子的α-1,4-糖苷键，生成糊精、麦芽寡糖、麦芽糖、葡萄糖等水解产物[1]。
α-淀粉酶在植物、动物和微生物中都广泛存在，常见的产淀粉酶微生物有芽孢杆菌、放线菌、黑曲霉、米曲霉、红曲霉和根霉等[2-7]。
芽孢杆菌属(Bacillus)是一类能产生芽孢的革兰氏阳性细菌，具有较强的抵抗不良环境的能力，如耐酸碱、耐高温的能力较强。
芽孢杆菌中较多菌种具有高淀粉酶、蛋白酶活性，近年来被广泛地用于动物饲料业，特别是作为水产饲料的添加剂。
例如在银鲫饲料中添加了0.1%的芽孢杆菌后，银鲫肠道和肝胰脏的淀粉酶活性提高了3.7%和129.5%[8]，能够有效帮助动物对饲料的消化吸收，同时作为一种良好的免疫激活剂，能增强动物的免疫力和抗病力[9]。
此外，利用芽孢杆菌产生α-淀粉酶，在食品生产中也有广泛应用。
笔者从土壤中分离得到产淀粉酶的芽孢杆菌，进行种属的初步鉴定，以期为芽孢杆菌在动物饲料业和食品生产中的发开应用提供理论依据。
1 材料与方法1.1 材料土壤材料采集于浙江师范大学取杏园食堂草坪土壤表层5~10厘米下的肥土。
1.2 培养基淀粉培养基：可溶性淀粉1%、蛋白胨l%、葡萄糖0.5%、Nacl 0.5%、牛肉膏0.5%、琼脂粉0.8%。
土壤中产淀粉酶的芽孢杆菌的筛选及淀粉酶活力的测定教案
土壤中产淀粉酶的芽孢杆菌的筛选及淀粉酶活力的测定13级生技426摘要本实验从土壤中分离出能产淀粉酶的芽孢杆菌并对其进行鉴定、保存，实验中涉及菌株的分离纯化、菌株的形态学鉴定和生理生化鉴定，根据伯杰氏细菌学手册鉴定其种属。
实验中通过80℃水浴20min预处理，杀死无芽孢菌体，筛选出芽孢杆菌；再用稀释涂布平板法对芽孢杆菌进行初步筛选；又通过分区划线法对初筛菌株进一步分离纯化；最后用选择性淀粉培养基进行筛选，得到纯培养的产淀粉的芽孢杆菌。
最后并通过耐盐试验、明胶试验、糖发酵试验、VP试验、吲哚试验等多项生理生化实验对筛选出来的菌种进行鉴定。
关键词：淀粉酶芽孢杆菌生化鉴定一、引言芽孢杆菌属(Bacillus)是一类好氧或兼性厌氧，产生抗逆性内生孢子的杆状细菌。
多为腐生菌，主要分布于土壤、动植物体表及水体中。
由于芽孢杆菌属的细菌可以产生多种有用代谢产物，芽孢又是菌体度过不良环境的休眠体。
因此，在工、农业生产上有较高的应用价值。
菌体杆状，直或接近直，0.3 – 2.2X1.2 – 7.0微米。
多数运动，鞭毛典型侧生，形成抗热内生孢子。
在一个孢子囊细胞中，孢子不多于1个。
暴露与空气中时，不妨碍孢子的形成。
革兰氏反应为阳性，仅在生长早期为阳性、阴性。
有机体化能营养，利用多种底物进行严格呼吸代谢，严格发酵代谢或呼吸和发酵二者兼有的代谢。
在呼吸代谢中，最终的电子受体是分子氧，在一些种中可以用硝酸盐代替氧，大多数种产接触酶，严格好养或兼性厌氧。
淀粉酶是一种用途极为广泛的生物催化剂，可应用于面包制造业淀、粉的糖化和液化、纺织品脱浆、造纸、清洁剂工业、化学、临床医学的分析和制药业等。
淀粉酶家族包括α-淀粉酶，β-淀粉酶和葡萄糖淀粉酶。
二、实验目的1．了解微生物分离纯化的原理及微生物分离纯化常用方法和技术；2．掌握从土壤中筛选产淀粉酶菌株的原理及方法；3．掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力测定的原理及方法；4．培养学生自行设计实验流程、综合分析解决问题及判断实验结果的能力；5．对所学习过的微生物实验方法进行综合技能训练；6．从不同环境土壤样品中筛选出能产淀粉酶的芽孢杆菌，并分析比较各产淀粉酶菌株的产淀粉酶活力及总结各芽孢杆菌在土壤中的分布情况。
_淀粉酶产生菌的分离筛选与诱变选育
Animal Husbandry and Feed Science
2010 ，31 （9 ）:1-3
α- 淀粉酶产生菌的分离筛选与诱变选育
刘雅琴，陈海魁，孔令全 （北方民族大学生物科学与工程学院，宁夏 银川 750021）
摘要：从土样、水样和面样中分离产 α-淀粉酶的芽胞杆菌，对 3 个样品进行淀粉平板分离和革兰氏染色 、芽胞染色，选
①土样照片
第9期
刘 雅 琴 等 ：α-淀 粉 酶 产 生 菌 的 分 离 筛 选 与 诱 变 选 育
3
③面样：菌落与土样、水样基本类似，只是在菌落中心 有蜡样圆心小斑。 2.2 产 α-淀粉酶菌株的筛选结果 土样、水样和面样 3 个 样品中分离出产淀粉酶的芽胞杆菌， 利用淀粉平板共分离 出 64 株单菌落，经稀碘液染色有水解圈且显微镜下观察和 芽胞染色后， 选出具有产淀粉酶能力的芽胞杆菌 47 株，筛 选 出 有 较 大水 解 圈 的 10 株 ， 其 中 ， 土 样 4 株 （菌 株 编 号 Ty1~Ty4）、面样 3 株（菌株编号 My1~My3）和水样 3 株（菌株 编号 Sy1~Sy3）。 10 株菌的菌圈比（即 HC 比值）见表 1。
外酸性淀粉酶还可应用于青贮饲料发酵饮料废液的处理等多种领域近年来我国酶制剂工业蓬勃发展品种和产量也不断增加但是同国外酶制剂行业相比尚有一定的差距我国淀粉酶剂型品种和生产菌株都很单一由于我国淀粉资源丰富淀粉酶应用范围广泛淀粉酶工业发展也必将促进我国其他工业的迅速发展为了适应经济发展的需要应进一步扩大淀粉酶的产量和品种通过对淀粉酶生产菌进行分离筛选将有助于发现因此该研究从富含淀粉的地方采集面样土样水样进行试验以期获得在某些方面性能优良如耐高温耐强酸耐强碱等的粉酶生产菌从而为将来改良淀粉酶生产菌以及满足不同行业的需要奠定理论基础材料与方法11培养基和菌种淀粉培养基g可溶性淀粉mpa灭菌min产淀粉酶发酵培养基
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一种从土壤中分离产淀粉酶的微生物的方法
淀粉酶是一种重要的酶类，在食品、制浆造纸等工业中广泛应用。
为了提取淀粉酶，我们需要寻找土壤中的微生物作为产酶菌株，并开发一种高效的分离方法。
下面介绍一种用于分离产淀粉酶微生物的方法。
首先，我们需要采集土壤样品，最佳采集时间一般在较潮湿的季节，例如春季或秋季。
将土壤样品放入无菌容器中，避免外界污染。
接下来，将土壤样品进行稀释处理。
取适量的土壤样品，加入适量的浸润液（如无菌盐水溶液），进行充分的搅拌混合。
然后，进行一系列的稀释，以获得适合于微生物生长的平衡菌落计数。
然后，将样品进行涂布。
取一定稀释倍数的土壤样品，均匀涂布在含有淀粉基质的琼脂平板上。
淀粉基质可以提供微生物产酶的营养来源。
在涂布后，将琼脂平板进行孵育，一般在适宜温度下培养24-48小时。
在孵育结束后，观察琼脂平板上是否出现透明环或透明区域。
这些透明环或区域代表微生物分泌产生的淀粉酶对淀粉基质进行降解的结果。
选择直径适当、透明区域清晰的菌落进行分离。
分离后，我们可以进行产淀粉酶微生物的纯化和鉴定。
对分离的菌株进行单菌落传代培养，将单一菌落的微生物培养至纯化。
然后，通过形态学观察、生理生化特性测试和16S rRNA基因测序等手段，对微生物进行鉴定确认。
通过这种方法，我们可以从土壤中分离并鉴定出产淀粉酶的微生物菌株。
这对于淀粉酶的生产和应用具有重要的意义，为相关工业提供了有益的资源。