大肠杆菌生产人胰岛素
(完整word版)人胰岛素的工业制备
人工胰岛素制备工艺的研究及其进展摘要:据WHO 统计，全世界糖尿病患者已接近1.2亿，而我国目前糖尿病患者的总数已达到3000万人，跃居世界第二位，其中数百万患者长期使用胰岛素治疗。
如今我国经济发展迅速，同时也带来了巨大生活的压力和健康问题，并且带有一定的遗传因素，数百万患者需要长期使用胰岛素治疗。
胰岛素是由胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸等的刺激而分泌的一种蛋白质激素。
而目前临床使用的胰岛素有三种来源：1、动物胰岛素（从猪和牛的胰腺中提取，两者药效相同，但与人胰岛素相比，猪胰岛素中有1个氨基酸不同，牛胰岛素中有3个氨基酸不同，因而易产生抗体）。
2、半合成胰岛素（将猪胰岛素第30位丙氨酸，置换成与人胰岛素相同的苏氨酸，即为半合成人胰岛素）。
3、重组人工胰岛素（利用生物工程技术，获得的高纯度的生物合成人胰岛素，其氨基酸排列顺序及生物活性与人体本身的胰岛素完全相同）。
可见第三种方法是目前最好的副作用最小，而且简单安全的方法。
所以针对重组人工胰岛素的制备做了以下研究。
关键词:重组人工胰岛素；大肠杆菌；(His)6一Arg—Arg一人胰岛素原；在当今世界范围内，诺和诺德、辉瑞、万安特以及我们国内的通化东宝、深圳科兴等生物技术公司在胰岛素的生产技术上已经都是很先进的水平了，也就是重组人工胰岛素的制备方法。
这种方法是自从动物中提取胰岛素和人工合成胰岛素的方法以来，最简便而且是最有效最安全的制备胰岛素的方法。
它是发酵工程技术和基因工程技术结合的产物，也是造福人类的新一代药物生产方法。
不仅在治疗糖尿病方面的作用突出，同时对治疗癌症等严重影响人类健康的疾病的治疗开创了思路。
所以，作为本科生的生物技术专业制药方向的大学生来说，这种利用基因工程，发酵工程等方法工业制备胰岛素的原理和流程的工艺，和这种开拓创新的思维是我们必须要了解和学习得。
1重组人工胰岛素的生产原理通过基因工程酵母菌发酵生产hPI，经后加工形成hI。
重和林M30
重和林M30 （精蛋白重组人胰岛素注射液预混70/30）重和林是拜耳医药保健有限公司出品的一种重组人胰岛素。
是通过重组DNA技术、采用大肠杆菌提取技术，利用一种非致病性菌株而产生的胰岛素重和林胰岛素分子在成分和三维构形方面与自然人完全一致。
用来治疗I型和II型糖尿病。
重和林分为3种：（1）重和林N （精蛋白重组人胰岛素注射液）100IU/ml,3ml/支,笔芯；40IU/ml,10ml/瓶,小瓶。
（2）重和林R （重组人胰岛素注射液）100IU/ml,3ml/支,笔芯；40IU/ml,10ml/瓶,小瓶。
（3）重和林M30 （精蛋白重组人胰岛素注射液预混70/30）100IU/ml,3ml/支,笔芯；40IU/ml,10ml/瓶,小瓶。
我院现在使用的是重合林M30。
重和林于2001年在波兰上市，以优质的品质和出色的疗效，广受临床医生及患者的好评。
2004年在俄罗斯上市，2009年在乌克兰上市，2010年在中国上市。
重和林的研发是高端技术的产物，采用大肠杆菌提取技术，大肠杆菌提取技术是科学的、先进的、独特的，重和林获得包括中国、美国、欧盟等全球58个国家和地区的两项专利。
重和林早在1994年即开始在中国、美国和欧盟等全世界58个国家申请了包括生产流程的专利、羧肽酶B的专利在内两项生产工艺专利，有效期20年，直到2014年底。
给药途径分皮下注射、静脉注射两大类。
其中胰岛素注射器、胰岛素笔、皮下胰岛素泵均通过皮下注射胰岛素。
静脉注射仅限于短效胰岛素（R）。
皮下注射胰岛素的部位很多，包括双上臂外侧（包括三角肌处），腹部两侧，臀部及大腿外侧等都可选作注射部位。
不同部位胰岛素吸收速度不同，由快及慢依次为：腹壁、前臂、大腿外侧、臀部。
重和林M30笔芯的使用方法：注射前，将笔芯在手掌中搓10次。
若笔芯已经安装入笔中，每次注射前，从一端握住笔，缓慢的倒置180度，上下摇动10次，使玻璃珠在每次摇动中能完全的穿行于笔芯中，检查应呈白色均匀混悬液，如有凝结或管壁有白色固体物则不要使用。
新型人胰岛素-重和林简介
吸收与分布
• 健康受试者约 5%胰岛素同血 中蛋白结合。 脑脊液中的胰 岛素浓度约为 血清胰岛素总 浓度的25%
拜耳的中效胰岛素 产品为重和林N
重和林R
重和林R
特点： • 与目前广泛应用的人胰岛素产品具有生物等效性 • 性价比更高 • 与拜耳口服降糖药、血糖监测仪器、患者教育项目一起构成了一个全面的糖
尿病管理服务体系
重和林M30
特点：
• 重和林系列产品中的预混规格，可以满足不同糖尿病患者的治疗需求 • 为人胰岛素的预混产品
7
6
5
4
3
2
1
0
时间（min）
—重和林R — 对照R 重合林 R 优泌林 R
相对生物有效性：107.4±18.8%
GIR：葡萄糖输注率，反映胰岛素降糖作用的有效性
0 25 50 75 100 125 150 175 200 225 250 275 300 325 350 375 400 425 450 475 500 525 550 575 600 0 25 50 75 100 125 150 175 200 225 250 275 300 325 350 375 400 425 450 475 500 525 550 575 600
重和林® R 重组人胰岛素注射液 规格：100IU/ml,1*3ml,cartridge
40IU/ml,1*10ml,vial
重和林® M30(30/70) 精蛋白重组人胰岛素注射液(预混30/70) 规格：100IU/ml,1*3ml,cartridge
基因工程制备胰岛素的原理
基因工程制备胰岛素的原理基因工程制备胰岛素的原理主要涉及三个步骤：基因克隆、表达和纯化。
第一步：基因克隆。
首先，从人类组织或细胞中提取出编码胰岛素的基因，即胰岛素原基因（proinsulin gene）。
然后，使用酶切酶将这个基因剪切成多个片段。
接下来，将剪切好的基因片段与载体（通常是质粒）连接，形成重组质粒。
再将这个重组质粒转化到细菌中（如大肠杆菌）进行复制。
经过培养、筛选和鉴定，得到含有胰岛素基因的重组质粒。
第二步：基因表达。
将所得到的重组质粒注入到宿主细胞（通常是培养的动物细胞或真核表达系统）中，使其成为重组表达宿主。
在宿主细胞中，重组质粒会被转录成胰岛素的mRNA，并被细胞质中的核糖体翻译成胰岛素的前体蛋白（proinsulin）。
然后，前体蛋白经过一系列的翻译后修饰，如信号肽的剪切和糖基化等，转变成成熟的胰岛素蛋白。
第三步：纯化。
经过表达的胰岛素会以包括其他蛋白质的复杂混合物的形式出现在表达宿主细胞中。
因此，需要对这个混合物进行纯化，以获得高纯度的胰岛素。
一种常用的方法是使用层析技术，如亲和层析和离子交换层析等，根据胰岛素与某些特定配体（如金属离子或抗胰岛素抗体）的亲和性来进行分离和富集。
通过这些层析步骤，可以得到纯度较高的胰岛素。
总结起来，基因工程制备胰岛素的原理主要涉及基因克隆、基因表达和纯化。
通过基因克隆，首先获得含有胰岛素基因的重组质粒；接着，通过基因表达，将胰岛素基因在宿主细胞中转录和翻译成胰岛素蛋白；最后，通过纯化步骤，将胰岛素从其他蛋白质中分离出来，并得到高纯度的胰岛素。
这种方法可以大量制备胰岛素，为临床治疗糖尿病等疾病提供重要药物。
人胰岛素的制备
人胰岛素的制备一、获得目的基因从供体细胞中提取mRNA，以其为模板，在反转录酶的作用下，反转录合成胰岛素mRNA互补DNA，再以cDNA第一链为模板，在反转录酶或DNA聚合酶I的作用在，最终合成编码它的双链DNA序列。
即得到了目的基因。
反转录-聚合酶链反应法(一)从人体细胞内提取胰岛素基因转录的mRNA1, 细胞总RNA的提取:取胰岛B细胞，用PBS洗后，加入TRIZOL试将细胞破裂，后用DEPC处理，多次离心后，取RNA白色沉淀，测OD值，电泳。
2 ，从总RNA中分离mRNA：取上述提取的总RNA若干，加入Buffer OBB ，Oligotex Suspension ，打匀。
70℃水浴（裂解RNA的二级结构），20-30℃条件下，静置（让Oligotex与mRNA结合）。
将Oligotex/mRNA复合物的沉淀加到EP管SPIN柱上高速离心，加Buffer将其他RNA洗脱，最后用琼脂糖凝胶电泳纯化mRNA。
（二）mRNA转录合成cDNA第一链cone 第一链的合成加入上步获得的mRNA和适当引物于EP管中，加入RNase-free water，混匀后,70℃反应10分钟，反应完成后,立刻将反应体系置于冰上5min;稍微离心一下,顺序加入缓冲液、RNA酶抑制剂、反转录酶、dNTP （加入放射性同位素利于检验），混匀，稍微离心反应物之后,42℃放置2分钟。
取出置于冰上。
电泳分析，同位素活性测定。
（三）PCR法扩增，特异合成目的cDNA链通过胰岛素的特异引物，用PCR法进行扩增，特异的合成胰岛素的cDNA链。
PCR法的操作步骤：预变性引物退火引物延伸循环25-35次最后延伸前端引物：✧5’-ggt tcc gga tct ggt tct ggt tct ctg gtc ccc cgc ggt agt caccac cac cac cac cac cgt ttt gtg aac caa cac ctg tgc ggc-3’✧后端引物：✧5’-agt gtc gac tta gtt gca gta gtt ctc cag ctg gta-3’二、组建重组质粒采用pQE--30质粒作为载体，用双酶切法进行基因重组。
生物发酵技术在制备抗生素和胰岛素中的应用
生物发酵技术在制备抗生素和胰岛素中的应用随着科学技术的不断发展，生物发酵技术已成为制药产业中不可或缺的一部分。
生物发酵技术可以高效、精准的制备许多重要化合物，如抗生素、胰岛素等。
本文将会探讨生物发酵技术在制备抗生素和胰岛素中的应用。
一、抗生素的生产抗生素是一种抑制或杀灭微生物的药物，常用于治疗感染疾病。
抗生素的发现、制备和使用是人类在抗击细菌感染方面的一项重要成就。
然而，在一些情况下，传统的化学合成方法并不能很好地制备一些复杂分子结构的抗生素。
因此，生物发酵技术在抗生素制备中得到了广泛应用。
生物发酵技术通常使用微生物，如细菌和真菌等作为生产抗生素的生物体。
例如，青霉素是由青霉菌属的黄金链霉菌生产的。
生物发酵技术不仅可以生产天然抗生素，还可以制备半合成和全合成抗生素。
例如，利福平是由青霉素G半合成而来的。
在抗生素的生产过程中，微生物需要生长在有利的环境中，以产生足够的抗生素。
微生物生长需要特定的营养物质和气体、适宜的温度和pH值等条件。
此外，微生物的生长还需要适当的搅拌和通氧等设备。
所有这些条件都需要仔细控制和调整，以确保生产出高质量、高效的抗生素。
二、胰岛素的生产胰岛素是调节体内糖代谢的激素，常用于治疗糖尿病。
胰岛素的生产最初是通过从猪和牛胰腺中提取胰岛素，但由于其容易引起人体免疫反应，限制了胰岛素的使用。
因此，科学家开始使用生物发酵技术生产胰岛素。
生物发酵技术中的胰岛素生产通常使用大肠杆菌作为基因工程载体。
通过将人类胰岛素的基因插入大肠杆菌中，大肠杆菌就可以生产与人类胰岛素相同的蛋白质。
然而，胰岛素蛋白质的折叠和加工需要在正确的生理条件下进行。
因此，为了生产高质量的胰岛素，大肠杆菌需要在类似胰腺的环境下生长。
为了满足大肠杆菌的生长需求，生物发酵技术需要特殊的培养条件。
大肠杆菌的生长要求不同于真菌和细菌，更难以控制。
这就涉及到生物发酵技术中微生物的生长监测、基因表达调节和反应器的调整等方面的技术要求。
重组人胰岛素原料药生产实验报告
重组人胰岛素原料药生产实验报告重组人胰岛素原料药生产实验报告引言：胰岛素是一种重要的蛋白质激素，对调节血糖水平起着关键作用。
传统上，胰岛素是从动物源中提取的，但这种方法存在成本高、产量低、批次不稳定等问题。
为了解决这些问题，近年来，研究人员利用基因工程技术成功地实现了大规模的重组胰岛素的生产。
本实验旨在通过表达和纯化重组人胰岛素原料药，探索其生产工艺及其在医学上的应用前景。
实验方法：1. 克隆胰岛素基因：从人类胰腺细胞中提取RNA，合成cDNA，通过PCR扩增胰岛素基因。
2. 插入载体：将胰岛素基因与表达载体连接，并通过细菌转化将其导入大肠杆菌宿主细胞中。
3. 表达蛋白：在含有适当抗生素的培养基中培养大肠杆菌，表达胰岛素基因并产生胰岛素前体蛋白。
4. 纯化胰岛素前体蛋白：利用柱层析技术去除杂质，得到纯化的胰岛素前体蛋白。
5. 胰岛素前体蛋白的转化：通过酶促反应将胰岛素前体蛋白转化为活性胰岛素。
实验结果：1. 成功克隆了人类胰岛素基因，并将其插入表达载体中。
2. 经过培养和表达，成功得到了大量含有胰岛素前体蛋白的大肠杆菌。
3. 经过柱层析技术的纯化，获得了高纯度的胰岛素前体蛋白。
4. 在酶促反应中，胰岛素前体蛋白成功转化为活性胰岛素。
讨论：本实验成功地表达和纯化了胰岛素前体蛋白，并将其转化为活性胰岛素。
重组胰岛素的生产相较于传统的动物源提取方式具有许多优势。
首先，基因工程技术可以大幅度提高产量，从而满足市场需求。
其次，重组胰岛素的品质更稳定，批次间的差异小，有助于提高疗效的一致性。
此外，重组胰岛素的生产过程相对较简单，能够降低生产成本。
重组人胰岛素原料药作为一种重要的医药原料，具有广阔的应用前景。
目前，胰岛素已成为糖尿病患者必不可少的药物之一。
通过重组技术生产的胰岛素原料药可以满足糖尿病患者不断增长的需求。
此外，胰岛素在其他疾病治疗中也有潜在的应用，如肥胖症、胰岛素抵抗等。
结论：本实验成功地表达和纯化了重组人胰岛素原料药，为其大规模生产提供了理论和实验基础。
将胰岛素基因导入大肠杆菌的方法
将胰岛素基因导入大肠杆菌的方法
一、简介
将胰岛素基因导入大肠杆菌是一种重要的基因工程技术，目前已被广泛应用于微生物中药物的分泌、特定化学反应的催化以及研究生物机制等，为生物技术及其应用提供了新的手段。
本文将介绍将胰岛素基因导入大肠杆菌的方法。
二、技术要点
1、基因连接：在将胰岛素基因导入大肠杆菌中，首先需要合成一个带有载体的表达载体，通常会用多克隆位点将胰岛素基因和载体连接在一起，形成一个可以被大肠杆菌识别的表达载体。
2、转化：接着将这个表达载体通过各种转染方法注入到大肠杆菌中，如电转染、质粒转染等，以达到将胰岛素基因导入大肠杆菌的目的。
3、识别：然后通过基因检测，如PCR等技术，识别到大肠杆菌中的胰岛素基因，从而确定转化是否成功。
4、筛选：最后通过定量反应、生物学抗性试验以及其他生物学技术，筛选出高表达胰岛素的大肠杆菌株，以确保将胰岛素基因导入大肠杆菌的成功。
三、结语
将胰岛素基因导入大肠杆菌是一种重要的基因工程技术，其步骤主要包括基因连接、转化、识别及筛选等，目的是为了得到高表达胰岛素的大肠杆菌株，以更好地应用于生物技术及其应用中。
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大肠杆菌生产人胰岛素基因工程自诞生以来发展很快。
1972年，美国斯坦福大学生物化学系主任贝格尔把两种病毒的DNA人工组合到一起，形成了第一个人工重组DNA分子，这是基因工程的开创性工作。
1973年，科恩发表一篇报告，说他们把大肠杆菌的两种质粒的DNA连接到了一起，并且又送回到大肠杆菌细胞中去，重组质粒的DNA得到了复制和表达。
这是第一次完成了一个基因工程。
1976年，美国用大肠杆菌生产出了本来由人脑产生的生长抑制素，完成第一个有实用价值的基因工程。
已知生长抑制素是含有14个氨基酸的多肽链，在清楚其结构以后，根据遗传密码可以倒推出它的基因结构——一条由42个核苷酸组成的DNA片断。
人工合成这个DNA片断，再把它送入大肠杆菌。
由这项研究开始，科学家又掌握了一条获得基因的新途径——人工合成。
使用类似方法，美国人在1978年又用大肠杆菌生产出了胰岛素，使胰岛素可以工业化生产，给糖尿病患者带来了福音。
原先胰岛素的来源是从牛胰脏提取，产量有限。
用化学方法人工合成胰岛素仅有科学意义而无实用价值，因为成本太高了。
现在世界医药市场上的胰岛素，已经大半是基因工程的产品了。
鼠生长激素、人生长激素、鸡卵清蛋白、人白细胞干扰素等许多种物质，也都已经可以用大肠杆菌生产。
生物制法：首先剪切胰岛素基因，再将胰岛素基因转入人的大肠杆菌内，再创造大肠杆菌裂殖的有利环境，对大肠杆菌进行大规模培养，使之产生大量的治疗糖尿病的药物——胰岛素。
基因制法: 在基因工程人胰岛素的生产过程中,一般是先表达胰岛素原,然后对胰岛素原复性,复性后的胰岛素原通过酶切得到有活性的胰岛素.其中胰岛素原的复性效率是决定最终收率的关键因素,正确折叠与错误折益胰岛素原的分子量完全相同,结构非常相似,采用RT-HPLC可对其进行分离检定.Sergeev等利用反相色谱建立了复性液中胰岛素原的检测方法.如果要对正确折叠与错误折盛胰岛素原的结构进一步说明,可将其用蛋白酶V8酶解,然后用RP-HPLC-MS作肤图谱.Damn等用S.aureus protease V8酶解胰岛素原,然后用R'FHPLC做肚谱图,并结合质谱法对重组胰岛素原的折受过程进行了监测.新胰岛素工艺提升市场超15% 行业格局将变(2009-05-22 10:57:54)糖尿病在过去十年里在全球各地发展势头十分迅猛，现在中国、印度、巴西和俄罗斯等新兴工业国也已迈入糖尿病高发国行列。
而尽管目前国际医药市场上已有磺酰脲类、α－葡糖苷酶抑制剂类和噻唑烷二酮类等数十个品种的降糖药，但临床医学界早已观察到糖尿病人对这些药物发生了耐受现象。
作为糖尿病“最后的治疗手段”的胰岛素，其需求量因此不断上升。
目前，全球胰岛素市场被诺和诺德、礼来和赛诺菲－安万特所垄断，我国的吉林通化东宝药业的产能也突飞猛进，已跻身胰岛素领先生产商行列。
然而，胰岛素生产工艺层出不穷，据说已有转基因植物胰岛素生产工艺诞生，由此引起了上述生产商的关注。
新技术来袭就胰岛素生产工艺而言，在20世纪80年代以前，国际市场所需胰岛素原料药基本来自动物胰岛素，但随着生物工程制药业的崛起和重组DNA技术的日趋成熟，利用酵母菌表达人胰岛素基因法生产的人胰岛素已成为国际胰岛素市场上的主流产品，而副作用较大的动物胰岛素在西方国家早已退出舞台，目前仅少数国家仍在继续使用，估计动物胰岛素目前所占世界胰岛素市场的份额已不足5％近期，加拿大SemBioSys生物工程公司宣称，其已成功利用北美洲常见的一种油料植物??红花（可榨取食用红花油）经转基因技术改造后生产出人胰岛素产品。
据该公司CEO鲍曼先生介绍，该公司经多年试验，现已能做到每英亩红花所产的红花籽能提取到1公斤左右的人胰岛素产品（这些胰岛素原料药加工成制剂足以供2500名糖尿病人使用1年）。
鲍曼还称，该公司利用红花提取的人胰岛素原料药的价格，仅为利用转基因酵母菌法生产的同类产品价格的70％。
由此推测，若今后转基因红花生产的人胰岛素产品能获准上市，则其价格将进一步下降至现胰岛素市场价的40％或更低。
据悉，SemBioSys公司已在2008年初正式向美国FDA提出其转基因红花人胰岛素产品在美进行临床试验的申请。
现该产品正在做Ⅰ~Ⅱ期临床试验。
一旦该人胰岛素在美通过临床试验并上市，将为早已竞争十分激烈的国际胰岛素市场增添一强有力的新竞争对手。
从理论上讲，利用转基因植物生产蛋白质类药品要比利用大肠杆菌等真核细菌转基因生产的药品更容易，且很容易获得高产。
而且，发酵转基因微生物需要价格极其昂贵的不锈钢制发酵罐与提取设备（在国外每套不锈钢制发酵罐/提取设备的市场价格在几百万至上千万美元），而如利用转基因植物来生产人蛋白质药品则无需任何发酵设备，只需像种植普通作物那样播种、田间管理和收获，大大节省了生产成本。
因此，全球医药业界人士的目光都集中在SemBioSys公司身上，一旦该人胰岛素通过临床试验并获上市批文，将是世界上首个利用转基因植物生产并上市的胰岛素，具有里程碑意义。
从另一个角度来看，诺和诺德、礼来等胰岛素生产商的市场份额将不可避免地受到该产品的威胁。
巨头们严阵以待业内人士分析，SemBioSy公司的人胰岛素原料药将挟其低廉的生产成本优势，不仅对欧美胰岛素生产商构成巨大威胁，对我国的吉林通化东宝和北京甘李药业两大人胰岛素生产商所造成的影响同样不容小觑。
据悉，我国通化东宝药业经扩产后，去年其重组基因人胰岛素原料药产量已从几年前微不足道的年产200公斤急速扩张至去年3000公斤年产能的规模化生产水平，估计这一胰岛素原料药产量约占国际市场胰岛素当年供应量的1/5。
而国家有关部门为鼓励国内企业提高胰岛素原料药出口数量水平，今年年初已出台了胰岛素出口退税新政策，即胰岛素类产品的出口退税率从原来的5％提高至13％。
这一措施将极大地促使国内胰岛素原料药生产企业将目光更多地从国内市场转向海外市场。
令人欣慰的消息是，吉林通化东宝药业公司已与20多个国家的客商达成出口胰岛素原料药和制剂的意向，几年来，该公司已向苏丹、乌克兰、俄罗斯、埃及、巴西、巴基斯坦、印度、伊朗和尼泊尔等国家累计出口1亿多美元的人胰岛素产品。
如果没有新情况出现，我国胰岛素原料药对外出口前景将是一片光明。
据了解，虽然早在20多年前美国已有一些生物工程制药公司利用转基因土豆、转基因香蕉、转基因西红柿和转基因烟草等高产作物成功生产出抗病毒疫苗，但迄今为止，上述产品中尚未有被FDA批准上市的先例。
据美国科学家分析，植物远比大肠杆菌或酵母菌等微生物所含成分更复杂，一旦植物中的植物毒素或其它未知成分由于提取工艺不纯而带入产品中并进入人体，是否会引起严重的副作用也未必可知。
所以，尽管美国生物制药公司早在20多年前即已有利用转基因植物生产人蛋白质药品的构想和实践，但美国至今未见有任何一种人用蛋白质类药品是利用转基因植物所生产和上市。
那么，今年这一局面是否会被打破？据悉，诺和诺德、礼来、赛诺菲－安万特、通化东宝均在密切注视着SemBioSys的人胰岛素产品是否能顺利获得FDA的上市许可。
不管事态发展如何，国际胰岛素市场增长率今年将超过15％，但今年恐将充满变数，对我国刚刚起步不久的生物工程法生产胰岛素原料药企业来说考验尤为严峻。
胰岛素国际市场是否有新走向，还将拭目以待。
(医药经济报)工业生产胰岛素精制工艺改革研究——Ⅲ.从粗品胰岛素精制高纯胰岛素--《南京大学学报数学半年刊》1986年03期胰岛素制剂的纯度与其抗原性密切相关。
1972年Eli Lilly公司制成了单峰胰岛素和单组成胰岛素。
1973年Novo公司和Nordisk公司,开发研制成单组分胰岛素。
这些胰岛素制剂的抗原性大大低于一般胰岛素制剂。
迄今为止,关于高纯度胰岛素制剂的研究,在我国还未见报导。
作者应用离子交换凝胶柱层析技术,通过将一根阳离子——葡聚糖凝胶(CM-Sephadex C—50)柱和另一根阴离子——葡聚糖凝胶(QAE—Sephadex A—50)柱串联,并将层析收集液进一步纯化,从粗品胰岛素制成了高纯胰岛素。
用酸、碱二种不连续体系的聚丙烯酰胺凝胶电泳,对制成的产品进行检测,结果证实电泳谱只显出单一的染色区带。
这证明本产品的纯度达到了丹麦单峰胰岛素的水平。
由于方法简便有效,适宜在生化制药厂推广应用。
重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ工程菌高密度发酵工艺优化目的优化表达重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)工程茵的高密度发酵条件.方法考察培养基以及诱导时机、诱导剂量和诱导时间对蛋白表达的影响;用自控发酵罐进行分批补料培养实验,确定优化工艺条件.结果以2×YT+0.5%葡萄糖为发酵培养基,经0.8 mmol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导5 h,通过pH-stat反馈补料方式实现工程菌高密度发酵与目的蛋白高效表达,每1 L发酵液收获干菌体50.1 g,IGF-Ⅰ含量达5.25g/L.结论建立了IGF-Ⅰ工程菌优化的高密度发酵工艺,为IGF-Ⅰ的下游纯化和工业化生产奠定了基础。
陈蔚青陈虹胡文浪张建芬CHEN Wei-qing CHEN Hong HUWen-lang浙江树人大学,生物与环境工程学院,浙江,杭州,310015胰岛素前体发酵过程补料优化方法申请号/专利号：200710026683本发明的胰岛素前体发酵过程的补料优化方法，基于微生物生长动力学基础，采用首先通过分批补加甲醇来确定最初甲醇流加速率，然后通过最终发酵菌体密度与实时测样菌体密度的差值以及发酵周期来进行比生长速率的计算和调整，最后计算出实时待调整的甲醇流加速率的方法，实现了根据菌体生长状况及时调整实时甲醇流加速率的变比生长速率控制，将比生长速率与菌体生长、产物表达进行参数相关，这种变比生长速率调控策略能够及时地调整菌体的生长，使之与产物表达相协调，可以明显地提高蛋白的浓度，重组猪胰岛素前体的浓度和总产量较现有技术（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ酵母发酵手册）酵母发酵的方法提高了５０％。
申请日：2007年02月02日公开日：2007年09月05日授权公告日：申请人/专利权广东东阳光药业有限公司人：申请人地址：广东省东莞市松山湖北部科技工业园工业北路发明设计人：朱志钢;郑强;张富权;谢俊杰;唐新发专利代理机构：东莞市华南专利事务所代理人：张明专利类型：发明专利分类号：C12P21/02;C12R1/84胰岛素有哪些种类根据胰岛素的来源不同，可分两大类，即动物胰岛素和人胰岛素。
动物胰岛素：主要有猪胰岛素和牛胰岛素。
动物胰岛素主要是从动物（猪或牛）的胰腺提取并纯化，由于与人体自身生产的胰岛素在结构上有不同程度的差别，因而当注射进人体后，人体的"防御系统"即医学上所称的免疫系统会发生排斥反应（医学上称为免疫反应），产生一种称为"抗体"的物质、和注射进体内的胰岛素结合，因而导致胰岛素不能发挥降低血糖的功效，导致某些病人，注射的胰岛素不能发挥降低血糖的功效，注射的胰岛素剂量会越来越大，久而久之导致胰岛素逐渐失效，少数病人免疫反应较严重，可出现皮疹、发热，全身发痒，甚至血压下降，休克等，这些病人就不能继续用这种胰岛素治疗。