中期考核汇报 - 扬州大学

但再如果增加提取次数是否提取效果会显著增加还需要进一步 研究。
3、提取方法的考察
•现使用的有关银杏外种皮中有效成分的有机溶剂提取方 法主要有热提法，索氏提取法， 超声波提取法。 • 最近有有一种新的植物成分的提取法：超临界二氧 化碳萃取法(supercriticalfluid extraction SFC）， 此法是近20年来迅速发展起来的一门高新分离技术,在银 杏叶提取物中有人作过一些研究，但因其设备昂贵且对 操作人员技要求高，所以在银杏提取物中并没有大量推 广使用 。
1、提取溶剂的考察：
在提取溶剂的选择时首先考虑的是相似相溶原理，即极性物质易溶于 极性有机溶剂中，非极性物质易溶于非极性溶剂中。银杏萜内酯从结构上 来看都是属于高度含氧原子的萜类，再加上其独特的分子结构，使其表现 出较强的分子极性。银杏内酯GA、GB、GC，GM和GJ的结构相似，差别在于 羟基的个数和位置不同，由此产生了分子极性的差异，对于这五种银杏内 酯和白果内酯的极性认识不一，一种认为白果内酯较银杏内酯少一个五元 环，且有两个羟基，极性较大，内酯GB的极性则较小。而有人则认为银杏 内酯J和C的极性最强；A，B较强；而白果内酯因属于倍半萜类，分子结构 中只有一个戊烷环和三个内酯环，含有两个羟基团，与银杏内酯相比，白 果内酯的分子极性较弱。Teris A.则认为GB是强极性的，而GA是弱极性的， 所以，对于萜内酯的极性还需进一步的考察研究。
用100%的水做提取剂时GC和BB的提取
效果不佳，而在里面加入一定量的乙醇时提
取效果很好。
吴红菱17的提取方法为干燥、粉碎的银杏外种皮至 醇-水（丙酮-水）溶剂中提取，在她的报道中并未有提 取条件的限制，即有机溶剂与水的比例，提取温度，提 取时间，提取次数等。
楼凤昌的提取方法：银杏外种皮干燥、粉碎,称重, 约4kg,以85%工业乙醇回流提取三次,每次3h，
银杏外种皮所含的化学成分与银杏叶中有很大的不同，有关银 杏外种皮提取物的萜内酯纯化还无人做过研究，是否叶的纯化 方法适用于外种皮还需进一步的研究。而银杏叶的这种溶剂萃 取-柱纯化法虽然得出的内酯含量很高但经过较多的纯化步骤萜 内酯的损耗也很大，所以还应该简化步骤，寻求更为有效的柱 填料，并根据填料选择毒小，洗脱能力强的洗脱液，取 得 银杏
谢谢大家！
3.6 结构鉴定
所以综合考虑，有关ຫໍສະໝຸດ 杏外种皮的萜内酯较好溶剂提取方法为：
干燥粉碎的银杏外种皮，25%-60%乙醇-水溶液提取， 提取温度60℃，提取次数3-4次，料液比为：第一次为 1:12，第二次可为1:8或1:6，然后合并提取液，减压回收 有机溶剂，得银杏外种皮粗提液。
乙醇-水溶液 60℃ 提取3-4次
银杏外种皮
• 萃取是初步纯化。粗提过程中使用的是较低浓度的乙醇 溶液，所以外种皮中一些脂溶性物质也会溶解在提取溶 剂中，其主要就是一些脂类物质，所以要先将脂类物质 除去。石油醚是不错的选择。
• 对于银杏叶中的萜内酯的精制和纯化方法，郁 青
• 等人做过全面的研究，发现 乙酸乙酯是银杏
• 萜内酯的最好的萃取剂之一。
减压回收溶剂。得银杏外在种皮粗提物。
2、提取温度和时间
张立国等考察了银杏在不同溶 剂和温度下的溶解性，结果表明： 萜内酯在70℃下，溶剂强度在8.50处溶 解度最大。 至于提取次数可按溶剂用 量和外种皮用量来调节，一般使用的提 取料液比在1:4—1:12（g∕ml）之间， 第一次的溶剂用量较后大，提取一般在 三次为宜。
柱纯化
柱纯化现使用的主要是酸性氧化铝柱，大
孔吸附树脂和聚酰胺柱。
•目前只有李新岗25等用氧化铝柱处理了银杏叶的乙醇提取液， 然后用无水乙醇洗脱，洗脱液浓缩即得产品，方法可将银杏总 内酯的含量提高到95%以上，得率为4.2%，但是其白果内酯含 量很低 。 •何君采用了酸性氧化铝纯化银杏萜内酯，其中的白果内酯损 失很小，因为酸性氧化铝对黄酮和杂质的吸附好，对内酯吸附 差，并且对白果内酯无损伤，吸附后的流出液即所需要的萜内 酯。
银杏内酯（ginkgolide）和白果内酯(bilobalide)分子结构示意图
银杏外种皮中萜内酯
现已分离鉴定的银杏外种皮中的萜内酯只有三种， 即银杏内酯A（GA），银杏内酯B（GB）和银杏 内酯C（GC）。吴红菱在测外种皮中内酯含量时 用使用了白果内酯作为标准品，且得出了与白果 内酯保留值非常相近的色谱峰，他直接把他作为 白果内酯（BB）来计算内酯的总含量。余碧钰等 在研究银杏外种皮提取物时也直接用白果内酯作 为标准品，并得出了与吴红菱相同的结果，这说 明银杏外种皮中有可能含有白果内酯，但还需进 一步的研究加以鉴定。
银杏萜内酯之前只在银杏叶和根皮中分离到，共有六种（GA,GB,GC,GM,GJ 和BB，前五种的化学结构很相似：都属于二萜，均具有独特的十二碳骨架，嵌 有一个叔丁基和六个五元环，其中有一个四氢呋喃环和三个内酯环。白果内酯 属于倍半萜，有一个碳戊环和三个内酯环。银杏萜内酯有很强的药物活性，其 作用主要表现在专属性的抗血小板活化因子（PFD）活性，其中GB的活性最高， 已引起国际药学界的广泛关注，有望成为治疗休克、烧伤、过敏性哮喘、中风、 移植排斥、血液透析等病症的一类新药。而BB则具有神经保护和抗水肿作用, 有望成为治疗神经系统疾病、脑炎、脑水肿等病症的新药。
•有关银杏叶中的内酯的提取和分离法已有很多 ， 且有的方法所得的产物中的萜内酯含量已达到7%， 超过了国际上所规定的6%的标准，可见，有关银杏 叶中萜内酯的提取纯化法已很成熟。
•银杏外种皮较银杏叶比起来所含成分复杂，至今还 未有银杏外种皮萜内酯完整的提取和纯化方法。
•提取
•对银杏外种皮中萜内酯的提取方法主要采用的是有机溶剂提 取法 。
银杏外种皮中萜内酯的提取
•银杏内酯在银杏叶和外种皮中含量都很低 ，有的学 者开始对银杏内酯的 人工合成进行了研究，1988年 Corey等成功的合成了银杏内酯A ，1993年 rimmins等 研究了白果内酯的全合成途径并获得了成功 。
•但由于银杏萜内酯的分子立体结构复杂，人工合成 途径的技术难度很大，因此，仍以天然的植物材料 （银杏叶、外种皮，根皮或种仁）作为提取萜内酯化 合物的主要来源。
萜内酯的高得率。
银杏外种皮中萜内酯的含量考察
•在对银杏叶提取物或是其提取物制剂中的萜内酯的含量的测定 方法多采用高效液相色谱法（HPLC）。但由于银杏萜内酯的紫 外吸收差，且往往有其他物质的干扰，目前尚未见有前处理方 便，通用，快速的含量测定法。
•现已知的银杏外种皮中的萜内酯有三种（GA，GB，GC），吴 红菱17在进行银杏外种皮中萜内酯的含量的测定的时候只用了 GA、GB和BB作标品，测得的结论是银杏外种皮中含萜内酯 1.3%；余碧玉等测量了银杏外种皮提取物中GA，GB，GC和BB 的含量31，结论是含银杏萜内酯11.79%。而银杏外种皮中是否含 有BB我们现在还不能肯定，是否还含有其他两种内酯或是我们 没有发现的内酯成分，所以二者的测量结果是不肯定的。
银杏外种皮粗提液
减压回收
提取液
合过 并滤
滤液
纯化
•因为银杏外种皮中所含的成分很复杂，在用有机 溶剂做提取液时，其他的很多极性和弱极性的物质 也被一起溶解在提取液中被提取出来，如黄酮类化 合物，烷基酚类、烷基酸类、醇类等等，所以必须 对所得的粗提液进行纯化，纯化的步骤一般分步： 萃取和柱纯化。
1、萃 取
任星霖
银杏外种皮研究现状
银杏外种皮是其种实最外的皮层，即种子硬壳最外面的部 分，成熟时呈黄色或黄棕色，柔软多汁，并有特殊的臭 味 。早在上个世纪八十年代，我国就有人对银杏外种皮 进行了研究，近十几年的研究主要集中在以下三方面：
对银杏外种皮中化学成分及其含量的研究 对银杏外种皮提取物药理活性的研究 对银杏外种皮中有效成分的提取分离及纯化的研究
大孔吸附柱
大孔吸附柱是按其极性和填料的孔径大小对所纯化的 物质进行选择性的吸附的方法，用于银杏萜内酯的纯 化中主要有两种形式，一种是只吸附黄酮等杂质，而 不吸附萜内酯的树脂，如DM-130型树脂和聚酰胺柱都 是黄酮良好的吸附剂，聚酰胺柱与黄酮形成氢键吸附， 在银杏叶和外种皮提取物中用来除去黄酮类物质是很 好的选择。这种柱纯化的洗脱液经过浓缩即得产品。 另一种是吸附萜内酯而对其他杂质成分吸附较弱的树 脂。韩金玉等作了有关大孔吸附树脂对银杏内酯和白 果内酯吸附性能的研究，结论是树脂AB-8对银杏萜内 酯具有较大的吸附量，且解吸率大大高于其他树脂， 具有良好的吸附性能。
银杏萜内酯
银杏萜内酯是属于萜类化合物，萜类化合物是一类广泛存在于自然界的天 然产物，凡分子式符合（C5H8）n通式的衍生物统称为萜类化合物，实际上它 是聚戊二烯类化合物，按照碳原子数目又可以分为单萜（碳原子数目：10）， 倍半萜（碳原子数目：15）二萜（碳原子数目：20），二倍半萜（碳原子数 目：25），三萜（碳原子数目：30），四萜（碳原子数目：40）多萜（碳原 子数目：7.5×103～3×105）。