细菌学检验-2-细菌学检验基本技术
微生物检验基础知识汇总!
你需要的微生物检验基础知识汇总！一、分类细菌属于原核细胞型微生物。
最精确的方法为遗传学分类方法。
最常用的是经典传统分类法：根据细菌的亲缘关系，界门纲目科属种型株分类。
科：由共同关系的属组成，如肠杆菌科；属：是种的高一级分类单位，通常包含有共同特征或关系亲密的种，用以描述微生物的主要特征，如埃希氏菌属；种：是分类等级的基本单位，同一种微生物形态、生理学特征和组成成分基本相同，用以描述微生物的次要特征，如大肠埃希氏菌；菌株或品系：同一种微生物中不同来源的纯培育物，如大肠埃希氏菌CGMCC 1.3373。
二、细菌形态学及形态学检查法细菌形态结构主要指细菌的大小、外形、排列及超微结构。
细菌结构与其生理功能、致病性、免疫性有关。
2.1形态结构2.1.1基本形态3类：球菌、杆菌、螺旋菌，杆菌是最常见的形态。
2.1.2大小测量细菌大小的单位为微米m。
球菌以直径表示大小，杆菌以长与宽表示大小，同一种细菌在不怜悯况下大小形态也有差别：涂片干燥、固定、染色时细菌收缩；快速生长的球菌往往呈短杆状。
菌龄与细菌大小的关系受很多因素影响，主要与代谢废物的积累及培育基中渗透压上升等因素有关。
2.1.3结构基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质；特别结构：鞭毛、菌毛、荚膜、芽孢等。
菌毛是什么？菌毛（Pilus）很多革兰氏阴性菌菌体表面遍布的比鞭毛更为细、短、直、硬、多的丝状蛋白附属器，也叫做纤毛（Fimbriae)。
其化学组成是菌毛蛋白（Pilin），菌毛与运动无关。
菌毛可分为一般菌毛(Commonpilus)和性菌毛(Sexpilus)两种。
一般菌毛长0.3～1.0um,直径7nm。
具有粘着细胞（红细胞、上皮细胞）和定居各种细胞表面的力量，它与某些细菌的致病性有关。
无菌毛的细菌则易被粘膜细胞的纤毛运动、肠蠕动或尿液冲洗而被排解，失去菌毛，致病力亦随之丢失。
性菌毛有的细菌还有1～4根较长的性菌毛，比一般菌毛而粗，中空呈管状。
性菌毛由质粒携带的一种致育因子（Ferility factor）的基因编码，故性菌毛又称F菌毛。
细菌学
细菌学1、细菌学是微生物学的一个分支学科。
它重要研究细菌的形态、生理、生物化学、遗传、进化、分类及应用的学科。
2、细菌的特殊结构及其作用；①荚膜：大多数细菌的荚膜为多糖，功能：A 抵御吞噬细胞的吞噬B特异的抗原性②菌毛：成分为蛋白质，有普通菌毛和性菌毛③芽孢：有较强的抵抗力，有助于细菌的鉴别。
④鞭毛：成分是蛋白质，功能A运动器官B具有特异抗原性C与细菌粘附有关，增强细菌对宿主的致病性3、简述鉴定细菌的要点：①获得并确定细菌的纯培养②按从大到小的顺序鉴定细菌的各种特性③正确分析有价值的结果，确认所鉴定细菌的种属可能性④实验室操作和结果判定的标准化⑤以尽可能少的实验鉴定细菌名词解释1、毒力：一定菌株或毒株致病的程度。
2、传染：病原菌侵入动物活组织，立足繁殖，从而引起一系列相互作用的过程。
3、限制酶：能作用于外来的DNA分子，切断磷酸脂键，从而限制外来核酸对细菌自身遗传物质发生影响的酶。
4、修饰酶：能够使DNA分子上的特定位置的碱基发生甲基化的酶。
5、间体：细菌的细胞膜内凹陷形成的囊状结构。
6、菌血症：细菌侵入血液系统但是血象没有变化。
7、败血症：细菌侵入血液系统引起血象发生变化。
8、类毒素：细菌外毒素经甲醛完全脱毒但任然保持抗原性的毒素。
9、半数致死量LD50 最小致死量MLD最小感染量MID 半数感染量ID50问答题1、简述细菌毒力的构成因素①侵袭力：重要与细菌产生粘附因子，固定和抗吞噬因子、扩散和转移因子。
②产毒性：与细菌产生的内外毒素和其他有毒代谢产物有关。
2、传染的表现形式有哪些？①显性传染（传染病）②隐形传染③带毒（带菌）3、细菌的外毒素与内毒素有何区别4、如何确定细菌的致病性⑴引入量的概念⑵引入分离培养及电镜技术，了解其致病机理⑶引用分子无生物学方法了解致病因子功能及基因结构及作用机理名词解释1、ELISA：酶联免疫吸附实验2、PCR：聚合酶链式反应，指存在与待扩增DNA互补引物，脱氧核苷三磷酸和DNA聚合酶的情况下，在细胞外进行的DNA聚合反应。
细菌的分离培养及培养性状的观察
实验四 细菌的分离培养及培养性状的观察在细菌学检验中，细菌的分离培养是重要的基本技术之一。
从混杂微生物中获得单一菌株纯培养的方法称为分离；纯培养是指一株菌种或一个培养物中所有的细菌都是由一个细胞分裂、繁殖而产生的后代。
分离培养的目的在于从被检材料中，或者从污染的众多杂菌中分离出纯的病原菌。
细菌分离培养应先从被检材料或病料中分离培养单个菌落，然后钓取可疑菌落进行纯培养，再将纯培养物移植培养。
目的要求1．学习、掌握需氧菌和厌氧菌分离培养的基本要领和技术。
2．了解细菌的菌落形态及其在各种培养基上的培养性状。
3．了解培养性状对细菌鉴别的重要意义。
4．掌握钓菌、纯培养及移植技术。
操作步骤一．需氧性细菌分离培养法1. 平板划线分离法菌种被其他杂菌污染时或混合菌悬液常用平板划线法进行纯种分离，此法是借助将蘸有混合菌悬液的接种环在平板表面多方向连续划线，使混杂的微生物细胞在平板表面分散，经培养得到分散的由单个微生物细胞繁殖而成的菌落，从而达到纯化目的。
但划线分离的培养基必须事先倾倒好，需充分冷凝待平板稍干后才可使用；为便于划线，一般培养基不宜太薄，每皿约倾倒20 ml 培养基，培养基应厚薄均匀，平板表面光滑。
划线分离主要有连续划线法（图4-1）和分区划线法（图4-2）两种。
划线法示意图见图4-3。
（1）连续划线法以无菌操作用接种环直接取平板上待分离纯化的菌落。
将菌种点种在平板边缘一处，取出接种环，烧去多余菌体。
将接种环再次通过稍打开皿盖的缝隙伸入平板，在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却，然后从接种细菌的部位在平板上自左向右轻轻划线，划线时平板面与接种环面成30～40度角，以手腕力量在平板表面轻巧滑动划线，接种环不要嵌入培养基内划破培养基，线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意勿使前后两条线重叠。
划线完毕，关上皿盖。
灼烧接种环，待冷却后放置接种架上。
培 养皿倒置于适宜的恒温箱内培养。
培养后在划线平板上观察沿划线处长出的菌落形态，涂片镜检为纯种后再接种斜面。
临床常见标本的细菌学检验
痰液的采集
采集指征
下呼吸道感染者可有发热、咳嗽和咳痰 可伴有胸痛、气急甚至呼吸困难，肺部可闻及湿罗音；
X线检查肺部有炎性浸润或胸腔积液 严重可致感染性休克和呼衰。
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痰液的采集和运送
采集方法
自然咳痰法 支气管镜采集法 防污染毛刷采集 法 支气管肺泡灌洗法 胃内采痰法 小儿取痰法
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痰液的采集和运送
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
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尿液的检验
菌落计数
定量接种尿液培养标本 根据细菌在平板上的生长情况 定量报告每毫升尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）
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尿液标本常见的病原菌
病原菌
正常 菌群
G+
金葡 化脓性链球菌 肠球菌 结核分枝杆菌 葡萄球菌 枯草杆菌 非致病性棒状杆菌
注意培养时间
加做无菌对照
涂片染色检查
结合培养细菌的生长特点对照判断
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（四）检验程序
标本选择 采集（保存运送）
观察、前处理
直接 涂片
报告
快速 检验
报告
分离培养 （需、厌氧、CO2培养）
可疑菌落 (必要时先做培养)
增菌(需氧、厌氧、 CO2培养)
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
难辨梭菌
杆菌
G-
沙门菌 大肠埃希菌
志贺菌 霍乱弧菌 副溶血弧菌
弯曲菌 小肠结肠炎耶尔森菌
变形杆菌
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粪便检验的临床意义
肠道致病菌
霍乱弧菌-霍乱，志贺菌-细菌性痢疾，伤寒沙门菌-伤寒；
食物中毒
沙门菌、弯曲菌、葡萄球菌、副溶血弧菌。
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第二节 临床常见标本的细菌学检验
临床微生物学检验技术(85页)
应用：常用于肠杆菌科内某些种属的鉴别，如大肠埃希菌和产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。肠杆菌属和哈夫尼亚菌属为阴性，而沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属和变形杆菌属等为阳性。
4．β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验） 原理：乳糖发酵过程中需要乳糖通透酶和β－半乳糖苷酶才能快速分解。有些细菌只有半乳糖苷酶，因而只能迟缓发酵乳糖，所有乳糖快速发酵和迟缓发酵的细菌均可快速水解邻硝基酚-β-D-半乳糖苷（O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside,ONPG）而生成黄色的邻硝基酚。用于枸橼酸菌属、亚利桑那菌属与沙门菌属的鉴别。 方法：将待试菌接种于ONPG肉汤中，35℃水浴或孵箱孵育18~24h，观察结果。
3．甲基红（MR）试验 原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步被分解为甲酸、乙酸和琥珀酸等，使培养基pH下降至4.5以下时，加入甲基红指示剂呈红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质（如醇、醛、酮、气体和水），培养基pH在 5.4以上，加入甲基红指示剂呈桔黄色。 方法：将待试菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中，35℃孵育48~96h后，于5ml培养基中滴加5~6滴甲基红指示剂，立即观察结果。
二、染色标本
细菌标本经染色后，除能清楚看到细菌的形态、大小、排列方式外，还可根据染色反应将细菌进行分类，因此染色标本的检查在细菌的初步鉴定中应用最广，起着非常重要的作用。 （一）常用染料：酸性染料、碱性染料、复合染料。 （二）常用的染色方法：革兰染色、抗酸染色、 荧光染色。
革兰染色
二、培养接种
（一）划线接种 1.方法 斜线法 、曲线法 、方格法 、放射法 、四格法。
斜线法
细菌学检验的方法和结果分析
细菌学检验的方法和结果分析摘要】目的：探讨细菌学检验的方法和结果分析。
方法：对细菌标本进行采集和送检。
结论：细菌的检验对细菌的感染控制有很大的帮助。
因此，要加大力度,更好地发挥临床微生物检验在医院感染控制中的作用。
【关键词】细菌学；检验；【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）01-0220-011.标本采集与注意事项1.1 标本采集的时间标本采集应在早期和未服用抗菌药物之前。
1.2 标本采集的种类检验标本主要以患者的大便为主。
某些情况下，患者的呕吐物、沾染粪便的衣物和尸体的肠内容物及环境水样亦可作为检材。
1.3 标本采集的方法以采集患者粪便为主，采样时可用灭菌小勺或棉拭采取自然排出的新鲜大便，亦可用直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内3～5cm处转动取出。
采用后者应注意棉拭大小适宜，避免采便量过少。
一般要求水样便采取1～3ml，成形便采取指甲大小(2～3g)的粪量；采呕吐物、沾染粪便的衣物等，用无菌棉拭蘸取标本后插入碱性蛋白胨水管中送验；采水样时，用无菌采样瓶采水450ml送验(检验时将标本全部倒入含5％食盐及10％蛋白胨的浓蛋白胨水50m1中，增菌培养后按粪便标本检验方法进行分离培养。
1.4 标本的送检采得的患者标本应在床边立即接种于培养基，不能立即检查的，要接种于碱性蛋白胨水或文．腊保存液或插入Cary-Blair半固体保存培养基中保存，尽快送往检验室。
标本与保存液的比例要适当，8～10ml保存液可加入l～3ml液体便或指甲大小的成形便，过多的大便量可降低保存液的pH。
送检标本时应填写“标本送检单”，人源性标本应写明患者姓名、地址、发病时间、采集时间、临床诊断等。
2.检验方法和结果2.1 病原学检查2.1.1显微镜检取黏液絮状的粪便标本直接涂片，空气自然干燥，在火焰上加热固定，用革兰或用l：10稀释的复红染色，镜检有无弧菌。
一般新鲜粪便中弧菌形态较典型，排列成鱼群状。
呼吸道标本细菌学检验操作规程SOP
呼吸道标本细菌学检验操作规程（一）目的：规范呼吸道标本细菌学检验,确保检验结果准确可靠。
（二）适用范围及操作人员：呼吸道标本培养和涂片检检查；检验科工作人员。
（三）支持性文件：《WST805-2022临床微生物检验基本技术标准》、《下呼吸道感染细菌培养操作指南》、《全国临床检验操作规程》。
（四）标本类型：痰、咽拭、支气管肺泡灌洗吸出液、支气管冲洗液或刷子、肺穿刺液等。
（五）标本采集时间：尽量在抗生素使用前采集。
（六）标本采集方法:1、咳痰：适用于肺部感染患者,特别是重病监护室(ICU)及住院的社区获得性肺炎(CAP)、慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)、肺脓肿(咳痰非最适标本)、可疑细菌性病原体引起的肺部感染患者。
咳痰前,患者用无菌生理盐水漱口;指导患者咳出深部痰,勿留取唾液和鼻咽腔分泌物。
2、气管吸出物：仅当气管插管的患者出现肺炎症状时(如发热或浸润),可采集气管吸出物标本。
从气管中吸痰，用无菌容器留取送检。
3、支气管肺泡灌洗液：利用纤维支气管镜向小支气管和肺泡中注入无菌生理盐水灌洗,在40mL～80mL回收的灌洗液中包含约1mL支气管末梢和肺泡中的分泌物;弃去前段可能污染的部分,收集其余部分后立即送检。
4、保护毛刷标本：将纤维支气管镜插入亚段支气管可疑感染部位,经支气管镜刷检孔推出双层套管中的毛刷(远端填塞聚乙二醇),刷取脓性分泌物,采样后将毛刷回收入双层套管并退出纤维支气管镜,用无菌剪刀剪断毛刷,置于含lmL生理盐水的无菌容器中(仅供需氧培养),快速送检。
5、气管穿刺法在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本，适用于厌氧菌培养。
6、棉拭采集法用无菌棉拭子轻轻擦拭病人鼻咽部黏膜，留取标本，置无菌试管内送检。
（七）标本拒收标准：1、申请单姓名、科别、床号与标本的标签不符。
2、痰标本呈水样或唾液样。
3、痰涂片白细胞<10／低倍视野，上皮细胞>25／低倍视野。
4、标本容器溢漏，无瓶盖。
5、痰标本留取放置时间太长，超过2小时。
临床标本的细菌学检验
病种
标本
鼠 疫 痰，腺穿刺液
霍 乱 水样便
炭 疽 痰，渗出物
白 喉 假膜，咽拭子 淋 病 尿道/阴道分泌物 流 脑 脑脊液、瘀血癍 肺结核 痰 梅 毒 病变渗出液
方法
GS，亚甲兰染色 GS，制动试验 GS，亚甲兰染色/ 串珠试验 GS，亚甲兰染色 GS GS 抗酸染色 暗视野
结
果
G-两极浓染，多形态
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• 标本的采集和运送
腰椎或脑室穿刺，将脑脊液分别收集于3 只无菌试管内， 1-2ml/管 细菌学检查
化学和免疫学检查 细胞计数和分类 标本采集后置于无菌容器中立即送检，不 能保存于冰箱中。
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• 实验室检查
脑脊液离心沉淀，取其沉淀物接种于巧克力琼 脂平板、血琼脂平板和厌氧琼脂平板，分别置 需氧和厌氧环境中培养，对疑有真菌和结核分 枝杆菌感染的还应分别接种于相应专用培养基 上。孵育后根据菌落性状、生化反应作细菌学 鉴定。在细菌培养同时，取其沉淀物作涂片、 染色、镜检，以早期诊断感染的病原。
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Step4. 初次培养基上的分离物，可能存在
多种细菌： 区分正常菌群与致病菌 确定优势菌群
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化脓性链球菌菌落特征（β溶血）
铜绿假单胞菌菌落特征（血琼脂平板）
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• 快速
涂片检查
• 是“指南针”
• 对确诊报告提供参考意义
• 不要过分依赖、过分夸大它的作用
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血液、分泌物、排泄物、穿刺液、脑脊液等标本和 液体培养物可直接涂片镜检，有些细菌可做出初步诊断。
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脑膜炎类型
观察物
细菌性的 结核性的 真菌性的 病毒性的
优势白细 胞类型
细菌检验技术习题库+答案
细菌检验技术习题库+答案一、单选题（共80题，每题1分，共80分）1、进行细菌的分群常用:A、单价血清B、因子血清C、小牛血清D、多价血清E、人血浆正确答案：D2、革兰染色的关键步骤是:A、卢戈氏碘液复染B、涂片、固定C、结晶紫初染D、酸性复红复杂E、95%酒精脱色正确答案：E3、观察细菌内部的超微结构需要采用:A、透射电镜B、荧光显微镜C、显微镜油镜D、偏光显微镜E、暗视野显微镜正确答案：A4、甲基红试验和VP试验阳性表明被检菌具有以下哪一特性A、分解乳酸产酸产气B、分解葡萄糖生成丙酮酸C、生成甲醇、甲醛D、苯丙酮酸E、以上全部正确答案：B5、全自动微量稀释法试验系统检测细菌生长采用:A、颜色变化B、浊度变化C、PH值变化D、释放的二氧化碳E、压力变化正确答案：B6、用显微镜油镜观察标本最合适的亮度是:A、稍强B、稍弱C、缩小光圈亮度D、很强E、减弱正确答案：D7、检查菌体不同结构成分及抗原与特异性抗体结合形成复合物时须用何种显微镜:A、倒置显微镜B、照像显微镜C、普通显微镜D、暗视野显微镜E、荧光显微镜正确答案：E8、鞭毛染色是属于什么染色法:A、单染法B、革兰氏染色C、复红染色法D、抗酸染色法E、特殊染色法正确答案：E9、血浆凝固酶用于下列哪种细菌的鉴定:A、甲型溶血性链球菌B、金黄色葡萄球菌C、表皮葡萄球菌D、腐生葡萄球菌E、乙型溶血性链球菌正确答案：B10、关于标本直接涂片的意义错误的是:A、能排除不合格的待检临床标本B、及时发现标本中存在的病原微生物C、能指导选择合适的培养基D、快速地鉴定细菌E、能指导临床医师选择合适抗菌药物正确答案：D11、糖发酵管属于:A、特殊培养基B、营养培养基C、基础培养基D、鉴别培养基E、选择培养基正确答案：D12、细菌染色标本制作基本步骤 :A、涂片—固定—染色—干燥B、涂片—干燥—固定—染色C、涂片—染色—干燥—固定D、涂片—染色—固定—干燥E、涂片—固定—干燥—染色正确答案：B13、枸椽酸盐试验阳性结果颜色是:A、孔雀蓝色B、黑色C、紫色D、黄色E、红色正确答案：A14、枸橼酸盐利用试验中,提供氮源的物质为:A、氨基酸B、铵盐C、肌酐D、蛋白胨E、多肽正确答案：B15、含有细菌所需要最基本的营养成分,可供大多数细菌生长的培养基是A、鉴别培养基B、特殊培养基C、营养培养基D、选择培养基E、基础培养基正确答案：E16、保藏的菌种每移种几代需作一次鉴定?A、5代B、3代C、1代D、4代E、2代正确答案：B17、血培养时成人一般每次采集3-10ml,最佳采血量是:A、3-5mlB、5-10mlC、3-6mlD、8-10mlE、5-8ml正确答案：D18、哪一种显微镜主要用于未染色的活菌的检查:A、暗视野显微镜B、普通光学显微镜C、荧光显微镜D、电子显微镜E、倒置显微镜正确答案：A19、细菌学形态学检查中最常用最重要的染色方法是:A、暗视野墨汁染色法B、革兰染色法C、抗酸性染色法D、美兰单染色法E、特殊染色法正确答案：B20、不染色标本直接镜检,可观察到细菌的:A、菌毛B、颜色C、结构D、动力E、大小正确答案：D21、一般检查细菌形态最常用的是 :A、相差显微镜B、电子显微镜C、荧光显微镜D、普通光学显微镜E、暗视野显微镜正确答案：D22、细菌在半固体培养基培养时可看到细菌只沿穿刺线生长,请问此细菌可能是:A、无鞭毛的细菌B、双毛菌C、丛毛菌D、周毛菌E、单毛菌正确答案：A23、革兰染色法可用于:A、鉴别细菌B、协助临床选择用药C、细菌的分类D、解释发病机制E、以上均可正确答案：E24、 SS中的鉴别用糖为:A、葡萄糖B、麦芽糖C、乳糖D、蔗糖E、以上均不是正确答案：C25、自动化微生物药敏系统进行药敏检测的实质是:A、K-B纸片扩散法B、微量肉汤稀释法C、琼脂稀释法D、联合药敏试验E、E-test法正确答案：B26、血培养时采血量一般为血培养瓶中肉汤培养基量的:A、1/4-1/6B、1/5-1/4C、1/3-1/2D、1/4-1/3E、1/6-1/5正确答案：B27、通过革兰染色革兰阳性菌(G+)被染为什么颜色:( )A、红色B、绿色C、黄色D、蓝色E、紫色正确答案：E28、氧化酶试验阳性对照菌常选用:A、铜绿假单胞菌B、变形杆菌C、福氏志贺菌D、伤寒沙门菌E、大肠埃希菌正确答案：A29、API20E用于鉴定哪类细菌:A、肠杆菌科B、其他革兰阴性杆菌C、葡萄球菌D、厌氧菌E、奈瑟菌属正确答案：A30、检测靛基质的实验又称 :A、吲哚试验B、糖发酵试验C、尿素酶试验D、甲基红试验E、枸橼酸盐利用试验正确答案：A31、疱肉培养基属于:A、选择培养基B、鉴别培养基C、特殊培养基D、基础培养基E、营养培养基正确答案：C32、证明细菌具有鞭毛结构的常用方法是:A、抗酸染色法B、液体培养法C、普通琼脂培养法D、革兰染色法E、半固体培养法正确答案：E33、关于CAMP试验错误的是:A、使用羊血或马血平板B、使用产β-溶血素的金黄色葡萄球菌C、两划线交界处出现圆形溶血区为阳性D、B群链球菌该试验阳性E、试验中应使用新鲜培养菌正确答案：C34、进行半固体培养基的细菌接种,不需要:A、酒精灯B、菌种C、培养基D、接种针E、接种环正确答案：E35、细菌生长繁殖中需营养物质,其中的铵盐、硝酸盐、蛋白胨等属于哪一类物质:A、无机盐类B、生长因素类C、维生素类D、碳源E、氮源正确答案：E36、玻片凝集试验常用于下列哪种细菌的分型鉴定:A、伤寒沙门菌B、霍乱弧菌C、脑膜炎奈瑟菌D、肺炎链球菌E、以上均可正确答案：E37、下列微生物染色方法中,正确的是:A、沙眼衣原体——抗酸染色B、结核分枝杆菌——Giemsa 染色C、立克次体——碘液染色D、新生隐球菌查荚膜——革兰染色E、钩端螺旋体——镀银染色正确答案：E38、革兰氏染色中卢戈氏碘液起何作用:A、初染剂B、复染剂C、媒染剂D、固定剂E、脱色剂正确答案：C39、平板划线分离细菌成功的标志在于:A、有明显的分区划线B、1区与末区不相连C、绝对不能有污染菌生长D、培养后有足够的单个菌落E、不能划破琼脂正确答案：D40、在观察有折光力的微生物或细胞时,应用何种显微镜:A、倒置显微镜B、荧光显微镜C、普通显微镜D、照像显微镜E、暗视野显微镜正确答案：E41、微生物自动培养系统通过连续监测细菌或真菌代谢引起的哪项指标的变化,来判断标本是否存在微生物:A、氧气浓度B、二氧化碳浓度C、PHD、吸光度E、气压变化正确答案：B42、临床对血培养阳性结果的处理采用分级报告制度的是:A、二级报告制度B、一级报告制度C、五级报告制度D、三级报告制度E、四级报告制度正确答案：D43、显微镜油镜镜头的放大倍数是:A、40B、10C、50D、1000E、100正确答案：E44、巧克力琼脂平板属于:A、特殊培养基B、选择培养基C、鉴别培养基D、营养培养基E、基础培养基正确答案：D45、列哪种细菌荚膜肿胀试验为阳性:A、肺炎链球菌B、结核分枝杆菌C、脑膜炎奈瑟菌D、大肠埃希菌E、金黄色葡萄球菌正确答案：A46、甲基红试验用的培养基应是:A、蛋白胨水B、肉汤C、半固体D、碱性蛋白胨水E、葡萄糖蛋白胨水正确答案：E47、苯丙氨酸脱氨酶试验出现以下哪种颜色为阳性:A、黄色B、红色C、黑色D、绿色E、蓝色正确答案：D48、细菌生长繁殖中所需营养物质,其中葡萄糖、淀粉、甘露醇等属于哪一类物质 :A、维生素类B、碳源C、无机盐类D、氮源E、生长因素类正确答案：B49、下列不是细菌生长所需营养物质的是:A、蛋白质B、琼脂C、牛肉膏D、肉浸液E、血液正确答案：B50、“菌落”是指:A、在细胞培养基中形成的空斑B、由一个细菌在培养基上生长繁殖而形成的细菌集团C、一个细菌细胞D、多种细菌在培养基上混合生长形成的团块E、从培养基上脱落的细菌正确答案：B51、实验室短期保藏菌种可用哪种方法?A、冷冻干燥保藏法B、干燥保藏法C、液氮超低温保藏法D、液状石蜡保藏法E、定期移植保藏法正确答案：E52、麦康凯琼脂属于:A、特殊培养基B、选择培养基C、鉴别培养基D、营养培养基E、基础培养基正确答案：B53、哪一组实验方法常用于细菌动力检测:A、半固体培养法,芽胞染色法B、斜面培养法,墨汁负染法C、相差显微镜观察法,鞭毛染色法D、悬滴法,革兰染色E、斜面培养法,抗酸染色法正确答案：C54、荚膜染色方法较多,但都属于什么方法染色:A、单染法B、革兰氏染色C、抗酸染色法D、特殊染色法E、复红染色法正确答案：D55、触酶试验阴性对照菌常选用:A、链球菌B、微球菌C、葡萄球菌D、铜绿假单胞菌E、大肠埃希菌正确答案：A56、ONPG试验主要是利用迟缓发酵乳糖的菌株缺乏:A、半乳糖酶B、半乳糖渗透酶C、β-半乳糖苷渗透酶D、乳酸脱氧酶E、β-半乳糖苷酶正确答案：C57、观察细菌物形态和动力一般常用悬滴法或压滴法,而这种方法需要如何染色:A、单染法B、不染色C、复染法D、革兰氏染色E、姬姆萨染色正确答案：B58、细菌染色过程中固定的目的有:A、使细菌蛋白质变性B、使涂片不易脱落C、更易结合染料D、以上都是E、以上都不是正确答案：D59、通过革兰染色革兰阴性菌(G-)被染为什么颜色:( )A、绿色B、蓝色C、红色D、紫色E、黄色正确答案：C60、细菌培养基中最常用的凝固物质为:A、卵白蛋白B、聚乙二醇C、血清D、.琼脂E、明胶正确答案：D61、下列哪种试验是以金黄色葡萄球菌为载体:A、直接凝集试验B、胶乳凝集试验C、环状沉淀试验D、协同凝集试验E、间接血凝试验正确答案：D62、克氏双糖铁(KIA)属于:A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基正确答案：C63、染色标本时第一步是涂片,一般方法是 :A、在载玻上直接将菌胎涂上B、在载玻片上加一滴生理盐水将菌苔在盐水中均匀涂布C、在载玻片上加一滴蒸镏水,涂布D、在载玻片上加一滴酒精,涂布E、在载玻片上加一滴菌苔就在火焰上烤干正确答案：B64、芽胞、鞭毛、荚膜及异染颗粒等的染色需用什么染色法:A、复红染色B、抗酸染色C、特殊染色D、革兰氏染色E、美兰染色正确答案：C65、革兰染色中结晶紫溶液起什么作用:A、初染剂B、媒染剂C、复染剂D、固定剂E、脱色剂正确答案：A66、糖分解代谢试验不包括:A、ONPG试验B、甲基红试验C、七叶苷试验D、吲哚试验E、V-P试验正确答案：D67、用于快速鉴定迟缓发酵乳糖菌株的试验是:A、ONPG试验B、V-P试验C、O-F试D、MR试验E、Optochin试验正确答案：A68、普通斜面培养保藏菌种一般多久传代一次:A、1年B、3~6个月C、2年D、1~2个月E、1~2周正确答案：B69、H2S试验中细菌分解的是 :A、胱氨酸B、组氨酸C、丝氨酸D、赖氨酸E、色氨酸正确答案：A70、采用悬滴法检查不染色标本时在显微镜下若看见细菌在液体中能定向地从一处泳到另一处,这称为:A、分子运动与布朗运动B、布朗运动C、分子运动D、真正运动E、分子运动或布朗运动正确答案：D71、克氏双糖铁中的指示剂为:A、酸性复红B、中性红C、酚红D、溴麝香草酚兰E、中国蓝正确答案：C72、革兰染色的操作步骤是:A、复红→乙醇→碘液→结晶紫B、结晶紫→碘液→乙醇→复红C、结晶紫→复红→乙醇→碘液D、结晶紫→乙醇→复红→碘液E、复红→碘液→乙醇→复红正确答案：B73、氨基酸和蛋白质代谢试验不包括:A、七叶苷试验B、氨基酸脱羧酶试验C、吲哚试验D、硫化氢试验E、苯丙氨酸脱氨酶试验正确答案：A74、靛基质试验的主要试剂为:A、四甲基对苯二胺B、对重氨基苯磺酸C、对二甲氨基甲醛D、二甲基对苯二胺E、氨基苯甲醛正确答案：C75、有关细菌培养基的说法,哪项是错误的:A、固体培养基中的琼脂具有重要的营养价值B、固体培养基中的琼含量为2%~3%C、观察细菌的动力用半固体培养基D、半固体培养基中的琼脂含量为0.2%~0.5%E、葡萄糖蛋白胨水为常用的鉴别培养基正确答案：A76、培养肠道致病菌常用的选择性培养基是:A、巧克力平板B、血平板C、普通平板D、SS培养基E、糖发酵管正确答案：D77、Optochin试验不正确的是;A、用于肺炎链球菌与其他链球菌的鉴别B、是一种药物敏感试验C、一般用于指导临床用药D、与胆汁溶菌试验意义相同E、肺炎链球菌对Optochin敏感正确答案：C78、氧化酶试验的主要试剂为:A、对二甲氨基苯甲醛B、苯丙酮酸C、氨基苯甲醛D、3%H2O2E、盐酸四甲基对苯二胺正确答案：E79、下列不属于细菌生化反应试验的是:A、糖发酵试验B、V—P试验C、甲基红试验D、外斐反应E、靛基质试验正确答案：D80、与细菌动力无关的是:A、半固体穿刺接种B、悬滴标本镜检C、H抗原检测D、鞭毛染色E、革兰染色正确答案：E。
下呼吸道感染细菌学检验操作规范(1)
下呼吸道感染细菌学检验操作规范(1)下呼吸道感染细菌学检验操作规范近年来，下呼吸道感染病例不断增加，给医疗卫生事业带来了严峻的挑战。
为了确保下呼吸道感染病例的快速、准确、可靠的检测和诊断，制定下呼吸道感染细菌学检验操作规范，将有助于提高检验水平和工作效率，本文将针对细菌学检验操作规范进行详细介绍。
一、检验前准备1. 确定样本种类：本次检验需使用的下呼吸道标本种类有：痰、咽拭子或喉拭子等。
2. 样本采集：根据患者的情况进行样本采集，采集时要求患者咳嗽并咳出深部痰液，若患者不配合，则可采用吸痰管等工具进行痰液采集。
同时也可以采用喉拭子或者咽拭子进行标本采集。
3. 样本处理：对采集的样本，应及时送到检验室进行处理，加工前需要做出相应的标签，记录样本采集时间、采集标本证号、病人基本信息等。
二、操作流程1. 样本处理(a) 痰液标本处理方法：对于痰液标本，先进行分液处理，即分离痰液中的黏液、脓液、红细胞和有机杂质等。
然后以0.9%氯化钠溶液洗涤一次，摇匀后进行离心（5000r/min，10min）。
(b) 咽拭子或喉拭子标本处理：将采集的咽拭子或喉拭子样本转移到含有0.9%氯化钠溶液的离心管中，然后离心（5000r/min，5min），离心后取上清液进行下一步检验。
2. 检测**(a) 涂片制备：将上述处理后的纯化液采用无菌钢丝圈或无菌载玻片刷取标本并均匀涂在两张干净的干燥擅菌片上，干燥后送至乙醇固定。
(b) 染色：采用Gram染色方法进行染色，首先用碘酒凝固后，将菌片在床头火上迅速脱色，用80%乙酸洗去多余的碘酒和颜料，再冲洗水清洗，细心观察染色质量，必要时要反复染色。
(c) 细菌形态观察：观察染色后菌的形态。
非典型革兰氏染色细胞如需观察需通过进一步检验的手段，如选择恰当的培养基及培养条件等。
(d) 培养：将涂片标本在含有相应营养物质的培养基上培养，观察菌落的形态及生理生化特性，以进行分类鉴定。
常用的培养基及相应的菌种分类可参见《常用细菌分类鉴定表》。
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二、不同标本采样方法有所不同
1．血及骨髓样本的采集：采静脉血； 2．尿液样本的采集：晨起第一次尿液；中段尿或
肾盂尿。 3．粪便样本的采集：脓血粘液便、肛拭子。 4．痰样本的采集：咳痰法、胃内采痰、咽拭子等。 5．上呼吸道样本的采集：清水反复漱口后，咽后
壁拭子。 6. 其他临床样本的采集：脓汁(拭子、吸管) ；脑
（二）细菌接种的基本程序
灭菌接种环
取菌种试管和待 接种的斜面试管
接种管宜放在菌种管上面
沾取标本
接种
接种后灭菌接种环
（三）细菌接种方法
1．平板划线接种法：分离细菌
目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成 单个菌落，以便获得纯菌。
曲线接种法：适用于含菌量较少的标本。 分区划线接种法：适用于含菌量较多的标本。 棋盘格划线接种法：用于分离肠道菌科细菌。 平板涂布接种法：用于活菌计数和药敏实验。 倾注培养：用于细菌计数。
脊液(穿刺)；
三、标本的送检与处理
1.对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和 流感嗜血杆菌等应保温并立即送检。
2.其他所有的标本采集后最好在2h之内送到实验室。 3.若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存。 4.一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应超
过24h。
５.病人标本中可能含有大量致病菌，必须注意安全防 护。
６.标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装好， 防止送检过程中倒翻或碰破流出。
７.对于烈性传染病标本运送时更要特别严格，必须按 规定包装，由专人运送。
８.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有 时可直接用抽Fra bibliotek标本的注射器运送。
第二节 细菌的分离培养方法
一、培养基（culture medium） 的制备
SS琼脂使致病的沙 门菌、志贺菌容易 分离到。
5．特殊培养基
疱肉培养基、 巯基乙醇酸钠培养基
（四）培养基的选择
根据标本来源和可能 存在的病原菌，确定选用 各种分离培养基。 如：伊红美蓝/麦康凯用于 筛选革兰阴性杆菌。
（四）培养基的选择
从血液、骨髓中分离 病原菌用血液增菌培 养基
二、细菌接种方法
（三）培养基的种类(按成分分类)
1．基础培养基（based medium） 2．营养培养基（nutrient medium） 3．鉴别培养基（diferential medium） 4．选择培养基（selective medium） 5．特殊培养基（special medium） 6. 增菌培养基：可提高检出率。
1．基础培养基
含有基础生长所需的 基本营养成分，最常用 的是肉浸液，俗称肉汤 （broth），主要成分含 牛肉浸液和蛋白胨。
2．营养培养基
最常用的是血琼脂平板、巧克力血平板 等。
3．鉴别培养基
糖发酵管、克氏双糖 铁琼脂（KIA）、伊红镁蓝琼脂和动力-吲哚尿素（MIU）培养基等。
4．选择培养基
一样；
郭霍法则 （Koch’s postulate）
本章内容
第一节 样本的采集与送检原则 第二节 细菌的分离培养方法 第三节 细菌的形态结构检查法 第四节 细菌的生化反应检查法 第五节 细菌的血清学检验 第六节 细菌毒素的检测 第七节 细菌数量的测定 第八节 细菌L型检验
第一节 标本的采集与送检原则
调配
溶化
矫正pH
2019/10/5
过滤澄清
分装加塞
灭菌
检定
保存
12
(三)培养基的种类（按物理性状分类）
液体培养基：
不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。
半固体培养基：
含0.3％～0.5％琼脂， 用于观察细菌的动力、保存菌种等。
固体培养基：斜面、平板。
含2％～2.5％琼脂， 平板：多用于细菌的分离培养。 斜面：多用于纯培养、保存菌种等。
四、细菌在培养基上 的生长现象
(一)细菌在固体培养基中的生长现象
接种环境：严格无菌环境中进行 接种工具 接种的基本程序 接种方法
（一）接种工具
接种针和接种环：由三部分组组成，即环 （针）、金属柄和绝缘柄。接种前后都要过 火灭菌。
接种针：用于穿刺接种细菌， 接种环：用于固体、液体培养基的细菌接种。 L型玻璃棒：用于琼脂平板涂布接种细菌。
本节主要讲：临床样本的采集与送检 其余样本采集方法详见第七章
一、标本采集的一般原则
1．早期采集：应争取在使用抗生素之前采集； 2．无菌采集：避免杂菌污染； 3．根据致病菌在不同病期的体内分布和排出部位，
采取不同标本。尽可能采集病变明显部位的材料。 4．采集适量标本：特别是无菌部位的标本。 5．安全采集 6.标本必须新鲜，采集后尽快送检； 7.送检过程中要采取适当的保存方式。
第二章 细菌学检验基本技术
郭霍法则（Koch’s postulate）
证明某种微生物是否为某种疾病病原体的基本 原则。
在患病动物中存在可疑病原有机体，而健康动物中 没有；
可疑有机体在纯培养中生长； 纯培养中的可疑有机体细胞能引起健康动物发病； 可疑有机体被再次分离，并且和最初分离的有机体
1
1
4.液体培养基接种法
可观察细菌在培养基中的生长现 象或用作生化反应实验。
三、细菌培养方法
1．需氧培养法(一般培养法)
培养温度：37℃（采用恒温培养箱） 培养时间：18～24h
2．二氧化碳培养法 ：
烛缸法、二氧化碳培养箱
3．厌氧培养法
厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐 疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等
连续划线法
分区划线法
第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
涂布接种法：
用于测定标本中活菌数和药敏实验 细菌接种。
倾注培养法：用于细菌计数。
2.斜面接种法：
用于鉴定和保存菌种。
3.半固体培养基：
穿刺接种法 ，用于 保存菌种或观察细菌 动力。
培养基：是指人工配制的供 细菌生长繁殖需要的各种营 养物质配制而成的基质。
(一)培养基的的主要成分及其作用
营养物质：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖类、 醇类、血液、无机盐类、鸡蛋和动物血清生长 因子等。
水分：蒸馏水。 凝固物质： 琼脂（赋形剂）、明胶、卵白 抑制剂和指示剂
(二)制备培养基的一般程序