骨组织脱钙液介绍

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骨质脱钙方法

骨质脱钙方法

1 标 本 的处 理
常用 的为 酸 性 溶 液脱 钙 法 , 即骨 组 织 或 钙 化 组织 内 的钙 盐 多 为 不 溶 性 , 钙 盐 遇 酸 后 生 成 一 种 可溶 性 的钙盐 而 游 离 出钙 离 子 , 经 脱 钙 后 的骨 组 织易 于进 行切 片 。方法 如下 。 1 . 1新鲜标 本 , 经 1 0 % 福 尔 马林 液 固定 2 4 h或 更
面, 移 至刀 刃锋 利处 , 以切 取理 想 的组 织 片 , 1 . 7染 色 按 常规操 作 。
2 脱 钙 终 点 测 定
2 . 1针 刺 法 用 细针 刺探 , 根 据具 体情 况 , 每 半 日或 每 日以针 刺 探 , 至针 易刺人 骨钙组织 时 , 终 止 脱 钙 。或用手 轻 轻 扳 动 组 织 , 有 柔 韧 感 或 同时 观 察 组 织 在脱钙 液 中呈 悬 浮状 态 , 即证 明 已到 脱 钙 终 点 。小标本 数小 时 即可 , 致 密骨 及牙 齿等 需数 日。 2 . 2草酸 铵测定 取 在脱 钙过 程 中更 换 的最 后 一瓶 脱 钙 酸液 5 ml , 加 少 许 浓 氨水 中和 , 然 后 加 入 草 酸 铵饱和液 0 . 5~1 ml 混合 , 稍摇动后静置片刻 , 如 液体 变 白色浑浊 , 说 明脱 钙 尚不 完 全 , 这 是 由于草 酸盐 与脱钙 液 中 的钙 离 子 生 成 草 酸 钙 沉 淀 ; 若 液 体 仍 透 明则 说 明脱钙 已达 终点 。
[ 学 科 分 类代 码 】 3 2 0 . 1 1 9 9
组织 里含 有骨 质 或钙 化 灶 , 需 先 行脱 钙 处 理 。 因骨 质 由钙盐 组成 , 切 பைடு நூலகம் 时 既切 不 成 完 整 的切 片 , 又损 伤切 片刀 的刀锋 , 因此 , 在取 材 时 如 遇 到骨 质 或钙 化灶 , 应进 行脱 钙处 理后 才转 入脱 水 透 明。

介绍一种骨髓组织脱钙新方法

介绍一种骨髓组织脱钙新方法

介绍一种骨髓组织脱钙新方法
傅春燕;陈晨;周庆;沈明
【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》
【年(卷),期】2003(019)006
【摘要】@@ 骨髓组织活检标本来之不易,在制片过程中若处理不当,会给诊断造成极大的困难.如何既快又好地制作高质量的骨髓病理组织切片对正确诊断尤为重要.笔者通过2年的反复实践,摸索出一种骨髓组织脱钙后的常规制片方法(简称"新法"),现介绍如下.
【总页数】1页(P664-664)
【作者】傅春燕;陈晨;周庆;沈明
【作者单位】中南大学基础医学院病理学教研室,长沙,410078;中南大学基础医学院病理学教研室,长沙,410078;中南大学基础医学院病理学教研室,长沙,410078;中南大学基础医学院病理学教研室,长沙,410078
【正文语种】中文
【中图分类】R446.8
【相关文献】
1.介绍一种改良骨髓石蜡包埋组织网状纤维染色技术 [J], 刘少颜
2.介绍一种改良脱钙液在骨组织制片中的应用 [J], 陈世梁;卢志承;董玉英
3.介绍一种骨髓穿刺活检的理想脱钙剂及其HE染色法 [J], 缪勇建
4.介绍一种简易快速的骨髓组织脱钙法 [J], 夏勤;夏娟;李林丰;刘智;罗启翅;梁海桥
5.介绍一种改良快速病理组织脱钙法 [J], 刘旭伟;焦惠贤
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骨组织脱钙技术及其应用

骨组织脱钙技术及其应用

骨组织脱钙技术及其应用张绪斌;熊正文;张华东;解放军第【摘要】@@ 骨组织不同于一般的软组织,是一种坚硬的结缔组织,由粘多糖和一些胶原纤维样骨胶纤维构成的骨样组织和沉着于其中的无机盐(骨盐)形成的.【期刊名称】《医学理论与实践》【年(卷),期】2011(024)011【总页数】4页(P1264-1267)【关键词】骨组织;脱钙技术;应用【作者】张绪斌;熊正文;张华东;解放军第【作者单位】解放军第251医院,河北省张家口市,075000;解放军第251医院,河北省张家口市,075000;解放军第251医院,河北省张家口市,075000;解放军第251医院,河北省张家口市,075000【正文语种】中文【中图分类】R954.65;R392.1骨组织不同于一般的软组织,是一种坚硬的结缔组织,由粘多糖和一些胶原纤维样骨胶纤维构成的骨样组织和沉着于其中的无机盐(骨盐)形成的。

无机盐以羟基磷灰石结晶的形式存在,其中绝大部分为水合磷酸钙,此外还包括微量碳酸盐和柠檬酸盐等[1,2],因此骨和其他一些已钙化的组织在脱水、透明等制片前必须将组织中的钙盐用脱钙剂除去,才能制成4~5μm厚的切片。

目前,常用的脱钙剂主要有单纯酸类、混合酸类、螯合剂、离子交换树脂和电解脱钙等方法[3~6],尤其是近年来应用微波技术辅助脱钙明显缩短了脱钙时间,改善了HE、组织化学、免疫组织化学染色和原位杂交[7~11]。

现将骨组织的脱钙技术及应用等有关内容简介如下。

1 骨组织的组织学特点[1,2]骨组织由骨基质和骨细胞组成,骨基质是由有机物质和无机物质紧密结合而成,主要成分有:(1)胶原纤维:为Ⅰ型胶原;(2)粘蛋白:为胶原纤维间的无定型物质;(3)骨盐:主要是羟基磷灰石;(4)酶:包括碱性磷酸酶、酸性磷酸酶和胶原酶等。

软骨基质是由软骨母细胞分泌丰富的蛋白多糖组成的,HE染色呈淡蓝色,A lcian蓝染色阳性(蓝色),甲苯胺蓝呈异染性反应(紫红色),软骨的胶原属Ⅱ型胶原。

骨组织病理制片三种脱钙液的比较

骨组织病理制片三种脱钙液的比较

骨组织病理制片三种脱钙液的比较
白直成;鲁萍;顾栋桦;平金良;董吉顺
【期刊名称】《中国现代医生》
【年(卷),期】2011(49)29
【摘要】目的比较三种文献报道的改良脱钙液的效果,获得简单、便捷、适用于临床病理制片的脱钙液.方法考察在常温及37℃恒温条件下,三种改良脱钙液对骨组织的脱钙及染色效果.结果常温条件下,三种改良脱钙液的脱钙时间为72h左右,组织结构损伤小,改良脱钙液Ⅰ、Ⅲ染色效果佳;37℃恒温条件下,三种改良脱钙液的脱钙时间为8~14h,改良脱钙液Ⅰ镜下组织结构破坏,改良脱钙液Ⅱ组织结构破坏且染色效果不佳,改良脱钙液Ⅲ组织结构损伤小,染色效果佳.结论37℃恒温条件下,改良脱钙液Ⅲ是较适合于临床病理制片的脱钙溶液.
【总页数】2页(P75-76)
【作者】白直成;鲁萍;顾栋桦;平金良;董吉顺
【作者单位】浙江省湖州市中心医院病理科,浙江湖州313000;浙江省湖州市中心医院病理科,浙江湖州313000;浙江省湖州市中心医院病理科,浙江湖州313000;浙江省湖州市中心医院病理科,浙江湖州313000;浙江省湖州市中心医院病理科,浙江湖州313000
【正文语种】中文
【中图分类】R361+.2
【相关文献】
1.三种脱钙液对骨组织脱钙后切片染色效果分析 [J], 连丽琴;夏凌志;钟惠霞
2.骨组织制片中改良脱钙液与传统脱钙液的比较 [J], 王彦芳;王宪治
3.三种不同脱钙液在骨组织石蜡切片中的应用比较 [J], 杜洪;金荣
4.骨组织病理制片三种脱钙液的比较 [J], 张婉仪;阮君;丘展龙
5.骨组织病理制片三种脱钙液的比较 [J], 张婉仪;阮君;丘展龙
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一种改良脱钙液的配置与脱钙方法

一种改良脱钙液的配置与脱钙方法

一种改良脱钙液的配置与脱钙方法
李晓未;朱雪明
【期刊名称】《中国血液流变学杂志》
【年(卷),期】2016(26)4
【摘要】目的比较改良脱钙方法与传统脱钙方法在骨组织脱钙及制片染色中的差异.方法选取病理科的骨组织标本若干,分为两组,分别用改良脱钙法及传统脱钙法进行脱钙处理,然后脱水、包埋、切片、染色,观察脱钙效果及切片染色效果.结果改良脱钙液组平均脱钙时间比传统脱钙液组缩短为约1/3,改良脱钙液组的标本制片质量和HE染色优良率均高于传统脱钙液组.结论改良脱钙法脱钙时间短、脱钙更彻底,切片质量高,HE核浆染色清楚、对比清晰.
【总页数】2页(P479-480)
【作者】李晓未;朱雪明
【作者单位】苏州大学附属儿童医院病理科,江苏苏州 215025;苏州大学附属儿童医院病理科,江苏苏州 215025
【正文语种】中文
【中图分类】R446.8
【相关文献】
1.介绍一种改良脱钙液在骨组织制片中的应用 [J], 陈世梁;卢志承;董玉英
2.一种改良脱钙液在骨组织制片中的临床应用 [J], 何蓉;陈建萍;李艳
3.改良脱钙液制作脱钙骨石蜡切片与传统方法的比较 [J], 谢玲;邹丽宜;张志平;崔
红晶;林坚涛
4.介绍一种改良的Neutral EDTA脱钙液 [J], 马恒辉;章如松;周航波;周晓军
5.介绍一种改良的Plank·Rycho脱钙液 [J], 胥维勇;杨红;李科;杨群
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石蜡切片

石蜡切片

石蜡切片一、取材骨组织剔除上面的肌肉及结缔组织后,用浸满生理盐水的纱布包裹后再用锡箔纸包裹,-20放置两小时后转移至-80保存。

二、脱钙1、固定在4%PFA中4℃固定48h,然后PBS漂洗过夜,然后置于脱钙液中进行脱钙。

注:①、固定液一般新配的为好,配好后应密封放置在阴凉避光处;②、固定组织时,固定液必须充足,一般是组织体积的20-30倍,有些水分多的材料,中间应更换1-2次固定液。

2、脱钙a、酸脱钙20倍。

每天更换脱钙液,直至脱钙完成,小鼠股骨大概需要24-26小时。

脱钙完成后,立即将组织转移进氨水(浓氨水5滴加进100ml蒸馏水中配制)中30分钟中和残余在组织中剩余的酸。

b、EDTA脱钙15%EDTA骨组织脱钙液:首先在800mlPBS溶液中加入63.5NaOH搅拌至完全溶解,随后加入150g乙二胺四乙酸粉剂继续搅拌至溶液清亮,再加入2.5g多聚甲醛搅拌至溶解,最后调整pH值7.2-7.4,并定容为1L。

EDTA脱钙大概需要一个至两个月,第一个星期要每天换液,之后两三天换一次即可。

3、判断脱钙终点a、物理测试法用注射针扎入骨组织,能顺利无阻碍的扎进去即是脱钙完成。

b草酸铵工作液,充分混合放置过夜,每天测试一次,连续测试两天不出现沉淀即为脱钙完成。

三、脱水1、脱钙完成后的组织在PBS中漂洗过夜。

2、再在4%PFA固定过夜。

(可以省略)3、40%酒精脱水40min;4、75%酒精脱水35min;5、95%酒精脱水30min;6、100%酒精脱水20min;7、100%酒精脱水20min。

注:①、脱水时应在带盖的容器中进行,防止吸收空气中的水分。

②、更换更高一级的脱水剂时,最好不要移动组织防止损坏,可以用吸管吸出液体,再用滤纸吸净脱水剂,再加入新的脱水剂。

③、在低浓度酒精中停留不宜太长,防止组织变软,助长组织的解体。

④、在高浓度酒精和纯乙醇中停留也不宜太长,防止组织变脆,影响切片。

⑤、如需过夜,应放在70%酒精中。

骨组织病理制片三种脱钙液的比较

骨组织病理制片三种脱钙液的比较

s lto , itlgc lsr cu eo o e t s e ean i tgae n ou in I , n a etrsann f c . d rt ec n iin ou in h soo ia tu tr fb n i u srti ne rtd a d s l t s o lh d b te ti igef t Un e h o d t s e o
2 1 年 1 月第 4 卷第 2 期 0 1 0 9 9

技 术与方法 ・
骨 织 理 片 种 钙 的比 组 病 制 三 脱 液 较
白直成 鲁 萍 顾栋桦 平金 良 董吉顺
( 浙江省湖州市 中心医院病理科, 浙江湖州 33 0 ) 10 0
【 摘要 ]目的 比较 三种 文献报 道的改 良脱钙 液的效 果 , 获得简 单 、 便捷 、 适用 于临床 病理制 片 的脱 钙液 。方 法 考察在 常 温及 3 ℃恒 温条件 下 , 7 三种改 良脱钙 液对骨 组织 的脱钙及 染色效 果 。结果 常温 条件下 , 种改 良脱 钙液 的脱钙 时间为 三 7 h左右 , 织结构损 伤小 , 良脱 钙液 I、 2 组 改 Ⅲ染色效 果佳 ; 7 3 %恒温条 件下 , 三种 改 良脱 钙液 的脱 钙时间为 8— 1h 改 4, 良脱钙 液 I 下组织 结构 破坏 , 良脱钙液 Ⅱ组织 结构破 坏且染 色效 果不佳 , 良脱钙 液 Ⅲ组织 结构损 伤小 , 镜 改 改 染色效 果 佳 。结论 3 ℃恒 温条件下 , 良脱 钙液 Ⅲ是较适 合于 临床 病理制 片的脱钙溶液 。 7 改
d c l ii a i n f o l e a u e e a c f t r m i r t r .M e h c o t t ods T r e mo i e e ac fc t n s l t n we e u e o e a c f a i n o o e t s e n e h e d f d d c l i a i o u i r s d f r d c l i c t fb n i u s u d r i i o o i o s

骨组织脱钙方法的比较

骨组织脱钙方法的比较

成标本的惟一标识条码,大大提高了病理科在标本验收环节的准确性,因为用条码激光扫描的方法比 人眼核对要可靠得多。同样,山该系统自动生成和分配给每一例标本的条码式病理号也增加了标本大 体检查进一步核对时的方便性和可诱性。 病理科的重要性不言而喻,病理科的质景管理事关重大。通过IS09000与信息化系统的引进,给 病理科的管理带来了新生,为病理科的发展提供了保障,病理信息学与现代质晕管理学已经逐步与分 予生物学一起成为了当代病理学发展的重要支柱。
微小病理标本制作体会
李春梅(哈尔滨医科大学附属肿瘤医院病理科
1 5 004 O)
随着临床检查技术的提高及各种检杏仪器的广泛应用,病理科收到的微小病仰。‘二冬明显增加,如 B超CT引导下的各种细针穿刺标本、各种窥镜的钳取标本等。据我2008年小完全统汁,微小标本近3000 例,占总病检量大约五分之一。如此大晕的微小标本,增加了制作切片的难度。我的体会是: 一、严格遵守操作流程 微小标本一般在卜2 mm3左右,送检时均山洒精同定于小药瓶中,我们的操作流程是: 核对标本、登记、编u.,对标本大小、块数进行描述;脱水透明、浸蜡 先倾倒掉原同定
2009年全国病理学技术进展和应用研讨会
骨锯将其锯成厚度不超过0.5cm的骨片,剥去骨组织周嗣的软组织。经10%中性福尔马林液同定12h~ 24h后,分别放入以下三种脱钙液中: 1.1取15ml盐酸,取氯化钠7.5ml加蒸馏水至lOOml,即为含盐酸脱钙液(Von Ebner氏液)。 1.2取lOml甲酸,取lOml甲醛加蒸馏水至100M,即为甲酸一福尔马林液脱钙液(Gooding和Stewart 氏液)。 1.3取lOml硝酸,取lOml甲醛加蒸馏水全lOOml,即为福尔马林一硝酸脱钙液(Clayden氏液) 方案(1):将已固定12h~24h的骨片组织分别以1:30的比例分别放入以上三种脱钙液中,置入 恒温箱中37℃过夜,或50℃6h~8h,或60℃4h~6h加温并更换液体2次,最终使组织变软用针 轻刺可进入而不感到阻力为宜。脱钙后的组织经流水冲洗后,再行常规石蜡制片。 方案(2):将已同定12h~24h的骨片组织以1:30的比例放入福尔马林一硝酸液脱钙液中,放在 振荡器上振荡3h’6h并更换液体2次,最终使组织变软用针轻刺可进入而不感到阻力为宜。脱钙后的组 织经流水冲洗后,再行常规石蜡制片。 2、结果 骨组织标本用盐酸脱钙液处理后切片质量欠佳,用甲酸脱钙溶液处理后的切片质量尚可,但需时间 较长,而用福尔马林一硝酸脱钙液经振荡技术处理后的骨组织切片效果明显优于前二者,切片完整,切 片厚度可达3 鲜明。 3、讨论 传统脱钙的方法是将标本取材后直接放入单纯的含酸脱钙液中进行脱钙,一般需3天~7天的较长 时间。强酸溶液在对组织脱钙的同时也会对组织酸化,骨组织在酸性|悦钙液中浸入时间过长会影响后续 切片及染色的效果。而且未经同定的骨组织在酸性脱钙液中会受到更大的损伤,所以先将骨组织同定12 小时~24小时后再放入脱钙液内,能较好的保持骨组织的细胞形态结构。采用以上三种脱钙液处理骨组 织,使溶液既能起到固定的作用又能达到脱钙的目的。其中甲醛可部分抑制酸的浸软作用,可适当保护 组织不受酸的损害,不妨碍后续的染色技术,能保证切片HE染色的质量。 骨组织过厚则需适肖延长脱钙时问,如脱钙不完全,组织切片时不仅损坏刀刃,而且切片偏厚,染 色时组织易出现脱片现象。镜下观察可见骨组织结构模糊,骨基质欠平整,大部分区域折叠卷曲,骨细 胞核皱缩而影响诊断。因此骨组织取材大小一定要控制在约lcm
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骨组织脱钙液概述
在病理实验制作切片时,我们会经常碰到一些含钙组织,而且钙十分坚硬。

由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同,含钙的组织一般不能直接制作切片。

骨组织含钙量最多。

除了骨组织之外其它组织也可发生钙化,在组织中形成钙化区,所以需要经过脱钙过程。

脱钙是制作骨组织切片的重要环节,尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织。

为达到骨组织既充分脱钙,又保护骨组织的抗原不受破坏,需要对含钙的织固定之后再进行脱钙或采用固定兼有脱钙的液体处理,固定并脱钙。

然后再行常规制片。

用于脱钙的试剂很多,脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(ethylenediamine tetraacetic acid EDTA)除此之外还有电解脱钙法。

强有机酸,如硝酸和盐酸可用于密皮质骨的脱钙,在短时间内可除去大量的钙。

令人遗憾的是这些强酸对组织形态会产生不良影响,脱钙作用强对组织破坏性大。

细小的组织,例如,骨髓组织不推荐用强酸脱钙。

虽然可以使用各种附加剂,如缓冲液具有保护组织的作用,但也降低了脱钙速度。

因此,各种脱钙液的配方都围绕着脱钙速度和消除对组织的不良影响而设计。

在酸类脱钙液中醋酸和甲酸比较适合于骨髓组织脱钙。

甲酸是一种使用范围较广的脱钙剂。

甲酸脱钙 10% 浓度比较合适。

醋酸和甲酸的作用比较弱,脱钙速度比较慢,它们不适合密皮质骨的脱钙。

EDTA 是一种比较温和的脱钙剂(EDTA 不是酸)。

对组织的渗透性差,作用慢。

大剂量使用价格较贵。

电解脱钙对组织损害最小,因为它的脱钙速度太慢,所以,不适合常规使用。

不同的脱钙液对骨组织的脱钙作用不同,脱钙效果也不完全相同。

为了达到良好的脱钙效果,建议使用EDTA脱钙液,该脱钙液对组织损伤较小,缺点就是脱钙时间会比较长些,但脱钙时间也要根据组织块大小而定。

目前国内生产EDTA脱钙液的公司也很少,个人感觉上海舜百生物的EDTA脱钙液使用效果还不错,脱钙脱的比较彻底,而且对组织损伤很小,就是周期长了些。

EDTA 是一种相对较好螯合脱钙剂,对组织结构影响最小,可以较好的保存组织抗原性。

经 EDTA 脱钙的组织可以进行免
疫组化和原位杂交染色,缺点是脱钙速度比较慢。

一般脱钙时间需要数周至数月。

为了提高 EDTA 的脱钙速度,骨组织取材尽量取薄 0.3mm,采用微波脱钙。

用微波炉辅助脱钙可以大大缩短脱钙时间,只要设置好脱钙程序,严格控制好温度和脱钙时间,一般不会对组织造成不良影响,据资料介绍微波炉脱钙,骨髓组织EDTA 脱钙,只需要花费3-4 个小时。

这样的脱钙时间完全可以满足常规使用。

另外,使用 EDTA 可以避免强酸脱钙所造成组织结构不良的影响。

EDTA可用于各种骨组织、牙齿等的脱钙,是一种比较理想的脱钙剂。

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