R2A琼脂培养基适用性检查方案
环凯 R2A琼脂培养基说明书
广东环凯微生物科技有限公司网址： 地址：广州市黄埔区科学城神舟路788号邮编：510663传真：860288778876产品说明书Product Manual【产品名称】通用名称：R2A 琼脂培养基英文名称：R2A Agar 【产品编号与包装规格】产品编号产品类型包装规格028029P1颗粒250g/瓶【产品用途】用于纯水中微生物的计数。
【检验原理】酵母浸出粉、蛋白胨、酸蛋白水解物提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖、为可发酵糖类；可溶性淀粉可以吸收菌在复苏过程产生的有害物质；丙酮酸钠可增强细菌的复苏。
磷酸二氢钾为酸碱缓冲剂；无水硫酸镁提供二价阳离子；琼脂为凝固剂。
干粉培养基：称取本品干粉18.1g，加入蒸馏水或去离子水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，121℃高压灭菌15min。
【质量控制】贮存于避光、干燥处，用后立即旋紧瓶盖；保质期三年。
【注意事项】1、称量时注意粉尘，佩戴口罩操作以避免引起呼吸道系统不适。
2、干粉培养基使用后立即旋紧瓶盖，避免吸潮结块。
贮存于避光、干燥处。
未开封产品保质期三年。
开封后根据存放条件的不同保质时间存在一定的差异。
3、质检报告可以登录环凯网站 ，打开“质检报告”页面，输入产品批号下载。
广东环凯微生物科技有限公司网址： 地址：广州市黄埔区科学城神舟路788号邮编：510663传真：************-8619************8602************88778876【废物处理】检测之后带菌物品置于121℃下高压灭菌30分钟后处理。
【执行标准】Q/HKSJ 03-2011广东环凯微生物科技有限公司企业标准普通微生物培养基【说明版本】2019年11月22日【参考文献】《中华人民共和国药典》2015年版。
培养基适用性检查验证方案
培养基适用性验证方案编制:审核:批准:1.验证目的：本次验证的目的是确认无菌检查、微生物限度检查、控制菌检查用培养基应进行培养基的适用性检查，符合灵敏度要求。
2.参照标准2010版中国药典二部附录：XII A无菌检查法和XI G微生物限度检查法。
3.验证项目无菌检查、微生物限度检查、控制菌检查用培养基的适用性检查。
45.前提条件确认5.1所有本次验证实施过程中用到的仪器都已经过计量并且在计量有效期内。
5. 2所有参与本次验证的公司人员均进行相关培训6.接受标准6.1.液体培养基促生长能力检査：被检培养基与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。
6.2.液体培养基指示能力桧查：与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长情况、指示剂反应等应与对照培养基一致。
6.3.固体培养基促生长能力检査：被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。
6.4.固体培养基指示能力检査：被检培养基上试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。
6.5.培养基抑制能力检査：试验菌应不得生长。
6.6.无菌性检查：应不得有菌生长。
6・7・被检培养基上的菌落数不小于对照培养基上的菌落平均数的 生长的菌落大小、形态特征应一致。
7. 验证实施7.1 •试验用仪器和物料所用培养皿、移液管、工器具均应严格按照相关的灭菌程序灭菌；生物安全柜、灭菌器、霉菌培 养箱、生化培养箱、水浴锅、电热鼓风干燥箱等。
72验证用培养基及试剂适用性检查:70%,且74测试菌悬液菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30〜35 ° C培养18〜24小时。
分别取上述新鲜培养物用0. 9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50^100cful的菌悬液。
接种生抱梭菌至硫乙醇酸盐流体培养基中，30〜35 C培养18〜24小时。
上述新鲜培养物用0. 9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数lO^lOOcfu的菌悬液。
2015中国药典第二部-纯化水制备及质检方法
纯化水ChunhuashuiPurified WaterH20 18.02 本品为饮用水经蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其他适宜的方法制得的制药用水，不含任何添加剂。
【性状】本品为无色的澄清液体；无臭。
【检査】酸碱度取本品10ml,加甲基红指示液2滴，不得显红色；另取10ml,加溴麝香草酚蓝指示液5滴，不得显蓝色。
硝酸盐取本品5ml置试管中，于冰浴中冷却，加10%氣化钾溶液0. 4m l与0. 1%二苯胺硫酸溶液0. 1ml，摇匀，缓缓滴加硫酸5ml,摇勻，将试管于50T：水浴中放置15分钟，溶液产生的蓝色与标准硝酸盐溶液[取硝酸钾0. 163g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，精密量取lm l,加水稀释成100ml,再精密量取10ml,加水稀释成100ml，摇匀，即得（每lm l相当于1吨N03)]0. 3ml,加无硝酸盐的水4. 7ml,用同一方法处理后的颜色比较，不得更深(0. 000 006%) 。
亚硝酸盐取本品10ml,置纳氏管中，加对氨基苯磺酰胺的稀盐酸溶液（1 —100)lm l 与盐酸萘乙二胺溶液（0. 1 - l00Uml，产生的粉红色，与标准亚硝酸盐溶液[取亚硝酸钠0. 750g(按干燥品计算），加水溶解，稀释至100ml，摇匀，精密量取1ml，加水稀释成100ml，摇匀，再精密量取1ml，加水稀释成50ml,摇勻，即得（每lm l相当于1叫NO2)]0. 2ml,加无亚硝酸盐的水9. 8ml,用同一方法处理后的颜色比较，不得更深（0. 000 002%) 。
氨取本品50m l,加碱性碘化汞钾试液2m l,放置15分钟；如显色，与氣化铵溶液（取氣化铵31. 5m g,加无氨水适量使溶解并稀释成1000ml) 1. 5m l,加无氨水48m l与碱性碘化汞钾试液2ml制成的对照液比较，不得更深(0. 000 03% ) 。
电导率应符合规定（通则0681) 。
总有机碳不得过0. 50mg/L(通则0682)。
培养基适用性检查规程
培养基适用性检查规程目的：建立一个培养基的灵敏度检查，确保培养基性能可靠。
范围：适用于微生物检验。
责任：微生物检验员。
依据：《中国药典》2010年版一部附录、2010版GMP实施指南规程：1.不应在同一无菌室内同时操作2个或2个以上菌株。
2.菌株传代次数不得超过5代（以菌种保存中心获及的冷冻干燥菌种为第0代）。
一、计数培养基的适用性检查1、菌液制备取大肠埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤或营养琼脂培养基中，30-35℃培养18-24h；取白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，培养24～48小时，取上述培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50-100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。
菌液制备后若在室温下放置，应在两小时内使用；若保存在2-8℃，可在24小时内使用。
2、适用性检查取大肠埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各1ml（50-100cfu）,分别注入无菌平皿中，立刻注入待检查营养琼脂培养基和对照营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备4个平皿（其中2个注入待检查营养琼脂培养基，另两个注入对照营养琼脂培养基）。
30-35℃培养48h，计数。
取白色念珠菌1ml（50-100cfu）,注入无菌平皿中，立刻注入待检查玫瑰红钠琼脂培养基和对照玫瑰红钠琼脂培养基，平行制备4个平皿（其中2个注入待检查玫瑰红钠琼脂培养基，另两个注入对照玫瑰红钠琼脂培养基）。
23-28℃培养72h，计数。
3、结果判断若被检培养基上的菌落数不小于对照培养基上的菌落数的70%，且菌落大小、形态两者一致，判断该培养基的适用性检查符合规定。
二、控制菌检查用培养基的适用性检查1.菌液制备取大肠埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤或营养琼脂培养基中，30-35℃培养18-24h；取白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，培养24～48小时，取上述培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10-100cfu、每1ml50-100cfu 和每1ml大于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。
纯化水15版中国药典公示稿
纯化水
Chunhuashui
Purified Water
[修订]
【检查】 微生物限度 取本品不少于1ml ，按薄膜过滤法处理后，采用R2A 琼脂培养基，30～35℃培养不少于5天，依法检查（通则1105），每1ml 供试品中需氧菌总数不得过100cfu 。
R2A 琼脂培养基处方及制备 酵母浸出粉 0.5g 蛋白胨 0.5g 酪蛋白水解物 0.5g 葡萄糖 0.5g 可溶性淀粉 0.5g 磷酸二氢钾 0.3g 无水硫酸镁 0.024g 丙酮酸钠 0.3g 琼脂 15g 纯化水 1000ml 除葡萄糖、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH 值使加热后在25℃的pH 值为7.2±0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。
R2A 琼脂培养基适用性检查试验 照通则1105中“计数培养基适用性检查”的胰酪大豆胨琼脂培养基的适用性检查方法进行，试验菌株为铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌。
应符合规
定。
起草所：浙江院
复核所：天津所、陕西所
征
求 意 见 稿。
培养基适用性验证方案
培养基适用性验证方案培养基适用性验证是指在培养基的研发过程中，通过实验验证培养基的适用性和质量。
这一过程对于生物学、医学等领域研究以及工业生产来说非常重要。
本文将介绍一个基本的培养基适用性验证方案，以确保培养基的质量和有效性。
一、实验目的1.验证培养基中各种成分的适用性和稳定性；2.测试培养基对细胞或微生物的生长和增殖的支持程度；3.评估培养基对细胞或微生物的表型和基因表达的影响；4.了解培养基的理化指标，如pH值、渗透压等。
二、实验步骤1.准备培养基和试样：根据所研究的生物体或微生物的需要，准备相应的培养基，包括成分和浓度。
同时，准备不同的试样，如细胞或微生物的悬浮液或分离物等，用于验证培养基的适用性。
2.测定培养基理化指标：测定培养基的理化指标，如pH值、渗透压、离子浓度等，确保其在范围内。
3.测定培养基对细胞或微生物的生长和增殖的支持程度：将细胞或微生物接种于培养基中，通过监测生物体的生长曲线、增殖速率等参数来评估培养基对其的支持程度。
可以使用细胞计数仪、显微镜等工具进行观察和计数。
4.评估培养基对细胞或微生物的表型和基因表达的影响：通过观察生物体的形态、结构、活力等方面，了解培养基对其表型的影响。
同时，可以通过转录组分析、蛋白质组分析等手段，评估培养基对基因表达的影响。
5.验证培养基的稳定性：将培养基保存一段时间后，再次进行生物体的培养和生长实验，以验证培养基的稳定性和持久性。
6.数据分析和结果呈现：对实验结果进行统计分析，包括均值、标准差等指标，通过图表、表格等形式呈现实验结果。
三、实验注意事项1.实验室条件要符合要求，包括洁净无菌、合适的温度和湿度等；2.培养基的配制要精确，注意称量和混合时间；3.使用无菌技术和条件进行细胞或微生物的接种和培养；4.实验过程中要使用适当的控制组和重复实验，以确保实验结果的可靠性和准确性；5.实验过程中要严格按照操作规程和实验流程进行，避免误操作和实验结果的偏差。
r2a琼脂培养基用途
r2a琼脂培养基用途引言：r2a琼脂培养基是一种广泛应用于微生物学实验室的培养基，它具有多种用途。
本文将详细介绍r2a琼脂培养基的组成、制备方法以及其在微生物学实验中的应用。
一、r2a琼脂培养基的组成r2a琼脂培养基主要由牛肉膏、酵母浸出物、淀粉、葡萄糖、琼脂和蒸馏水等成分组成。
其中，牛肉膏和酵母浸出物提供了微生物所需的氨基酸、维生素和其他营养物质，淀粉和葡萄糖则为微生物提供能量来源。
琼脂的加入使得培养基具有固体的形态，方便微生物的生长和观察。
二、r2a琼脂培养基的制备方法制备r2a琼脂培养基的方法较为简单。
首先，将适量的牛肉膏和酵母浸出物溶解在蒸馏水中，并加热至完全溶解。
然后，将淀粉和葡萄糖加入溶液中，搅拌均匀。
最后，加入适量的琼脂并搅拌至完全溶解。
将制备好的培养基分装到培养皿中，并在高压灭菌器中进行高压灭菌。
待培养基冷却后，即可使用。
三、r2a琼脂培养基的应用1. 微生物定量：r2a琼脂培养基广泛应用于微生物的定量研究中。
由于其成分的合理配置和琼脂的添加，r2a琼脂培养基能够提供丰富的营养物质，使得微生物在上面能够迅速生长形成可见的菌落。
通过对菌落数量的计数，可以对微生物的种类和数量进行定量分析。
2. 环境微生物研究：r2a琼脂培养基也常用于环境微生物的研究中。
环境中存在着各种各样的微生物，而r2a琼脂培养基提供的丰富营养物质可以满足不同微生物的生长需求，从而促进其生长和繁殖。
通过在不同环境样品上使用r2a琼脂培养基进行培养，可以获得环境中微生物的种类和数量信息，对环境微生物进行研究。
3. 食品卫生检测：在食品卫生检测中，r2a琼脂培养基也被广泛应用。
食品中可能存在各种微生物，而r2a琼脂培养基提供的适宜的营养物质能够促进微生物的生长。
将食品样品接种在r2a琼脂培养基上进行培养，可以检测食品中是否存在致病微生物或食品污染。
4. 高需氧微生物研究：r2a琼脂培养基对高需氧微生物的研究也具有重要意义。
培养基适用性检查操作规程
培养基适用性检查操作规程
1．目的：检查培养基对相关菌种的适用性，保证微生物实验结果的有效性。
2. 适用范围：适用于首次使用的培养基种类、购入的新批次培养基的适用性检查。
3. 依据：《中国药典》（2010版）四部：无菌检查法/微生物限度检查法-培养基的适用性检查
4. 职责：微生物检验员实施，QA监督。
5. 内容：
5.1 设备和材料
恒温培养箱、无菌培养皿/试管、接种环、酒精灯/火焰喷枪、超净工作台、＜100CFU/ml 的工作菌液、灭菌后的培养基（无菌检查用、计数用）
5.2 培养基适用性检查-无菌检查用
5.2.1 无菌性：
每种培养基每批随机抽取不少于10支，其中5支置30~35℃、另5支置20~25℃培养14天。
14天后均应无菌生长。
5.2.2 灵敏度
取培养基3支，其中2支接种相应的工作菌液各1ml，另1支不接种，作为空白对照，置30~35℃培养3天（或20~25℃培养5天）。
逐日观察结果。
空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，则判定该培养基的灵敏度检查符合规定。
5.3 培养基适用性检查-计数用
取无菌培养皿，吸取相应的工作菌液各1ml注入无菌培养皿，立即倾注培养基，每株试验菌接种2个培养皿，混匀，凝固。
同时用对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
置30~35℃培养48小时（或23~28℃培养72小时），计数。
若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。
6.相关表格：《培养基适用性检查记录》。
R2A琼脂培养基即用型平板说明书
R2A琼脂培养基即用型平板说明书【产品名称】通用名称：R2A琼脂英文名称：R2A Agar【型号规格】Φ90mm，10皿/包。
【预期用途】用于纯化水中菌落总数的测定。
【检验原理】蛋白胨、酵母浸出粉、酪蛋白水解物提供氮源及生长因子；葡萄糖、可溶性淀粉提供碳源亦可吸收细菌代谢过程中产生的废物；丙酮酸钠有利细菌生长；磷酸盐是pH稳定剂；琼脂是凝固剂。
【组成成份】由蛋白胨、酵母浸出粉、酪蛋白水解物、葡萄糖、可溶性淀粉、丙酮酸钠、磷酸盐和琼脂等组成。
【使用方法】样本按药典标准规定进行前处理后接种于培养基，30～35℃培养18～24h 后，观察结果。
【检验结果】枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌生长良好。
【注意事项】1.该培养基仅用于科研研究。
2.采集的标本必须尽快接种培养，以保证结果准确。
3.所用标本及其培养废弃物应视为有潜在传染性的物质，应按传染病实验室操作规范处理。
【贮存条件】2～25℃，避光保存。
【有效期】有效期6个月。
【参考文献】1.中国药典2020年版2.SN/T1538.1-2005培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则3.SN/T1538.2-2007培养基制备指南第2部分：培养基性能测试实用指南4.WS/T232-2002商业性微生物培养基质量检验规程5.GB4789.28-2013食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求【基本信息】生产企业名称：上海申启生物科技有限公司住所：上海市普陀区绥德路118弄60号4层、56号2层联系方式：电话：************************传真：************生产地址：上海市普陀区绥德路118弄62号4层邮编：200331网址：/。
培养基适用性检查记录
培养基适用性检查记录一、实验目的本实验旨在检查培养基的适用性，包括其成分是否合适、无污染、无毒性，并能够提供对所需生物体的适宜环境。
二、实验材料和仪器1.培养基样品：包括液体培养基和固体培养基。
2.培养基成分：包括蛋白胨、琼脂、糖类、无机盐等。
3.实验生物体：包括细菌、酵母菌等。
4.培养基制备器具：包括培养皿、试管、移液器、烧杯等。
5.实验室基本设备：包括电子天平、离心机、恒温培养箱等。
三、实验步骤1.培养基成分检查首先，检查培养基成分的符合度。
查阅培养基配方，并逐一准备并称量所需成分。
使用电子天平进行称量，确保称量准确。
检查成分是否存在误差，是否符合配方要求。
2.培养基配制检查根据培养基配方，准备液体培养基和固体培养基。
对液体培养基，按照配方将成分溶解在适量的蒸馏水中，并进行调pH处理。
对固体培养基，将成分溶解在蒸馏水中，并加入适量的琼脂糖或琼脂进行制成。
3.培养基无菌检查将配制好的培养基分别装入培养皿或试管中，并在恒温箱中进行高温高压灭菌处理。
灭菌结束后，在无菌操作台上进行无菌条件下的检查。
观察培养基是否有异常物质存在，如颜色变化、气泡、异味等。
4.培养基毒性检查将培养基分别接种相应的生物体，观察生物体的生长情况及有无异常现象。
观察时间可根据生物体的生长周期安排。
5.培养基成分调整及检查根据对培养基适用性的判断，如发现培养基的补充成分不足，或适用生物体的无法正常生长，可以对培养基的配方进行调整。
通过增加或减少特定成分的用量，或替换一些成分，再进行上述实验步骤进行再次检查。
四、实验结果和分析经过以上实验步骤，我们对培养基的适用性进行检查，并对实验结果进行记录和分析。
1.培养基成分符合度：通过称量成分的准确性和配方的符合度，可以判断培养基成分是否合适。
2.培养基配制检查：根据液体培养基和固体培养基的制备步骤，以及配方的准确性，可以判断培养基的配制是否正确。
3.培养基无菌检查：通过观察培养基灭菌后是否有异常现象，如颜色变化、气泡、异味等，可以判断培养基是否无菌。
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. . . . .下载可编辑. R2A琼脂培养基适用性检查方案 文件编号：VP-QC-2015-05 起 草 人： 审 核 人： 批 准 人： 批准日期： 年 月 日 . . . .
.下载可编辑. 目录 1 概述1 2 验证目的及围1 3 验证小组人员组成及职责1 4 验证依据2 5 验证前准备2 6 验证的实施2 7 偏差处理5 8 验证数据及评估5 9验证报告及评审5 10 再验证及周期5 11 验证文件及归档5 12 附件5 . . . .
.下载可编辑. 1 验证目的及围 2015版《中华人民国药典》中规定纯化水的微生物限度检查采用的培养基为R2A琼脂培养基。为了保证纯化水微生物限度检查的准确性和可靠性，需对该R2A琼脂培养基进行适用性检查实验。 2 验证方法 照2015版药典非无菌产品产品微生物限度检查：微生物计数法（通则1105）中“计数培养基适用性检查”的胰酪大豆胨琼脂培养基的适用性检查方法进行，试验菌株为铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌，应符合规定。 3.验证小组人员组成及职责： 3.1验证小组由以下部门人员组成：质量部、QC、生产部。 3.2 验证小组组成及职责列表 组成 职 责
QC 1. 负责起草验证方案的起草 2. 负责本方案的培训 3. 仪器仪表校验确认 4. 负责验证的实施 5. 负责数据的收集和整理 6. 负责数据分析 7. 负责完成验证报告
质量部 1. 负责验证方案、验证报告的审核与批准 2. 负责验证现场的监督审查
生产部 1. 负责保障设备、器具的完好 2. 负责动力系统的保障 4 验证接受标准 4.1 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5~2围，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致； 4.2 被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。 5.验证前准备 5.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。培训人员记录见附件1。 . . . . .下载可编辑. 5.2将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。 5.3 确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。 5.4 相关文件 序号 相关文件 文件编号 1 DHG型电热恒温鼓风干燥箱操作规程 WI-100
2 BSC-100-II-B2生物安全柜操作和维护保养规程 WI-101
3 WXQI-S-18SI自动手提式灭菌器使用和维护保养规程 WI-103
4 DK型电热恒温水浴锅操作规程 WI-104
5 HWS型恒温恒湿箱操作规程 WI-105
6 JA2003N电子天平操作及维护保养规程 WI-106
7 PHS-3C型PH计操作及维护保养规程 WI-108
8 SHP-3C型低温生化培养箱操作及维护保养规程 WI-109
9 YJ-875SDB型净化操作台的操作及维护保养规程 WI-113
10 《培养基管理规程》 WI-76
6.验证的实施 6.1 实验材料 6.1.1培养基 类别 培养基名称 厂家 批号 验证培养基 A2R琼脂培养基 对照培养基 胰酪大豆胨琼脂培养基 6.1.2 仪器设备 DHG型电热恒温鼓风干燥箱、BSC-100-II-B2生物安全柜、WXQI-S-18SI自动手提式灭菌器、DK型电热恒温水浴锅、HWS型恒温恒湿箱（30～35℃）、JA2003N电子天平、PHS-3C型PH计、SHP-3C型低温生化培养箱（20～25℃）、YJ-875SDB型净化操作台。 6.1.3 稀释剂： PH无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 6.1.4 计数用培养基 胰酪大豆胨琼脂培养基 . . . . .下载可编辑. 6.1.5 验证用菌株 铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104] 枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501] 6.1.6 灭菌前调节PH溶液： 10%碳酸钠溶液或1mol/L氢氧化钠溶液/15%冰醋酸溶液或1mol/L盐酸溶液。 6.2 验证容 6.2.1 培养基的配制灭菌过程 将分装包装好的培养基分别放入灭菌器中121℃灭菌15分钟后取出。取1管已灭菌的培养基，放冷至25℃测定pH值，应在7.20.2围。 6.2.1.4 外观性状 灭菌后的培养基应对其外观性状仔细检查，如发现色泽异常、浑浊、橡胶塞被培养基沾染等，均应挑出弃去。将制备好的培养基保存在2～25℃、避光的环境中，在存放2周后，培养基外观应色泽正常，澄清透明。 6.2.2菌液制备 接种铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30〜35℃培养18〜24小时。 6.2.3 菌液计数（每种菌液接种2个） 6.2.3.1 分别取上述制备的铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌（50～100cfu/ml）各1ml加入无菌培养皿，立即注入不超过45℃胰酪大豆胨琼脂培养基15~20ml，混匀，凝固，置30~35℃培养箱培养48小时，计数每株试验菌平行制备2个平皿。 6.2.4培养基适用性检查 6.2.4.1分别取上述制备的铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌各1ml加入培养皿，每种菌液平行做2皿，立即注入不超过45℃胰酪大豆胨琼脂培养基15~20ml，混匀，凝固，置30~35℃培养箱培养48小时；分别计数。同时取相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 6.2.4.2取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种小于（50～100cfu/ml）的铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌1ml各2支，另1支不接种作为空白对照，置30~35℃培养箱培养48小时，逐日观察结。同时取相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 . . . . .下载可编辑. 6.2.5 结果判定： 6.2.5.1被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5~2围，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致； 6.2.5.2被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。 7.偏差处理 验证的数据产生的任何偏差，应及时进行偏差调查，按照《化验室偏差管理规程》进行处理并如实记录，给出合理的偏差处理措施，并上报验证领导小组，记录备案，并且根据处理措施进行相应的处理，并对处理的过程、结果进行记录与跟踪。 验证小组根据数据分析，做出相应的评定与结论，报请验证委员会批准。 8验证数据及评估 验证小组对验证检测数据进行评估，并对结果进行评价 结果评价：
评价人： 日期： 9.验证报告及评审 9.1 验证小组依据本方案实施验证，编写验证报告。 9.2 验证小组组织专业人员对验证报告进行评审。 9.3 QA对验证报告给出结论，验证合格发放验证合格证。 10.再验证及周期 10.1纯化水微生物限度检查用的A2R琼脂培养基的适用性检查验证，其再验证周期一般为三年，以证实确认培养基的可靠性。 10.2当药典中纯化水微生物限度检查法发生变更时，需进行再验证； 10.2 当所用到的检验设备出现故障进行重大维修，尤其是关键部件的维修；仪器的性能发生了明显的偏移，已不能再满足检验产品质量的要求时，均需要对该检验方法进行重新确认，以证明变更对已经确认的效果无影响。 11.验证文件归档