F-7000荧光分光光度计操作规程
F-7000简易操作 (中)
日立F-7000荧光分光光度计简易操作步骤<一>开机顺序：（1）接通电脑及打印机电源，进入Windows操作系统。
（2）接通光度计左侧电源开关（POWER）约5秒钟后主机右上方绿色氙灯指示灯点亮，表示氙灯已经启辉工作。
（3）双击电脑屏幕上FL Solutions 荧光分析快捷框，进入仪器操作界面。
<二>关机顺序：（4）使用仪器操作软件退出操作系统并关闭氙灯。
（5）保持主机通电10分钟以上最后关闭主机电源开关。
（目的是让灯室充分散热）<三> 波长扫描的简易操作：（Wavelength Scan）点击快捷栏“Me thod”后，立即显示了分析方法（Analysis Method）的五个模块界面，分别为“常规”（General），“仪器条件”（Instrument），“监视界面”(Monitor)，“处理”(Processing)，“报告”(Report)。
下面详细介绍每个界面：（1）General （常规）*Measurement（测量方式）--------选择Wavelength （波长扫描）*Operator （操作者名）---------键入操作者性名*Insturment (仪器型号) ----------自动给出*Sampling (进样器类型) -------选用自动进样器后该项自动指定*Comments (注释表)-----------可输入简单注释说明*☐ Use sample table（使用样品表）----（2）Instrument （仪器条件）*Scan mode (扫描方式) ---------- Excitation (激发波长扫描)Emission（发射波长扫描）Synchronous（同步扫描）*Data mode （数据方式）---------Fluorescence （荧光采集）Luminescence （发光采集）Phosphorescence（磷光采集）*EM WL （发射波长）------------输入范围0nm, 200nm～900nm*EX Start WL （激发起始波长）----输入范围200nm～890nm*EX End WL （激发终止波长）-----输入范围210nm～900nm* EX WL (激发波长)-------------输入范围0nm, 200nm～900nm*EM Start WL （发射起始波长）-----输入范围200nm～890nm*EM End WL （发射终止波长）-----输入范围210nm～900nm*Scan speed （扫描速度）-----------30,60,240,1200,2400,12000,30000,60000nm/min八挡可选（磷光扫描仅有三挡：30,60,240nm/min）*Delay （延迟时间）----------输入范围0～9999秒（重复测量时仅对第一次测量有效）*EX Slit （激发单元狭缝）-----------1, 2.5 ,5, 10, 20,五挡可选。
荧光光谱分析法及F7000光度计的使用20120602
~10-9s 。
7
二、荧光的激发光谱与发射光谱
荧光分子都具有两个特征光谱：激发光谱和 发射光谱（荧光光谱）。 （1）荧光的激发光谱：表示不同激发波长下 所引起物质发射某一波长荧光的相对率。 绘制激发光谱：固定发射波长(选最大 发射波长),然后以不同波长的入射光激发荧 光物质，以荧光强度F对激发波长l作图， 即为激发光谱。
8
二、荧光的激发光谱与发射光谱
激发光谱曲线的最高处，处
于激发态的分子最多，荧光
强度最大，称为最大激发波 长 lex
9
二、荧光的激发光谱与发射光谱
（2）荧光的发射光谱（荧光光谱） 荧光光谱表示在所发射的荧光中各种 波长组分的相对强度。绘制发射光谱时， 使激发光波长固定在lex处，然后对发射光 谱扫描，测定各种波长下相应的荧光强度， 以荧光强度F 对发射波长l作图，得发射光 谱图（即荧光光谱）。
29
二、荧光效率及其影响因素
散射光对荧光测定有干扰，尤其是波长 比入射光波长更长的拉曼光，与荧光波长接 近，对测定的干扰大，必须采取措施消除。 拉曼光的干扰主要来自溶剂，当溶剂的拉曼 光与被测物质的荧光光谱相重叠时，应更换 溶剂或改变激发光波长。
30
二、荧光效率及其影响因素
a:320nm或350nm为激发光， 荧光峰总是在448nm。 b:将空白溶剂分别在320n m及350nm激发光照射下 测定荧光，拉曼光波长 分别是360nm和400nm， 400nm的拉曼光较接近4 88nm，对荧光有干扰， 因而影响测定结果。 c：选择320nm为激发光， 对测定无干扰。
36
三、荧光分析法的应用
• 有机化合物的分析 为提高测定的灵敏度，有时也将芳 香族化合物与适当试剂反应之后再进行测定。 如水杨酸与铽形成络合物后，荧光 增强，测定灵敏度提高。再如糖尿病研究中 的重要物质阿脲(四氧嘧啶)与苯二胺反应后， 荧光增强，可用于测定血液中低至10-10mol 的阿脲。
日立F-7000荧光分光光度计的使用
日立F-7000荧光分光光度计的使用
日立F-7000荧光分光光度计的使用
梁向晖毛秋平钟伟强*
【摘要】荧光分光光度法广泛应用于医药、农业、环境科学、生命科学、材料科学及食品科学等领域。
简要介绍F-7000 荧光分光光度计的基本构造和工作原理，同时以荧光增白剂33#为测试对象，对它的操作及维护进行详细介绍。
【期刊名称】分析仪器
【年(卷),期】2018(000)004
【总页数】6
【关键词】荧光分光光度计高灵敏度荧光增白剂
经验交流
基金项目：广东省研究生教育创新计划项目(2017JGXM-MS04); 广东省功能分子工程重点实验室资助课题(2017kf05)。
当紫外线照射到某些物质的时候，这些物质会发射出各种颜色和不同强度的可见光，而当紫外线停止照射时，所发射的光线也随之消失，这种光线称之为荧光。
荧光分光光度计具有灵敏度高、选择性强、取样量少、方法简便等优点。
现已广泛应用于药物分析、农业、生命科学、环境科学、材料科学、食品科学等诸多领域[1-7]。
日立F-7000荧光分光光度计具有如高灵敏度(信噪比为15000∶1)、高扫描速度(可达60000nm/min)等功能。
本文简要介绍F-7000荧光分光光度计的工作原理和基本构造，同时以荧光增白剂33#(杀虫丹)为测试对象，对它的操作及维护进行详细介绍。
荧光增白剂33#的化学名称乙硫甲威，分子式是C11H15NO2S，分子量:225.3073；CAS号:29973-13-5。
分子结构式如图1所示。
F-7000荧光分光光度计使用操作步骤解析
• ！！Attention：激发光终止与起始波长差不 小于10nm。
– 选择扫描速度“Scan Speed”（通常选 240nm/min）。 – 选择激发/发射狭缝（EX/EM Slit）。 – 选择光电倍增管负高压“PMT Voltage”（一 般选700V）。 – 选择仪器响应时间“Response”（一般选 Auto）。 – 选择光闸控制“□Shutter Control”打√，以使 仪器在光谱扫描时自动开启，而其他时间关闭。 – 选择“Report”设定输出数据信息、仪器采集 数据的步长（通常选0.2nm）及输出数据的起 始和终止波长（Data Start/End）。
图6 关闭运行软件
• （2）约十分钟后，关闭仪器主机电源，即按下仪 器主机左侧面板下方的黑色按钮（POWER）。 （目的是仅让风扇工作，使Xe灯室散热）。
•
（3）关闭计算机。
寻找激发波长的方法
测试前，激发波长未知，可以按照以下步骤寻找激发波长。
• 1. 首先在发射光谱设置中输入一个激发光波长数 值，如300 nm，设置发射光谱范围，通常起始值 大于激发波长，小于激发波长的二倍，得到一个 发射光谱，得到一个或几个发射波长的峰值 • 2. 重新在激发光谱中设置，输入步骤一中得到的 发射波长，设置激发光谱范围，通常起始值大于 发射波长的一半，小于发射波长，得到激发波长 的峰值 • 3. 按照步骤二的过程，将几个发射波长都输入， 得到几个激发波长 • 4. 重复步骤一的过程，输入步骤二，三中得到的 激发波长，观察发射光谱的峰形，确定发射光谱。
• ！！Attention：Data Start/End需与 “Instrument”选项中设置一致，否则所得 到的数据点会逐渐减少，而无法作图。
（4）参数设置好后，点击“确定”。
实验二 荧光分光光度法测定富里酸
实验二荧光分光光度法测定富里酸——一实验目的与要求1、了解荧光分光光度计的基本组成结构，并学会操作使用；2、掌握荧光分光光度法定量分析的基本原理。
二实验原理富里酸（FA）在水中是一种荧光物质，并且在低浓度时，荧光强度与FA浓度呈正比：I f = kc基此，测定一系列已如浓度的富里酸的荧光强度，然后以荧光强度对富里酸浓度作标准曲线，再测定未知浓度富里酸的荧光强度，把它代入标准曲线方程求出其浓度。
图1富里酸的分子结构三仪器、药品及材料F-7000型分子荧光分光光度计，吸收池，容量瓶，移液枪；富里酸，去离子水四实验步骤1．系列标准溶液的配制准确称取0.2500g富里酸，加入少量水溶解，移至250mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
此富里酸溶液浓度为1.000g·L-1。
取6只100 mL的容量瓶分别加入1.000g·L-1的富里酸标准液0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00 mL,，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
2．绘制激发光谱和发射光谱在200-500 nm范围内扫描荧光激发光谱。
在300-600 nm范围内扫描荧光发射光谱。
3. 绘制标准曲线荧光激发波长固定在340 nm处，荧光发射波长固定在420 nm处，从发射光谱上测定系列标准溶液的荧光发射强度。
4．未知试样的测定在标准系列溶液同样条件下，测定未知样品的荧光发射强度。
5．绘制荧光强度I f对富里酸溶液浓度c的标准曲线，并由标准曲线求算未知试样的浓度。
五数据处理1．原始数据标准溶液未知液样品编号 1 2 3 4 5 6 x浓度/(mg∙L-1) 0 2 4 6 8 10荧光强度-0.029 0.230 0.462 0.675 0.916 1.122 0.774 2．标准曲线绘制和未知样品含量计算。
得到富里酸荧光强度与浓度的关系曲线为y=0.1147x-0.0106，测得未知液荧光强度为0.774，即0.774=0.1147x-0.0106得：x=6.84所以未知样品浓度为6.84mg∙L-1六实验注意事项1、试液的浓度不要太高。
F-2700荧光分光光度计操作规程及使用注意事项
F-2700荧光分光光度计操作规程及使用注意事项
一、操作规程
㈠准备
1．打开稳压电源，接通计算机及打印机电源，然后接通主机电源开关（POWER），待主机右上方指示灯亮，仪器进入自检状态，通电预热15~20min。
2．双击计算机桌面快捷方式“FL Solution”，进入仪器操作界面。
㈡测量
1．预设发射波长的扫描起点、终点及合适的激发波长，进行发射光谱扫描，确定最大发射波长。
2．预设激发波长的扫描起点、终点及最佳发射波长，进行激发光谱扫描，确定最大激发波长。
3．设置发射波长和激发波长，输入标准溶液浓度、样品信息等参数，进行测定，保存所有测量数据。
㈢关机
1．取出比色皿，立即清洗，晾干后放回盒内。
退出操作软件系统并关闭氙灯，保持主机通电10min以上，再依次关闭仪器主机、稳压电源、计算机和打印机。
2．清扫仪器，保证仪器干净、整洁，盖上仪器防尘罩，做好仪器使用记录。
二、注意事项
1. 开启仪器主机前，打开稳压电源，将仪器主机右侧面板下方调到“Remote”档，并确定样品室内无比色皿和其它杂物。
初始化时请勿打开样品室盖。
2. 为延长仪器使用寿命，扫描速度、狭缝的设置一般不宜选在高档。
3. 测试样品时所用比色皿是石英制品，使用时避免碰撞以免破碎；每次使用后应立即清洗干净晾干保存。
比色皿中液体加入量为2/3体积即可，外侧液体擦拭干净后方可放入光路中进行测定，切忌将溶液溅入样品室内。
每次放入比色皿时，要保持方向一致（横线朝外）。
4. 关机后间隔半小时（待氙灯温度下降后）方可重新开机。
5. 仪器若长时间不用，需定期开机以保持整机干燥。
荧光分光光度计的使用流程
荧光分光光度计的使用流程1. 准备工作在使用荧光分光光度计之前，需要进行一些准备工作。
以下是一些必要的准备事项： - 确保荧光分光光度计已经连接到电源，并且通电正常。
- 检查荧光分光光度计的灯泡是否正常工作，灯泡是否需要更换。
- 确保荧光分光光度计的样品室是干净的，没有任何杂质或污垢。
2. 打开荧光分光光度计软件打开荧光分光光度计的软件，通常会有一个图形界面供用户使用。
以下是打开软件的步骤： 1. 双击荧光分光光度计软件的图标，启动软件。
2. 在软件界面上找到并点击“打开”按钮，选择要分析的样品文件。
3. 样品的输入在荧光分光光度计软件中，需要输入样品的相关信息。
以下是样品输入的步骤：1. 在软件界面上找到并点击“新建样品”按钮，创建一个新的样品文档。
2. 在样品文档中填写样品的名称、浓度、体积等信息。
4. 调整荧光分光光度计的参数荧光分光光度计的参数调整非常重要，直接影响到后续的实验结果。
以下是参数调整的步骤： 1. 在软件界面上找到并点击“参数设置”按钮，进入参数设置界面。
2. 根据实验要求，调整荧光分光光度计的激发波长、发射波长、积分时间等参数。
5. 测量样品的荧光信号完成参数调整后，可以开始测量样品的荧光信号了。
以下是测量样品荧光信号的步骤： 1. 将准备好的样品放入荧光分光光度计的样品室中。
2. 在软件界面上点击“开始测量”按钮，荧光分光光度计开始记录样品的荧光信号。
3. 等待一段时间后，荧光分光光度计会自动停止测量。
6. 分析和保存实验结果测量完成后，需要对实验结果进行分析和保存。
以下是实验结果分析和保存的步骤： 1. 在软件界面上找到并点击“数据分析”按钮，进入数据分析界面。
2. 根据需要，选择相应的数据分析方法，进行实验结果的分析。
3. 点击“保存”按钮，将实验结果保存到指定文件夹中。
7. 清洁和关闭荧光分光光度计实验结束后，需要进行荧光分光光度计的清洁和关闭。
以下是清洁和关闭荧光分光光度计的步骤： 1. 关闭荧光分光光度计软件，确保所有操作已保存。
荧光分光光度计操作规程
荧光分光光度计操作规程
一、开机
1、确保分光光度计与个人电脑是通过随机配带的USB数据线连接
2、将电脑打开，打开荧光分光光度计的电源开关。
3、检查表示氙灯是否被点着及仪器处于工作状态的批示灯是亮的。
4、双击桌面上荧光分析软件快捷图标。
5、等待程序初始化，系统将自检，如果出现错误提示，立即关闭荧光分光光度计，过15
分钟再重新启动。
二、关机
1、选择文件菜单里的“关闭”命令，点击“是”终止联机。
2、出现是否关机的图示，点击“是”关灯并退出荧光分析软件。
3、等氙灯充分冷却后再关荧光分光光度计。
三、操作
1、创建一个分析方法
从工具菜单中，选择配置命令来设置分析条件。
扫描类型选择波长扫描，根据标准再设定扫描模式、数据模式、发射波长、激发波长等参数。
2、测量样品
选择好测量方法后，进入波长测量界面，将样品入入指定的样品槽，点击菜单工具－扫描进行测量或点击扫描按钮进行测量，如果中途暂停测量，点击工具条上的停止按钮。
扫描完毕后，图谱处理窗口或打印窗口将会自动弹出。
峰值表将显示峰数、峰的起始位置、峰的终止位置、峰高值、谷位置、谷值、半峰宽等信息。
3、谱图处理
对样品和标准按照同样的方法进行处理，并对数据结果进行打印。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
日本日立F-7000荧光分光光度计基本操作规程1、开机顺序（1）开启计算机。
（按图中圆圈按钮）（2）开启仪器主机电源。
按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮（POWER）。
（按下图中圆圈按钮）（3）观察主机正面面板右侧的Xe LAMP 和RUN指示灯依次亮起来，都显示黄绿色。
Xe LAMP灯先亮，RUN灯后亮。
2、打开运行软件。
（1）双击桌面图标（FL Solution 2.1 for F-7000）。
主机自行初始化，扫描界面自动进入。
（2）初始化结束后，须预热15-20分钟(若要进行定量分析，须预热30分钟以上，按界面提示选择操作方式。
3.点击右上角Method,进行方法设置。
若要预扫描，可选择3-D scan（如下图）.设置好方法后（见下图），再点击右上角Pre Scan（如上图），在Instrument Monitor菜单(见下图)的Data mode中选择Fluorescence, 在EX Start WL中输入激发波长200，EX End WL中输入激发波长500,在EM Start WL中输入发射波长210(有利于保护检测器)，在EM End WL中输入700(nm)，为节约扫描时间，扫描速度Scan speed可设置为30000。
点击update,可知扫描需要多少时间。
EX slit和EM slit一般选择5.0（若荧光强度太弱，可提高该数值，若强度太高，可降低该数值），PMT V oltage （电压）中可选择700（若荧光强度太弱，可提高该数值，若强度太高，可降低该数值），PMT V oltage 0-1000v前面的方框打勾后，可在上面的PMT V oltage中随意填写电压值。
在Response 中选择Auto。
在Processing菜单中(见下图)的Y Axis中的Max中填5000或10000，Min中填0。
Contour中填写10，在open data processing window after data acquisitior前打勾。
再点击右上角Pre Scan（如下图），进行预扫描。
然后选择图谱中颜色最浓、最深、纵坐标最高的漩涡中心点，点击这个中心点，即可出现最佳激发波长、最佳发射波长及强度。
若中心点太密，看不出（如上图），可点击右键，选择scale，将contour 由10.00改为100。
再点击确定。
即可出现下图情况：点击纵坐标最高的漩涡中心，如上图和下图，在左上角即可出现最佳激发波长（EX）、最佳发射波长(EM)及强度。
待预扫描结束后，可再次点击Method, 进行重新设置，在General菜单的Measurement中选择Wavelength scan（如下图）；在Instrument Monitor菜单(见下图)的scan mode中选择Emission, Data 中选择Fluorescence, 在EX WL中输入预扫描中得到的最佳激发波长，在EM Start WL中输入比最佳激发波长大10nm的数据(有利于保护检测器)，在EM End WL中输入700(nm)，Scan speed中选择240或1200，EX slit和EM slit一般选择5.0（若荧光强度太弱，可提高该数值，若强度太高，可降低该数值），PMT V oltage （电压）中可选择700（若荧光强度太弱，可提高该数值，若强度太高，可降低该数值），PMT V oltage 0-1000v前面的方框打勾后，可在上面的PMT V oltage中随意填写电压值。
在Response 中选择Auto, 在Replicates 中选择1，在Cycle time中填0。
在Processing菜单中(见下图)的Y Axis中的Max中填1000或2000或10000（可根据预扫描结果的荧光强度值填写Y轴荧光强度的最大值），Min中填0。
Contour中填写10，在open data processing windowafter data acquisitior前打勾。
4.点击右上角Sample ABC,进行数据存储模式及途径设置（见下图）。
5.点击上图右上角Measure,即可对样品进行测试，测试完后在图谱右上角点击report，再点击文件菜单“另存为”，可将图谱数据另存为excel格式。
6. 96微孔板的操作，先安装相关装置，安装后（见下图）图中画圆圈的支架突出部分要压住它边上按钮。
开机后在空白图谱上面可见MPR菜单(见下图)，点击该按钮。
出现下图情景点击Data save,可设置数据格式及存储路线（如下图）。
点击上图中的Exchange position，放微孔板的支架会跳出来，然后可放入装有样品的微孔板，左下角为A1位置（见下图）。
选择图中有样品的比色皿，如下图，点击Sample set,可出现黄色背景，若点击Reset,可取消设置，黄色背景消失。
可选择某一个样品进行预扫描（设置方法同上面叙述过的方法一样），根据预扫描结果，再对方法进行设置（设置方法同上面叙述过的方法一样），对批量样品进行测试。
7、关机顺序（逆开机顺序实施操作）：（1）关闭运行软件FL Solution 2.1 for F-7000。
（2）关闭仪器主机电源。
（3）关闭计算机。
注意事项（1）注意开机顺序。
步骤1-（2）若是未先开主机，则程序会抓取不到主机讯号。
（2）注意关机顺序。
（3）为延长仪器使用寿命，扫描速度、负高压、狭缝的设置一般不宜选在高档。
（4）关机后必须半小时（等氙灯温度降下）方可重新开机。
F-7000荧光分光光度计使用操作步骤1、开机：（1）开启计算机。
（2）开启仪器主机电源。
按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮（POWER）。
同时，观察主机正面面板右侧的Xe LAMP 和RUN指示灯依次亮起来，都显示绿色。
2、计算机进入Windows XP视窗后，打开运行软件（如图1）。
（1）双击桌面图标（FL Solution 2.1 for F-7000）。
主机自行初始化，扫描界面自动进入。
（2）初始化结束后，须预热15-20分钟，按界面提示选择操作方式。
图1 FL Solution 2.1扫描界面3、测试模式的选择：波长扫描（wavelength scan）（1）点击扫描界面右侧“Method”。
（2）在“General”选项中的“Measurement”选择“wavelength scan”测量模式，如图2。
图2 Method--“General”选项的界面（3）在“Instrument”选项中设置仪器参数和扫描参数，如图3。
图3 Method--- “Instrument”选项设置界面主要参数选项包括：①选择扫描模式“Scan Mode”：Emission/Excitation/Synchronous（发射光谱、激发光谱和同步荧光）。
②选择数据模式“Data Mode”：Fluorescence/Phosphprescence/Luminescence(荧光测量、磷光测量、化学发光)。
③设定波长扫描范围。
A、扫描荧光激发光谱(Excitation)：需设定激发光的起始/终止波长（EX Start/End WL）和荧光发射波长（EM WL）;B、扫描荧光发射光谱(Emission)：需设定发射光的起始/终止波长（EM Start/End WL）和荧光激发波长（EX WL）;C、扫描同步荧光（Synchronous）：需设定激发光的起始/终止波长（EX Start/End WL）和荧光发射波长（EM WL）。
！！Attention：激发光终止与起始波长差不小于10nm。
④选择扫描速度“Scan Speed”（通常选240nm/min）。
⑤选择激发/发射狭缝（EX/EM Slit）。
⑥选择光电倍增管负高压“PMT V oltage”（一般选700V）。
⑦选择仪器响应时间“Response”（一般选Auto）。
⑧选择光闸控制“□Shutter Control”打√，以使仪器在光谱扫描时自动开启，而其他时间关闭。
⑨选择“Report”设定输出数据信息、仪器采集数据的步长（通常选0.2nm）及输出数据的起始和终止波长（Data Start/End）。
！！Attention：Data Start/End需与“Instrument”选项中设置一致，否则所得到的数据点会逐渐减少，而无法作图。
（4）参数设置好后，点击“确定”。
4、设置文件存储路径（1）点击扫描界面右侧“Sample”，如图4。
图4 Sample选项的界面（2）样品命名“Sample name”。
（3）选中“□Auto File”，打√。
可以自动保存原始文件和TXT格式文本文档数据。
（4）参数设置好后，点击“OK”。
5、扫描测试（1）打开盖子，放入待测样品后，盖上盖子。
（请勿用力）。
（2）点击扫描界面右侧“Measure”（或快捷键F4），窗口在线出现扫描谱图。
6、数据处理（1）选中自动弹出的数据窗口，如图5。
（2）选择“Trace”，进行读数并寻峰等操作。
图5 扫描谱图窗口（3）上传数据。
3、关机顺序（逆开机顺序实施操作）：（1）关闭运行软件FL Solution 2.1 for F-7000，弹出窗口，如图6。
（2）选中“○Close the lamp，then close the monitor windows？”，打“⊙”。
（3）点击“Yes”。
窗口自动关闭。
同时，观察主机正面面板右侧的Xe LAMP指示灯暗下来，而RUN指示灯仍显示绿色。
图6 关闭运行软件（2）约十分钟后，关闭仪器主机电源，即按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮（POWER）。
（目的是仅让风扇工作，使Xe灯室散热）。
（3）关闭计算机。