实验动物接种方法
实验动物接种方法
一、试验目的
熟悉并掌握实验动物的疫苗接种途径与方法
二、试验原理
接种疫苗的目的是激发保护性免疫应答并形成免疫记忆，从而使动物免遭感染的危害。
疫苗种类：根据传统与习惯，疫苗可分为减毒活疫苗、灭活疫苗、抗毒素、亚单位疫苗、载体疫苗、核酸疫苗等。接种途径的确定应根据疫苗种类、畜禽日龄及免疫目的而定，主要有以下几种途径：气雾法、注射法（肌肉、皮下、皮内、静脉、腹腔内）、饮水法、点眼、滴鼻法、灌胃法等。一般活苗采用饮水、喷雾、滴鼻、点眼、注射免疫，灭活苗则需肌肉或皮下注射。
三、实验材料
1ml注射器、生理盐水、滴管、灌胃器、每两人一只小鼠
四、实验方法
注射法（肌肉、皮下、皮内、静脉、腹腔内）、点眼、滴鼻法、灌胃法。
1．注射接种方法
（1）皮下注射接种（多点注射法）
皮下注射接种是将药液推入皮下结缔组织，经毛细血管、淋巴管吸收进入血液循环的过程。作皮下注射常选项背或大腿内侧的皮肤。操作时，常规消毒注射部位皮肤，然后将皮肤提起，注射针头取一钝角角度刺入皮下，把针头轻轻向左右摆动，易摆动则表示已刺入皮下，再轻轻抽吸，如无回血，可缓慢地将药物注入皮下。拔针时左手拇、食指捏住进针部位片刻，以防止药物外漏。注射量约为体重。
（2）皮内注射接种（多点注射法）
是将药液注入皮肤的表皮和真皮之间，观察皮肤血管的通透性变化或皮内反应，接种、过敏实验等一般作皮内注射。先将注射部位的被毛剪掉，局部常规消毒，左手拇指和食指按住皮肤使之绷紧，在两指之间，用结核菌素注射器连接针头穿刺，针头进入皮肤浅层，再向上挑起并梢刺入，将药液注入皮内。注射后皮肤出现一白色小皮丘，而皮肤上的毛孔极为明显。注射量为次。
（3）肌肉注射接种（多点注射法）
小鼠体积小，肌肉少，很少采用肌肉注射。当给小鼠注射不溶于水而混悬于油或其他溶
剂中的药物时，采用肌肉注射。操作时1人保定小鼠，另一人用左手抓住小鼠的1条后肢，右手拿注射器。将注射器与半腱肌呈90°角迅速插入1/4,注入药液.用药量不超过10g体重.
(4) 静脉注射接种
将小鼠放在金属笼或鼠夹中,通过金属笼或鼠夹的孔拉出尾巴,用左手抓住小鼠尾巴中部.小鼠的尾部有2条动脉和3条静脉,2条动脉分别在尾部的背侧面和腹侧面,3条静脉呈品字型分布,一般采用左右两恻的静脉.拔去沿尾部静脉走向的毛,置尾巴于45-50℃温水中浸泡几分钟或用75%酒精棉球反复擦拭尾部,以达到消毒和使尾部血管扩张及软化表皮角质的目的.行尾部静脉注射时,以左手拇指和食指捏住鼠尾两侧,使静脉更为充盈,用中指从下面托起尾巴,以无名指夹住尾巴的末梢,右手持4号针头注射器,使针头与静脉平行(小于30°角),从尾巴的下1/4处进针,开始注入药物时应缓慢,仔细观察,如果无阻力,无白色皮丘出现,说明已刺入血管,可正式注入药物.有的实验需连日反复尾静脉注射接种,注射部位应尽可能从尾端开始,按次序向尾根部移动,更换血管位置注射接种。注射量为体重。拔出针头后，用拇指按住注射部位轻压1-2min，防止出血。
应当注意，此途径因绕过淋巴结，故不利于细胞免疫的建立。
（5）腹腔注射
左手提起并固定小鼠，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部，右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两恻进行穿刺，针头刺入皮肤后进针3nm左右，接着使注射针头与皮肤呈45°角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失。固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液后即可注射药液。注射量为体重。
2. 滴鼻接种
左手保定住小鼠，右手用滴管吸取疫苗，对准鼻孔滴入1-2滴疫苗。待完全吸入后方能松手，吸入不准的要重滴。
3. 点眼接种法
左手保定住小鼠，右手用滴管吸取疫苗，对准眼睛滴入1-2滴疫苗。待完全吸入后方能松手，吸入不准的要重滴。
4. 灌胃法
小鼠专用灌胃针由注射器和喂管组成，喂管长约1nm，喂管尖端焊有一金属小圆球，金属球中空，用途是防止喂管插入时造成损伤。金属球弯成20度角，以适应口腔与食道之间弯曲。
将喂管插头紧紧连接在注射器的接口上，吸入定量的药液；左手捉住小鼠，右手拿起准备好的注射器。将喂管针头尖端放进小鼠口腔，压迫鼠头部，使口腔与食管成一直线。轻轻转动针头以刺激鼠的吞咽，将针头顺咽后壁轻轻插入食管下段，如遇阻力，可轻轻上下滑动，
不能强行插入。一旦感觉阻力突然消失有落空感时，轻抽注射器，如无气泡抽出，则表明针头已进入胃。如此时动物安静，呼吸无异常，可将药液注入。若动物出现剧烈挣扎，进针阻力很大或动物呼吸困难，则可能是插入气管内，此时必须立即退出重插。操作时动作轻柔以防损伤食管及膈肌。一般灌胃针头插入长度小鼠为 cm。用中指与拇指捏住针筒，食指按着针竿的头慢慢往下压，即可将注射器忠的药液灌入小鼠的胃中。
五、注意事项
1. 注意安全，避免被动物咬伤。
2. 注射器要避免重复使用，注射部位的消毒要彻底。
动物免疫接种
动物免疫接种
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免疫接种 免疫接种是给动物接种疫苗或免疫血清,使动物机体自身产生或被动获得对某一病原微生物特异性抵抗力的一种手段。通过免疫接种,使动物产生或获得特异性抵抗力，预防疫病的发生，保护人、畜健康,促进畜牧业生产健康发展。 第一节疫苗基础知识 一、疫苗的概念 由病原微生物、寄生虫以及其组分或代谢产物所制成的、用于人工自动免疫的生物制品，称为疫苗。给动物接种疫苗，刺激机体免疫系统发生免疫应答,产生抵抗特定病原微生物（或寄生虫）感染的免疫力，从而预防疫病。 二、疫苗种类 由细菌、病毒、立克次氏体、螺旋体、支原体等完整微生物制成的疫苗，称为常规疫苗。常规疫苗按其病原微生物性质分为活疫苗、灭活疫苗、类毒素。 利用分子生物学、生物工程学、免疫化学等技术研制的疫苗，称为新型疫苗，主要有亚单位疫苗、基因工程疫苗、合成肽疫苗、核酸疫苗等。 （一）活疫苗
活疫苗是指用通过人工诱变获得的弱毒株，或者是自然减弱的天然弱毒株（但仍保持良好的免疫原性）,或者是异源弱毒株所制成的疫苗。例如布鲁氏菌病活疫苗、猪瘟活疫苗、鸡马立克氏病活疫苗(Ⅱ型）、鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗等。 1、活疫苗的优点 （1）免疫效果好。接种活疫苗后,活疫苗在一定时间内，在动物机体内有一定的生长繁殖能力,机体犹如发生一次轻微的感染，所以活疫苗用量较少,而机体所获得的免疫力比较坚强而持久。 （２)接种途径多。可通过滴鼻、点眼、饮水、口服、气雾等途径,刺激机体产生细胞免疫、体液免疫和局部黏膜免疫。 2、活疫苗的缺点 （1)可能出现毒力返强。一般来说，活疫苗弱毒株的遗传性状比较稳定，但由于反复接种传代,可能出现病毒返祖现象,造成毒力增强。 （2）贮存、运输要求条件较高。一般冷冻干燥活疫苗，需-15℃以下贮藏、运输，因此必须具有低温贮藏、运输设施,进行贮藏、运输,才能保证疫苗质量。 （３）免疫效果受免疫动物用药状况影响。活疫苗接种后,疫苗菌毒株在机体内有效增殖,才能剌激机体产生免疫保护力,如果免疫动物在此期间用药,就会影响免疫效果。 （二)灭活疫苗
动物实验的基本操作
第一节实验动物的捉拿、固定和编号方法 在基础医学实验中，正确捉拿与固定动物，是实验工作的基础，也是实验顺利进行的保证。掌握正确捉拿、固定动物的目的就是防止实验者被动物咬伤抓伤，同时也是为了维持动物的正常生理活动，从而不影响实验观察结果。 一、实验动物的捉拿与固定方法 在基础医学实验中，最常用的动物有小鼠、大鼠、豚鼠、蟾蜍、蛙、家兔和犬，现分别就其捉拿与固定方法依次予以介绍。 1. 小鼠 捉拿时先用右手将鼠尾抓住提起，放在较粗糙的台面或鼠笼上，在其向前爬行时，右手向后拉尾(图5-1)，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和头颈部皮肤，将其置于左手心中，拉直四肢并用左手无名指压紧尾和后肢(图5-2)，右手即可作注射或其他实验操作。取尾血及尾静脉注射时，可将小鼠固定在金属或木制的固定器上(图5-11)。 图5-1 图5-2 2. 大鼠 方法基本与捉拿小鼠相同，但实验者事先应戴帆布防护手套。用右手将鼠尾抓住提起，放在较粗糙的台面或鼠笼上，抓住鼠尾向后轻拉，左手拇指和食指抓紧两耳和头颈部皮肤，余下三指紧捏鼠背部皮肤，如果大鼠后肢挣扎厉害，可将鼠尾放在小指和无名指之间夹住，将整个鼠固定在左手中，右手进行操作。若进行手术或解剖，则应事先麻醉或处死，然后用棉线活结缚四肢，用棉线固定门齿，背卧位固定在大鼠固定板上。需取尾血及尾静脉注射时，可将其固定在大鼠固定盒里，将鼠尾留在外面供实验操作。 3. 豚鼠 豚鼠具有胆小易惊的特性，因此抓取时要求快、稳、准。一般方法是：先用右手掌迅速、轻轻地扣住豚鼠背部，抓住其肩中上方，以拇指和食指环握颈部，对于体型较大或怀孕的豚鼠，可用另一只手托住其臀部(图5-3、图5-4)。
二十种常见实验动物模型
二十种常见实验动物模型 一、缺铁性贫血动物模型 缺铁性贫血（iron deficiency anemia，IDA）是体内用来合成血红蛋白（HGB）的贮存铁缺乏，HGB合成减少而导致的小细胞低色素性贫血，主要发生于以下情况：（1）铁需求增加而摄入不足，见于饮食中缺铁的婴幼儿、青少年、孕妇和哺乳期妇女。（2）铁吸收不良，见于胃酸缺乏、小肠粘膜病变、肠道功能紊乱、胃空肠吻合术后以及服用抗酸和H2受体及抗剂等药物等情况。（3）铁丢失过多，见于反复多次小量失血，如钩虫病、月经量过多等。 IDA是一种多发性疾病，据报道，在多数发展中国家，约2/3的儿童和育龄妇女缺铁，其中1/3患IDA，因此，研究IDA的预防和治疗具有重要的意义。在这些研究中，缺铁性贫血的动物模型（Animal model of IDA），又是实施研究的基础工具。常见的IDA动物模型的构建技术如下： 实验动物：一般选用SD大鼠，4周龄，雌雄不拘，体重65g左右，HGB≥130g/L。 建模方法：低铁饲料加多次少量放血法。低铁饲料一般参照AOAC 配方配制，采用EDTA浸泡处理以去除饲料中的铁，饲料中的含铁量是诱导SD大鼠形成缺铁性贫血模型的关键，现有研究表明，饲喂含铁量<15.63mg/Kg的饲料35天，SD大鼠出现典型IDA表现，而饲喂
含铁40.30mg/Kg的饲料SD大鼠出现缺铁，但并不表现贫血症状。建模时一般采用去离子水作为动物饮水，以排除饮水中铁离子的影响。少量多次放血主要用于模拟反复多次小量失血导致的铁丢失，还可以加速贫血的形成。放血一般在低铁饲料饲喂2周后进行，常用尾静脉放血法，1～1.5ml/次，2次/周。 模型指标：（1）HGB≤100g/L；（2）血象：红细胞体积较正常红细胞偏小，大小不一，中心淡染区扩大，MCV减小、MCHC降低；（3）血清铁（SI）降低，常小于10μmol/L，血清总铁结合力（TIBC）增高，常大于60μmol/L。 需要指出的是，以上模型不能用于铁吸收不良相关IDA的防治研究。根据具体的研究需要，也可以适当调整建模方法。 二、白血病动物模型 用免疫耐受性强的人类胎儿骨片植入重症联合免疫缺陷病(SCID)小鼠皮下，出于人类造血细胞与造血微环境均植入小鼠，建立具有人类造血功能的SCID小鼠模型称为SCID－hu小鼠。再将髓系白血病患者的骨髓细胞植入SCID－hu小鼠皮下的人类胎儿骨片内，植入的髓系白血病细胞选择性生长在SCID－hu小鼠体内的人类造血微环境中，即为人类髓系白血病的小鼠模型。SCID小鼠是由于其scid所致。T、B淋巴细胞功能联合缺陷，这种小鼠能接受人类器官移植物。 造模方法：
动物疫病免疫接种技术
动物疫病免疫接种技术 一、概念 免疫接种是给动物接种疫苗或免疫血清，使动物机体自身产生或被动获得对某一病原微生物特异性抵抗力的一种手段。通过免疫接种，使动物产生或获得特异性抵抗力，预防疫病的发生，保护人、畜健康，促进畜牧业生产健康发展。 二、免疫接种 （一）免疫接种的类型 根据免疫接种的时机不同，可分为预防接种、紧急接种和临时接种。 1、预防接种。指在经常发生某类传染病的地区、或有某类传染病潜在的地区、或受到邻近地区某类传染病威胁的地区，为了预防这类传染病发生和流行，平时有组织、有计划地给健康动物进行的免疫接种。 2、紧急接种。指在发生传染病时，为了迅速控制和扑灭传染病的流行，而对疫区和受威胁区尚未发病的动物进行的免疫接种。紧急接种应先从安全地区开始，由外向内，逐头（只）接种，以形成一个免疫隔离带。 3、临时接种。指在引进或运出动物时，为了避免在运输途中或到达目的地后发生传染病而进行的预防免疫接种。 （二）免疫接种的准备 1、器械。 （1）接种器械根据不同的免疫方法、畜禽的大小，准备所需要的接种器械。注射器、针头（大小）、镊子、刺种针；点眼（滴鼻）
滴管；饮水器、玻璃棒、量筒；喷雾器等。 （2）消毒器械剪毛剪、镊子、消毒灭菌器等。 （3）动物保定器。 （4）带盖瓷盘、疫苗冷藏箱、冰袋、体温计、听诊器、废弃疫苗瓶收纳器等。 （5）动物防疫人员防护用具：防护服、防护靴、防护帽、防护目镜、防护口罩等。 2、药品 （1）注射部位消毒75％酒精、5%碘酊、脱脂棉等。 （2）防疫人员专用消毒药及肥皂等。 （3）抗应激过敏药品 0.1%盐酸肾上腺素、地塞米松磷酸钠等。 3、注意事项 (1)器械清洗一定要保证清洗的洁净度，不能有污染。 (2)灭菌后的器械一个周内不用，下次使用前应要重新消毒灭菌。 (3)禁止使用化学药品消毒，因为用化学消毒药消毒后，器械上难免会残留化学消毒剂，与疫苗接触会造成疫苗的失效。 （4）使用一次性无菌塑料注射器时，要检查包装是否完好和是否在有效期内，开袋要马上使用，不能开袋在空气中放置太长时间，以免造成污染。 （三）检查待接种动物健康状况 为了保证免疫接种动物安全及接种效果，接种前应观察了解预接种动物的健康状况。按照几不打的原则： （1）检查动物的精神、食欲、体温，不正常的不接种。 （2）检查动物是否发病、是否瘦弱，发病、瘦弱的动物不接种。 （3）幼小、怀孕的动物不接种。 （4）对上述动物进行登记，以便以后补免，不能漏免。
各种免疫接种方法优缺点比较
各种免疫接种方法优缺点比较 （1）免疫接种的方法免疫接种的方法很多，主要有注射免疫法（皮下免疫、皮内免疫、筋肉接种、静脉接种）、经口免疫法、气雾免疫法、滴鼻、点眼等 1. 注射免疫 （1）皮下接种法皮下接种是最常用的免疫接种途径，凡是易溶解的无强烈刺激性菌苗、疫苗等均可作皮下注射。家畜应选择皮肤容易移动的部位，马、骡多在颈侧；牛在颈侧或肩胛后方的胸侧；猪在耳根或股内侧；犬、猫在颈侧或背部、股内侧；家禽：颈部、大腿内侧。优点：操作简单，吸收较皮内接种为快，免疫效果好，缺点是工作量大、需要逐只免疫，注射剂量大，有刺激性等 皮内接种法马：颈侧、眼睑部位。牛及羊：除颈侧外，可在尾根或肩胛中央部位。猪：耳根后。鸡：肉髯部位。目前兽医制品用作皮内接种的，仅有羊痘弱毒菌苗、猪瘟结晶紫疫苗等少数制品，其它均属于诊断液方面。一般使用专供皮内注射的注射器，也可使用lml注射器和相应的注射针头。 皮内接种的有点：是使用药液少，同样的疫苗皮内注射较之于皮下注射反应小。同时，真皮层的组织比较致密，神经末梢分布广泛，特别是猪的耳根皮内比其他部位容易保持清洁。同量药液皮内注射时所产生的免疫力较皮下注射为高。皮内接种的缺点是操作较难，技术含量高。
肌肉接种法马、牛、猪、羊：臀部和颈部两个部位。鸡：多在胸肌，在龙骨外侧胸部l/3处，以15号针头成30°，倾斜朝背部方向刺人胸肌，切忌垂直刺入胸肌，以免刺穿胸腔。在翅膀靠近肩部无毛处的翼下内侧肌肉注射比较确实。在腿部肌肉注射时，可抓住鸡脚，朝身体方向刺入外侧腿肌。 兽医生物制品，除猪瘟弱毒疫苗、牛肺疫弱毒疫苗、新城I系苗以及在某些情况下接种血清采用肌肉接种外，其他生物制品一般都不应用此法进行接种。肌肉接种的优点是药液吸收快，操作方便。注射方法也较简便。其缺点是工作量大、需要逐只免疫，注射剂量大，有刺激性。同时臀部接种如部位不当，易引起跛行。 静脉接种法马、牛、羊：颈静脉，猪：耳静脉。鸡：翅静脉。兽医生物制品中的免疫血清，除了皮下或肌肉接种外，亦可采用静脉接种，特别在急于治疗传染病患畜时。疫苗、菌苗、诊断液一般不作静脉注射。静脉接种的优点：可使用大剂量，奏效快，可以及时抢救病畜。缺点：比较麻烦；如所应用的血清为异种动物者，可能引起过敏反应（血清病）。 胸腔注射胸腔注射目前仅见猪喘气病弱毒疫苗的免疫，它能很快刺激胸部的免疫器官产生局部的免疫应答，直接保护被侵器官，但是免疫时需要保 定猪只，免疫刺激大，接种技术较高
动物免疫接种不良反应及应急措施
动物免疫接种不良反应及应急措施 在动物免疫接种实践中,注射疫苗出现的不良反应是一个不容忽视的问题。动物免疫接种不良反应的发生,特别是免疫注射引起的死亡，不仅给养殖场（户）造成一定的经济损失，而且影响到动物防疫工作的正常开展。对免疫接种不良反应采取积极的应急措施，是一个非常现实和急迫的问题，备足备好抢救药品，做好随时应急准备工作，是我们在免疫接种工作中不可忽视的一个重要环节。 1、免疫接种的不良反应 在免疫接种过程中，出现不良反应的强度和性质与疫（菌）苗的种类、质量、毒性以及动物个体和品种差异、接种时操作方法、被免疫动物健康状况等因素有关。主要表现为：①免疫接种途径错误，操作不规范；②注射疫（菌）苗剂量过大，部位不准确；③疫（菌）苗贮藏、运输等不当，质量不高；④接种前临床检查不细，带病接种疫苗；⑤接种对象错误，忽视品种和个体差异或过早接种疫（菌）苗。根据不良反应的强度和性质，可分为以下3种类型。 1.1 正常反应 是指疫苗本身的特性引起的反应。大多数动物在接种疫苗后不会出现明显的不良反应，少数动物在接种疫苗后，常常出现一过性的精神沉郁，食欲下降，注射部位出现短时轻度炎性水肿等局部或全身性异常表现。 1.2 严重反应 指与正常反应在性质上相似，但反应的程度重或出现反应的动物数量较多。引起严重反应的原因通常是由于疫苗的质量低劣、毒
（菌）株的毒力太强、注射剂量过大、操作错误、接种途径或使用对象不准等因素引起。 1.3 过敏反应 是指疫苗本身或其培养液中存在某些过敏源，导致动物在接种疫苗后迅速出现过敏反应。发生过敏反应的动物表现为缺氧、黏膜发绀、严重的呼吸困难、呕吐、腹泻、虚脱或惊厥等全身反应过敏性休克。 2、过敏反应的临床表现 根据反应的程度和临床表现，可分为最急性过敏、急性过敏和慢性过敏3种。 2.1 最急性过敏 被接种疫苗后的动物在10 min之内，迅速出现呼吸困难，口吐白沫，呕吐，无意识排便，鸣叫呻吟，站立不稳，倒地抽搐，体温降低，可视黏膜，皮肤苍白，心跳快而弱，脉沉细数，虚脱或惊厥等全身反应和过敏性休克，整个过程短则几秒钟，长者不超过1 h，抢救不及时，很快休克或死亡。 2.2 急性过敏 呆立不动，精神委靡，呼吸急促，口流涎沫，全身肌肉颤抖，出汗，呕吐食物，拒食，强迫行走则步态不稳或突然倒地，大小便失禁，瞳孔散大，反射减弱，四肢冰凉，偶而有鼻腔出血，猪有时可见皮疹，体温升高1 ℃~2 ℃，心率增快，脉沉细数。 2.3 慢性过敏型 1 d~3 d表现临床症状，慢食或不食、蹄部疼痛，注射部位肿胀或炎性水肿，有急性型症状，但较轻微，自然或稍微对症治疗即可痊愈。
动物免疫操作规程及注意事项
动物免疫操作规程 （一）、器械的准备和消毒。注射器、针头、镊子、针盒等严格冲洗，经煮沸20--25分钟后备用。并备体温表、包裹纱布、药棉、耳标钳、耳标、疫苗专用储存箱、登记簿、动物免疫证、疫苗、碘酒、酒精和抢救药品等。 （二）、严格遵照各种疫（菌）苗使用说明中的各项要求和注意事项。 （三）、掌握片区内及周围的动物疫情，并对预防对象进行健康检查。对于疫区内的、正在患病的、瘦弱的、母源抗体尚未消失的和重胎临产的动物暂时不免疫接种，待上述原因消除后再进行预防接种。 （四）、疫（菌）苗的稀释。按各种疫（菌）苗的要求进行稀释，猪瘟冻干苗用生理盐水、猪二联苗用氢氧化铝液按每头份疫苗1毫升稀释；禽流感-新城疫二联苗、鸡新城疫苗、狂犬病疫苗用注射用水按使用方法酌情份量进行稀释；口蹄疫疫苗、牛出败苗、蓝耳病、禽流感等不需稀释,只需在使用时振荡均匀即可。稀释、吸药所用注射器和针头都必须严格消毒。稀释、吸药的针头留在药未用完的瓶塞上，用挤干的酒精棉花包裹，作专门吸药用。 （五）、注射时，在注射部位用碘酒、酒精消毒后，准确、足量注射（我县现行规格的猪瘟冻干苗、猪二联苗、猪三联苗每瓶40头份，注射38头猪；每瓶20头份，注射19头猪；牛出败苗100毫升，注射18头牛；口蹄疫苗按猪苗每头份2毫升，牛苗每头份3ml进行注射）。 （六）、注射后，打耳标进行标识，并作好登记、应填发免疫证的填发免疫证，嘱咐畜主保存好免疫证，以备以后查验。 （七）、疫（菌）苗药瓶及沾有疫（菌）苗药液的废弃物等均需烧毁或深埋，器械立即消毒。 （八）注意事项： 1、吸药时只准吸出，不准推入。需排空气时，针头尖孔处用消毒药棉吸干排出的药液。
动物免疫接种制度
动物免疫接种制度 ⑴准时准量免疫接种，做到头头免疫注射。 ⑵注射疫苗时,小猪1栏换1个针头，种猪1针筒疫苗换1个针头。病猪不能注射，病愈后及时补注。 ⑶接种活菌苗前后1周停用各种抗菌素。 ⑷发生过敏反应肌注肾上腺素；为预防过敏反应及加强免疫效果，可在注射疫苗前饮水添加维力康等抗应激、免疫增效剂药物。
卫生消毒制度 1、进入猪场大门和生产区大门口处设消毒池，并设人员过往消毒通道，消毒药物可用2%的火碱溶液，消毒对象主要是车辆的轮胎和人员的鞋底。 2、大门口处设喷雾器械，消毒对象是车身和车底盘。 3、工作人员进入生产区之前，必须经过消毒间，淋浴，更换工作衣、帽、胶鞋，脚踏消毒池进入。经批准允许入场参观人员的消毒方法与工作人员相同，并按制定路线参观。 4、空猪舍在引入猪群前应彻底消毒，程序为：清扫杂物、粪尿，用高压水管冲洗墙壁、地面及栏架。水冲洗干燥后可用0.3%的过氧乙酸或2-3%的火碱溶液喷雾消毒。对于封闭舍可随后关闭门窗及出风筒，用甲醛和高锰酸钾熏蒸消毒24小时（甲醛30毫升/立方米，高锰酸钾15克/立方米，加水15毫升/立方米）。熏蒸时先将甲醛称好放入容器内（按猪舍面积均匀放开）。最后放入高锰酸钾，放高锰酸钾时动作要快，以免溶液溢出，烧伤皮肤。并迅速离开现场，封闭门窗。 5、猪场过道及运动场每周可用2%的火碱溶液或1：800的百毒杀消毒一次，饲养用具（如饲槽）必要时每周刷洗一次，同时可用0.1%的新洁尔灭消毒。 6、母猪进入产房前，将产房彻底冲洗干净，干燥后再用消毒药喷雾消毒。母猪进入产房前，全身冲洗干净，经过消毒、驱除体表寄生虫后再上产床。母猪分娩前用0.1%的高锰酸钾消毒乳房和阴部，分娩后再用消毒药布擦拭乳房、阴部和后躯，并及时清理胎衣和产房。 7、作好配种时的卫生消毒工作。 8、作好接产时的卫生消毒工作。 9、作好经常性的环境消毒、带猪消毒，消毒剂应按性质经常更换。
2015-动物实验基本操作
动物实验基本操作一（固定、性别判定、标识） 【实验目的】在做动物试验时，为确保给药、实验顺利进行，防止被动物咬伤、准确辨别动物性别、准确标识动物，要学会用正确方法捉拿实验动物、掌握辨别动物性别的方法以及掌握标识动物的方法。 【实验对象】SD大鼠，KM小鼠，雌雄各半，体重180-250g。 【实验器材和药品】 器材：鼠笼、大小鼠固定器、方木板、美式图钉、细绳、防护手套 药品：苦味酸80%~90%酒精饱和溶液、20%乌拉坦 【实验步骤】 一、小鼠的捉拿 1、徒手固定：用右手提起尾巴中部，放在鼠笼盖或其他粗糙面上。向后上方轻拉，此时，小鼠前肢紧紧抓住粗糙表面。左手拇指和食指迅速捏住小鼠颈背部皮肤，再置小鼠于左手心，并以左手掌心和中指夹住小鼠背部皮肤，无名指压住小鼠尾根部，将其固定于手中。右手可行注射或其它操作。 2、固定器固定：尾静脉注射或给药时，将小鼠放进固定器中或者大小和重量适当的容器（如烧杯），只露出尾巴，该类容器能够压住尾部，避免其活动。勿固定过紧造成窒息死亡。进行腹腔手术或心脏采血时，先准备一个15-20cm的方木板，边缘钉入五颗钉子。将小鼠四肢分别用20-30cm的线绳捆绑，线的另一头分别绑在方木板的钉子上，并且在头部上颚切齿牵引一根线绳，也固定在钉子上，达到完全固定。 二、大鼠的捉拿
4-5周内的大鼠，方法同小鼠。周龄较大的，则：1、首先戴好防护手套。2、用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部将大鼠提起，放在大鼠饲养盒的面罩上。3、左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行。4、以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三指和手掌握住大鼠背部皮肤，完成抓取保定。三、性别判定 小鼠、大鼠性别判定 （1）幼鼠外生殖器与肛门间隔短的是♀，外生殖器与肛门间隔长的是♂。 （2）成年动物可直接肉眼辨认，雄性有膨起的阴囊和阴茎，雌性动物有阴道口。四、动物的标记 小鼠的短期标记法：苦味酸80%~90%酒精饱和溶液（黄色），标出属于自己的编号【注意事项】 1、实验人员要有精神准备：掌握方法，胆大心细，做好防护。 2、动物兴奋的时候不要抓取，待其安静下来。 3、根据受试动物的给药部位或采血方法的不同，事先选择徒手固定还是固定器固定。 4、固定时把握好力度，过分用力会使小鼠颈椎脱臼或窒息死亡，若用力过轻头部能反转过来咬伤实验者的手。 【思考题】 1.在固定实验动物时如何才能快、准、稳？
2015-动物实验基本操作
2015-动物实验基本操作动物实验 基本操作一（固定、性别判定、标 识）【实验目的】在做动物试验 时，为确保给药、实验顺利进 行，防止被动物咬伤、准确辨别动 物性别、准确标识动物，要学会 用正确方法捉拿实验动物、掌握 辨别动物性别的方法以及掌握标识 动物的方法。 【实验对象】SD大鼠，KM小鼠，雌雄各半，体 重180-250g。 【实验器材和药品】 器材：鼠笼、大小鼠固定器、方木板、美式图钉、细绳、防护手套 药品：苦味酸80%?90酒精饱和溶液、20%乌拉坦【实验步骤】 一、小鼠的捉拿 1、徒手固定：用右手提起尾巴中部，放在鼠笼盖或其他粗糙面上。向后上方轻拉，此时，小鼠前肢
紧紧抓住粗糙表面。左手拇指和食指迅速捏住小鼠颈背部皮肤，再置小鼠于左手心，并以左手掌心和中指夹住小鼠背部皮肤，无名指压住小鼠尾根部，将其固定于手中。右手可行注射或其它操作。 2、固定器固定：尾静脉注射或给药时，将小鼠放进固定器中或者大小和重量适当的容器（如烧杯），只露出尾巴，该类容器能够压住尾部，避免其活动。勿固定过紧造成窒息死亡。进行腹腔手术或心脏采血时，先准备一个15-20cm的方木板，边缘钉入五颗钉子。将小鼠四肢分别用20-30cm的线绳捆绑，线的另一头分别绑在方木板的钉子上，并且在头部上颚切齿牵引一根线绳，也固定在钉子上，达到完全固定。 二、大鼠的捉拿 4-5 周内的大鼠，方法同小鼠。周龄较大的，^V: 1、首先戴好防护手套。2、用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部将大鼠提起，放在大鼠饲养盒的面罩上。3、左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行。4、以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三指和手掌握住大鼠背部皮肤，完成抓取保定。 三、性别判定小鼠、大鼠性别判定 (1)幼鼠外生殖器与肛门间隔短的是早，夕卜生殖器与肛门间隔长的是￡。 (2)成年动物可直接肉眼辨认，雄性有膨起的阴囊和阴茎，雌性动物有阴道口。
动物免疫注意事项
动物免疫接种注意事项及免疫接种失败的原因 1、动物免疫接种，是用人工的方法将有效的生物制品（疫苗、菌苗、抗血清和高免蛋黄液）引入动物机体内，从而激发动物机体产生特异性抵抗力，以避免疾病的发生和流行。免疫接种是预防和控制动物传染病的一项极为重要的措施。动物免疫接种注意事项和免疫失根据动物免疫接种的时机不同，动物免疫接种可分为预防接种、紧急接种和临时接种。 1.1预防接种。在经常发生某些传染病的地区，或某些传染病潜在的地区，为了防患于未然，有计划地给健康的动物进行免疫接种。动物机体预防接种通常使用疫苗、菌苗、类毒素等生物制剂，采用皮下、皮内肌肉或皮肤刺种、点眼、滴鼻、喷雾、 1.2紧急接种。当一地区发生某种疾病时，为了控制和扑灭其流行，给受威胁地区及周围的动物紧急免疫接种该疫病的疫苗，可有效地防止该病的蔓延。但对病畜及可能已受感染的潜伏期病畜，必须严格消毒隔离，但不能再接种疫苗。 1.3临时接种。在引进或运出动物时，为了避免在运输途中发生传染病进行的预防免疫接种。 2、免疫接种注意事项
2.1注意消毒、无菌操作 2.1.1器械消毒。对使用的注射器及针头要严格消毒，消毒方法可以用蒸煮消毒、高压灭菌或使用一次性注射器，禁止使用化学药品消毒器械。 2.1.2动物体表消毒。在动物注射部位，剪毛后用碘酊或75% 酒精进行消毒。 2.1.3针头选择。为避免交叉感染，家畜应一畜一个针头，禽至少50只换一个针头。 2.14做好免疫接种的个人人员安全防护和消毒 2.2正确使用疫苗 2.2.1 在使用疫苗前，要检查疫苗的外观质量。凡发现疫苗瓶破损，瓶盖或瓶塞密封不严或松动，无标签或标签不完整（包括疫苗品种、批准文号、生产日期、出厂日期、有效期、生产厂家等），超过有效期、色泽改变、疫苗发生沉淀、破乳、有异物、霉变、异味、无真空等，这样的疫苗（菌苗）不得使用。 2.2.2 疫苗使用时，要详细阅读使用说明书并做好记录。记录内容包括：接种日期、畜禽的品种、日龄、数量、使用疫苗的品种、厂名、生产日期及有效期、接种方法等。 2.2.3 正确稀释疫苗。疫苗稀释前冻千疫苗应先置于室温（15 ℃～25 ℃）先平衡疫苗温度再稀释，并严格按疫苗说明书进行。有专用稀释液的疫苗使用稀释液，没有稀释液的疫苗用蒸馏水或去离子水，但不能用自来水（自来水中的消毒剂会把疫苗
常用实验动物的实验基本操作技术
常用实验动物的实验基本操作技术 第一节常用实验动物的生物学特征 1．蛙（或蟾蜍）的生物学特点是什么？主要用于哪些实验？ 属于两栖变温动物，皮肤光滑湿润，有腺体无外鳞。蛙的心脏有两个心房，一个心室，心房与心室区分不明显，动静脉血液混合，有冬眠习性。生存环境比哺乳动物简单，在机能学实验中有多种实验选择该动物。如：①离体蛙心实验，常用来研究心脏的生理功能及药物对心脏活动的影响。②蛙的腓肠肌和坐骨神经可用于观察外周神经及其肌肉的功能，以及药物对周围神经、骨骼肌或神经肌肉接头的影响。③缝匠肌可用于记录终板电位。脊休克、脊髓反射、反射弧分析、肠系膜微循环等。在临床检验中，可用雄蛙作妊娠反应实验。 2．小白鼠的生物学特征是什么？主要用于哪些实验？ 小白鼠性情温顺，易于捕捉，胆小怕惊，对外来刺激敏感。它胃容量小，不耐饥渴，随时采食。在机能学实验中常选用该动物。故适用于大量的实验动物，如：某些药物的筛选实验、半数致死量（LD50）测定、药效比较、毒性实验、妊娠期20天左右，常用于避孕药实验及抗癌药实验。 3．大白鼠的生物学特征是什么？主要用于哪些实验？ 大白鼠性情温顺，行动迟缓，易于捕捉，但受惊吓或粗暴操作时，会紧张不安甚至攻击人。大鼠嗅觉发达，对外界刺激敏感，抵抗力较强。大鼠无胆囊，肾单位表浅，肝再生能力强。大鼠的血压反应比兔稳定，可用它作血压实验，也可用于慢性实验、抗炎、降脂、利胆、子宫实验及心血管系统的实验。药典规定该动物为催产素效价测定及药品指控中升压物质检查指定动物。 4．豚鼠生物学特征是什么？主要用于哪些实验？ 豚鼠性情温和，胆小，饲养管理方便，可群养。豚鼠耳蜗管发达，听觉灵敏，存在可见的普赖厄反射（听觉耳动反射），乳突部骨质薄弱。豚鼠对组织胺、人型结核杆菌很敏感。能耐受腹腔手术，使用于肾上腺机能的研究。其自身不能制造维生素C，是研究实验性坏血症的唯一动物。 5．家兔生物学特征是什么？主要用于哪些实验？ 家兔属于草食性动物，性情温顺但群居性差，听觉、嗅觉十分灵敏，胆小易惊，具夜行
小鼠解剖
实验一小鼠大体解剖 注意事项：请按教师的指令进行操作，谨防被小鼠咬伤； 如发生意外，请立即报告老师！ 一、实验目的 1. 掌握小鼠的抓取和固定方法； 2. 掌握小鼠的解剖方法； 3. 熟悉脏器系数的测定方法 4. 了解一般实验动物的抓取和固定方法 5. 了解一般实验动物的生物样本的采集方法 二、实验内容 1. 小鼠的抓取和固定 正确的抓取固定动物，是为了不损害动物健康，不影响观察指标，并防止被动物咬伤，保证实验顺利进行。抓取固定动物的方法依实验内容和动物类而定。抓取固定动物前，必须对各种动物的一般习性有所了解，抓取固定时既要小心仔细，不能粗暴，又要大胆敏捷，确实达到正确抓取固定动物的目的。 （1）单手抓取固定法 小鼠性情较温顺，挣扎力小，比较容易抓取和保定。抓取时，用左手拇指和食指捏住小鼠尾巴中部（图1）放在格板或铁笼上。趁着小鼠试图挣脱的瞬间，迅速用另外三个手指压住小鼠的尾巴根部握入手掌（图2）；放松拇指和食指，用另外三个手指控制小鼠，然后用食指和拇指捏住小鼠头部两边疏松的皮肤提起小鼠（图3），完成抓取保定。注意，抓小鼠尾巴应抓住尾巴中部或根部，不能仅捏住小鼠尾巴的尾端，因为这时小鼠的重量全部集中到尾端，如果小鼠挣扎，有可能弄破尾端。 在进行解剖、手术、心脏采血、尾静脉注射时，可将小鼠用线绳捆绑在木版上，或固定在尾静脉注射架及粗试管中。 图1 图2 图3 （2）双手抓取固定法
抓取时先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤（图4），将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可（图5）。这种在手中固定方式，能进行实验动物的灌胃、皮下、肌肉和腹腔注射以及其他实验操作。 如进行解剖、手术、心脏采血和尾静脉注射时，则需将小鼠作一定形式的固定，解剖手术和心脏采血等均可使动物先取背卧位（必要时先行麻醉），再用大头针将鼠前后肢依次固定在腊板上。尾静脉注射时，可用小鼠尾静脉注射架固定（图6），先根据动物大小选择好合适的固定架，并打开鼠筒盖，手提鼠尾巴，让动物头对准鼠筒口并送入筒内，调节鼠筒长短合适后，露出尾巴，固定筒盖即可进行尾静脉注射或尾静脉采血等操作。 图4 图 5 2. 小鼠的处死方法 （1）颈椎脱臼处死法 此法是将实验动物的颈椎脱臼，断离脊髓致死，为小鼠最常用的处死方法。操作时实验人员用右手抓住鼠尾根部并将其提起，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，用左手拇指、食指用力向下按压鼠头及颈部，右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，造成颈椎脱臼，脊髓与脑干断离，实验动物立即死亡。 （2）断头处死法 此法适用于鼠类等较小的实验动物。操作时，实验人员用左手按住实验动物的背部，拇指夹住实验动物右腋窝，食指和中指夹住左前肢，右手用剪刀在鼠颈部垂直将鼠头剪断，使实验动物因脑脊髓断离且大量出血死亡。 3 .小鼠解剖步骤 （1）处死小鼠 将小鼠采用颈椎脱臼法处死后，置台秤上称重。 图6
免疫接种 基础知识范文
第一章免疫接种 免疫接种是给动物接种疫苗或免疫血清，使动物机体自身产生或被动获得对某一病原微生物特异性抵抗力的一种手段。通过免疫接种，使动物产生或获得特异性抵抗力，预防疫病的发生，保护人、畜健康，促进畜牧业生产健康发展。 第一节疫苗基础知识 一、疫苗的概念 由病原微生物、寄生虫以及其组分或代谢产物所制成的、用于人工自动免疫的生物制品，称为疫苗。给动物接种疫苗，刺激机体免疫系统发生免疫应答，产生抵抗特定病原微生物（或寄生虫）感染的免疫力，从而预防疫病。 二、疫苗种类 由细菌、病毒、立克次氏体、螺旋体、支原体等完整微生物制成的疫苗，称为常规疫苗。常规疫苗按其病原微生物性质分为活疫苗、灭活疫苗、类毒素。 利用分子生物学、生物工程学、免疫化学等技术研制的疫苗，称为新型疫苗，主要有亚单位疫苗、基因工程疫苗、合成肽疫苗、核酸疫苗等。
（一）活疫苗 活疫苗是指用通过人工诱变获得的弱毒株，或者是自然减弱的天然弱毒株（但仍保持良好的免疫原性），或者是异源弱毒株所制成的疫苗。例如布鲁氏菌病活疫苗、猪瘟活疫苗、鸡马立克氏病活疫苗（Ⅱ型）、鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗等。 1、活疫苗的优点 （1）免疫效果好。接种活疫苗后，活疫苗在一定时间内，在动物机体内有一定的生长繁殖能力，机体犹如发生一次轻微的感染，所以活疫苗用量较少，而机体所获得的免疫力比较坚强而持久。 （2）接种途径多。可通过滴鼻、点眼、饮水、口服、气雾等途径，刺激机体产生细胞免疫、体液免疫和局部黏膜免疫。 2、活疫苗的缺点 （1）可能出现毒力返强。一般来说，活疫苗弱毒株的遗传性状比较稳定，但由于反复接种传代，可能出现病毒返祖现象，造成毒力增强。（2）贮存、运输要求条件较高。一般冷冻干燥活疫苗，需-15℃以下贮藏、运输，因此必须具有低温贮藏、运输设施，进行贮藏、运输，才能保证疫苗质量。
实验动物接种方法
实验动物接种方法 一、试验目的 熟悉并掌握实验动物的疫苗接种途径与方法 二、试验原理 接种疫苗的目的是激发保护性免疫应答并形成免疫记忆，从而使动物免遭感染的危害。 疫苗种类：根据传统与习惯，疫苗可分为减毒活疫苗、灭活疫苗、抗毒素、亚单位疫苗、载体疫苗、核酸疫苗等。接种途径的确定应根据疫苗种类、畜禽日龄及免疫目的而定，主要有以下几种途径：气雾法、注射法（肌肉、皮下、皮内、静脉、腹腔内）、饮水法、点眼、滴鼻法、灌胃法等。一般活苗采用饮水、喷雾、滴鼻、点眼、注射免疫，灭活苗则需肌肉或皮下注射。 三、实验材料 1ml注射器、生理盐水、滴管、灌胃器、每两人一只小鼠 四、实验方法 注射法（肌肉、皮下、皮内、静脉、腹腔内）、点眼、滴鼻法、灌胃法。 1．注射接种方法 （1）皮下注射接种（多点注射法） 皮下注射接种是将药液推入皮下结缔组织，经毛细血管、淋巴管吸收进入血液循环的过程。作皮下注射常选项背或大腿内侧的皮肤。操作时，常规消毒注射部位皮肤，然后将皮肤提起，注射针头取一钝角角度刺入皮下，把针头轻轻向左右摆动，易摆动则表示已刺入皮下，再轻轻抽吸，如无回血，可缓慢地将药物注入皮下。拔针时左手拇、食指捏住进针部位片刻，以防止药物外漏。注射量约为体重。 （2）皮内注射接种（多点注射法） 是将药液注入皮肤的表皮和真皮之间，观察皮肤血管的通透性变化或皮内反应，接种、过敏实验等一般作皮内注射。先将注射部位的被毛剪掉，局部常规消毒，左手拇指和食指按住皮肤使之绷紧，在两指之间，用结核菌素注射器连接针头穿刺，针头进入皮肤浅层，再向上挑起并梢刺入，将药液注入皮内。注射后皮肤出现一白色小皮丘，而皮肤上的毛孔极为明显。注射量为次。 （3）肌肉注射接种（多点注射法） 小鼠体积小，肌肉少，很少采用肌肉注射。当给小鼠注射不溶于水而混悬于油或其他溶
1常用实验动物的给药途径和方法
常用实验动物的给药途径和方法 在动物实验中，为了观察药物对机体功能、代及形态的变化，常需将药物注入动物体。由于实验目的、动物种类、药物剂型不同，给药途径和方法也多种多样。 一经口给药法 (一)灌胃法 此法给药剂量准确，是借灌胃器将药物直接灌到动物胃的一种常用给药方法。 1、白鼠灌胃法：抓起小鼠，以左手拇指、食指固定头部，小指、无名指和掌心夹注尾巴，使腹部朝上，颈部拉直，右手持灌胃器，将灌胃针从鼠的口角插入口腔，从舌背沿上腭插入食道。灌胃量0.2～0.5ml/10g。 胃管可用适宜口径的硬质塑料管或磨去针头的8号注射针头弯成适当的弧度制成。 注意，操作时不要用力猛插，以免插破食道或误插入器官造成动物死亡。 2、白鼠灌胃法：左手戴上棉手套，用左手拇指和食指将大鼠头部固定，将大鼠 灌胃器沿腭后壁慢慢插入食道。灌胃针插入时应无阻力，如有阻力或动物挣扎则应退针或将针拔出，重新再插。灌胃器由注射器和特殊的灌胃针构成。灌胃量10～20ml/kg 3 兔、犬等:灌胃一般要借助于开口器、灌胃管进行。先将动物固定，再将开口器固定于上下门齿之间，然后将灌胃管(常用导尿管代替)从开口器的小孔插入动物口中，沿咽后壁而进入食道。插入后应检查灌胃管是否确实插入食道。可将灌胃管外开口放入盛水的烧杯中，若无气泡产生，表明灌胃管被正确插入胃中，未误入气管。此时将注射器与灌胃管相连，注入药液。 4、猪的胃灌注法：给猪下鼻饲管较困难，因猪的鼻翼与上唇联合形成吻突，鼻腔上下鼻夹与鼻中隔通道极窄，只能通过F10－12号的导尿管，F14号以上的导尿管不能插入，故一般均给猪采用经口入胃的灌胃方法。具体方法是，预先做好一矩形小木块，中间有一洞，让小猪咬住，将其固定，然后再由此洞下胃管。此种操作较为简便。 5、鸟类：包括鸽、鸡等，经口灌胃给药，可由助手将其身体用毛巾裹住固定好。实验者用左手将动物向后拉，使其颈部倾斜，用左拇指和食指将动物嘴撬开，其他三只手指固定好动物头部，右手取带有灌胃针头的注射器，将灌胃针头由动物舌后插入食管。不要象其它动物灌胃时插的太深，如动物不挣扎，插针头又很顺利，即可将药液经口或食管上端罐入胃。罐入速度要慢。
讲义4 实验动物解剖
第四章实验动物解剖 选用环节动物（蚯蚓）、节肢动物（鳌虾）、鱼类（鲫鱼）、两栖类（蛙类或者蟾蜍）、哺乳类（大白鼠、小白鼠或者家兔）等作为代表性动物，进行系统操作实验，既学习了动物解剖知识，也在具体操作中熟悉和巩固前章所学习的动物抓取、麻醉。安死术等技术。 通过解剖与观察，使学生建立动物躯体结构和主要功能的认识，以便为各种实验所需的组织取材准确定位。哺乳动物是医学、药理学及生理学等学科的基本实验材料；环节动物、鱼类及两栖类则是环境生物学及水生生物学的常用实验动物，故在大学一年级的基础生物技术实验课中开设该项基本操作训练是很有必要的。教师也依据专业方向，为学生选择针对性的实验动物作为教学材料。 第一节环毛蚓（Pheretima sp．）解剖及横切面观察 一、目的意义 蚯蚓及沙蚕等都是环节动物门动物，尤以蚯蚓最为常见，也最为重要。蚯蚓不仅能改良土壤、净化修复污染上壤，还是很重要的畜禽饵料及人类的医药原料。本实验以环毛为代表动物，研究它的外形和内部构造，籍以了解环节动物的有机结构和特化程度。 二、获得与处理 在野外阴暗潮湿而多腐殖质的土壤中挖取成熟的环毛蚓，用5％福尔马林溶液浸泡后备用。部分活的蚯蚓用琼脂培养几天后，通过普通石蜡切片法，制成横切面玻片标本。 三、操作及观察 （一）外形观察 置环毛蚓于蜡盘中，观察其外部形态。 1．外形长筒形，由很多环节组成，环节之间有节间沟，每节中央环上有一圈刚毛，身体可分为背、腹面及前、后端。 2．前端在第ⅩⅣ～ⅩⅪ节有棕红色隆起的环带，可据此判断身体的前端，前端的第一节叫围口节，中间是口，口的背侧有肉质的口前叶。 3．后端相反的一端为后端，末端的开口为肛门。 4．背面颜色深暗的一面。在背中线处每条节间沟内有1个背孔（前端几节缺）。背孔的起始位置则因种类不同而异。 5．腹面颜色浅淡的一面。通常在6/7～8/9节间沟的腹面两侧有受精囊孔3对，孔的数量（1对～4对）因种而异；在第ⅩⅣ节腹中线上有1个雌性生殖孔;在第ⅩⅧ节腹侧有1对雄性生殖孔。在受精囊孔与雄性生殖孔的附近常有生殖乳突分布。 （二）内部解剖 将蚯蚓置于蜡盘上，用解剖剪在其身体背面略偏背中线处, 从肛门剪到口。 1．隔膜隔膜是体腔中位于节间沟处的一层膜。它将体腔分隔成许多小室。 2．消化系统分以下几部分。 (1) 口腔位于第I节～Ⅲ节内； （2）咽位于第Ⅳ节～Ⅴ节内，肌肉发达，隔膜较厚，旁边有咽头腺； （3）食道位于第Ⅵ节～Ⅷ节内，细长形； （4）嗉囊位于第Ⅳ之前，比食道略为膨大； （5）砂囊位于第Ⅳ节～X节，桶状或球状，肌肉质，较发达； （6）胃位于第Ⅵ节～ⅩⅣ节内，呈细长管状； （7）肠自第ⅩⅤ节后均为肠，在第XXⅦ节向前伸出1对盲肠，锥状或掌状（形状因种而异）。 3．循环系统闭管式，有以下几个主要部分：
动物免疫与动物采血实验操作规范
动物免疫与动物采血 一、动物保定 在进行动物免疫和动物采血之前，进行动物保定是非常必要的。正确的抓取固定动物是为了不损害动物健康，不影响观察指标，并防止被动物咬伤，保证试验顺利进行。下面介绍几种常见实验动物的保定方法。 1 小鼠的抓取固定方法 小鼠性情温顺，一般不会主动咬人，但取用时动作也要轻缓。抓取时先用右手抓取鼠尾提起，放在其前，爪能抓牢的物体表面稍后提，或放在实验台上，在其向前爬行时，用左手拇食指迅速提住其后颈部皮肤，把鼠体置于左手心中，将鼠尾用无名指和小指压在手掌上。右手即可进行各种操作，如注射、灌胃及其他实验操作。 如进行解剖、手术、心脏及尾部采血和尾静脉注射时，则需将小鼠做一定形式的固定，解剖手术和心脏采血等均可使动物先取背卧式（必要时先进行麻醉），再用大头针或线绳将鼠前后肢依次固定在支持物上。尾静脉采血或尾静脉注射时，可用小鼠尾静脉注射架固定；或倒放适当大小和重量的容器，把小鼠放在里面只露尾巴，这种容器能够压住尾部不让活动，同时起，到驱赶血液的作用；或把小鼠放在一黑布口袋里小鼠趋黑，向前爬动，在尾部将小口袋缩口，固定小布口袋后，可进行尾静脉采血或尾静脉注射等操作。 如只想移动小鼠，可用两手把它捧起或用右手拇指和食指的指腹抓住尾部中央将小鼠倒提起来。 2 大鼠的抓取固定方法 4-5周龄以内的大鼠和小鼠一样抓住尾部提起来，周龄较大的大鼠尾部皮肤因为容易被剥脱，所以用左手从背部中央到胸部捏起来抓住。 由于大鼠比小鼠牙尖性猛，不易用袭击方式抓取，以防大鼠在惊恐或击怒时咬伤手指，提拿时最好戴上防护手套，轻轻抓住尾巴后提起，置于试验台上，固定方法随操作目的而定。如需尾静脉取血或注射，可将大鼠固定盒内或用小黑布口袋装大鼠，使其只露尾部；如需腹腔注射或肌肉注射或灌胃，可用右手提住鼠尾，将鼠放在鼠爪能抓牢的物体表面，如铁丝笼子，稍向后拉鼠尾、鼠身被拉长，用左手贴在鼠背，捏紧头顶部和背部皮肤，即可将大鼠固定在左手中，右手可进行其他操作；如需长时间固定操作，可将大鼠四肢固定在木板上，用一根棉绳拉住两只门齿固定在头部后木板上。 3 豚鼠的抓取固定方法 豚鼠较为胆小易惊，不宜强烈刺激和受惊，所以在抓取时，必须稳、准和迅速。抓取幼小豚鼠时，用两手捧起来，成熟动物则用右手大把抓起来，用手固定，方法是先用手掌迅速扣住鼠背，抓住其肩胛上方，以拇指和食指环握颈部，另一只手托住臀部。也可用固定器固定豚鼠或将豚鼠四肢固定在木板上。 4 家兔的抓取固定方法。 家兔比较顺服不会咬人，但脚爪较尖，应避免抓伤。进行皮下、腹腔、肌肉注射或测肛温时，只须将家兔抓牢或按住就行即可，抓兔的方法是用右手把两耳轻轻地拿在手心，抓紧颈后部的皮厚处，提取兔，然后用左手托住臀部，使兔的体重大部分落在左手上，不能单提两耳，因为兔耳并不能承担全身重量，易造成疼痛而引起挣扎。单提两耳，捉拿四肢，提抓腰部和背部都是不正确的抓法。 当只对兔的头部进行操作时，如耳静脉注射、采血等，可用兔固定器固定头部，对兔进行测量血压，呼吸及手术时，可将兔固定在实验台上，四肢用棉绳固定在实验台两侧，另用一根棉绳拴住兔的两只门牙，另一端固定在实验台的铁柱上即可。
实验三 实验动物基本操作技术
实验三实验动物基本操作技术 学习目标 ●熟悉大鼠、小鼠及家兔的捉拿与固定；熟悉小鼠腹腔注射、家兔耳 缘静脉注射的方法与技术；熟悉动物的编号方法。 ●了解其他动物实验技术。 大多数药理实验是以动物为实验对象的，常用实验动物有青蛙与蟾蜍，小白鼠，大白鼠，豚鼠，家兔，猫，狗等，实验前了解其特点，掌握常用的动物实验基本操作技术，有利于学生动手能力的培养。本节重点介绍青蛙与蟾蜍，小白鼠，大白鼠，豚鼠，家兔的实验基本操作技术。 一、实验动物的编号 为了分组和辨别的方便，实验时常需对实验动物进行编号。常用的编号方法如下： 1．染料标记法 （1）常用染料：红色染料：5％中性红或品红液；黄色染料：3％～5％苦味酸溶液；咖啡色染料：2％硝酸银溶液；黑色染料：煤焦油的酒精溶液。 （2）标记规则：根据实验动物被毛颜色的不同选择不同化学药品涂染动物。 A.家兔等动物的标记方法：一般用毛笔蘸取不同颜色的染料溶液直接在动物背部涂写号码。若用硝酸银溶液涂写，则需在日光下暴露1min。 B.大鼠、小鼠的标记方法：通常在动物不同部位涂上有色斑点来表示不同的号码。如需要对数只实验动物编号，将小白鼠背部划分为前肢、腰部、后肢的
左、中、右部九个区域，从右到左标记。 2．穿耳打孔法用专门的打孔器在动物耳朵的不同部位打孔表示。 3．挂牌编号法此法常用于狗、猴、猫等大动物的编号。将号码牌固定于动物的颈圈或耳上。 4．人工针刺号码法先将动物被毛去除，用针在动物皮肤上刺出号码，再用酒精墨汁涂染即可。 二、实验动物的捉拿与固定方法 1．蛙和蟾蜍用左手握住动物，以食指按压其头部前端，拇指按压背部。 2．小白鼠捉拿法有二种，一种是用右手提起尾部，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，向后上方轻拉，此时小鼠前肢紧紧抓住粗糙面，迅速用左手拇指和食指捏住小鼠颈背部皮肤并用小指和手掌尺侧夹持其尾根部固定手中；另一种抓法是只用左手，先用拇指和食指抓住小鼠尾部，再用手掌尺侧及小指夹住尾根，然后用拇指及食指捏住其颈部皮肤。 3．大白鼠捉拿时，右手抓住鼠尾基部（因抓尾尖动物会扭动易使其尾部的皮肤脱落，影响实验的进行）将大鼠放在粗糙面上，左手戴上防护手套或用厚布盖住大鼠，抓住其整个身体并固定其头部以防咬伤。捉拿时勿用力过猛，勿捏其颈部，以免引起窒息。 4．豚鼠捉拿时以拇指和中指从豚鼠背部绕到腋下抓住豚鼠，另一只手托住其臀部。体重小者可用一只手捉拿，体重大者捉拿时宜用双手。