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肿瘤基因治疗的基本策略和常用方法课件
• 1、基因干预技术
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⑵、RNA干扰技术
RNA干扰( RNA interference,RNAi ) 是指在进化过程中高度 保守的,由双链RNA ( dsRNA) 诱发、同源mRNA高效特异性 降解的现象。RNAi使特定基因沉默,是真核细胞中的一种转录 调节机制,这种由21 ~ 23 个核苷酸长度介导的小RNA常被称 为小干扰RNA( siRNA) ,其序列在真核生物进化中高度保守。 将长dsRNA或短siRNA递送进入生物体细胞内均可引发RNA i， 进而使特定基因表达沉默
• 1、基因干预技术
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?如何高效地向肿瘤细胞或组织递送干扰RNA
RNAi理想递送系统
① 适配体——RNAi的嵌合体。适配体能与多种目标物质 高特异性、高选择性结合
② 稳定核酸脂质复合物（SNALPs），对脂类复合物进行 聚乙二醇（PEG）修饰使得复合物获得亲水性外层，从而 增强其在血浆中的稳定性
02 肿瘤基因治疗的 基本策略
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01 基因矫正
01
03
采用基因打靶技术矫正突变的抑癌基因中的突变序列
02 基因置换 将外源性的正常抑癌基因直接导入肿瘤细胞，取代突变 的抑癌基因而发挥作用，以改变肿瘤细胞的恶性表型 YEAH! 03 基因失活
03 常用方法
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01
04
02
03
1、基因干预技术
肿瘤的基因治疗ppt课件
自杀基因治疗法
自杀基因治疗，就是将某些细菌、病毒和真菌中特有的药 物敏感基因导入肿瘤细胞，通过此基因编码的特异性酶类 将原先对细胞无毒或毒性极低的药物前体在肿瘤细胞内代 谢成有毒性的产物，以达到杀死肿瘤细胞的目的。
ＨＳＫ－ ｔｋ基因是常用的自杀基因。
之一。
ＮＴＫ基因是非常具有应有前景的自杀基因
自杀基因疗法克服了病毒介导的基因疗法不能使其转导的 基因进去所有肿瘤细胞的最大缺陷。通过自杀基因的旁观 者效应，自杀基因转导细胞还可对临近非转导细胞产生细 胞毒作用。
优点：高效低毒，不易产生抗药性，不受肿瘤细胞周 期的影响等。
基因治疗发展历程
世界首例腺苷脱氨酶缺乏性重 症联合免疫缺陷病的基因治疗 于90年代初获得成功。随 后 Ronsenberg和Hwu将TNF基因导 入TIL细胞，使转染细胞TNF产 量大增，从而达到治疗肿瘤的 目的。1999年Lattime等将携 带GM-CSF基因的病毒直接注射 到肿瘤部位治疗了3例晚期黑 色素瘤患者，肿瘤缩小并达到 部分缓解。其他细胞因子，如 TNF、IL-4、IL-12等也被用于 修饰癌细胞或抗原递呈细胞（ antigen presenting cell， APC）。
生科二班31唐美方，8陈玉婷
肿瘤是细胞无限制增生的结果，而 细胞的生长是由基因决定的。人体 内存在癌基因和抑癌基因两大功能 相异的基因群。
基因治疗（gene therapy）是指通过一定的 方式，将正常功能基因或有治疗作用的DNA 序列导入人体靶细胞去纠正基因突变或表达 失误产生的基因功能缺陷，从而达到治疗或 缓和人类遗传性疾病的目的
临床实验证明，基因治疗的疗效高于单纯放、化疗疗 效约 3 倍；治疗非小细胞癌，60% 的患者肿瘤完全 消退或部分消退；对乳腺癌的疗效达到 90%
医学ppt-肿瘤生物学及基因治疗
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各类生物治疗的概况
一、细胞因子
1.干扰素 多个研究表明，IFN一旦与细胞膜结合，就会在细胞间产 生一系列复杂的变化，包括对某些酶的诱导作用可增强巨噬 细胞的吞噬活性，同时增强淋巴细胞对靶细胞的毒性，所有 这些活性均可导致IFN发挥其临床功效。 在临床上可治疗慢性粒细胞白血病、淋巴瘤、多发性骨 髓瘤、恶性黑色素瘤、肾癌、类癌等
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TRUST为既往至少一次标准方案放化
疗后疾病进展和不适进行放化疗的晚期 NSCLC患者提供厄洛替尼（特罗凯）治疗， 研究证实特罗凯对全球晚期 NSCLC二线治疗 的OR为13% ；非鳞癌、不吸烟患者达到更 高DCR（女性为80 %，男性为75%），不论 何种临床特征的患者临床获益率为>50%， 吸烟、鳞癌患者用特罗凯治疗同样可获益。
2006年ASCO会议报道的ECOG 4599研 究为紫杉醇+卡铂方案联合贝伐单抗，可较单 纯化疗延长生存期2个月（12.3个月 vs 10.3 月) 。
NCCN指南推荐符合贝伐单抗治疗者可 联合化疗用于晚期NSCLC一线治疗， 其符合 标准包括无脑转移、非鳞癌、既往无咯血史 及目前并未合并抗凝治疗。
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► 四、分子靶向性药物
甲磺酸伊马替尼（STI571、glivec、格列卫）是 靶向治疗最成功的范例，是Bcr-Abl酪氨酸激酶的选 择性抑制剂，能够与Abl激酶上的ATP结合位点相互 作用，从而阻止下游蛋白的磷酸化。
Bcr-Abl已被证明是造成白血病的癌基因，可以引 发CML，使用格列卫所获近期缓解率60%，其中 CR40%，预计18个月的无进展生存率（PFS）和生 存率分别89%和95%。
不能增强化疗疗效。
效率和患者的生存期。近 单克隆抗体：贝伐单
肿瘤基因治疗与靶向治疗护理课件
的安全风险。
非病毒载体包括纳米颗粒、脂质体和阳 离子聚合物等，它们具有低毒性和低免 疫原性等优点，但导入效率相对较低。
基因编辑技术
基因编辑技术是指通过修改人体细胞的基因组，以达到治疗肿瘤的目的。目前常用的基因编 辑技术包括CRISPR-Cas9和ZFNs等。
CRISPR-Cas9技术能够高效地编辑人体细胞的基因组，但同时也存在一定的安全风险和伦理 问题。
目前，肿瘤基因治疗已经成为肿瘤治疗领域的一个重要分支，为许多难治性肿瘤提 供了新的治疗手段。
肿瘤基因治疗分类
根据作用机制的不同，肿瘤基因治疗 可以分为两大类：体细胞基因治疗和 生殖细胞基因治疗。
生殖细胞基因治疗是指将健康的基因 导入到患者的生殖细胞中，以改变患 者的遗传信息，从而达到预防和治疗 肿瘤的目的。
反义RNA技术能够通过抑制特定基因的表达来治疗 肿瘤，但同时也存在一定的安全风险和伦理问题。
CHAPTER
03
肿瘤靶向治疗护理
靶向药物分类与特点
小分子靶向药物
单克隆抗体
针对肿瘤细胞内部的信号转导、细胞周期 等关键环节，抑制肿瘤生长和扩散。
通过与肿瘤细胞表面的特定抗原结合，触 发免疫系统的抗肿瘤反应。
ZFNs技术能够精确地编辑人体细胞的基因组，但同时也存在一定的免疫原性和成本问题。
基因表达调控技术
基因表达调控技术是指通过调节人体细胞的基因表达，以达到治疗肿瘤 的目的。目前常用的基因表达调控技术包括RNA干扰和反义寡核苷酸等 。
RNA干扰技术能够通过抑制特定基因的表达来治疗肿瘤，但同时也存在 一定的安全风险和免疫原性问题。
针对特定基因突变的靶向药物
细胞免疫疗法
针对特定基因突变引发的肿瘤，如EGFR、 ALK等。
非病毒载体包括纳米颗粒、脂质体和阳 离子聚合物等，它们具有低毒性和低免 疫原性等优点，但导入效率相对较低。
基因编辑技术
基因编辑技术是指通过修改人体细胞的基因组，以达到治疗肿瘤的目的。目前常用的基因编 辑技术包括CRISPR-Cas9和ZFNs等。
CRISPR-Cas9技术能够高效地编辑人体细胞的基因组，但同时也存在一定的安全风险和伦理 问题。
目前，肿瘤基因治疗已经成为肿瘤治疗领域的一个重要分支，为许多难治性肿瘤提 供了新的治疗手段。
肿瘤基因治疗分类
根据作用机制的不同，肿瘤基因治疗 可以分为两大类：体细胞基因治疗和 生殖细胞基因治疗。
生殖细胞基因治疗是指将健康的基因 导入到患者的生殖细胞中，以改变患 者的遗传信息，从而达到预防和治疗 肿瘤的目的。
反义RNA技术能够通过抑制特定基因的表达来治疗 肿瘤，但同时也存在一定的安全风险和伦理问题。
CHAPTER
03
肿瘤靶向治疗护理
靶向药物分类与特点
小分子靶向药物
单克隆抗体
针对肿瘤细胞内部的信号转导、细胞周期 等关键环节，抑制肿瘤生长和扩散。
通过与肿瘤细胞表面的特定抗原结合，触 发免疫系统的抗肿瘤反应。
ZFNs技术能够精确地编辑人体细胞的基因组，但同时也存在一定的免疫原性和成本问题。
基因表达调控技术
基因表达调控技术是指通过调节人体细胞的基因表达，以达到治疗肿瘤 的目的。目前常用的基因表达调控技术包括RNA干扰和反义寡核苷酸等 。
RNA干扰技术能够通过抑制特定基因的表达来治疗肿瘤，但同时也存在 一定的安全风险和免疫原性问题。
针对特定基因突变的靶向药物
细胞免疫疗法
针对特定基因突变引发的肿瘤，如EGFR、 ALK等。
基因治疗张幻灯片优秀课件
分子诊断
遗传性疾病的诊断
羊水和胎盘绒毛膜检测
探针杂交分析法
• 用途：用于诊断已知基因突变的疾病。 • 探针：人工合成两种寡核苷酸片段，长约
16－19个单核苷酸；其中一种是正常 的，另一种含有一个突变的单核苷酸。 探针可用同位素、生物素、地高辛等标 记。 • 样本：血液或羊水细胞。
待测样品（血细胞或羊水细胞） 提取分离DNA
恢复至正常水平的 5%-10%
维持免疫系统功能
改善病人症状
•重症联合免疫缺陷的基因治疗 腺苷脱氨酶基因治疗(1990)
Ashanti de Silva, Now 13, was the first patient to be treated with gene therapy.
1991年美国科学家对50位黑色素 瘤患者进行了基因治疗，把外源的肿 瘤坏死因子（TNF）基因导入患者体 内，从而达到杀死肿瘤细胞的功能， 研究也取得了成功。
如：哮喘病遗传度为80％、精神分裂症为80 ％、高血压遗传度为62％ 、冠心病遗传度为 65％ 、糖尿病遗传度（幼年型）为75％、 （老年型）为35％、唇裂＋腭裂遗传度为76 ％
第一节
基因诊断
基因诊断
一、概念和特点 概念：利用现代分子生物学和分子遗传
学的技术方法，直接探测基因结构及其表达 水平，从而对疾病作出诊断的方法。 分为 DNA诊断和RNA诊断两类。
们自然就想到如果能够使变异基因和异常表达 的基因变成正常基因和正常表达基因，那么就 可从根本上治愈遗传疾病，这就是基因治疗的 基本思路。
基因治疗的概念：向靶细胞或组织中引入 外源DNA片段，以纠正或补偿基因的缺 陷，关闭或抑制异常表达的基因，从而达 到治疗的目的。
2．基因治疗的历史
肿瘤基因治疗与靶向治疗PPT共67页
END
肿瘤基因治疗与靶向治疗
41、实际上，我们想要的不是针对犯 罪的法 律，而 是针对 疯狂的 法律。 ——马 克·吐温 42、法律的力量应当跟随着公民，就 像影子 跟随着 身体一 样。— —贝卡 利亚 43、法律和制度必须跟上人类思想进 步。— —杰弗 逊 44、人类受制于法律，法律受制于情 理。— —托·富 勒
45、法律的制定是为了保证每一个人 自由发 挥自己 的才能 ，而不 是为了 束缚他 的才能 。—— 罗。——华盛顿 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。——罗素·贝克 18、最大的挑战和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人。——马云 19、自己活着，就是为了使别人过得更美好。——雷锋 20、要掌握书，莫被书掌握；要为生而读，莫为读而生。——布尔沃
肿瘤基因及其调控机制.ppt
39kD的蛋白。蛋白定位于核内。Jun与随后发 现的junB，junD都是核转录因子，与c-fos形成 转录调节复合物，其蛋白产物FOS／Jun能与其 他反式因子如视甲醛受体（RAR）、糖皮质激 素等相互竞争，对转录起调节作用。
③ met 定位于7p31，其转录产物有多
种，分别为9.0,7.0,6.0,5.0和3.2kb mRNA。蛋白 产物主要有两种，分别为 ppl40-145met肝细胞 生长因子受体和 pp65tpr-met活化融合蛋白。最 初确定其为转化基因是在以MNNG处理的人骨 肉瘤细胞系中，由于l号染色体的tpr序列插入 到7号染色体的 met基因形成tpr-met重排而使其 活化。
物进化过程中，现在的逆转录病毒的祖先在感 染正常细胞的同时，通过复杂的遗传学重组和 突变，将正常细胞的细胞癌基因整合到其基因 组中，并使之改变成活化的病毒癌基因。带有 病毒癌基因的逆转录病毒在感染适当的动物时， 可使之发生肿瘤。
2. 点突变（point mutation） 美国的
Weinberg，Wigler和 Cooper等实验室于 1983 年分别从不同的膀胱癌细胞系中分离DNA，用 以转染NIH／3T3细胞系，可使之发生恶性转 化。从转化细胞中已分离到活化癌基因的分子 克隆，并证明其与Harvey鼠肉瘤病毒的癌基因 （v-Ha-ras）非常相似。
Demezuk （1991）对癌基因作了全面的综 述，列出了87种癌基因，并进行了分类。鉴于 近年来又有一些新的癌基因和抑癌基因出现， 对此作了一些增补。现以其资料为基础，对五 举癌基因分别介绍如下：
1. 生长因子类：
属于这异类的有sis,int-2等五个癌基因。 特点是其产物与某些生长因子极为相似： 例如，猴肉瘤病毒v-ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱis癌基因的蛋白产物p28 与血小板生长因子（PDGF）β链几乎完全相同。 因此sis蛋白可模拟PDGF同其受体结合，刺激 细胞过度增殖。
③ met 定位于7p31，其转录产物有多
种，分别为9.0,7.0,6.0,5.0和3.2kb mRNA。蛋白 产物主要有两种，分别为 ppl40-145met肝细胞 生长因子受体和 pp65tpr-met活化融合蛋白。最 初确定其为转化基因是在以MNNG处理的人骨 肉瘤细胞系中，由于l号染色体的tpr序列插入 到7号染色体的 met基因形成tpr-met重排而使其 活化。
物进化过程中，现在的逆转录病毒的祖先在感 染正常细胞的同时，通过复杂的遗传学重组和 突变，将正常细胞的细胞癌基因整合到其基因 组中，并使之改变成活化的病毒癌基因。带有 病毒癌基因的逆转录病毒在感染适当的动物时， 可使之发生肿瘤。
2. 点突变（point mutation） 美国的
Weinberg，Wigler和 Cooper等实验室于 1983 年分别从不同的膀胱癌细胞系中分离DNA，用 以转染NIH／3T3细胞系，可使之发生恶性转 化。从转化细胞中已分离到活化癌基因的分子 克隆，并证明其与Harvey鼠肉瘤病毒的癌基因 （v-Ha-ras）非常相似。
Demezuk （1991）对癌基因作了全面的综 述，列出了87种癌基因，并进行了分类。鉴于 近年来又有一些新的癌基因和抑癌基因出现， 对此作了一些增补。现以其资料为基础，对五 举癌基因分别介绍如下：
1. 生长因子类：
属于这异类的有sis,int-2等五个癌基因。 特点是其产物与某些生长因子极为相似： 例如，猴肉瘤病毒v-ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱis癌基因的蛋白产物p28 与血小板生长因子（PDGF）β链几乎完全相同。 因此sis蛋白可模拟PDGF同其受体结合，刺激 细胞过度增殖。
神经胶质瘤的基因治疗演示精品PPT课件
结束语
当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的， 所以不要放弃，坚持就是正确的。
When You Do Your Best, Failure Is Great, So Don'T Give Up, Stick To The End
感谢聆听
不足之处请大家批评指导
Please Criticize And Guide The Shortcomings
三大问题
自杀基因是如何作用 影响其作用效应的因子 旁观者效应的机制
自杀基因作用机制
GCV磷酸化为GCV—TP GCV—TP在DNA复制时与dGTP竞争性 胸苷激酶TK提高磷酸化
影响作用因子
IL—2的免疫治疗与HSV—TK 肿瘤坏死因子A 单核细胞趋化蛋白 - 1 (MCP- 1) 这些作用因子均可增加H SV- tk /GCV 系统的
HSV1—TK/GCV
自杀基因HSV1—TK
筛选稳定表达 TK的细胞
PCR技术扩增
利用基 因技术
神经胶质瘤细胞C6
磷酸化GCV
杀肿瘤细胞GCV—TP
SUCCESS
THANK YOU
2020/12/21
验证转基因细胞的杀肿瘤效应——阳性对照 比较其他两种原药BVdU和无氧鸟甘（ACV）
结论：稳定表达tk的神 经胶质瘤细胞C6对Ｇ ＣＶ高度敏感并被特 异杀死，且其有效性 和特异性高于BVdU和 ACV
肿瘤细胞混合，用GCV治疗 在Cx43—13且TK+组，只要有5%的TK，肿瘤
就会很快缩小
基因治疗存在的问题
目前基因治疗神经胶质细胞瘤大多停留在动物实 验上，未能广泛应用于临床。
主要问题：1.正确找到基因靶点
2.基因转移和表达的问题