新型精子功能分析系统的临床应用评价
不育男性精子自发顶体反应率、顶体酶活性与精液常规参数及精子功能指标的相关性分析
·１０ ·中国性科学 ２０２１年４月 第３０卷 第４期 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｕｍａｎＳｅｘｕａｌｉｔｙ， Ａｐｒｉｌ２０２１， Ｖｏｌ．３０，Ｎｏ．４【基金项目】广东省卫生和计划生育委员会基金（Ａ２０１７１５２）△【通讯作者】陆杉，Ｅ ｍａｉｌ：ｇｚｌｕｓｈａｎ＠１２６ ｃｏｍＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２ １９９３．２０２１．０４．００４·男科与性医学·不育男性精子自发顶体反应率、顶体酶活性与精液常规参数及精子功能指标的相关性分析周欢群 蒋满波 周文 谢妍 吴爱华 王爱爱 倪运萍 陆杉△广东省中医院生殖医学科，广州５１０００６【摘要】 目的 探讨不育男性精子自发顶体反应率、顶体酶活性与精液常规参数及精子功能指标的相关性。
方法 选取２０１９年４月至２０２０年２月广东省中医院生殖医学科诊治的７７例不育男性作为研究对象。
收集其实验室检测的精液分析数据进行回顾性分析。
收集患者精子自发顶体反应、顶体酶活性、精子 透明质酸结合试验、精子ＤＮＡ碎片、精子核蛋白、混合抗球蛋白反应试验（ＭＡＲ）、精液常规分析的数据资料。
采用Ｓｐｅａｒｍａｎ相关性分析精子自发顶体反应率、顶体酶活性与精液常规参数及精子功能指标的相关性。
结果 精子自发顶体反应率与精子总数、尾部畸形率呈正相关（ｒ＝０ ２２１、０ ２７８，Ｐ＝０ ０４５、０ ０１５），与平均路径速度（ＶＡＰ）、顶体酶活性呈负相关（ｒ＝－０ ２２３、－０ ２５３，Ｐ＝０ ０４３、０ ０３７）；精子顶体酶活性与精子存活率呈正相关（ｒ＝２ ８４，Ｐ＝０ ０１８），与尾部畸形率呈显著负相关（ｒ＝－０ ３０４，Ｐ＝０ ００１）。
精子自发顶体反应率、顶体酶活性与精子ＤＮＡ碎片率、精子核蛋白不成熟度、精子 透明质酸结合率及ＭＡＲ均无明显相关性（Ｐ＞０ ０５）。
结论 精子自发顶体反应率、顶体酶活性与部分精液参数有相关性，但与多项精子功能指标无明显相关性。
精子DNA碎片率及顶体酶活性对男性不育的诊断价值
健康域公卫引言男性不育是高发于男性群体的生殖系统疾病，是指夫妻生活正常，且无避孕措施，因男性因素造成不育症状。
其致病因素与性病史、吸烟饮酒和环境污染有关,多需要通过精液质量检测诊断该病，而后开展针对性治疗[1]。
DFI （DNA 碎片指数）是精液质量的常用诊断指标，可以评估疾病程度。
顶体酶活性可以判断精子活性，其指数降低则精子具有较差的穿越力，进而降低精子质量。
现阶段，以上两项指标是男性不育的常规诊断指标，便于疾病的早期治疗。
为此，本研究选取1727例男性筛查者，分析以上两项指标的诊断效果。
1资料与方法1.1一般资料选择2016年6月~2021年12月入院诊断的1727例男性筛查者，其中男性不育患者481例。
根据DFI 分组，一组306例，不育时长为9个月~3年，平均（1.24±0.48）年。
二组113例，不育时长为10个月~3年，平均（1.30±0.44）年。
三组35例，不育时长为11个月~4年，平均（1.30±0.34）年。
四组27例，不育时长为8个月~4年，平均（1.51±0.33）年。
根据顶体酶活性分组，≤48.2U/106为27例，不育时长为8个月~3年，平均（1.17±0.66）年；＞48.2U/106为416例，不育时长为10个月~4年，平均（1.21±0.69）年。
经假设检验并无差异，＞0.05。
1.2方法根据精液检查与处理实验室手册对精液进行常规检测，用改良的牛鲍氏计数板测量精液密度，采取手工法计数。
用快速染色法（Diff-Quik ）测定精子形态学特点，正常形态4%为参考值的具体下限。
所有操作人员经过系统化培训以后上岗，具备熟练的操作能力。
顶体酶活性检测采取顶体酶试剂盒，根据改良后的Kennedy 法实施检测，将精液标本混匀以后进行计数操作，使每个反应管内部的精子个数大概是7.5×106个，对各个标本设置对照以及反应管，然后添加反应液以及抑制剂。
精液的常规检测ppt课件
与凝固酶相关
增加：影响精子液化、活力、穿透力。 下降：先天性无精囊腺、精子浓度低或无精子
方法：PH试带或酸度计，1小时内完成
PH 7.2—7.8
<7.0伴少精症:输精管阻塞、先天性精囊缺如等 >7.8 ：急性前列腺炎、精囊炎、附睾炎
• 化学检查
精浆的果糖
方法：间苯二酚比色法、吲哚显色法 意义：先天性精囊腺缺如、精囊炎、精囊阻塞、射精阻塞时果糖减少。
精子存活率：取1滴液化后的精液于载玻片上，加染色液混匀，放置片刻，计算高 倍镜下100个精子中不着色精子的百分率。≥75%
精子活动率：取1滴液化后的精液于载玻片上，加盖片放置片刻后，高倍镜下至少
观察100个精子，计算有活动能力的精子占全部精子的百分率。
≥70% 精子活动力：取1滴液化后的精液于载玻片上，加盖片放置片刻后，高倍镜下至少
精液的常规检测
精液检查的意义 精液的组成 精液的检查方法 精液告单的解读
精液检查的意义
• 评估男性生育功能,提供不育症诊断和观察疗效的依据 • 辅助诊断男性生殖系统疾病 • 输精管结扎技术 • 计划生育科研 • 法医学鉴定 • 体外受精 • 婚前检查
精液的组成
精液
精子 ( 5% ) : 产于睾丸，熟于附睾
VAP平均路径速度 : 精子头沿其空间平均轨迹移动的时间平均速度。 ALH精子头侧摆幅度 : 精子头沿其空间平均轨迹侧摆的幅度。最大值or平均值表示 MAD平均移动角度 : 精子头沿其曲线轨迹瞬间转折角度的时间平均绝对值。 BCF鞭打频率(Hz) : 精子曲线轨迹越过其平均路径轨迹的时间平均速率。 WOB摆动性 : 精子头沿其实际轨迹的空间平均路径摆动的尺度。VAP/VCL。 LIN直线性 : 曲线轨迹的直线性。VSL/VCL。 STR前向性 : 空间平均路径的直线性。VSL/VAP。
精子分析系统SCA参数1
进口计算机辅助精子分析系统参数
1、进口精子计算机辅助分析软件，获得中国药监局注册（SFDA认证）
2、显微镜：进口正立相差显微镜，x10 ,x20倍正相差物镜和x40, x100倍平场消色差物镜
3、样本放置：可放置多种不同的计数池如马克板、迈克肖玻片、普通玻片等。
检测样本量：1ul-10ul1。
分析速度：< 2秒（按单视野分析500条精子计算）
4、版本：最新4.2版本或以上
5、完全中文操作界面，已包括自动扫描载物台驱动程序
6、精子活动力动态分析功能：正相差光学图像分析，精确区分精子和杂质，对分析视野内的精子标记编号，点击或输入精子编号可实时显示每条精子的运动轨迹，提供手工修正功能
7、人工纠错功能：可对每条精子分析状况进行人工修正补偿
8、质量控制功能：有提供精子活动相差视频质控图像，实现精子活动力分析质量控制
9、精子密度检测质量控制：可检测精子密度质控珠，生产精子密度质控表
10、精子活动力检测质量控制：提供精子活动相差视频质控图像，实现精子活动力分析质量控制
11、网络数据库和网络链接功能：病历数据库使用SQL Server 2008 express网络数据库，提供数据库链接表和提供XML 文件
12、软件向上升级兼容功能：支持显微镜载物台自动扫描
13、精子密度，活动力检测成本：不需使用任何消耗品：“零成本”。
WHO人类精液检查与处理实验手册
正 主段应是直的，均一的，比中段细，其 主段应是直的，均一的，比中段细，非
常 长约45um。
卷曲的，其长约为45um。
标 准
异 主段缺陷包括：短、多尾、发卡形、断 主段缺陷包括：短、多尾、发卡形、断
常裂
裂
标 主段急剧弯曲、主段宽度不规则、主段 主段弯曲（>90度）、主段宽度不规则、
准 卷曲以及上述缺陷的任何组合
生育力评估
评估男性生育三大要点：
女方妊娠 妊娠时相 精液参数
其他男性病诊断
精子的总数：睾丸生殖功能 输精管道的通畅程度
血精、脓精：附性腺疾病 精浆生化： 附性腺功能
治疗策略制定（常规治疗及辅助生殖）
少精子症的分类和ART治疗方案
精子浓度
治疗
轻度少精子症 ≧10，<20(15) ×106/ml
主段卷曲以及上述缺陷的任何组合
精子胞浆小滴判断标准
胞浆小滴体积大于精子头部的1/3
胞浆小滴体积大于精子头部的1/3
WHO第四版与第五版精子形态学评估标准比较研究
研究目的：比较WHO第四版与第五版精子形态学评估标准的变化。 研究对象： 1000个精子图片，一张精子形态质控版 研究方法： 1.用WHO第四版的评估标准，对上述精子进行评估 2.精子库9名工作人员学习第五版精子形态学评估标准及精子图谱，并进行室内质量控
因此，有必要建立或选用特殊实验对精子功 能进行测定。
精子存活率 精子形态分析 精子顶体完整性 精子与透明带结合试验 精子细胞核成熟度与DHA损伤检测 精子表面结合抗体检测 附睾功能检测
精子形态学评估标准
在评估精子正常形态时应采用严格标准 （Krugeret al.,1986;Menkveld et al.,1990;Coetzee al.,1998)
精液检查质量标准及实验分析
精液检查质量标准及实验分析目的：男性不育症病因复杂，常见的有生殖器发育异常、性功能障碍及精液异常三大类。
男性不育症的检查主要通过检查精液的质量及精子数量及功能，了解男性的生育能力。
方法：运用显微镜计数法对本院2007年1月～2010年6月男性不育患者的精液进行常规检查并作统计分析。
结果：2007年1月～2010年6月期间37例不育男性精液的常规检查，其中精子密度高于6×109/L 20例，占54.05％，低于2×109/L 9例，占24.32％，低于1×109/L 3例，占8.11％，无精子5例，占13.51％。
结论：精子密度对生育力有影响，但用它来判断男性生育力是不全面的。
如何扩大精液的常规检验，待于进一步的探讨和完善，从而对男性不育症的诊断和治疗提供参考依据。
标签：男性不育症；精子检查；显微镜计数法精子形态和精子密度、活力都是评价男性生育力的重要参数，有研究资料表明，正常精子形态是体外受精主要预测参数，形态正常精子比例与受孕有直接关系，比精子密度、精液量和精子运动性更能在受孕中起预测作用[1]。
精液检查的目的为评估男性生育功能，提高不育症诊断和疗效观察的依据；辅助诊断男性生殖系统疾病[2]，现就本院检验科对37例男性患者的精液常规检查进行探讨分析：1 资料与方法1.1 一般资料37例男性患者年龄28～35岁，平均31.5岁，婚龄为3年以上，性生活正常，亦未避孕但妻子未怀孕者36例，占97.3%，婚前体检中因生殖器疾病进行精液检查者1例，占2.7%。
1.2 标本采集患者禁性生活3～7 d，不少于48 h，不超过7 d，将一次射出量装入洁净、干燥容器内，不能用胶乳避孕套，因其干扰精子的存活，标本在1 h内送到检验室，冬季应注意保温，最好在20～40℃，结果出现异常应在1周后复查，2次采集间隔应大于7 d，不能超过3周，反复查2～3次才能得到较正确的结果。
标明受检查者姓名，记录采集时间。
WHO精液检查第五版
2
HCV hepatitis C virus 丙肝病毒 HIV human immunodefciency virus 人免疫缺陷病毒 HOP hamster oocyte penetration 仓鼠卵穿透 HOS hypo-osmotic swelling 低渗肿胀试验 HPF high power field 高倍视野 HRP horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 HSA human serum albuminxiv 人血清白蛋白 IV HTF human tubal fuid 人输卵管液 IB immunobead 免疫珠 IBT immunobead test 免疫珠试验 ICSI intracytoplasmic sperm injection 胞浆内精子注射 Ig immunoglobulin 免疫球蛋白 IM immotility 不动 IQC internal quality control 内质量控制 IU international unit 国际单位 IUI intrauterine insemination 宫腔内人工授精 IVF in vitro fertilization 体外受精 KRM Krebs-Ringer Medium Krebs-Ringer 培养液 LIN linearity 线性 LLQ lower limit of quantifcation 定量下限 LPF low power field 低倍视野 MAD mean angular displacement 平均角位移 MAI multiple anomalies index 复合异常指数 MAR mixed antiglobulin reaction 混合抗球蛋白反应 NA numerical aperture 数值孔径 NP non-progressive (motility) 非前向的（活力） PBS phosphate-buffered saline 磷酸缓冲盐溶液 PDCA plan, do, check, act PMA phorbol 12-myristate 13-acetate (12-)十四酸佛波酯(-13-)乙酸盐 PMSG pregnant mare serum gonadotrophin 孕马血清 PNPG p-nitrophenol glucopyranoside 对硝基苯酚吡喃葡萄糖苷 PR progressive (motility) 前向的（活力） PSA Pisum sativum agglutinin 碗豆凝集素 QA quality assurance 质量保险 QC quality control 质量控制 RCF relative centrifugal force 相对离心力 RI refractive index 屈光指数 RNA ribonucleic acid 核糖核酸 ROS reactive oxygen species 活性氧类物质 rpm revolutions per minute 每分钟转速 SD standard deviation 标准差 SDI sperm deformity index 精子畸形指数 SDS sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 SE standard error 标准误
精液常规检查
稠性很高，4.黏稠度 【检测原理】 （1）直接玻棒法：将玻璃棒插入精液标本，提棒 时可拉起黏液丝。精液黏稠度分为3级：①Ⅰ级： 30 min精液基本液化，玻璃棒提拉精液呈丝状黏 稠度。②Ⅱ级：60 min精液不液化，玻璃棒提拉 可见粗大黏稠丝，涂片有较明显黏稠感。③Ⅲ级： 24h精液不液化，难以用玻璃棒提拉起精液，黏涂 片困难。
3.精子形态 （1）湿片法：精子计数后，用高倍镜或相差显微镜 （600×）直接检查精子形态。 （2）染色法：将液化精液涂成薄片，经干燥、固定后作 H-E、吉姆萨、改良巴氏、勃力-利染色(Bryan-Leishman staining)和肖尔染色（Shorr staining）等。油镜下观察计数 200个精子，报告形态正常和异常的精子百分率。 现已有预先固定染料的商品化载玻片，在载玻片上直接滴 加5～10ul液化精液，加盖玻片，数分钟后精子着色，可以 清楚地显示精子形态结构。 正常精子形态（图7-9、图7-10）：①头部呈椭圆形，长约 4.0～5.0μm，宽约2.5～3.5 μm/顶体的界限清
（3）精子存活率（sperm motility rate）：用活精 子所占比例表示。常用染色法：用伊红Y或台盼蓝 等染料对液化精液染色，在高倍镜下观察200个精 子，以不着色精子的百分率报告。通常，精子死 亡后，细胞膜完整性受损，失去屏障功能，很容 易着色。当精子活动率低于50%时，应检查精子 存活率。 【方法学评价】 湿片法和干片法均简单，适合临 床应用。
5.酸碱度 【检测原理】 用精密pH计测定液化精液。 【方法学评价】 pH试纸法简便，pH计法准确。 【质量保证】 测定精液pH值应在射精1h内完成，精液放 置时间过长会影响测定结果。细菌污染可以使精液pH呈碱 性。 【参考值】 7.2～8.0（平均7.8） 【临床意义】 ①pH<7.0并有精液减少，可能是输精管道 阻塞、射精管和精囊腺缺如或发育不良所致。②pH>8.0， 常见于急性前列腺炎、精囊炎或附睾炎，可能是精囊腺分 泌过多或前列腺分泌过少所致。
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检 验 医 学 与临 床 ２ １ ０ ０年 １ ０月 第 ７卷 第 １ ９期
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新 型 精 子 功 能 分 析 系 统 的 临 床 应 用 评 价
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医 院 生 殖 中 心 ５ ０ ３ ） ３ ０ １
【 要】 目的 评 估 新 型 精 子 功 能 分 析 系统 的 临 床 应 用 价 值 。方 法 采 用 新 型 精 子 功 能 分 析 系统 与 西 班 牙 摘
Ｓ Ａ 系统 对 １ ２ 生 育 和 不 育 男 性 精 液 标 本 进 行 分 析 和 比较 ， Ｃ １例 并检 测 两 系统 主 要 参 数 的 精 密度 。结 果 两 种 系统 在反 映 生 育组 和 不 育组 男性 精 液 主要 参 数 ， 如 精 子 密度 、 动 率 、 向运 动 率 、 均 运 动 速 度 （ Ｐ 的 指 标 上 是 诸 活 前 平 ＶＡ ）
Ｙ ｎ， ａ ＳＨ Ｉ ｕ Ｗｅｌ ＬＩ Ｗ ｅ ， Ｕ Ｙｉ ｇ． ｐｒ ｄｕ ｔｏ Ｑｉ — ｌ， Ｕ ｉ ＱＩ ｎ Ｒｅ ｏ ｃ ｉ ｎＣｅ ｔ ｒ， ｎ ｉ ｇ Ｓ ｃ ｎ ｏ ｅ Ｈｏ ｐ ｔ ｌ Ｎａ ｎ ｎ Ｇｕ ｎ ｎ ｅ Ｎａ ｎ ｎ ｅ ｏ ｄ Ｐｅ ｐｌ ’ ｓ ｉ ， ｎ ｉ ｇ， ａ — ａ
Ｃｌ ｉａ ｐ ｌ ａ ｉ ｎ ｅ ａ ｕ ｔ ｎ ｆ ｒ ｎ ｗ ｃ ｍｐ ｔ ｒａ ｓ ｔｄ ｓ ｅ ｍ ｎ ｌ ｔ ａ ｙ ｔｍ Ｈ Ｕ ＮＧ Ｑｉ ｎ， Ｕ ｎ Ｚ ｉ ｃ ｌ ｐ ｉ ｔｏ ｖ ｌ ａ ｉ ｏ ｅ ｏ ｕ ｅ － ｓｉ ｅ ｐ ｒ ａ ａ ｙ ｉ ｌｓ ｓ ｅ ｎ ａ ｃ ｏ ｓ ｃ Ａ ａ ＬＩ Ｆｅ ｇ ＯＵ
一
致 的 （ 关 系数 均 大 于 ０ ８ ） 并 且在 生 育 组 和 不 育 组 间各 主 要 参 数 差 异 有 统 计 学 意 义 （ ０ ０ ） 两 系 统 检 测 相 ．５ ， Ｐ＜ ． １ 。
得 到 的主 要 参 数 ， 包括 密 度 、 动 率 、 向 运 动 率 、 均 运 动 速 度 的 Ｃ 活 前 平 Ｖ值 ， 论 在 批 间还 是 批 内都 较 低 （ １ ） 无 ＜ ５ 。
Ｄ０Ｉ １ ． ９ ９ ｊ ｉｓ ． ６ ２ ９ ５ ． ０ ０ １ ． ０ ： ０ ３ ６ ／．ｓ ｎ １ ７ — ４ ５ ２ １ ． ９ ０ １
中 图分 类 号 ： ４ ６ １ ４ Ｒ ４ ． ４
文 献标 志 码 ： Ａ
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
文 章 编 号 ： ６ ２ ９ ５ （ ０ ０ ｌ － ０ ９０ １ ７ —４ ５ ２ １ ） ９２ ４ —２
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［ ｓｒ ｃ］ ０ｂｅｔｖ Ｔｏｅ ａｕ ｔ ｈ ｌ ｉａ ａ ｐｉａｉｎｖ ｌｅｏ ｈ ｅ ｏ ｕｅ－ ｓｉｔｄ ｓ ｅｍ ｎ ｌ ｔ ａ Ａｂｔａ ｔ ｊ ｃｉｅ ｖ ｌａｅｔ ｅｃｉ ｃ ｌ ｐ ｌ ｔ ａｕ ｆｔｅｎ ｗ ｃ ｍｐ ｔｒａ ｓｓｅ ｐ ｒ ａ ａｙ ｉ ｌ ｎ ｃ ｏ ｃ
结论 与 西班 牙 Ｓ ＣＡ 系统 比较 ， 型精 子 功 能 分析 系统 在 各 主 要 技 术 参 数 上 与 其 具 有 较 好 的 一 致 性 ， 够反 映 － 新 能 临 床 不 同组 群 患 者精 液 的差 异 ， 具 有 较 高 的精 密 度 。 且
【 键词】 计算机辅助精液分析 ； 精液常规分析 ； 不 育 关