血清蛋白电泳检查作业指导书
实验七 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳

实验七血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳一、实验目的1、进一步掌握电泳的基本原理及凝胶电泳的原理。
2、熟悉琼脂糖凝胶电泳的特点和操作要点。
3、掌握正常人血浆脂蛋白的分类。
二、实验原理琼脂糖凝胶是由D-半乳糖和3,6脱水L-半乳糖的残基通过氢键交替排列组成的直链多糖。
电泳时,因为凝胶中含水量大(98%-99%),固体支持物的影响较少,故电泳速度快、区带整齐。
而且由于琼脂糖不含带电荷的基团,电渗影响很小,是一种良好的电泳材料,分离效果较好。
血清中脂类物质均与载脂蛋白结合成水溶性脂蛋白形式存在,各种脂蛋白所含载脂蛋白的种类及数量不同,因而不同脂蛋白颗粒大小相差很大。
因此,以琼脂糖凝胶为支持物,在电场中可使各种脂蛋白颗粒分开。
将血清脂蛋白用脂类染料苏丹黑(或油红)进行预染。
再将预染过的血清置于琼脂糖凝胶板上进行分离,通电后,可以看到脂蛋白被分成三条区带,从负极到正极依次为β脂蛋白(最深)、前β脂蛋白(最浅)及α脂蛋白(比前β脂蛋白略深),在原点处应无乳糜微粒。
此法应用于高脂蛋白血症的分型。
三、器材和试剂1、器材:电泳仪、电泳槽、离心机、水浴锅、染色盘、微量注射器、滤纸、镊子剪刀、2cm*8cm玻璃片2、试剂⑴巴比妥缓冲液(PH8.6):称取巴比妥钠15.4g、巴比妥2.76g及EDTA0.29g,加水溶解后,再加蒸馏水定容至1000ml(PH为8.6,离子强度0.075),作为电极缓冲液。
⑵苏丹黑染色液:将苏丹黑0.5g溶于无水乙醇5ml中至饱和。
⑶凝胶缓冲液:称取三羟甲基甲烷(Tris)1.212g,EDTA0.29g及Nacl5.85g,用蒸馏水溶解后,稀释至1000ml。
调PH至8.6.⑷琼脂糖凝胶:称取琼脂糖0.50g溶于50ml凝胶缓冲液中,再加水50ml,在水浴中加热至沸,待琼脂糖完全溶解后,立即停止加热。
⑸新鲜血清(无溶血现象)四、操作步骤1、预染血清血清0.2ml加苏丹黑染色液0.02ml与试管中,在混合后置于37℃水浴染色30分,然后离心(2000r/min)约5分。
试验六血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

实验六 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳一、实验目的1、学习电泳技术的基本原理和醋酸纤维素薄膜电泳的操作技术。
2、掌握电泳分离血清蛋白及其定性分析方法。
二、实验原理电泳:指带电颗粒在电场作用下,向与其自身所带电荷电性相反的电极移动的现象。
例如,蛋白质具有两性解离性质,当蛋白质溶液的大于等电点时,该蛋白质带负电荷,在电场中向正极移动;反之则带正电荷,在电场中向负极移动;只有蛋白质溶液pH 在蛋白质的等电点时静电荷为零,在电场中不向任何一极移动。
早在1890年就发现了电泳现象。
1937年瑞典科学家Tiselius 设计了世界上第一台自由电泳仪,建立了“移界电泳法”,成功地将血清蛋白分成清蛋白、α1球蛋白、 α2球蛋白、 β球蛋白和γ球蛋白五个主要成分,为人们了解血清奠定了基础。
为此获得1948年诺贝尔奖。
迁移率(泳动度)是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度。
)(///112−−⋅⋅===s V cm Vtdl l V t d E v u u :迁移率;v :质点泳动速度(cm 2·s -1);E :电场强度(V ·cm -1);d :质点泳动距离(cm );l :支持物有效长度(cm );V :支持物两端实际电压(V );t :通电时间(s )影响质点泳动速度的因素:①颗粒表面电荷数↑;②质点的分子量↓;③颗粒大小及分子构象↓;④介质黏度↓;⑤电场强度↑;⑥介质溶液的pH (距pI 大小);⑦溶液的离子强度↓;⑧电渗现象:液体在电场中对于一个固体支持物的相对移动,是由于电泳支持物本身带有带点解离基团所致。
例如在纸电泳中,由于滤纸上吸附OH -离子带负电荷,而与纸相接触的水溶液由于静电感应而带正电荷,液体便向负极移动,并携带颗粒同时移动,所以电泳时,颗粒泳动的表面速度是颗粒本身的泳动速度与由于电渗携带颗粒的移动速度之矢量和。
电泳种类:按分离原理可分为区带电泳、移界电泳、等速电泳和聚焦电泳四种。
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

(3) 加样量 : 加样品量的多少与电泳条件、样品性质、染 色方法与检测手段灵敏度密切相关。作为一般原则,检 测方法越灵敏,加样量越少,对分离更有利。如加样量 过大,则电泳后区带分离不清楚,甚至相互干扰,染色 也较费时。 点样好坏是获得理想图谱的重要环节之一,以印章 法加样时,动作应轻、稳,用力不能太重,以免将薄膜 弄破或印出凹陷而影响电泳区带分离效果。 (4) 电量选择 : 电泳过程应选用合适的电流强度,一般为 0.3 ~ 0.5 mA / cm 宽膜。电流强度高,则热效应高,可 能引起蛋白质变性或由于缓冲液蒸发造成膜片干涸。电 流过低,则样品泳动速度慢且易扩散。 (5) 染色液的选择 : 染色液应根据样品的特点加以选择。 其原则是染料对被分离样品有强的着色力,背景易脱色, 应尽量采用水溶性染料,不宜选择醇溶性染料,以免使 薄膜溶解。
图ll一1 正常人血清醋酸纤维素薄膜电泳示意图 1为清蛋白;2,3,4,5分别为α 1-,α 2-,β -及γ -球蛋白;6为点样原点
Hale Waihona Puke 此法由于操作简单快速、分辨率高及重复性好等优 点,目前已成为临床生化检验的常规操作之一。它不仅可 用于分离血清蛋白,还可用于分离脂蛋白、血红蛋白及同 工酶的分离测定。
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
一、实验目的
1.学习醋酸纤维素薄膜电泳的基本原理。 2.了解醋酸纤维素薄膜电泳的操作技术。 3.掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量的方法。
二、实验原理
醋酸纤维素薄膜电泳是以醋酸纤维素薄膜为支持 物的电泳方法。醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化形 成的纤维素醋酸酯。将它溶于有机溶剂(如丙酮、氯仿、 氯乙烯、乙酸乙酯等)后,涂抹成均匀的薄膜则成为醋 酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状结构,有强渗 透性,对分子移动无阻力,厚度为120um。
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

实验二血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳【原理】由于不同的蛋白分子在同一环境中解离情况不同、分子大小不同等差异,电泳时可将其分离。
醋酸纤维素薄膜电泳具有分离速度快,区带清晰,操作简便等优点。
血清含多种蛋白质,用醋酸纤维素薄膜电泳可分为五个区带,经固定染色后不仅可看到清晰的色带,而且可定量测定,计算出各种蛋白质的百分含量,其正常值如下:A(白蛋白) 57~72%α1球蛋白 2~5%α2球蛋白 4~9%β球蛋白 6.5~12%γ球蛋白 10~20%某些肝、肾疾病上述蛋白含量发生改变。
【仪器】电泳仪 721型分光光度计染液盘漂洗盘镊子(或竹夹子)【试剂】1.巴比妥缓冲液(pH8.6,离子强度0.06):巴比妥纳12.7g,巴比妥1.66g,先加水少量,小心加热溶解,最后用蒸馏水定容为1 000ml,4℃保存。
2.氨基黑10B染色液:氨基黑10B 0.5g,甲醇50ml,冰醋酸1.0ml,蒸馏水40ml,混匀。
3.漂洗液:95%乙醇45ml,冰醋酸5ml,蒸馏水50ml,按比例混匀。
4.0.4N NaOH溶液。
【操作】1. 点样:将醋酸纤维薄膜切成8cm×2cm条状,浸于巴比妥缓冲液,待完全浸透后,取出置于滤纸上,轻轻吸去多余的缓冲液,再于薄膜的无光泽面的一端2.5cm处,用小玻片蘸取少许血清,垂直印于膜上,待样品浸入膜后,将薄膜有样品的一面向下(以防蒸发干)贴在电泳槽架上,两端用数层浸湿的滤纸(或纱布)作盐桥贴紧。
(其他样品同样处理,若需标记,只能用铅笔书写于有光泽面的两端。
)2.通电:一般电压用90~120V,电流约0.4~0.6mA/cm,通电45至60分钟,待电泳区带展开约25~35mm后关闭电源。
3.染色:通电完毕,将薄膜直接浸于染色液中,3~5分钟后取出放入另一盘中,用漂洗液浸洗数次,每次3分钟,至脱色使背景无色为止。
染色完毕,将染色液倒回原瓶,漂洗液注入回收瓶。
4.定量:将漂洗完毕的薄膜吸干,剪下每种蛋白质色带,另于空白处剪一窄条薄膜,分别放入有4m1 0.4N NaOH的中试管内,振摇数次,使染料色泽浸出,30分钟后,分别于650nm处读吸光度(空白薄膜条浸出液作空白对照)。
血清蛋白的电泳的实验报告

血清蛋白的电泳的实验报告血清蛋白的电泳实验报告引言:血清蛋白是人体内重要的生物分子之一,它在维持体内稳态、免疫防御和营养输送等方面发挥着重要作用。
了解血清蛋白的组成及其分布情况对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。
本实验旨在通过电泳技术对血清蛋白进行分离和鉴定,为进一步研究血清蛋白的功能和相关疾病提供基础数据。
材料与方法:1. 实验仪器:电泳槽、电源、电泳胶、电泳板等。
2. 实验试剂:血清样品、电泳缓冲液、蛋白质标记物等。
3. 实验操作:将电泳胶浸泡于电泳缓冲液中,待其均匀吸收后放置于电泳槽中。
将血清样品与蛋白质标记物混合后,加入电泳槽中的样品孔。
调节电源参数,进行电泳分离。
分离结束后,将电泳板取出,进行染色和成像。
结果与分析:通过电泳实验,我们成功地将血清蛋白分离出不同的带状图谱。
根据电泳胶上的带状图谱,我们可以初步判断血清蛋白的分布情况。
一般来说,血清蛋白主要分为白蛋白、球蛋白和β-球蛋白三个主要部分。
在电泳胶上,白蛋白通常位于最上方,形成一条明亮的窄带。
白蛋白是血浆中含量最高的蛋白质,其主要功能是维持渗透压和输送营养物质。
球蛋白则位于白蛋白下方,呈现为一系列较宽的带状图谱。
球蛋白包含多种免疫球蛋白,对于机体的免疫防御具有重要作用。
β-球蛋白则位于球蛋白的下方,它是一组具有多样性的蛋白质,包括一些激素、运输蛋白和凝血因子等。
除了上述主要蛋白质成分外,电泳图谱中还可能出现一些其他蛋白带。
这些带状图谱可能代表了疾病或炎症状态下的特定蛋白质增加或减少。
通过对这些带状图谱的分析,可以提供疾病诊断和治疗的线索。
结论:通过电泳技术对血清蛋白进行分离和鉴定,我们可以初步了解血清蛋白的组成和分布情况。
血清蛋白的电泳图谱可以为疾病的诊断和治疗提供重要参考。
未来,我们可以进一步研究血清蛋白的功能和相关疾病机制,为临床应用和新药研发提供更多的信息。
值得注意的是,电泳实验是一种初步的分离方法,对于复杂的蛋白质组成和相互作用等问题,还需要结合其他技术手段进行深入研究。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳

血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
一、实验目的
掌握电泳技术的基本原理,学习醋酸纤维薄膜电泳的操作技术。
二、实验原理
任何带电粒子在电场中向一定电极泳动。
蛋白质是两性电解质,处在非等电点状态在电场中会向一定电极移动,一般来说在碱性条件下蛋白质多数带负电荷,在电场中会向正极移动。
醋酸纤维薄膜电泳(CAME)是以醋酸纤维薄膜(CAM)
作支持物的一种区带电泳技术。
血清蛋白中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。
各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、分
子量、等电点及形状不同,在电场中的迁移速度不同,经过电泳可将其分开,电泳结果经氨基黑10B染色、漂洗,得电泳图谱。
血清蛋白电泳可选用pH8.6的巴比妥缓冲液。
四、实验步骤:
1.浸泡:用镊子取醋酸纤维薄膜放在缓冲液中浸泡20分钟。
2、点样:把膜条从缓冲液中取出,夹在两层粗滤纸内吸干多余的液体,然后铺在玻璃板上(无光泽面朝上),将点样器在血清中沾一下(量薄薄一层为好),再在膜条一端2-3厘米处轻轻水平地落下并随时提起,这样即在膜条上点上了细条状的血清样品。
3、电泳,在电泳槽内加入缓冲液,使两个电极槽内的液面等高,将膜条平悬于电泳槽支架的滤纸桥上。
膜条点样的一端放在负极上。
通电,电流强度每条膜1mA(注意强度),电泳时间约为40分钟。
4、染色:电泳完毕后将膜条取下并放在染色液中浸泡5分钟。
5、漂洗:将膜条从染色液中取出后移置到漂洗液申漂洗数次至无蛋白区底色脱净为止,可得到色带清晰的电泳图谱。
注意:打开电泳仪时旋钮归0,防止电流过大造成危险。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验报告
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验报告
标题:血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
一、实验目的:
1.掌握醋酸纤维素薄膜电泳的原理和方法。
2.了解血清蛋白质的组成和分布。
二、实验原理:
醋酸纤维素薄膜电泳是一种常用的分离和鉴定蛋白质的方法。
其原理基于不同蛋白质分子在电场中的迁移率不同,从而实现对蛋白质的分离。
这种电泳方法具有快速、简便、分辨率高等优点。
三、实验步骤:
1.准备试剂和器材:醋酸纤维素薄膜、电极缓冲液、血清样
品、水浴锅、电泳仪、计时器、移液管、剪刀、镊子等。
2.加样:将适量血清样品用移液管加到醋酸纤维素薄膜上,
注意不要形成气泡。
3.电泳:将加好样的醋酸纤维素薄膜放入电泳仪中,接通电
源,开始电泳。
记录电泳时间和电流强度。
4.染色:电泳结束后,将醋酸纤维素薄膜取出,放入染色液
中染色。
5.观察和拍照:观察染色后的醋酸纤维素薄膜,记录各蛋白
带的颜色和位置。
用相机拍摄结果。
四、实验结果:
五、实验结论:
通过本次实验,我们成功地分离了血清中的各种蛋白质,并观察到了它们在醋酸纤维素薄膜上的分布情况。
实验结果表明,血清中含有白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白等多种蛋白质。
这种方法有助于我们进一步了解血清蛋白质的组成和分布,为临床诊断和治疗提供参考。
同时,本实验也锻炼了我们实际操作的能力和对醋酸纤维素薄膜电泳原理的理解。
血清蛋白电泳实验报告
血清蛋白电泳实验报告血清蛋白电泳实验报告引言:血清蛋白电泳是一种常见的实验技术,用于分离和鉴定血清中的不同蛋白质成分。
通过电泳的原理,我们可以获得关于血清蛋白的重要信息,如蛋白质的分布情况、浓度以及异常蛋白的存在等。
本文将介绍血清蛋白电泳实验的步骤、结果和意义。
实验步骤:1. 样本准备:收集被测者的血清样本,并将其离心以去除细胞和血小板等固体成分。
2. 样本处理:将血清样本进行蛋白质沉淀,以去除一些干扰物质。
常用的方法包括酸性沉淀和盐析沉淀等。
3. 准备电泳胶:制备聚丙烯酰胺凝胶,通常使用10%的聚丙烯酰胺凝胶。
4. 样本加载:将处理后的血清样本加载到电泳胶槽中,通常使用细管或微量移液器进行操作。
5. 电泳条件设置:根据需要选择合适的电泳条件,如电压、电流和时间等。
通常,较低的电压和电流可获得更好的分离效果。
6. 电泳运行:将电泳胶槽连接到电源,进行电泳运行。
根据蛋白质的分子量和电荷,不同的蛋白质会在凝胶中移动的速度不同。
7. 凝胶染色:电泳结束后,将凝胶染色以显示蛋白带的分布情况。
通常使用共染色剂如银染法或可见染色剂如考马斯亮蓝R-250等。
8. 结果分析:通过观察凝胶上的蛋白带的位置和强度,可以得出有关蛋白质成分的信息。
实验结果:在我们的实验中,观察到了人类血清蛋白的常见分离带,包括白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白。
白蛋白是血清中含量最高的蛋白质,迁移速度最快,位于凝胶的最顶端。
α1-球蛋白和α2-球蛋白位于白蛋白下方,β-球蛋白和γ-球蛋白则位于凝胶的最底端。
根据蛋白带的强度和位置,我们可以初步判断被测者的血清蛋白组成情况。
实验意义:血清蛋白电泳在临床诊断中具有重要的意义。
通过观察蛋白带的分布情况,可以帮助医生判断患者的肝功能、免疫功能以及某些疾病的存在。
例如,白蛋白的减少可能与肝功能异常有关,γ-球蛋白的增加可能与免疫系统的异常活动有关。
此外,血清蛋白电泳还可用于检测多发性骨髓瘤等恶性肿瘤的存在。
血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳
pp61
目的与要求:
掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳分离混合蛋白质的原理;熟悉聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验方法和操作技术。
制备凝胶
安装凝胶管
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ03
加样(血清样品15-20μL、其中含甘油、溴酚兰)
04
不连续电泳是指在电泳系统中采用了两种或两种以上的缓 冲液,pH值和孔径。
丙烯酰胺凝胶电泳可分为连续电泳和不连续电泳两类
具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应。
不连续圆盘电泳的凝胶管中置有两种不同的凝胶层:浓缩胶、分离胶。
不连续电泳能使稀的样品在电泳过程中浓缩成层,从而提高分辨能力
01
电极缓冲液:Tris-Gly 溶液(pH 8.3)
02
浓缩胶缓冲液: Tris-Cl 溶液(pH 6.7)
03
分离胶缓冲液: Tris-Cl 溶液(pH 8.9)
04
溶液中主要的负离子:
05
pI : 血清蛋白质(5.0左右)< 甘氨酸(5.97)
06
以及完全解离的Cl离子
07
形成先导离子(快离子)、尾随离子(慢离子)
浓缩胶的浓缩效应
在缓冲系统中的弱酸,如甘氨酸,在pH6.7时很少解离,其有效泳动速率很低,而氯离子却有很高的泳动速率,蛋白质的泳动速率介于两者之间。加上电压以后,作为先导离子的氯离子和尾随离子的甘氨酸离子分离开来,并在其后面留下一个导电性较低的区带。由于导电性和电场强度成反比,这一区带便获得较高的电压梯度,加速甘氨酸离子的泳动,使其赶上氯离子,建立起甘氨酸和氯离子的电压梯度和泳动速率乘积相等的稳定态,使这些带电颗粒以相同的速度泳动,两种离子之间有明显的边界。当甘氨酸、氯离子界面通过样品进入浓缩胶时,在移动界面前有一低电压梯度,界面后有一高电压梯度。由于在移动界面前的蛋白质分子泳动速率比氯离子低,因此氯离子能迅速越过。移动界面后的蛋白质处于较高的电压梯度中,其泳动速率比甘氨酸快。因此,移动的界面将蛋白质分子堆积到一起,形成一条狭窄的区带。由于浓缩胶为大孔凝胶,故对蛋白样品没有分子筛作用。当移动的界面到达浓缩胶和分离胶的界面时,凝胶的pH明显增加,导致甘氨酸大量解离。此时,甘氨酸的有效泳动速率明显增加,超越蛋白分子,直接在氯离子后移动。由于凝胶孔径变小,蛋白质分子的迁移速率降低,落在后面的蛋白质便在均一的电压梯度和pH环境中泳动,并根据其固有的电荷与分子大小进行分离。 可见,甘氨酸并非作为缓冲成分参与,而是作为尾随离子来参与电泳过程。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验注意事项
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验注意事项血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验是一种常用的蛋白质分离和分析方法。
在进行该实验时,需要注意以下几点:1. 样品处理:在进行血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验前,需要对样品进行处理。
首先,要避免样品的污染和氧化。
可以在样品中加入适量的抗氧化剂,如抗坏血酸或谷胱甘肽,以保护样品中的蛋白质不受氧化的影响。
其次,要对样品进行蛋白质浓缩和去除杂质的处理。
常用的方法有超滤、离心和沉淀等。
最后,还需要对样品进行还原和变性处理,以使蛋白质在电泳中具有良好的分离性能。
2. 电泳条件:在进行血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验时,需要设置合适的电泳条件。
首先,要选择合适的电泳缓冲液。
一般情况下,选择pH值在8-9之间的缓冲液,如Tris缓冲液或甘氨酸缓冲液。
其次,要根据样品的性质和分离的要求,选择合适的凝胶和凝胶浓度。
常用的凝胶有聚丙烯酰胺凝胶和聚丙烯酰胺-醋酸纤维薄膜复合凝胶。
最后,要控制好电泳的时间和电流。
一般情况下,电泳时间不宜过长,通常在1-2小时之间。
电流的选择要根据凝胶的尺寸和样品的性质来确定,一般在10-20 mA之间。
3. 样品加载:在进行血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验时,要注意样品的加载量。
加载量过多会导致蛋白质带宽增大,分离效果不好,加载量过少则会使蛋白质带宽变窄,某些蛋白质可能无法分离出来。
一般情况下,加载量应控制在10-20 μg之间。
4. 结果解读:在进行血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验后,需要正确解读实验结果。
首先,要注意对照组的设置。
可以设置阳性对照和阴性对照,以确定实验结果的准确性。
其次,要根据蛋白质的迁移距离和带宽来判断蛋白质的分子量和分离效果。
在解读结果时,可以参考蛋白质分子量标准品的迁移距离和带宽。
最后,要注意分析结果的统计学处理。
可以使用软件进行分析,计算蛋白质的相对含量和显著性差异等。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验是一种重要的蛋白质分离和分析方法。
在进行实验时,需要注意样品处理、电泳条件、样品加载和结果解读等方面的问题。
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血清蛋白电泳检查作业指导书(电泳法)
1. 实验原理
血清电泳检查是临床实验室中一种常用的蛋白质分析技术。
它可以对血清或其他体液中的异常蛋白质进行筛选。
它是以区带电泳为基础在一种合适的支持介质—琼脂糖上进行的电泳。
血清蛋白质在给定的PH条件下主要根据其所在带电荷数将其分离成各种片段,根据其支持介质不同,电泳技术已有很大发展。
选用琼脂糖作介质,其使用十分方便。
血清蛋白质由五个不同迁移区带组成:ALB,α1,α2,β和γ球蛋白。
每一区带含有一种或多种血清蛋白质。
2. 标本采集
2.1 标本采集前病人准备:受检者应空腹。
2.2 标本种类:静脉血
3. 标本储存:静脉血分离出血清,储存于2-8℃冰箱中,5天。
4. 标本运输:储存于2-8℃状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。
5. 标本拒收标准:细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。
6. 试剂
6.1试剂名称:血清蛋白电泳检查试剂
6.2 试剂生产厂家:法国Sebia公司
6.3 包装规格:150tests
6.4 试剂盒组成
琼脂糖凝胶10块缓冲液条带10包×2条
氨基黑(浓缩液)1瓶×100ml 点样模具滤纸10条×1盒
6.5 试剂储存条件及有效期:贮存于室温(15~30℃)或冰箱(2~8℃),不能冷冻。
有效期两年。
7. 仪器设备
7.1 仪器名称:SEBIA电泳仪
7.2 仪器厂家:法国Sebia公司
7.3 仪器型号:HYDRASYS
8. 操作步骤
8.1 启动电泳仪
8.2 将加样器放在一平板上,有数字的一端向上。
各加样孔加入10ul溶血的样品,2分钟内加样完毕。
将加样器放入保湿盒内,齿端向上(转运时用塑料齿保护架)。
等待5分钟,使样品扩散至齿端。
打开电泳仪盖,抬起电极和加样器支架。
8.3 使用HYDRAGEL 15 HEMOGLOBINCE时选择仪器的“PROTEIN”程序(位于链盘左侧)。
8.4 从包装袋内取出缓冲条,拿出末端的塑料片,将缓冲条两端塑料片固定在电极支架背侧的钉上,塑料片应紧贴支架。
8.5 取出凝胶板。
将薄的滤纸轻轻吸去凝胶板表面的多余液体,然后立即丢弃滤纸。
在电泳仪温度控制板表面的边线内加200ul蒸馏水或去离子水。
凝胶面朝上,放置凝胶板,边缘对齐边线。
略略将凝胶弯曲,然后放平,使水均匀分布在凝胶板下面而不含气泡。
8.6 降低支架,使缓冲条不接触到凝胶板。
8.7 从保温盒里取出加样器。
取时拿保护框。
折断加样器齿端保护框。
将加样器放在6号位置。
8.8 关上电泳仪盖子,按下键盘左侧的绿色箭头“START”键,电泳开始。
8.9 凝胶染色扫描
8.9.1 打开盖子
8.9.2 取出并丢弃加样器
8.9.3 升高两个支架,握住塑料端取出并丢弃缓冲条。
8.9.4 打开凝胶托架,平放,将干燥的凝胶片放入两层间,然后关上托架。
8.9.5 将凝胶支架放入染色池
8.9.6 取出凝胶支架,打开盖子,取出干燥的凝胶片。
8.9.7 在光密度仪的570nm处或以黄色滤光片扫描测定。
使用HYDRYS,DVSE或PREFERENCE 光密度仪时,使A2片段的标记置于扫描板5mm的标志处。
10. 结果判断与参考范围:扫描得到的只是每种血清蛋白条带的相对浓度值。
参考范围:建议测定每一批样本时都附有一控制品。
11. 临床意义
11.1 正常血清电泳检查一般可分为五条区带,即ALB,, α1,α2,β和γ球蛋白,脐带血清,胎儿血清,部分原发性肝癌血清,在AlB与α1球蛋白之间可增加一条甲胎蛋白带。
多发性骨髓瘤可分离出六条区带,多出的1条称为M蛋白带。
在下列疾病中可见醋纤膜蛋白电泳图明显异常。
11.2 M蛋白血症单克隆γ球蛋白(M蛋白)血症,主要见于多发性骨髓瘤,巨球蛋白血症,重链病以及一些良性M蛋白增多症。
在β与γ球蛋白后区段的各部分出现一条致密浓集的M蛋白带。
11.3 蛋白缺乏症主要包括α1抗胰蛋白酶缺乏症,γ球蛋白缺乏症等。
临床上较少见。
电泳图型表现为α1或γ球蛋白部位蛋白缺乏或显著减低。
11.4 肾病见于急慢性肾炎,肾病综合症,肾功能衰竭等。
表现为ALB减低,α2和β升高。
11.5 急慢性炎症表现为α1,α2和β三种球蛋白均增高。
11.6 肝病包括急慢性肝炎和肝硬化。
主要表现为ALB减低,β和γ球蛋白增高,出现β和γ难分离相连的“β~γ桥”,此现象往往是由于IgA增高所致,IgA与肝纤维化有关。
12. 操作性能:灵敏度高、特异性强、操作简便,重复性好。
13. 注意事项:
13.1 试剂贮存于室温(15~30℃)或冰箱(2~8℃)内,不能冷冻。
13.2 不要应用溶血标本
13.3 电泳过程中不能打开盖子。
在染色脱色以及干燥过程中,仪器的一些程序处于锁定状态。
13.4 最后染色后立即扫描测定。
若欲保存,可用一保护物覆盖后置于干燥、暗处,避免受热,可保存约3个月。