补体结合实验的原理和应用
补体实验报告
补体实验报告篇一：补体结合实验第二节补体结合实验补体结合实验（complementfixationtest，cft）是用免疫溶血机制做指示系统，来检测另一反映系统抗原或抗体的实验。
早在1906年wasermann就将其应用于梅毒的诊断，即著名的华氏反映。
这一传统的实验经不断改良，除用于传染病诊断和流行病学调查之外，在一些自身抗体、肿瘤相关以原和hla的检测和分析中也有应用。
一、类型及原理自身免疫性溶血，若是有补体参与时，补体通过一系列的激活，最后形成膜解决复合物（membrane attack complex），它可以直接解决红细胞膜，致使红细胞破裂，这就是所谓“血管内溶血”。
而没有补体参与的免疫性溶血，抗体与红细胞膜上抗原结合后，没有直接把红细胞破坏，而是把红细胞“致敏”，致敏RBC在通过脾脏等网状内皮系统时，被吞噬细胞“吃掉”，这就是所谓“血管外溶血”。
该实验中有5种成份参与反映，分属于3个系统：①反映系统，即已知的抗原（或抗体）与待测的抗体（或抗原）；②补体系统；③指示系统，即srbc与相应溶血素，实验时常将其预先结合在一路，形成致敏红细胞。
反映系统与指示系统争夺补体系统，先加入反映系统给其以优先结合补体的机缘。
若是反映系统中存在待测的抗体（或抗原），则抗原抗体发生反映后可结合补体；再加入指示系统时，由于反映液中已没有游离的补体而不出现溶血，是为补体结合实验阳性。
若是反映系统中不存在的待检的抗体（或抗原），则在液体中仍有游离的补体存在，当加入指示系统时会出现溶血，是为补体结合实验阴性（图14-2）。
因此补体结合实验可用已知抗原来检测相应抗体，或用已知抗体来检测相应抗原。
图14-2补体结合实验示用意二、实验方式补体结合实验的改良方式较多，较常常利用的有全量法(3ml)、半量法(1.5ml)、小量法(0.6ml)和微量法（塑板法）等。
目前以后两种方式应用较为普遍，因为可以节省抗原，血清标本用量较少，特异性也较好。
补体结合试验的原理及应用
补体结合试验的原理及应用1. 原理介绍补体结合试验是一种常见的实验方法，用于检测血清或体液中的溶菌酶的活性。
其原理基于抗原-抗体反应和补体激活的过程。
在一个完整的补体结合试验中，通常需要包括三个基本步骤：补体激活、免疫复合物的形成和补体结合。
1.1 补体激活补体是一组血浆蛋白，在机体的免疫防御机制中起着关键的作用。
当体内存在抗原时，抗原与特异性抗体结合形成免疫复合物。
这些免疫复合物可以激活补体系统。
补体分为经典途径和替代途径，其中经典途径是由免疫复合物激活补体的主要途径之一。
1.2 免疫复合物的形成免疫复合物是由抗原与抗体结合形成的复合物。
当抗原与抗体结合形成免疫复合物后，免疫复合物会引起补体激活。
1.3 补体结合补体结合是指补体成分与免疫复合物结合的过程。
当补体的C1q成分与免疫复合物结合后，C1q会激活补体的经典途径，进而引发连续的级联反应，最终形成一个膜攻击复合物（MAC），导致细胞膜的破坏。
2. 应用领域补体结合试验在医学检验、疾病诊断等领域具有广泛的应用价值。
以下是一些补体结合试验的应用领域：2.1 免疫疾病的诊断补体结合试验可用于检测自身免疫性疾病和某些免疫缺陷病的诊断。
例如，系统性红斑狼疮患者血清中的补体结合活性通常较低。
2.2 感染性疾病的诊断补体结合试验可用于检测某些感染性疾病的诊断，如流行性感冒、风疹、百日咳等。
在感染过程中，补体会参与抗体介导的免疫反应，通过补体结合试验可以检测到相关抗体和免疫复合物的形成。
2.3 肿瘤标志物的检测补体结合试验对某些肿瘤标志物的检测也具有一定的应用价值。
例如，前列腺特异性抗原（PSA）是早期发现前列腺癌的一个重要指标，通过补体结合试验可以检测血清中的PSA水平。
2.4 药物敏感性的评估补体结合试验可以用于评估药物的敏感性。
例如，某些抗肿瘤药物的疗效可能与补体结合试验的结果相关，通过补体结合试验可以评估药物对免疫复合物的效应。
3. 结语补体结合试验作为一种重要的实验方法，可以应用于医学检验、疾病诊断等多个领域。
第十九章 补体检测及应用
第十九章补体检测及应用补体是一组存在于人和脊椎动物血清中具有酶样活性、不耐热的糖蛋白。
补体不是单一成分，其在功能效应上是以连续反应程序进行的，故又称补体系统。
补体的存在与抗原性异物的刺激无关，在正常人血清中，其含量相对稳定，但在某些疾病发生时，补体的含量及其活性可发生改变。
第一节概述一、补体成分的含量与理化特性（一）补体成分的含量补体大多为糖蛋白，属于β球蛋白，C1q、C8等为γ球蛋白，C1s、C9为α球蛋白。
正常血清中补体各组分含量相差较大，其中C3含量最高。
补体活化后的裂解片段以该成分的符号后加小写英文字母表示，通常a为小片段，b为大片段，但C2a 为大片段，C2b为小片段。
体内合成补体成分的部位和细胞有多种，以肝脏、脾脏、小肠等组织和巨噬细胞、上皮细胞、血小板等细胞为主。
（二）补体的理化特性补体的性质不稳定，易受各种理化因素的影响，加热、紫外线照射、机械振荡、酸碱和酒精等因素均可破坏补体。
在-10℃活性保持3～4天，冷冻干燥可较长时间保持其活性，加热56℃30分钟灭活（灭能），故补体活性检测应尽快进行。
标本保存应置于-20℃以下。
二、补体的活化途径1.经典途径是以抗原-抗体复合物结合C1q启动激活的途径，最早被人们所认识，故又称第一途径或传统途径，是抗体介导的体液免疫应答的主要效应方式。
2.MBL途径是甘露聚糖结合凝集素（MBL）结合至细菌启动的途径。
其诱导物或激活剂是机体的炎症反应急性期时相性蛋白产生的MBL和C反应蛋白等，后者与病原体结合而启动绕过C1的MBL途径。
3.旁路途径是通过微生物表面等膜性物质，从C3开始，由B因子、D因子参与激活过程，也称第二途径、旁路途径。
这种激活方式不依赖于特异性抗体的形成，在感染早期可为机体提供有效的防御机制。
第二节补体总活性测定已应用于科研和临床的方法包括：基于经典途径的CP-CH50和应用于C3旁路检测的AP-CH50。
CP-CH50是临床常规进行的补体总活性检测项目，AP-CH50尚未列入检验常规。
补体结合
0
0
0
0
10
30
30
500
1:25
0
0
0
0
0
20
40
40
100
1:50
10
0
0
0
10
30
50
50
100
1:75
50
20
10
0
20
50
70
70
100
1:100
80
80
70
60
90
100
100
100
100
表注：表中0～100均为溶血的百分比
表6-7是一份强阳性血清测定结果的一个示例。按比例，抗原1︰100稀释液与强阳性血清的各稀释度所发生的抑制溶血现象最强。如果对弱阳性血清的各稀释液的反应亦与此相同，则此批抗原的效价为1︰100，这就是一个抗原工作量。应注意，测定抗原必须用病马阳性血清，不可使用注射鼻疽死菌免疫的兔高免血清。
表6-4 抗原稀释表
管号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
稀释倍数
10
50
75
100
150
200
300
400
500
生理盐水（ml）
抗原（ml）
实存量（ml）
6.50
5.00
7.50
6.50
4.50
4.00
4.50
4.00
5.00
⑵血清稀释：取鼻疽强阳性血清和弱阳性血清各一份，用生理盐水按表6-5做成5种稀释液，在60℃水浴中灭能30min。
由于许多抗原是非细胞性的，而且上述抗原、抗体和补体三种成分都是用生理盐水或缓冲盐水稀释的比较透明的液体，所以补体不论是否被结合，都不能直接看到，故无法判定。
临床免疫学补体检测及应用
第十九章补体检测及应用本章考点1.概述2.补体的活化途径3.有关补体测定的试验4.补体测定的应用补体是存在于人和脊椎动物正常新鲜血清及组织液中的一组具有酶样活性的球蛋白。
补体系统是补体加上其调节因子和相关膜蛋白共同组成一个反应系统，称为补体系统。
补体系统参与机体的抗感染及免疫调节，也可介导病理性反应，是体内重要的免疫系统和放大系统。
第一节补体系统的组成和性质一、命名根据l968年WH0命名委员会对补体系统进行了统一命名。
参与补体激活经典途径的固有成分按其被发现的先后顺序分别称Cl、C2、……C9。
Cl由Clq、Clr、Cls 三种亚单位组成；补体系统旁路激活途径及调节因子中另一些组分以英文大写字母表示，如B因子、D因子、P因子、H 因子等；补体调节成分多以其功能进行命名，如C1抑制物、C4结合蛋白、衰变加速因子等；补体活化后的裂解片段以该成分的符号后面加小写英文字母表示，如C3a、C3b等；具有酶活性的成分或复合物在其符号上划一横线表示，如、，灭活的补体片段在其符号前面加英文字母i表示，如iC3b等；对补体受体以其结合对象命名，如CLrR、C5Ar、对C3片段受体则用CRl、CR2……CR4表示。
二、分类构成补体系统包括30余种活性成分，按其性质和功能可以分为三大类：1.在体液中参与补体活化级联反应的各种固有成分；2.以可溶性形式或膜结合形式存在的各种补体调节蛋白；3.结合补体片段或调节补体生物效应的各种受体。
三、理化性质补体的大多数组分都是糖蛋白，且多属于β球蛋白，约占血清球蛋白总量的l0%；Clq，C8等为γ球蛋白；Cls，C9为α球蛋白。
正常血清中各组分的含量相差较大，C3含量最多，C2最低。
各种属动物间血中补体含量也不相同，豚鼠血清中含有丰富的补体，故实验室多采用豚鼠血作为补体来源。
补体性质不稳定，易受各种理化因素影响，如加热、机械振荡、酸碱、酒精等均可使其失活；在0℃～10℃下活性只保持3～4天，冷冻干燥可较长时间保持其活性；加热56℃30min可使血清中绝大部分补体组分丧失活性，称为灭活或灭能。
补体结合试验的原理及应用
补体结合试验的原理及应用补体结合试验（Complement fixation test，CFT）是一种常用的免疫学试验，广泛应用于临床、动物卫生、微生物学和生化学等领域。
本文将介绍补体结合试验的原理、方法和应用。
一、原理CFT是通过检测抗原-抗体结合后是否影响补体作用来确定是否存在特定抗体的一种免疫学试验。
抗原与特异性抗体结合后，形成免疫复合物，该复合物可以与补体结合并激活补体，从而引发一系列补体反应。
而在CFT中，引入两种补体成分：被偶联的抗原与补体激活剂（即受体），以及补体底物（即被激活的补体）。
被测血清中如有特异性抗体，可与被偶联的抗原发生结合，使得补体激活剂发生变化，无法与补体底物相结合。
因此，测得补体底物与补体激活剂之间无结合，即补体未被激活，则可证明血清中存在特定抗体。
二、方法1. 试剂与设备（1）被测血清：取血后离心获取血清；（2）受体：把抗原与抗体偶联在羊红细胞表面，用0.1M苏打缓冲液洗涤去除未偶联的抗原和抗体；（3）抗原与特异性抗体：比如，细菌、病毒、药物等；（4）补体：常见的有裂解法（Lysed Sheep Erythrocytes，LSE）和搅拌法（Z牛补体）；（5）试管/小瓶/平板：供反应使用；（6）显微镜、离心机等。
2. 步骤（1）制备试剂：适量的抗原和抗体分别和受体在适宜条件下以一定比例混合，制成一定浓度的大量受体；另需要制备几重稀有度的抗原和抗体梯度稀释物；（2）标准样品制备：以已知抗体滴定值的血清为标准样品，依据其相对滴定值制成浓度为10U的配制液；（3）加样：将待检血清、标准样品及对照血清加到小瓶中，每组加4支小瓶；（4）加试剂：加入适量偶联抗原及补体；（5）反应：置平板中，在37℃恒温箱内孵育数小时，待反应结束；（6）结果判定：利用显微镜观察血清和补体底物与补体激活剂是否结合，判断血清中抗体是否存在。
三、应用CFT可以测定某一种特定抗体的存在与否，具有特异性、敏感性和准确性等优点。
实验一--补体结合实验
实验一补体结合实验实验原理：补体无特异性，可与任何抗体抗原复合物结合而被激活，但不能与单独的抗体或抗体结合。
补体结合试验是一种有补体参与，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应体系。
绵羊红细胞与溶血素结合后可激活补体，导致红细胞破坏，出现溶血现象。
参与补体结合反应的五种成分可分为两个系统：(1)待测系统，已知抗原（或抗体）、待测抗体（或抗原）；（2）指示系统，SRBC、溶血素。
待检测系统与补体作用后，加入指示系统，若不出现溶血，表示待测系统中的抗原抗体相对应；两者特异性结合形成抗原抗体复合物结合并消耗了补体，无游离的补体与指示系统结合，故不溶血，为补体结合试验阳性。
反之，若出现溶血，则为补体结合试验阴性。
实验方法：1.取五支试管，依次做好标记，放在试管架中。
2.按照下表加样。
实验结果：结果分析：试管1、5没有发生溶血现象，为补体结合试验阳性，说明其中的抗体抗原发生了特异性结合，消耗了补体；试管2、3、4发生溶血现象，为补体结合试验阴性，说明抗体抗原不对应，没有消耗补体。
1.羊血用前轻轻摇匀，避免剧烈正当引起溶血。
2.各种试剂的吸管不要混用。
3.补体的性质较不稳定，低温保存，加样时再从冰箱里取出。
4.水浴时避免水滴滴进试管。
5.本实验影响因素很多，对照组的反应情况是否正常是判断实验可信度的参照。
实验二人外周血单个核细胞分离实验原理：常用来分离人外周血单个核细胞的分离液是由聚蔗糖和泛影葡胺按一定比例混合制成。
它分子量大又无化学活性，20摄氏度时比重约为1.077kg/L，淋巴细胞和单核细胞比重略小于分层液，为1.070kg/L左右。
而粒细胞和红细胞比重大，为1.092 kg/L左右。
通过离心，使一定比重的细胞按相应密度梯度分布，淋巴细胞和单核细胞位于分离液的上层，而粒细胞和红细胞沉于离心管的管底，从而将淋巴细胞和单核细胞等单个核细胞分离出来。
实验方法：1.抽取1.5ml静脉血至肝素抗凝管，加入1.5ml Hank’s液2.混匀后取3ml稀释液，沿试管壁缓慢加入到2ml分离液中。
第四节 补体结合试验
第十一章血清学试验第四节补体结合试验补体结合试验（complement fixation test）是应用可溶性抗原，如蛋白质、多糖、类脂、病毒等，与相应抗体结合后，其抗原-抗体复合物可以结合补体，但这一反应肉眼不能察觉，如再加入致敏红细胞（溶血系统或称指示系统），既可根据是否出现溶血反应，判定反应系统中是否存在相应的抗原和抗体。
参与补体结合反应的抗体称为补体结合抗体。
补体结合抗体主要为IgG和IgM，IgE和IgA 通常不能结合补体。
通常是利用已知抗原检测未知抗体。
一、基本原理本试验包括两个系统共五种成分：一为检测系统（溶菌系统），即已知的抗原（或抗体）、被检的抗体(或抗原)和补体；另一为指示系统（溶血系统），包括绵羊红细胞、溶血素和补体。
抗原与血清混合后，如果两者是对应的，则发生特异性结合，成为抗原-抗体复合物，这时如果加入补体，由于补体能与各种抗原-抗体复合物结合（但不能单独和抗原或抗体结合）而被固定，不再游离存在。
如果抗原-抗体不对应或没有抗体存在，则不能形成抗原-抗体复合物，加入补体后，补体不被固定，依然游离存在。
由于许多抗原是非细胞性的，而且抗原、抗体和补体都是用缓冲液稀释的比较透明的液体，补体是否与抗原-抗体复合物结合，肉眼看不到，所以还要加入溶血系统。
如果不发生溶血现象，就说明补体不游离存在，表示溶菌系统中的抗原和抗体是对应的，它们所组成的复合物把补体结合了。
如果发生了溶血现象，则表明补体依然游离存在，也就表示溶菌系统中的抗原和抗体不相对应，或者两者缺一，不能结合补体（图11-7）。
二、补体结合试验的基本过程及应用试验分两步进行。
第一步为反应系统作用阶段，由倍比稀释的待检血清加最适浓度的抗原和补体。
混合后37℃水浴作用30～90min或4℃冰箱过夜。
第二步是溶血系统作用阶段，在上述管中加入致敏红细胞，置37℃水浴作用30～60min，观察是否有溶血现象。
若最终表现是不溶血，说明待检的抗体与相应的抗原结合了，反应结果是阳性；若最终表现是溶血，则说明待检的抗体不存在或与抗原不相对应，反应结果是阴性。
补体结合试验
主讲人： 组员：
补体及其作用特点 补体存在于哺乳动物血清中，各种动物比较，豚鼠血 清中补体含量最高，成分较全，效价稳定，采取方便， 故通常将豚鼠的全血清作为补体。56℃30min可使补 体失去活性，称为“灭能”或“非动”。 补体的作用为能与抗原—抗体复合物结合，但不能与 抗原单独结合，也不易与抗体单独结合；补体的作用 没有特异性，能与任何一组抗原抗体复合物结合。它 能与红细胞（抗原）和溶血素（抗体）的复合物结合， 引起红细胞破坏（溶血），也能与细菌、病毒成分及 其相应抗体的复合物结合。 补体结合反应中的抗体主要是IgG和IgM
补体效价测完后，按表添加各种成分。所用的致敏血球是将2单位溶血素和 2.50％红细胞液等量混合后，置37℃水浴中15min，即成为致敏血球。 在2单位溶血素的存在下，能使0.50ml的2.50％红细胞完全溶血的最小补体 量，即为该补体的效价。在本例中，补体效价为1:20稀释液0.25ml。
效价测完后，按下列计算原补体在使用时应稀释的倍数。 0.50／0.25×20.0＝40.00 即此补体应作1︰40稀释使用，每管加入0.50ml，此即为1个单位补体。考 虑到补体性质不稳定，在操作过程中效价会降低，故此使用浓度比原效价 大10.00％左右较为适宜。因此，本批补体应用1︰36稀释使用，每管加入 0.50ml。
含义
表示方法
100%溶血
-
75%溶血
+
50%溶血
++
25%溶血
+++
完全不溶血
++++
待检测血清出现“++++”时的最高稀释度就是该血清的滴度。
• 主要优缺点： ① 优点：灵敏度高 特异性好 反应结果明显 不同物理 状态下的抗原均可用此法 易于推广 ② 缺点：参与反应的物质多 抗原、抗体或血清标本具有 溶血或抗补体作用时，试验难以进行。
补体结合实验报告
补体结合实验报告引言补体是一组在免疫系统中起关键作用的蛋白质。
补体系统能够识别和破坏体内的病原体和损伤细胞。
补体结合实验是通过观察补体与特定物质结合的能力来评估免疫系统的功能性。
本实验旨在通过补体结合实验，研究其对不同物质的结合能力以及影响因素。
实验设计实验材料•血清样本：从健康人体血液中提取的血清样本。
•不同物质：如抗原A、抗原B、抗原C等。
•血清稀释液：用于稀释血清样本。
•补体源：提供补体蛋白质的来源。
•补体结合试剂：一种特殊染色试剂，用于观察补体与物质结合后的颜色变化。
实验步骤1.将血清样本加入不同的试管中，每个试管加入相同体积的血清样本。
2.将不同物质分别加入试管中，使不同试管中的样本与不同物质接触。
3.在每个试管中加入适量的补体源，并轻轻混合。
4.将试管放置在恒温水浴中，保持一定的温度。
5.在一定时间后，观察试管中的颜色变化，并记录结果。
6.根据实验结果，评估补体与不同物质的结合能力。
实验结果经过实验观察，我们得到了以下结果：•在与抗原A接触的试管中，补体与抗原A发生结合，并观察到颜色的变化。
•在与抗原B接触的试管中，补体与抗原B发生结合，并观察到颜色的变化。
•在与抗原C接触的试管中，补体与抗原C发生结合，并观察到颜色的变化。
根据实验结果，我们可以得出结论：补体与不同物质具有特异性结合能力。
讨论本实验中，我们通过补体结合实验评估了血清样本中补体与不同物质的结合能力。
补体的结合能力是免疫系统正常功能的重要指标之一。
通过补体结合实验，我们可以了解免疫系统对特定物质的识别和作用方式，为疾病的诊断和治疗提供重要的参考依据。
在实验中，我们使用了血清样本和不同物质进行反应，观察到了颜色的变化。
这种颜色变化是由于补体与物质结合后的反应产物导致的。
通过观察颜色变化，我们可以初步判断补体与不同物质的结合情况。
然而，本实验也存在一些局限性。
首先，补体结合实验只能初步评估补体与物质的结合能力，不能提供详细的定量信息。
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补体结合实验的原理和应用
1. 原理介绍
补体结合实验是一种用于研究补体系统功能的实验方法。
补体系统是一组血浆蛋白酶，它在机体的免疫应答中发挥重要作用。
补体系统能够通过一系列活性酶的激活和相互作用，最终导致细菌的破坏或产生炎症反应。
补体结合实验的基本原理是利用补体结合能力来检测不同抗原或抗体的特异性反应。
在实验中，一个标记物（通常是荧光染料或放射性同位素）与待测物（常为抗原或抗体）结合，并在给定条件下与补体结合。
通过检测补体结合标记物的数量或强度，可以间接评估待测物与补体的相互作用。
2. 实验步骤
补体结合实验的一般步骤如下：
1.准备试样：待测物中的抗原或抗体需要纯化或稀释到一定浓度，以便
进行后续实验。
同时，补体也需要准备好。
2.标记待测物：将待测物标记上荧光染料或放射性同位素，使其具有可
检测性。
3.混合试样：将标记的待测物和补体一起加入到一个反应体系中，并进
行充分混合。
4.适当条件下孵育：为了促使补体结合反应发生，通常需要在适当的温
度和时间下对反应体系进行孵育。
5.分离未结合的标记物：通过离心、洗涤等方式，将未结合的标记物从
反应体系中分离出来。
6.检测结合的标记物：将分离后的标记物进行检测，常用的方法包括光
度计、荧光分析仪或放射计等。
7.数据分析：根据检测结果，评估待测物与补体的结合能力，并进行数
据统计和解释。
3. 应用领域
补体结合实验在免疫学和生物医学研究领域有着广泛的应用。
3.1 免疫疾病的诊断
补体结合实验可以用于检测免疫疾病的诊断，例如系统性红斑狼疮和类风湿关节炎等。
通过检测患者血清中的抗体与补体结合的能力，可以评估免疫系统的功能状态，从而辅助医生进行病情判断和诊断。
3.2 药物研发
补体结合实验可以用于评估药物的有效性和安全性。
研究人员可以使用补体结
合实验来研究新药物对特定疾病相关蛋白的结合能力，从而评估药物的作用机制和潜在疗效。
此外，补体结合实验还可以用于评估药物对正常细胞的毒性，以及了解药物在体内的代谢和排泄情况。
3.3 免疫学研究
补体结合实验在免疫学研究中也有广泛的应用。
通过补体结合实验，研究人员
可以评估不同抗原与抗体之间的特异性结合，了解免疫反应的机制和过程。
此外，补体结合实验还可以用于研究补体系统在炎症反应和免疫应答中的作用，帮助揭示免疫系统的调节机制。
结论
补体结合实验是一种重要的实验方法，可以用于评估待测物与补体的相互作用。
该实验方法在免疫学研究、药物研发和免疫疾病的诊断中有着广泛的应用。
通过了解补体结合实验的原理和应用，我们可以更好地理解免疫系统的功能和机制，为疾病的早期诊断和药物的研发提供科学依据。