急性肾功能衰竭动物模型制作
大鼠肾纤维化模型
大鼠肾纤维化模型肾积水(hydronephrosis)是指尿液从肾盂排出受阻，蓄积后肾内压力增高，肾盂肾盏扩张，肾实质萎缩，导致肾功能减退。
梗阻性肾病其主要的病理生理改变是肾积水、肾盂及肾小管压力升高、肾间质水肿、炎性细胞浸润、肾间质内成纤维细胞增生、肾间质胶原蛋白聚集、肾间质增宽、肾小管萎缩，最终导致肾间质纤维化和肾单位减少，引起肾功能衰竭。
单侧输尿管梗阻是比较成熟的肾间质纤维化模型，结扎2周就可有成纤维细胞的增生和间质细胞外基质的生成。
但是由于输尿管的结扎使患侧肾盂中的尿液不能外排，加上对侧肾脏的代偿作用，所以一般情况模型组血肌酐、尿素氮、NAG以及24h尿蛋白仅明显高于正常组，但还处于正常范围之内，同时对侧肾一般也无明显改变，而患侧肾脏组织中大量炎症细胞浸润、肾小管和间质的结构严重破坏以及肾间质纤维化，最后肾间质呈现广泛的纤维化，而肾小球几乎没有病变。
因此单侧输尿管梗阻模型在研究肾间质纤维化方面使研究的靶点明确，有利于其病变机理及抗间质纤维化治疗的研究。
1.实验动物SPF级Wistar大鼠，健康，雄性，体重为180g~200g2.实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。
3.实验周期7d，14d，21d，28d4.建模方法1术前一晚禁食,自由饮水。
2称量大鼠，腹腔注射水合氯醛（15%）350mg/kg麻醉，剃毛固定后用碘酒及酒精擦拭手术区域。
3在上腹中线偏左约3-4mm剪开腹壁，手术组分离出左肾输尿管。
4在靠近肾下极处结扎并分离输尿管，然后双结扎，在2个结扎中间剪断输尿管，逐层缝合肌层及腹壁，酒精清洁缝合处。
待小鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察大鼠状态及死亡情况并做好记录。
5置于加热垫至其苏醒。
假手术组不结扎输尿管，其余步骤相同。
6术后三天连续注射青霉素20万单位/天防止感染。
5.模型的评价5.1 蛋白尿含量、尿NAG活性测定模型组术后2周、4周的24h尿蛋白含量以及尿酶NAG活性比正常组和假手术组明显上升。
壳寡糖对氯化汞诱导的兔急性肾功能衰竭的保护作用
少。本实验拟通过观察壳寡糖对 Ｈ Ｃ ｇ１ 诱导 的兔急性
肾功 能衰竭 是 否具 有 保 护 作 用 ， 初 步 探 讨 其 作 用 机 并 制 ， 临床 寻找便 宜 、 效 的治疗 药物 提供 实验 依 据 。 为 有
１ 材 料与 方法
高， 患者难 以承受； 且仪器设备 昂贵 ， 技术水平要求高，
苯胺 （ Ａ 显色 剂 和免 疫 组化 链 霉 素合 素一 Ｄ Ｂ） 生物 素一 过
四川医学 ２ １ 年 ９ ０２ 月第 ３ 卷 （ ９ ） ＳｃｕｎＭ ｄ ａ Ｊ ｕ ａ ，０２ Ｉ１ ３ Ｎ ． ３ 第 期 ｉ ａ ｅｉ ｌ ｏｒ ｌ １ ，ｏ ３ ， ｏ９ ｈ ｃ ｎ ２ ／．
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ｍｏ ｌ ． Ｉ ｈ Ｓ ｇ ｏ ｐ， ｈ ｅ ｕ ｌｖ ｌ ｆＢＵ ｎ ｓｌ ｗ ｒｓｇ ｉ ｃ ｎｌ ，ｈ ｅ ｅｓｏ Ｄ ｃ ｎｅ ｔ ｅ ｅ ｌｗｅ ｎ ＯＤ ｄ ｅ ｎ ｔ ｅ ＣＯ ｒ ｕ Ｔ ｅ ｓ ｒ ｍ ｅｓ ｏ Ｎ ａ ｄ Ｃｒ ｅ ｗａ ｏ ｅ ｉｎ ｆ ａ ｔ ｔ ｅ ｌｖ ｌ ｆ ｉ ｙ Ｍ Ａ ｏ ｔ ｎ ｒ ｏ ｒａ ｄ Ｓ ｗ ａ ｔ ｉ ｅ ｅ ｈ ｇ ｅ ａ ｈ ｓ ｈ Ｆ ｇ ｏ ｐ，Ｗｈ ｔ Ｓｍｏ ｅ， ｏ ａ ｅ ｉ ｃ ｉ ｔ ｗ ｒ ｉｈ ｒｔ ｎ ｔ ｏ ｅ ｉ ｔ ｅ ＡＲ ｒ ｕ ｖｙ ｈ ｎ ａ ’ ｒ ｃ ｍｐ ｒ ｄ ｗ ｔ ＡＲＦ ｇ ｏ ｐ，ｔｅ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｆ ｅ ａ ａ ｉｈ ｒ ｈ ｒｕ ｈ ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｏ ｎ ｌＭＴ ｗ ｓｈ ｇ ｅ ｒ ｓｇ ｉ ｃ ｎ ｌ ｉ Ｓ ｇ ｏ ｐ Ｃｏ ｃｕ ｉ ｎ Ｔ ｅ ｐ ｅｒ ａｍｅ ｔ ｉ ＯＳ ｃ ｎ ｅ ｃｅ ｔ ｒｔｃ ａ ｂ ｔ ａ ａｎ ｔＨｇ １ ｎ ｕ ｅ ｉｎ ｆ ａ ｔ ｎ ＣＯ ｒ ｕ ． ｉ ｙ ｎ ｌｓ ｏ ｈ ｒ ｔ ｔ ｎ ｔ Ｃ ａ ｆ ｉｎ ｌ ｐ ｏ ｅ ｔ ｂ ｉ ｇ ｉｓ Ｃ ｉｄ ｃ ｄ ＡＲＦ． ｅ ｗ ｈ ｉ ｙ ｒ ｓ ２
糖尿病肾病动物模型成模标准
糖尿病肾病动物模型成模标准
糖尿病肾病动物模型的成模标准主要依赖于动物的血糖水平、尿白蛋白排泄率（UAE）和肾功能等多个因素。
1. 血糖水平：模型成功的动物应长期处于高血糖状态，通常血糖水平高于正常值的2倍以上。
2. 尿白蛋白排泄率：模型成功的动物应出现尿白蛋白排泄率增高，这是糖尿病肾病的早期标志。
3. 肾功能：模型成功的动物应出现肾功能损伤的指标，如血清肌酐（Scr）和血尿素氮（BUN）水平升高。
4. 病理学检查：模型成功的动物应出现肾组织学改变，如肾小球硬化、肾小动脉硬化、肾间质纤维化等。
以上标准并非一成不变，不同的实验可能需要不同的成模标准。
例如，一些研究可能需要使用更先进的成像技术来评估肾功能的损伤程度。
四氯化碳诱导犬急性肝功能衰竭模型的建立
２１ ０ ０年 ９月 第 ３ 卷第 ｌ ｌ ７期 Ｇｕ ｎ ｄ ｎ ｄｃｌ ｏ ｒ ａ Ｓ ｐ２ １ ，Ｖ １３ ， ｏ １ ａ ｇ ｏ ｇＭｅ ｉ ｕ ｎ ｌ ｅ ．０ ０ ｏ． １ Ｎ ．７ ａＪ
・
２ ４９ ・ ２
四氯 化碳 诱 导犬 急 性肝 功 能 衰 竭 模 型 的建 立
显增生 ， 可见核分裂像 。见 图 ３ 。
５５ ０ ０
ｏ ｏｏ
５ ０ ０ ｏ ｏ ｏ
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ｏｈ与建 模前比较ｐ ０ ０ ； Ａ组比较 ｐ ｏ ０ １ 与建模前 比较Ｐ ００ ０Ａ与 Ａ组 比较 Ｐ ０ ０ １ ＝． ｏ ０ Ａ与 ＜ ． ０ ０ ＝． ； ０ ＜ ． ０ ０
临床应用的重要条件。四氯化碳 已被广泛地应用 于诱 导动物 Ａ Ｆ 型 。目前 ， Ｌ模 急性 肝功 能衰竭 动物模 型主 要是大 鼠 和小 鼠 ， 少有 制作 药物性 犬急 性肝 功 很 能衰竭模 型的报道 。本文在传统 四氯化 碳诱导大 鼠和 兔肝功能衰竭模 型制作方法 ” 基础上 ， 构建 了四氯化 碳诱 导犬肝 功能衰竭 模 型 ， 探讨该 模 型用 于人工 肝 并 支持系统血 液净化疗法 的可行性 。
性（ Ｐ＜０ ０ ０ ） ． ０ １ 。见 图 １ ２ 、。
１１ 材料 健康雄性广州本地犬 ６条 ， ． 犬龄 ２～ ４岁 ， 体重 ８～ｌ ｇ随机分为 Ａ、 ２ｋ ， Ｂ两组 ， 每组 ３条。 １２ 急性肝 功能 衰竭模 型建模 方 法 麻醉 前禁食但 ． 不禁水 ６ｈ 为减少 口腔唾液分 泌 ， ， 麻醉前 １ ｉ ５ ｍｎ皮下 注射硫酸阿托品 ０５ｍ （ Ｌ ， ． ｇ １ｍ ） 然后用犬眠宝按Ｏ０ ～ ．６ ０ １ Ｌ ｋ ．０ ｍ ／ ｇ肌 肉 注 射 进 行 全 身 麻 醉 。 按 Ａ 组 ｌｍ ／ｇ Ｂ组 ０ ５ｍ ／ ｇ Ｌ ｋ、 ． Ｌ ｋ 剂量于前肢 隐静脉 注射 ３ ％ ０ 乙酰氨基 酚 （ 化 四氯 化碳 急 性 肝 功 能 衰 竭诱 导 作 强 用 ） 腹腔注射 ４ ％ 四氯化碳 ；２ｈ后 同样 的途径 半数 、 ０ １ 剂 量进 行 注射３ ％ 乙酰 氨基 酚 和４ ％ 四氯 化碳 。 ０ ０ 在
慢性心衰动物模型的制备及指标评定
慢性心衰动物模型的制备及指标评定慢性心衰是一种心血管疾病，其主要特征是心脏功能逐渐衰竭。
为了深入研究慢性心衰的发生机制及治疗方法，科学家们广泛应用动物模型进行实验研究。
下面将介绍慢性心衰动物模型的制备方法以及常用的指标评定方法。
一、慢性心衰动物模型的制备方法：1.高盐饮食法：将小鼠或大鼠的日常饮食中的盐分含量提高，例如增加食盐的含量。
高盐饮食会引起血压升高，从而导致心脏负荷增加，进而发生心衰。
2.高胆固醇饮食法：给小鼠或大鼠注射或灌胃高胆固醇的食物，例如高脂食品。
高胆固醇饮食会引起血液中胆固醇水平升高，导致动脉粥样硬化，心脏供血不足，最终发生心衰。
3.慢性心肌梗塞法：在小鼠或大鼠的冠状动脉中注射致命的微球或通过手术结扎冠状动脉，造成心肌梗塞，进而诱发心衰。
4.肾脏疾病法：通过手术切除小鼠或大鼠的一个或两个肾脏，或者给予肾脏毒素如丙酮酸来诱发肾脏疾病，进而导致心衰的发生。
二、慢性心衰动物模型的指标评定方法：1.心脏形态学指标：通过心脏组织切片染色法，观察心脏组织的肥大程度和纤维化情况。
常用的染色方法有hematoxylin-eosin (HE)染色和Masson's trichrome 染色，通过显微镜观察心脏细胞形态、胶原纤维沉积情况等。
2.心脏生理学指标：使用心电图（ECG）记录动物的心电活动，评估心脏的电生理状态。
常用的心电图参数包括心率、QRS波群、QT间期等。
超声心动图是另一种评估心脏功能的重要工具，可以测量心腔内径、心肌收缩力等参数，来评估心脏的收缩和舒张功能。
3.血液学指标：采集动物的血液样本，常见的指标包括血红蛋白浓度、红细胞计数、白细胞计数、血小板计数等。
这些指标可以反映动物的贫血情况、炎症反应以及凝血功能等情况。
4.生物化学指标：测定动物血液中的心肌损伤标志物，如肌钙蛋白、心钙蛋白等。
这些标志物在心肌损伤时释放到血液中，可以反映心肌细胞的损伤程度。
5.心脏基因表达：通过转录组学方法，分析心脏细胞内基因的表达变化。
急性肾损伤模型塑造研究进展
Ｒeview of the process of modeling acute kidney injury
YANG Ting，LIN Zhijian，JIANG Zhuoxi，CHU Mengzhen，ZHANG Bing* ，ZOU Lina
【Abstract】 Establishing a stable and reliable acute kidney injury model is an important means of researching acute kidney disease． Acute kidney injury models have various modeling method，different application scopes and diverse modeling standards． Acute kidney injury models were classified by reviewing the recent related literature and materials to analyze modeling method，pathological mechanisms，applications，modeling characteristics and other aspects． This work was conducted to provide promising references and considerable guidance for research and practice in treating acute kidney injuries．
超声造影评价兔急性肾功能衰竭肾皮质血流灌注
方 差 分 析 。 以 Ｐ＜ ０ ０ 为 差 异 有 统 计 学 意 义 。 ．５
２ 结 果
２ １ 造 模 前 、 各 时 间 点 血 生 化 改 变 情 况 ： 肉 注 射 甘 油 ． 后 肌
Ｌ ３ Ｅ探 头 。分 别 于 注 射 甘 油 前 、 射 甘 油 后 ０ ５ ６ ２ 、 Ａ５ ２ 注 ． 、 、 ４ ４ 、２ｈ共 ６个 时 间 点 行 超 声 造 影 。 肌 肉注 射 咪 达 唑 仑 （ ８ ７ 剂
量 ０ １ ｋ ）待 动 物 安 静 后 ， 探 头 固定 于 左 肾 长 轴 最 ． ５ｍＩ ｇ ， ／ 将 大 切 面 ， 动超 声 造 影 ， 耳 缘 静 脉 团 注 造 影 剂声 诺 维 （ 量 启 经 剂
细 观察 肾脏 灌 注 情 况 ， 集 图 像 并 保存 以供 分 析 。各 种 造 影 采
条 件在 所 有 动 物 造 影 过 程 中 均 保 持 不 变 。 每 次 造 影 开 始 前 经 耳 中 央动 脉 抽 血 测 量 Ｓ ｒ Ｂ ｃ 、 ＵＮ 水 平 ， 影 后 随 机 取 １只 造 兔 经 静 脉注 入 １ ０ ｍＩ 空气 处 死 ， 肾脏 送 病 理 检 查 。 取
度、 曲线 下 面积 有 回 升 趋 势 ， 于 ２ ， 异 有 统 计 学 意 义 高 ４ｈ差
（ Ｐ＜ ０ ０ ． １或 Ｐ＜ ０ ０ ） 自 ２ ． ５ ； ４ｈ曲线 上升 斜 率 减 小 、 峰 达
表 ２ 肾 皮 质 时 间 强 度 一 曲线 各 参 数 比较 （ ± ）
时间延迟 ， 造模 前 比较 差 异有 统 计 学 意 义 （ ＜００ 与 Ｐ ． １或
肾缺血再灌注损伤大鼠模型具体步骤及说明
肾缺血再灌注损伤大鼠模型具体步骤及说明•原型物种人•来源缺血再灌注，双侧肾动脉夹闭法•模式动物品系SD大鼠，SPF级，雄性，体重220g~250g•实验分组随机分组：对照组，模型组，阳性药物组，受试药物组，15只每组•实验周期24h or 72h•建模方法1. 选取250g左右大鼠，术前禁食12h，自由饮水。
2. 15％水合氯醛(350mg／kg)腹腔注射麻醉,大鼠背部去毛，消毒备皮。
3. 在背部脊椎旁1cm、肋骨下缘1cm处剪开皮肤及肌肉，可见到肾脏,小心分离出两侧肾脏的肾动脉，迅速用动脉夹夹闭两侧肾动脉。
4. 缺血60min后松开动脉夹，恢复血流，观察肾脏恢复情况。
5. 分两层缝合开口，待大鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察大鼠状态及死亡情况并做好记录。
6. 对照组不做缺血处理，其他操作相同。
7. 分别取再灌注0h、3h、6h、12h、24h、72h六个时间点取材。
麻醉大鼠，下腔静脉取血，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。
同时取左肾组织留作病理标本，右肾组织分生标本。
•应用疾病模型1. 血清生化指标检测：取各时间点（0h、1h、3h、6h、12h、24h、72h)血清，检测血清BUN（尿素氮）和Scr（血肌酐）水平,评估肾功能。
2. 肾系数检测摘取双侧肾脏后，生理盐水冲洗，称重计算肾系数。
肾系数=双侧肾重（mg）/体重（g）3. 肾小管坏死的评分每张切片×200 倍镜下取外髓质部10 个视野，按0 = 正常，1 = 轻微损伤(受损肾小管< 5%) ，2= 轻度损伤(受损肾小管5 %～25 %) ，3 = 中度损伤(受损肾小管25 %～75 %) ，4 = 重度损伤(受损肾小管> 75 %) 作半定量分析并计算其均值，作为肾小管坏死的评分指数4％多聚甲醛溶液固定48h。
常规组织脱水、透明、浸蜡、包埋。
石蜡切片进行HE染色和PAS染色。
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四种急性肾衰竭模型的制作与体会
摘要:介绍四种常用急性肾衰竭模型的操作方法、致病机制、病理改变与临床
病程。
肾动脉钳闭引起的肾脏缺血再灌注以及甘油、庆大霉素、氯化汞均可致
实验动物急性肾衰竭 病理学上可见典型的急性肾小管坏死。
不同模型其病因
、 病理改变与临床病程不尽相同 实际工作中可根据不同需要选用不同的模型。
关键词:急性肾衰竭;急性肾小管坏死;动物模型
急性肾衰竭(a c u t e r e n a l f a i l u r e A R F)是以肾功能在数小时到几天之内急
剧变化 导致肾脏排出氮质代谢废物的能力及维持体内水、电解质稳定功能丧
失为特征的急性肾脏病变。
以往国内外许多学者都曾应用动物模型对A R F的病因、发病机制及病理生理等方面进行了研究。
本文将就四种常见的引起急性肾
小管坏死致 A R F模型的操作方法、 致病机制、病理改变与临床病程作一比较。
1材料和方法
1．1实验动物
S D大鼠 8～9周龄 体重 190～210g;C57B L P6小鼠 体重18～20g由中山
大学医学实验动物中心提供 均为清洁级(动物合格证号:)。
1．2药物与试剂
氯化汞、 甘油、 多聚甲醛(广州化学试剂厂)庆大霉素(广东三才医药集团
有限公司)苏木素、 伊红、 无色品红(美国 S i g m a公司)乙醇、 二甲苯(广
州化学试剂厂)。
1．3实验仪器设备
普通光学显微镜(O l y m p u s B H22日本)显微镜及图像分析处理系统(德国
Z E I S S公司)
1．4方法
1．4．1缺血再灌注致A R F模型:选用大鼠(n=10)麻醉后 打开腹腔找到左肾
肾门 简单分离血管周围结缔组织 用无创伤动脉夹夹闭肾门约 45m i n后 松
开血管夹 结扎右肾并切除 缝合切口。
于术后12h、 24h、 72h分别杀检3、3、 4只大鼠。
1．4．2甘油致A R F模型:可选用大鼠或小鼠 本实验选用小鼠(n=8)禁水 16 h～24h后 以甘油(50%)10m L P k g体重分别在两侧后肢肌肉注射 之后实
验动物自由进食和饮水。
于注射甘油后 3d、7d分别杀检3、 5只小鼠。
1．4．3庆大霉素致A R F模型:选用大鼠(n=10)每天腹腔注射庆大霉素 160 m g P k g体重 连续 7d。
于注射后8d、 14d分别杀检2、 3只大鼠。
1．4．4氯化汞致A R F模型:选用大鼠(n=11)一次性腹腔注射 H g C l21
m g P k g～2m g P k g本次实验采用剂量2m g P k g(012%)。
于注射后 24h、
7d分别杀检3、 4只大鼠。
1．4．5标本采集:10%水合氯醛肌注麻醉 每只大鼠从下腔静脉取全血 2m L
左右 4℃静置 6～8h7000r P m i n离心 6m i n分离血清 取约 300μ L
用以检测血清肌酐(S c r)、尿素氮(B U N)-20℃冻存。
取部分肾脏新鲜组织
以4%多聚甲醛固定 石蜡包埋 切片。
1．4．6肾组织学染色和肾脏病理损害的评估:石蜡包埋组织切片2μm厚 二甲
苯脱腊和梯队酒精水化后行 H E和 P A S染色。
H E染色:苏木素 8m i n流水冲洗1 m i n蒸馏水浸1m i n加伊红 5m i n流水冲洗30s烤干 透明后用中性树胶封片。
P A S染色:高碘酸20m i n流水冲洗1m i n蒸馏水浸1m i n加无色品红20
m i n流水冲洗5m i n苏木素套染30s烤干 透明后用中性树胶封片。
肾小管损
伤定义为小管坏死、 萎缩、 扩张、刷状缘脱落、管型形成、 炎症细胞浸润和细胞浊肿。
损伤按照 0到 5分分级评分:没有损伤:0分;损伤面积。