风疹诊断标准及处理原则
麻疹、风疹监测与控制

麻疹病毒只有一个血清型,抗原性稳定; 低抗力不强,对干燥、日光、高温均敏感;但在低温 中能长期保存; 杀灭的方法:紫外线、过氧乙酸、甲醛、乳酸和乙醚
麻疹传播
麻疹患者是惟一的传染源, 患儿从接触麻疹病毒后7天至出疹后5天均有传染性; 病毒存在于眼结膜、鼻、口、咽和气管等分泌物中, 通过喷嚏、咳嗽和说话等由飞沫传播。 婴儿可从胎盘得到母亲抗体,生后4~6月内有被动
麻疹、风疹监测
目的
一、掌握麻疹、风疹的病原学、致病机制。 二、掌握麻疹、风疹的临床症状、病例定
义、诊断标准。 三、掌握麻疹、风疹的监测与控制策略。
麻疹
麻疹病原学:
麻疹病毒属副粘病毒科,为单股负链RNA病毒; 无特殊的神经氨酸酶; 呈球形,直径约100~250nm,衣壳外有囊膜,囊膜有 血凝素(HL),有溶血作用;
③ 恢复期:出疹高峰后,发热渐退,病情缓解,皮疹依出疹 先后顺疗隐退,留有棕褐色斑痕,1~2周消失,整个病程约 10天。成人麻疹较小儿童、发热高、皮疹多,但并发肺炎者 少。
麻疹
2、轻型麻疹 多见于接受过疫苗免疫者。目前以轻型患者多见。发热 低,上呼吸道症状轻,麻疹粘膜斑不明显,皮疹少,并发症少。
儿童易发,特别是学前儿童。
儿童易发,特别是学前儿童。
流行于冬春二季,其他季节散发
一年右)
14-21d(18天左右)
发热、咳嗽、流涕、眼结膜充血、麻 疹黏膜疹(又称柯氏斑)及全身斑丘疹。
类似轻形麻疹。
1、发热可达40度、 2、柯氏斑, 3、发热后3-5天出疹、3天出齐、4天出 透、5天退疹、7天退净,有色素沉着 4、卡它和眼结膜充血严重。
麻疹和风疹腮腺炎诊断培训班

提高诊断准确率的技巧与方法
技巧一
熟练掌握麻疹、风疹和腮腺炎 的典型症状和鉴别要点,提高
对疾病的敏感度。
技巧二
综合运用实验室检查、影像学 资料等多种诊断手段,提高诊 断的准确性。
方法一
加强培训和学习,不断更新专 业知识,提高对疾病的认知水 平。
方法二
加强与患者及家属的沟通,获 取准确病史和相关信息,减少
麻疹和风疹腮腺炎诊断培训班
目
CONTENCT
录
• 麻疹和风疹腮腺炎概述 • 麻疹和风疹腮腺炎的诊断方法 • 麻疹和风疹腮腺炎的治疗与预防 • 麻疹和风疹腮腺炎的案例分享与讨
论 • 培训班总结与展望
01
麻疹和风疹腮腺炎概述
定义与特点
01
02
03
04
麻疹
由麻疹病毒引起的一种急性呼 吸道传染病,主要表现为发热 、咳嗽、流鼻涕、眼结膜炎、 口腔麻疹粘膜斑及皮肤斑丘疹 。
接触传播
感染者通过接触口、鼻、眼等黏膜或皮肤破损处, 使病毒进入体内感染。
母婴传播
风疹病毒可通过胎盘感染胎儿,引起先天性风疹综 合征。
麻疹和风疹腮腺炎的症状与表现
麻疹
发热、咳嗽、流涕、眼结膜炎 、口腔麻疹粘膜斑及皮肤斑丘 疹。其中,麻疹粘膜斑是麻疹 早期具有特征性的体征。
风疹
低热或中度发热、头痛、咽痛 、皮疹、耳后及枕后淋巴结肿 大。皮疹通常在发热后1-2天 出现,先见于面部,后迅速扩 展到躯干和四肢。
其他病毒性皮疹
如水痘、手足口病等,需 通过临床表现和实验室检 查进行鉴别。
其他细菌性感染
如丹毒、猩红热等,需通 过细菌培养和药敏试验进 行鉴别。
自身免疫性疾病
如系统性红斑狼疮等,需 通过自身抗体检测进行鉴 别。
水痘诊断标准

水痘诊断标准水痘,又称为风疹,是一种由水痘-带状疱疹病毒引起的急性传染病。
水痘是一种常见的儿童传染病,但成年人和未接种疫苗的人同样容易感染。
水痘的诊断通常基于患者的临床表现和病史,下面将详细介绍水痘的诊断标准。
一、临床表现。
1. 水痘常见于儿童,但成年人同样容易感染。
水痘的临床表现包括发热、全身不适、头痛、食欲不振等非特异性症状。
2. 水痘的特征性皮疹是水疱,水疱首先出现在头皮、面部和躯干,然后扩散到四肢。
水疱初为红色丘疹,逐渐变为透明的水疱,最终结痂愈合。
二、病史。
1. 患者有接触水痘患者的史或者居住、学习、工作等场所有水痘流行的史。
2. 患者有发热、全身不适等症状,并伴有特征性的水痘疹。
三、实验室检查。
水痘的诊断通常基于临床表现和病史,不需要进行特殊的实验室检查。
但在一些疑难病例中,可以通过抗体检测或病毒核酸检测来进行确诊。
四、鉴别诊断。
水痘与其他疾病的鉴别诊断主要包括,疱疹性咽峡炎、手足口病、荨麻疹等。
这些疾病在临床表现和病史上与水痘有一定的区别,可以通过详细的病史询问和体格检查来进行鉴别诊断。
五、诊断注意事项。
1. 水痘的诊断主要基于患者的临床表现和病史,医生应该仔细询问患者的病史,包括接触史、发病情况等。
2. 在诊断水痘时,应该注意与其他疾病进行鉴别诊断,避免误诊或漏诊。
六、结语。
水痘是一种常见的传染病,通常通过患者的临床表现和病史可以进行诊断。
在诊断水痘时,医生应该仔细询问患者的病史,进行详细的体格检查,并注意与其他疾病进行鉴别诊断,以确保诊断的准确性。
希望本文对水痘的诊断有所帮助,谢谢阅读。
儿科常见的皮疹疾病及鉴别诊断(共38张PPT)

❖
2、球结合膜充血
❖
3、唇及口腔表现
❖
4、手足症状
❖
5、皮肤表现:多形性红斑和猩红热皮疹,常在第
一周出现。肛周皮肤发红、脱皮。
❖
6、颈部淋巴结肿大
❖
7、心脏表现:疾病1-6周可出现心包炎、心肌
炎、心内膜炎、心律失常。发生冠状动脉损坏多在病
程2-4周。也可以在疾病恢复期。
❖ 辅助检查:1.血象、CRP、ESR
SSSS
病原
凝固酶阳 性、噬菌 体Ⅱ组71 型金葡萄 菌(产生表 皮剥脱毒 素导致)
全身症状及 皮疹特点 其他
多为出生后3 皮疹有口周和眼周开始
个月内婴儿
迅速波及躯干和四肢。 在大片红斑基础上出现
,起病前常 松弛性水疱,皮肤大面
有上感或者
积剥脱后留有潮红糜烂 面,似烫伤样外观。手
其他化脓性 足皮肤可呈手套、袜套
皮疹疾病大致可分为两大类:感
染性和非感染性。
❖ 其中常见感染性皮疹包括以下
❖ 1.幼儿急疹 ❖ 2.水痘
❖ 3.风疹
❖ 4.猩红热 ❖ 5.麻疹
❖ 6.伤寒 ❖ 7.手足口病 ❖ 8. 葡萄球菌性烫伤样皮肤综合症
❖ 常见非感染性皮疹包括 ❖ 1.荨麻疹 ❖ 2.川崎病 ❖ 3.幼年类风湿关节炎 ❖ 4.过敏性紫癜 ❖ 5.湿疹
发热与皮疹 关系
轻症者可无 发热,典型 者有前驱期 ,1-2天, 表现为发热 、不适、头 痛等,此期 后出疹。
麻疹
病原
麻疹病 毒
全身症状 皮疹特点 及其他
呼吸道卡 他性炎症 ,结膜炎 ,发热第2 -3天口腔 粘膜斑
红色斑丘疹,大小不等, 可融合成片,疹间肤色正 常,继而色加重,自头面 部-颈部-躯干-四肢, 退疹后有色红色斑丘疹, 大小不等,可融合成片, 疹间肤色正常,继而色加 重,自头面部-颈部-躯 干-四肢,退疹后有色素 沉着及脱屑。
麻疹诊断标准

麻疹诊断标准麻疹是一种由麻疹病毒引起的急性、高度传染性的呼吸道疾病,常见于儿童。
麻疹的早期症状包括发热、咳嗽、流涕和结膜炎。
随后出现 Koplik斑和皮疹,皮疹从头部开始向四肢蔓延。
麻疹的诊断主要依靠临床表现和实验室检查。
下面将介绍麻疹的诊断标准,以便临床医生能够准确诊断和治疗患者。
一、临床表现。
1. 发热,麻疹患者在发病初期会出现高热,体温可达39℃以上。
2. 咳嗽、流涕和结膜炎,患者在发热的同时,会出现咳嗽、流涕和结膜炎等呼吸道症状。
3. Koplik斑,口腔黏膜上出现灰白色小颗粒状斑点,是麻疹的特征性体征之一。
4. 皮疹,发热3-7天后,患者全身出现红斑,开始于耳后,逐渐向面部、颈部、躯干和四肢蔓延。
二、实验室检查。
1. 血清麻疹病毒特异性IgM抗体,麻疹患者在发病后3-5天即可检测出血清麻疹病毒特异性IgM抗体,阳性率高。
2. 鼻咽拭子或咽拭子病毒核酸检测,麻疹患者在发病初期可通过鼻咽拭子或咽拭子病毒核酸检测来确认诊断。
三、诊断标准。
1. 临床诊断,符合上述临床表现中的任何一条,并且有流行病学史,即可做出临床诊断。
2. 实验室诊断,血清麻疹病毒特异性IgM抗体阳性或鼻咽拭子或咽拭子病毒核酸检测阳性,即可做出实验室诊断。
四、麻疹的鉴别诊断。
1. 流行性感冒,流行性感冒患者也会出现发热、咳嗽、流涕等症状,但不会出现Koplik斑和皮疹。
2. 荨麻疹,荨麻疹患者会出现皮疹,但不会伴随发热、咳嗽和结膜炎等症状。
3. 风疹,风疹患者也会出现皮疹,但风疹的皮疹常常在耳后开始,而麻疹的皮疹是从头部开始向四肢蔓延。
综上所述,麻疹的诊断主要依靠临床表现和实验室检查。
临床医生在诊断麻疹时,应充分了解患者的病史和临床表现,结合实验室检查结果,做出准确的诊断。
及时诊断和治疗麻疹,对于控制疾病的传播和减少并发症的发生具有重要意义。
风疹疫情应急预案

风疹疫情应急预案一、概述风疹是由风疹病毒引起的一种常见的急性呼吸道传染病。
以发热、全身皮疹为特征,常伴有结膜炎、耳后及枕部淋巴结肿大。
由于全身症状一般较轻,病程短,往往容易被忽视,但是近年来风疹爆发流行中重症病例屡有报道,而且孕妇早期感染风疹,90%以上胎儿将会出现先天性心脏病、先天性青光眼、先天性白内障、唇腭裂、小头畸形、耳聋、全身性骨病等疾病,严重的可以引起流产、死胎。
风疹是与麻疹非常相似的呼吸道传染病,二者在临床上很难区分,只能通过实验室诊断,在传染病疫情监测上,被视为麻疹的疑似病例。
二、应急处理要点(一)相关定义1、风疹疑似病例:发热、出疹或伴有咳嗽、卡他性鼻炎或结膜炎症状之一者,或任何经过训练的卫生人员诊断为麻疹/风疹的病例均为风疹疑似病例。
2、风疹疑似病例爆发:风疹疑似病例暴发是指一定地区一定人群中,在短时间内(一般指风疹的最长潜伏期)突然出现较多的风疹病例其强度超过一般流行年的平均发病水平。
暴发的定义是相对的,随风疹控制各阶段目标的不同可随之改变,只要风疹发病超过期望水平即可认为是暴发。
目前具体暂定如下:村(街道居委会)或一个集体单位10天内发生2例或2例以上麻疹/风疹疑似病例,以乡镇(街道办事处)为单位,10天内发生5例或5例以上风疹疑似病例即为暴发。
3、突发公共卫生事件相关信息报告标准:1周内同一学校、幼儿园、自然村寨、社区等集体单位发生10例及以上的风疹病例。
(二)疫情发现1、在下列情况下,学校、托幼机构、自然村寨、福利收容羁留机构等集体单位应尽快向区疾病预防控制中心报告。
(1)符合风疹疑似病例定义;(2短期内出现多例发热、出疹性病例,调查发现其中有聚集性或有流行病学关联时;(3)监测发现风疹样病例明显超过历史同期水平;(4)学校、托幼机构等因病缺勤短期内异常增加;2、疾病预防控制机构应定期开展主动监测和主动搜索,以早期发现疫情。
(三)疫情报告接到突发公共卫生事件相关信息报告的卫生行政部门应当尽早组织有关专家进行现场调查,如确认为实际发生突发公共卫生事件,应根据不同的级别,及时组织采取相应的措施,并在2小时内向本级人民政府报告,同时向上一级人民政府卫生行政部门报告。
儿科常见的皮疹疾病及鉴别诊断

可见儿童各年龄期, 面部-躯干-四肢, 发热后半天 可有中等度发热,高 斑丘疹,疹间皮肤 至1天出疹。 热者少,可有其他呼 正常,退疹后无色 经2-3天消 吸道感染症状,耳后 素沉着及脱屑。颜 退,长则4- 枕部淋巴结并触痛。 面及四肢多而躯干 5天。
少,但手心足底无 皮疹。
水痘
病原
全身症状及其他 皮疹特点
律失常。发生冠状动脉损坏多在病程2-4周。也可以在疾病恢复期。
• 辅助检查:1.血象、CRP、ESR
•
2.IgG、IgA、IgM和IgE和血循环免疫复合物升高
•
3.心脏B超:冠状动脉改变,﹥3mm为扩张,动脉瘤≧8mm。
• 诊断标准:发热五天以上,伴有下列5项中4项者,除外其他疾病后, 可诊断川崎病。
食欲不振,腹痛、腹 等。小儿较成年 胀、便秘或腹泻。表 人少见。 情淡漠,肝脾肿大。
SSSS
病原
全身症状及其他 皮疹特点
发热与皮疹 关系
凝固酶阳性、 噬菌体Ⅱ组71 型金葡萄菌(产 生表皮剥脱毒 素导致)
多为出生后3个 皮疹有口周和眼周开始迅速波及 无明显关系
月内婴儿,起病
躯干和四肢。在大片红斑基础上 出现松弛性水疱,皮肤大面积剥
病原
全身症状及其他 皮疹特点
发热与皮疹关系
乙型溶血性链球 菌
高热,中毒症状 重,咽峡炎,杨 梅舌,环口苍白 圈,扁桃体炎
皮肤弥漫性充血,发热后半天至1 上有密集针尖大 天出疹。 小丘疹,持续3 -5天退疹,1周 后全身大片脱皮。
伤寒
病原
全身症状及其他
皮疹特点
发热与皮疹关系
伤寒沙门氏 菌
发热,呈稽留热,也 玫瑰疹,见于躯 一般在病程4- 可呈弛张热或不规则 干部,按之退色,15天出现,可分 热,有消化道症状, 数个至数十个不 批出现。
麻疹风疹防控方案2024年版

麻疹风疹防控方案2024年版麻疹、风疹分别是由麻疹病毒和风疹病毒感染引起的以发热、出疹为主要表现的急性呼吸道传染病,传染性强,易引起暴发流行,分别是《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类、丙类传染病。
由于麻疹、风疹均为急性发热、出疹性疾病,疾病监测、干预和疫情处置等措施相似,为指导各地科学精准、统筹推进麻疹和风疹防控工作,切实保护人民群众身体健康,制定本防控方案。
一、总体要求坚持“预防为主、防治结合、精准防控、快速处置”原则,落实“早发现、早报告、早隔离、早治疗”措施。
加强预防接种和健康宣教,维持国家免疫规划麻腮风疫苗高水平接种率。
保持以个案为基础、流行病学调查和实验室检测支持的麻疹风疹监测系统高质量运转,加强疫情分析与风险研判,及时发现、规范治疗病例,有效处置聚集性疫情,持续将麻疹风疹发病率保持在较低水平。
二、病原学特征麻疹病毒属于副黏病毒科麻疹病毒属,呈球状或丝状,直径150—200nm,只有1个血清型,抗原性稳定。
基因组为有包膜的单股负链RNA,包括24个基因型,分属于8个进化分支(A—H),其中疫苗株属于A基因型。
该病毒对外界抵抗力较弱,对热、酸、干燥、紫外线和一般消毒剂均敏感;在室温物体表面存活时间不足2小时,56℃30分钟即可灭活;但在冻干状态下存活时间较久,加入蛋白稳定剂后于-70℃可存放数十年。
风疹病毒属于马氏病毒科风疹病毒属,多呈不规则球形,直径50—70nm,只有1个血清型,抗原性稳定。
基因组为有包膜的单股正链RNA,包括13个基因型,分属于2个进化分支(1、2),其中疫苗株病毒为2A基因型或1a基因型。
该病毒对热、脂溶剂、紫外线和一般消毒剂均敏感,56℃30分钟即可灭活。
三、流行病学特征和临床表现(一)麻疹。
1.传染源。
人是麻疹病毒的唯一自然宿主,麻疹感染者是唯一的传染源。
2.传播途径。
主要通过呼吸道飞沫传播,在相对密闭的空间内也可以通过气溶胶传播,接触被病毒污染的物体亦可造成感染。
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风疹诊断标准及处理原则GB 17009—1997^~`前言风疹是由风疹病毒引起的急性呼吸道传染病,呈世界性分布,在我国归属于法定丙类传染病,一年四季均可发生,以冬春季发病为多,易感年龄以1~5岁为多,故流行多见于学龄前儿童。
自风疹疫苗问世以来,发病率明显下降。
风疹临床症状轻微,但孕妇妊娠早期初次感染风疹病毒后,病毒可通过血胎屏障进入胎儿,常可造成先天性胎儿畸形、死胎、早产,因此,风疹的早期确诊及预防极为重要。
本标准由中华人民共和国卫生部提出。
本标准由浙江医科大学传染病研究所、中国预防医学科学院病毒学研究所负责起草。
本标准主要起草人:刘克洲、张礼璧。
本标准由卫生部委托技术归口单位中国预防医学科学院负责解释。
1 范围本标准规定了风疹的诊断标准及处理原则。
本标准适用于各级各类医疗、保健机构、卫生防疫机构和人员对风疹病人的诊断、报告和处理。
2 诊断原则典型病例可根据临床表现结合流行病学作出临床诊断,不典型病例需根据血清风疹抗体的检测或风疹病毒的分离阳性予以确诊。
3 诊断标准3.1 风疹3.1.1 流行病学史与确诊的风疹患者在14~21天内有接触史。
3.1.2 临床症状3.1.2.1 发热。
3.1.2.2 全身皮肤在起病1~2天内出现红色斑丘疹。
3.1.2.3 耳后、枕后、颈部淋巴结肿大或结膜炎或伴有关节痛(或关节炎)。
3.1.3 实验室诊断3.1.3.1 咽拭子标本分离到风疹病毒(见附录A),或检测到风疹病毒核酸。
3.1.3.2 1个月内未接种过风疹减毒活疫苗而在血清中查到风疹IgM抗体(见附录B)。
3.1.3.3 恢复期病人血清风疹IgG抗体滴度较急性期有4倍或4倍以上升高,或急性期抗体阴性而恢复期抗体阳转(见附录B)。
3.1.4 病例分类3.1.4.1 疑似病例:具备3.1.2.2条,同时伴3.1.2.1或3.1.2.3条。
3.1.4.2 临床诊断病例:疑似病例加3.1.1条。
3.1.4.3 确诊病例:疑似病例加3.1.3.1或3.1.3.2或3.1.3.3条。
3.2 先天性风疹综合征3.2.1 临床表现3.2.1.1 新生儿白内障/先天性青光眼,先天性心脏病,听力缺损,色素性视网膜病,唇裂腭裂,头小畸形,X线骨质异常。
3.2.1.2 紫癜、脾肿大、黄疸、精神性迟缓、脑膜脑炎。
3.2.2 经实验室确诊患儿母亲在妊娠早期有风疹病毒感染史3.2.3 实验室诊断3.2.3.1 婴儿血清风疹IgM抗体阳性。
3.2.3.2 婴儿风疹IgG抗体水平持续存在,并超过母体被动获得的抗体水平(4倍以上)。
3.2.3.3 婴儿咽拭子、血、尿、脑脊液或脏器活检标本分离到风疹病毒或检测到风疹病毒RNA。
3.2.4 病例分类3.2.4.1 疑似病例:具备3.2.1.1任一条或可伴3.2.1.2任一条。
3.2.4.2 临床诊断病例:具备3.2.1.1任一条或可伴3.2.1.2任一条,同时伴3.2.2条。
3.2.4.3 确诊病例:临床诊断病例加3.2.3.1或3.2.3.2或3.2.3.3条。
4 处理原则4.1 病人的隔离与治疗发现风疹疑似或诊断病例,应立即隔离,一般隔离至出疹后5天。
一般接触者不进行检疫。
对病人进行对症处理和支持治疗。
先天性风疹综合征患儿根据病症专科治疗。
确诊有风疹病毒感染的早期孕妇,为防止可能产生胎儿先天性畸形,建议及时终止妊娠。
4.2 预防孕妇风疹对育龄妇女,宜进行婚前或孕前检查血风疹IgG抗体,如证实为易感者,均应接种风疹疫苗。
孕妇妊娠早期(3个月内)尽量避免同风疹病人接触。
如一旦接触,可在潜伏期内查血清风疹IgG抗体,若阳性表明既往曾有过风疹病毒感染,若阴性应继续在接触后1个月左右再测一次血清IgG和IgM抗体,若明确阳转可判为风疹病毒感染。
4.3 免疫预防预防风疹有效方法是接种风疹减毒活疫苗,可对易感人群实行接种。
附录A(标准的附录)病原学诊断方法A1 病毒分离从病人呼吸道采集标本分离病原体。
A1.1 标本收集风疹病人宜在出疹前4~5天至疹后1~2天取咽拭子标本。
先天性风疹综合征患儿除咽拭子标本外,亦可于出生后尽快取尿液、眼泪、脑脊液、骨髓等标本。
将灭菌棉棒稍蘸液体(2%牛血清Eagle液),反复涂抹患者咽部数次,然后将棉棒浸于上述标本液(1~1.5mL)中反复挤压,标本液中加足量抗生素(青、链霉素1000u/mL)及制霉菌素50μg/mL(或二性霉素5μg/mL)。
A1.2 接种取0.1~0.2mL标本液接种于生长在试管中的单层原代乳兔肾细胞(PRK)(或其他原代细胞如原代人胚肾、兔胚纤维细胞、人胚二倍体细胞等)上,置37℃吸附1~2h后弃液,再加入含双倍常规抗生素量的维持液1mL,置33℃培养,每隔4天换液,连续观察8~14天。
如无细胞病变可见,即置—30℃冻化3次,盲目传代。
每次传代可接种于RK(下标始)13(下标终)、Vero、BHK(下标始)21(下标终)、LLC-MK(下标始)2(下标终)细胞上,连续盲传3代。
A1.3 观察细胞病变一般于10天左右出现细胞病变。
若不出现病变,可在接种14天后用100TCID(下标始)50(下标终)的ECHO(下标始)11(下标终)病毒或一定量的Sindbis、或VSV、或脊髓灰质炎病毒攻击,并设正常细胞种毒对照。
若对照出现病变,接种标本管无病变,表示原接种的细胞内已有病毒感染的存在。
A 1.4毒株鉴定用已知风疹病毒免疫血清,观察能否与新毒株起作用,传统用中和试验、血凝抑制试验或采用免疫荧光法作病毒鉴定等。
A2 病毒核酸检测利用分子杂交技术或PCR技术检测风疹病毒核酸。
附录B(标准的附录)血清学诊断方法B1 血凝抑制试验B1.1 原理鹅红细胞(或鸽红细胞)上有风疹病毒受体,遇风疹病毒可产生凝集现象。
若将抗体与病毒(血凝素)预先温育后再加入红细胞则不产生凝集,称为血凝抑制。
定量血凝素与不同稀释度抗体(血清)作用后能完全抑制血凝的最高血清稀释度,即为血凝抑制抗体效价。
B1.2 主要材料B1.2.1 血凝板:6×12或8×12个圆形孔(孔底光滑)的U形板。
B1.2.2 定量移液器:定量移液器选用25μL(即0.025mL)。
B1.2.3 尖底小试管:形如离心管,便于血清的吸取。
B1.3 风疹血凝素的制备取毒种感染BHK(下标始)21(下标终)细胞或Vero细胞,常规换液培养。
末次换入2%牛血清199综合培养基,置33℃培养6~7天以上,待细胞病变十十十时收获,冻化,取上清液用Tween-80乙醚处理即为血凝素;如用白陶土处理的2%牛血清配制感染细胞的培养基来制备血凝素,则不用Tween-80乙醚处理。
B1.4 血凝滴度所用溶液一律置4℃预冷,微量塑料板法。
血凝素用葡萄糖-明胶-巴比妥缓冲液以1∶2倍比递增稀释,再加0.25%新鲜鹅红细胞(或鸽红细胞)悬液,混匀,置4℃至少1h,观察结果,以“++++”(4单位)的最高稀释度为血凝滴度。
B1.5 血凝抑制试验原血清0.1mL+0.7mL氯化锰肝素液,4℃作用20min后在1∶8稀释的血清中加1滴积压鹅红细胞(或鸽红细胞),1h内摇2~3次,置4℃过夜,再以2000r/min的速度离心10min,取上清液待检。
待检血清用pH6.2的葡萄糖-明胶-巴比妥缓冲液倍比稀释后,每孔加0.025mL血凝素(含4单位;如系pH9的血凝素,事先应用0.1mol/L盐酸调至pH6.2左右再用)。
抗原抗体在4℃作用1h后加入0.25%鹅红细胞1滴(0.025mL),在4℃下作用2h后判定结果,以完全抑制血凝为终点。
每次试验预设以下对照:阳性血清对照:应出现一定已知效价阴性血清对照:应出现阴性结果待检血清对照:应无非特异性凝集抗原对照:应出现+++++(4单位)、+++(2单位)、++~+(1单位)、±(1/2单位)的凝集现象血球对照:应为阳性HI抗体阳性标准判定以1∶16作为阳性标准。
葡萄糖-明胶-巴比妥缓冲剂(DGV)配制:巴比妥0.58g巴比妥钠0.38g明胶0.6g无水CaCl(下标始)2(下标终)0.02gMgSO4(下标始)4(下标终)·H(下标始)2(下标终)O0.12gNaCl 8.5g葡萄糖10g巴比妥与明胶可分别先各在250mL蒸馏水中加温溶解,然后依次加入其他药品,溶解后加双蒸水至1000mL,分装10瓶消毒。
用前以0.1mol/L盐酸将pH调至6.2,用于稀释待测血清、配制血凝素及红细胞。
氯化锰-肝素液配制MnCl(下标始)2(下标终) 3.96g肝素16万单位加双蒸水至100mL,使用时以双蒸水稀释4倍(1∶3)。
B2 酶联免疫吸附法检测风疹IgG抗体(ELISA间接法)B2.1 原理将风疹抗原包被于固相载体上,加上待检血清,再用酶标抗抗体间接检出特异性抗体。
B2.2 材料B2.2.1 聚苯乙烯酶标板。
B2.2.2 风疹阴性和阳性血清。
B2.2.3 风疹抗原。
B2.2.4 抗入IgG辣根过氧化物酶结合物。
B2.2.5 酶底物邻苯二胺-双氧水。
B2.3 操作程序B2.3.1 用pH9.6碳酸盐缓冲液稀释风疹抗原与未感染风疹病毒的细胞抗原(对照抗原)。
B2.3.2 于40孔聚苯乙烯板的单排孔与双排孔分别加入0.1mL/孔的风疹抗原与对照抗原。
右下最后一孔不加任何抗原作为空白对照,4℃过夜。
B2.3.3 以0.05%Tween 20生理盐水(NS-T)洗板三次,倒去洗液。
B2.3.4 在血凝板中以2%牛血清NS-T将待测血清稀释成1:20~1:1280四个稀释度,每个稀释度加风疹抗原与对照抗原各1孔(0.1mL,下同),轻轻振摇后置37℃1~2h。
B2.3.5 以NS-T洗三次,倒去洗液后每孔加入以2%牛血清NS-T稀释的抗人IgG辣根过氧化物酶结合物0.1mL(空白对照不加),置37℃1~2h。
B2.3.6 以NS-T洗三次,倒去洗液后加邻苯二胺-双氧水底物液,每孔0.1mL(包括空白对照孔),避光在37℃放置10~20min,随时观察,待对照孔开始显淡黄色时即用2mol /L硫酸终止,每孔加50μL。
B2.3.7 用空白对照孔调零点,以酶标仪(492nm)测定各孔OD值。
OD值不足0.05者按0.05计。
凡同一稀释度下风疹抗原孔OD值/对照抗原孔OD值>2.1即P/N为阳性。
阳性之最高稀释度的倒数即为该血清的抗体效价。
小于1∶20者视为阴性。
B2.3.8 每次实验应作已知效价的阳性及阴性血清对照。
B3 酶联免疫吸附法检测风疹IgM抗体(抗体捕捉ELISA法)B3.1 原理利用包被在固相载体上的抗人IgMμ链抗体,捕捉待检血清中的IgM,再用风疹病毒抗原和已知的酶标风疹病毒抗体去检测血清中IgM是否为抗风疹抗体。
利用底物使酶显色而测知。