乳腺癌药敏药敏试验详解
药敏试验结果的正确解读
万古霉素 利 ≤0.5 S μg/m
奈唑胺 替加 ≥8 R
环素
≥≤80.125 RS
≥512 R
2
S
l μg/m l μg/m
万古霉素S折 ≤4 点 利奈唑胺S折 ≤4 点
大肠埃希菌 阿米卡星 庆大霉素 环丙沙星 左氧氟沙星 复方磺胺 头孢曲松 氨曲南 头孢他啶 头孢吡肟 哌拉西林/他唑巴坦
厄他培南 亚胺培南 ESBL筛选
R
I
S
自动化仪器－微量稀释法，抗菌药
头孢他 啶
≤1 187 20
≥2 1
物不能任意选择
4
稀释法：检测最低抑菌浓度 （MIC）
S
I
R
头孢他啶 ≤4 8
≥1
6
GN13
阴 性 菌 药 敏 卡
抗菌药物 氨苄西林 氨苄西林/舒巴坦 哌拉西林/他唑巴坦 头孢唑啉 头孢曲松 头孢他啶 头孢吡肟
CLSI折点
≤
≥
肠球菌属
粪肠球菌 葡萄球菌 属、淋病 奈瑟菌 肠球菌
肠杆菌科
所有菌属 所有菌属 肠杆菌科
可被推测的抗菌药物药敏结果
所有β内酰胺类及与酶抑制剂复合药耐药
对多西环素、米诺环素敏感 罗红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、地红霉素敏感 和耐药 不产β内酰胺酶的肠球菌对阿莫西林、哌拉西林 及其与酶抑制剂的复合剂敏感和耐药 亚胺培南敏感 所有β内酰胺类及与酶抑制剂复合药敏感
1
64
4
64
1
64
1
16
0.5
8
0.25
4
0.25
8
2
64
1
16
1
16
16
512
1
药敏试验判断标准
药敏试验判断标准药敏试验是测定细菌对各种抗菌药物的敏感程度，以指导临床合理用药的重要手段。
以下是药敏试验判断标准的主要内容：1. 耐药性耐药性是指细菌对某种抗菌药物不敏感或耐受。
在药敏试验中，如果细菌生长不受某种抗菌药物抑制或生长速度与对照菌株相比无明显减慢，则该菌株被认为对这种抗菌药物耐药。
2. 中介中介是指细菌对某种抗菌药物的作用处于不敏感与耐药之间。
在药敏试验中，如果细菌生长受到抑制，但生长速度仍高于对照菌株，则该菌株被认为对这种抗菌药物中介。
3. 敏感敏感是指细菌对某种抗菌药物高度敏感。
在药敏试验中，如果细菌生长受到明显抑制，甚至无法生长，则该菌株被认为对这种抗菌药物敏感。
4. 耐药谱耐药谱是指某一菌种对多种抗菌药物的耐药性。
通过药敏试验，可以测定某一菌种对各种抗菌药物的耐药谱，帮助医生了解该菌种对哪些抗菌药物有效，哪些无效。
5. 药敏试验结果与临床疗效药敏试验结果只能作为临床用药的参考，而不能完全替代临床疗效。
在实际治疗中，还需要结合患者的具体情况，如病情、生理状况、药物耐受性等因素来制定合理的用药方案。
6. 交叉耐药交叉耐药是指某种抗菌药物耐药的菌株对其他抗菌药物也表现出一定程度的耐药性。
这种现象在药敏试验中需要注意，避免误导临床用药。
7. 药物代谢和动力学药物代谢和动力学是影响药效的重要因素。
通过药敏试验，可以了解药物在体内的代谢途径和动力学特征，以便更好地掌握药物的使用方法，提高药效。
8. 药物配伍禁忌在联合用药时，需要注意药物之间的配伍禁忌。
某些抗菌药物之间可能存在配伍禁忌，这在药敏试验中需要加以注意，以避免用药不当引起的不良反应。
总之，药敏试验判断标准是指导临床合理用药的重要手段之一，可以帮助医生了解细菌对各种抗菌药物的敏感程度，为制定合理的用药方案提供依据。
同时需要注意交叉耐药、药物代谢和动力学、药物配伍禁忌等因素的影响，以提高药效并避免不良反应的发生。
药敏试验方法简介
药敏试验误差来源及控制
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合理设置对照组
在药敏试验中，应设置对照组以排除干扰因素对结果的影响，确保结果的可靠性。
药敏试验对环境、温度、湿度等条件要求较高，需要严格控制才能保证结果的准确性。
药敏试验的局限性
试验条件限制
对于一些低浓度药物或间歇性发作的病原体，药敏试验可能会出现假阴性结果。
检测灵敏度不高
药敏试验只能检测药物对病原体是否敏感，无法预测患者使用药物后是否会出现不良反应。
应用范围
操作步骤
分子生物学药敏试验需要对细菌基因进行提取、扩增和测序等操作，然后根据测序结果分析细菌对抗菌药物的敏感性。
定义
分子生物学药敏试验是一种基于分子生物学技术的药敏试验方法，通过检测细菌基因序列的变化，判断细菌对某种抗菌药物的敏感性。
应用范围
分子生物学药敏试验适用于一些特殊类型的细菌感染性疾病，如耐药菌感染等。
微生物耐药性的传播方式
微生物耐药性可以通过多种方式传播，如基因突变、质粒传递、细胞重组等。
要点三
抗生素的抗菌谱和抗菌活性
抗生素的抗菌谱是指其能够抗菌的微生物种类范围，而抗菌活性则是指抗生素对特定微生物的抑菌或杀菌能力。
抗生素的耐药机制
微生物对抗生素产生耐药性的机制包括抗生素泵出机制、药物靶点改变机制、药物修饰机制等。
药敏试验的实验方法
药敏试验的种类及方法
03
常规药敏试验
定义
常规药敏试验是一种测定细菌对抗菌药物敏感性的经典方法，通过在体外培养基上测定细菌生长情况，从而判断细菌对物稀释、细菌培养和结果观察等步骤。
应用范围
常规药敏试验适用于各种需要进行抗菌治疗的感染性疾病。
药敏试验实验报告讨论(3篇)
第1篇一、引言药敏试验是临床医学中一项重要的微生物学实验，通过对细菌、真菌等病原微生物进行药物敏感性测试，为临床医生提供合理的抗菌药物选择依据，从而提高治疗效果，减少耐药菌的产生。
本文将对药敏试验的原理、方法、结果分析及临床应用等方面进行讨论。
二、药敏试验原理药敏试验的基本原理是利用药物对病原微生物的抑制作用来评估药物的治疗效果。
在体外实验条件下，将抗菌药物与病原微生物共同培养，观察药物的抑菌或杀菌效果。
根据药物抑制病原微生物生长的最低浓度（最小抑菌浓度，MIC）来判断药物对病原微生物的敏感性。
三、药敏试验方法1. 纸条扩散法：将含有不同浓度抗菌药物的纸条贴在琼脂平板上，待细菌生长后观察抑菌圈的大小，以判断药物的敏感性。
2. 稀释法：将抗菌药物按一定比例稀释后，与细菌混合培养，观察药物的抑菌效果。
3. 抗生素浓度梯度法：在琼脂平板上形成不同浓度的抗生素梯度，观察细菌在不同浓度下的生长情况。
4. 自动化技术：利用自动化仪器设备进行药敏试验，提高实验效率和准确性。
四、药敏试验结果分析1. 结果判断标准：根据CLSI（美国临床和实验室标准化协会）标准，将药敏试验结果分为敏感、中介、耐药三种。
（1）敏感：MIC≤某药物敏感阈值，表示该药物对病原微生物具有抑制作用。
（2）中介：某药物敏感阈值<MIC≤某药物耐药阈值，表示该药物对病原微生物的抑制作用较弱，需加大剂量或与其他药物联合使用。
（3）耐药：MIC>某药物耐药阈值，表示该药物对病原微生物无抑制作用。
2. 结果分析：根据药敏试验结果，评估抗菌药物对病原微生物的敏感性，为临床医生提供合理的治疗方案。
五、药敏试验在临床应用1. 抗菌药物选择：根据药敏试验结果，为临床医生提供合适的抗菌药物选择，提高治疗效果。
2. 监测耐药菌：通过药敏试验，及时发现耐药菌的产生，为临床治疗提供参考。
3. 个体化治疗：根据患者的药敏试验结果，制定个体化治疗方案，提高治疗效果。
药敏试验结果的解读
头孢吡肟折点更改，适合剂量和疗效一致性
NEW
Agent Cefepime
Old Breakpoints Susc Int Res ≤8 16 ≥32
New Breakpoints Susc Int Res ≤2 4-8 ≥16
如ESBL试验阳性，则报告为耐药
用于治疗因肠杆菌科、肺炎克雷伯杆菌、 奇异变形杆菌引起的无并发症的尿路感染 时，预测头孢克洛、头孢地尼、头孢泊肟 酯、头孢丙烯、头孢呋辛酯。（呋辛、地 尼）
基于给药方案500mg/q6h或1g/q8h
对四环素敏感的菌株也对 多西环素和米诺环素。对 四环素中介或耐药的某些 菌株可以对二者均敏感
天然耐药
ⅠⅡ代头孢菌素和头霉素在体外可显示对沙 门菌属和志贺菌属有活性，但临床无效，不 应报告敏感
头孢菌素类（注射用药)（包括ⅠⅡ Ⅲ Ⅳ代头孢菌素）
判读标准只能用于预测口服药物的敏感性， 包括头孢羟氨苄、头孢泊肟、头孢氨苄。
敏感：1g/q8h或2g/q12h，SDD： 基于给药方案较高的药物暴露、较 高剂量或增加用药频率
感染与污染判断
✓ 多次从无菌部位标本都培养出同一细菌，通常是感染菌， 当单次培养阳性时需根据细菌种类和临床判断。
✓ 感染菌：大部分革兰阴性杆菌、金黄色葡萄球菌、肠球 菌等。
✓ 污染菌：表皮葡萄球菌，痤疮丙酸杆菌，梭杆菌属，类 白喉群 （来源于皮肤）；革兰阳性芽孢杆菌属，不动 杆菌属 （来源于环境 ）
细菌的天然耐药性-肠球菌
药敏结果与临床疗效不一致分析
药敏结果与临床疗效不一致性原因解析
✓ 疾病本身 ✓ 患者个体情况 ✓ 致病菌情况
药敏结果与临床疗效不一致性原因解析
药敏试验结果的正确解读
肠杆菌科
氨苄西林敏感和耐药 磺胺异恶唑敏感和耐药 萘啶酸耐药 头孢噻吩/头孢唑林敏感
所有菌属 所有菌属 肠杆菌科 肠杆菌科
可被推测的抗菌药物药敏结果
所有β内酰胺类及与酶抑制剂复合药耐药
对多西环素、米诺环素敏感 罗红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、地红霉素敏感 和耐药 不产β内酰胺酶的肠球菌对阿莫西林、哌拉西林 及其与酶抑制剂的复合剂敏感和耐药 亚胺培南敏感 所有β内酰胺类及与酶抑制剂复合药敏感
8
32
8
32
16
128
2
8
1
4
4
16
2
16
头孢西丁
8
32
氨曲南
4
16
亚胺培南
1
4
厄他培南
0.5
2
环丙沙星
1
4
左氧氟沙星
2
8
阿米卡星
16
64
庆大霉素
4
16
妥布霉素
4
16
呋喃妥因
32
128
甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲恶唑
2
4
不能报告完整的
MIC检测范围
≤
≥
2
32
2/1
32/16
4/4
128/4
4
64
1
64
1
64
R
I
S
自动化仪器－微量稀释法，抗菌药
头孢他 啶
≤1 187 20
≥2 1
物不能任意选择
4
稀释法：检测最低抑菌浓度 （MIC）
S
I
R
头孢他啶 ≤4 8
≥1
6
GN13
阴 性 菌 药 敏 卡
药敏反应实验报告
一、实验目的1. 了解药敏试验的基本原理和操作流程。
2. 掌握最小抑菌浓度（MIC）的测定方法。
3. 分析细菌对不同抗菌药物的敏感性，为临床合理用药提供依据。
二、实验原理药敏试验是一种体外试验方法，用于检测细菌对特定抗菌药物的敏感性。
通过观察细菌在含有不同浓度抗菌药物的培养基中的生长情况，可以确定最小抑菌浓度（MIC），即抑制细菌生长的最低药物浓度。
根据CLSI标准，将细菌对药物的敏感性分为敏感、中介和耐药三种。
三、实验材料1. 菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等。
2. 抗菌药物：青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星等。
3. 培养基：MH肉汤、MH琼脂、MH培养基。
4. 仪器：恒温培养箱、微量移液器、无菌操作台、显微镜等。
四、实验方法1. 菌株培养：将待测菌株接种于MH肉汤培养基中，37℃培养24小时，备用。
2. 制备药敏纸片：将不同浓度的抗菌药物溶解于无菌生理盐水中，制成药敏纸片。
3. 点种细菌：将培养好的菌株用无菌棉签涂布于MH琼脂平板上，待菌落生长后，用无菌镊子将药敏纸片贴于平板表面。
4. 观察结果：将平板置于37℃恒温培养箱中培养24小时，观察细菌生长情况，记录抑菌圈直径。
5. MIC测定：将培养好的菌株用无菌生理盐水稀释至一定浓度，分别加入不同浓度的抗菌药物，观察细菌生长情况，记录抑制细菌生长的最低药物浓度。
五、实验结果与分析1. 金黄色葡萄球菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均敏感。
2. 大肠杆菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均耐药。
3. 肺炎克雷伯菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均中介。
六、讨论1. 药敏试验是临床合理用药的重要依据，通过测定细菌对药物的敏感性，可以指导临床医生选择合适的抗菌药物，避免滥用和误用。
2. 本实验结果显示，金黄色葡萄球菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均敏感，提示临床治疗金黄色葡萄球菌感染时，可以选择这些药物进行治疗。
ATP法体外药敏在晚期乳腺癌治疗中的临床意义的开题报告
ATP法体外药敏在晚期乳腺癌治疗中的临床意义的开题报
告
研究背景：
晚期乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤，常规的化疗和手术治疗已经不能满足患者的需求。
随着医学技术的不断进步，体外药敏技术已经成为晚期乳腺癌治疗中的一种新的手段，其可以在体外对患者的肿瘤细胞进行现代化的高通量筛选，选择最适合患者的化疗方案，能够更加精确地治疗患者。
研究目的：
本研究旨在探讨ATP法体外药敏在晚期乳腺癌治疗中的临床意义，以期为患者提供更加精准的治疗方案。
研究方法：
选取2016年1月至2021年1月在我们医院就诊并接受ATP法体外药敏治疗的晚期乳腺癌患者，对其进行回顾性分析。
收集患者的基本病史、临床资料、生化指标等，并分析患者治疗前后的治疗效果和生活质量等。
研究结果：
ATP法体外药敏在晚期乳腺癌治疗中可以提高治疗的精准度，降低不必要的化疗对患者身体的伤害，同时提高治疗效果并提高患者的生活质量。
研究结论：
ATP法体外药敏技术在晚期乳腺癌的治疗中具有很大的临床意义，可以为患者提供更加精准的治疗方案和更好的治疗效果。
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染料排斥实验
原理是细胞死亡后膜通透性增加，染
料通过细胞膜而使细胞着色，故通过 计数未着色细胞可计算出药物的杀伤 率。但由于某些受杀伤尚未死亡的细 胞也不易着色，故假阴性率较高。另 外在计数时主观的因素会出现较大的 误差，目前较少应用。
集落形成法
集落法(Human Tumor Cell Cloning Assay, HTCA）肿瘤组织由增殖和非增殖细胞组 成，其中仅有 1％具有旺盛的增殖能力， 是肿瘤浸润扩散和复发的根源。 这种细 胞具有形成细胞集落的能力,故又称为肿 瘤干细胞。 测定肿瘤干细胞对药物的敏 感性符合临床药物治疗的需要。
如何解决这些问题？
肿瘤化疗个体化 : 研究发现，根据药敏
检测结果指导选药，有效率可在原来固定 化疗方案的基础上提高一倍以上，于是提 出了肿瘤化疗个体化的概念 ( 即预见性化 疗)。根据个体肿瘤敏感性检测的结果，选 用敏感的药物的联合方案，无疑将会大大 提高肿瘤的治疗水平。
肿瘤药敏的可行性
七十年代细胞培养技术的突破，新型培 养材料、培养基的问世。 1983年Mosmann建立了MTT法，方法简便， 设备要求不高，检测时间短，便于在临 床上广泛开展。 新的抗癌药不断问世，同一种肿瘤有多 种联合化疗方案可供选择。
放射同位素法
3H的β射线能量低，分辨率高，半衰期长达
12年,3H标记胸腺嘧啶核苷(3HT同位素标记 的核苷酸容易掺入 DNA和RNA分子中 放射性同位素发灵 敏度高，重复性好。 时间短，可较快地 得到结果。
仪器设备要求高。 由于具有放射性，故 操作时需要一定的防 护措施。 废料需特别处理。
四唑蓝比色法（MTT法）
原理：活细胞内线粒体脱氢酶能将四甲基偶氮唑 盐转化为蓝紫色结晶物(formazan)，用二甲亚砜 （DMSO）溶解后，可在酶标仪上记录吸光度。 优点:1.操作简便，设备要求不高，时间短。 2.实验精确，重复性好，而且无主观人为 因素影响，临床符合率85％。 3.成功率高，约为80－90％
MTT法操作方法
用培养液调整细胞浓度为 1 × 10 5 /ml 后接 种于微量培养板，每孔 100 ，每组设三个平 行孔，加入100μl 含有化疗药的培养基,置 培养箱内培养 68 小时，加入 20 μl MTT 后再 培养4小时,吸弃上清，每孔加二甲亚砜 200μl,用微量震荡器震荡,使结晶产物充分 溶解，在自动酶标仪上比色，测出波长 570nm 处的吸光度，最后计算细胞杀伤活性。
集落形成法方法学
双层琼酯法：底层 加入0.5% 的琼脂培 养液, 上层加含肿 瘤细胞悬液的0.3 % 琼脂培养液。上层 培养液供肿瘤细胞 生长，下层防止细 胞贴壁及成纤维细 胞的过度生长。
玻璃毛细管法: 培养 基0.6ml，瘤细胞悬液 0.1ml,抗癌药0.1 ml, 1％琼脂糖0.2ml加在 一起混匀后向玻璃毛 细管内加入50μl，冷 却凝固后置37℃二氧 化碳培养箱内培养。
肿瘤化疗的局限性
肿瘤的化学治疗在半个世纪 以来，虽然取得显著进展，但临 床抗肿瘤药物治疗的总有效率并 不高，阻碍化学治疗取得更好疗 效的原因众多，主要包括：
1. 现行化疗的盲目性
抗肿瘤药物研究表明，即使是相同 组织学类型的肿瘤对同一抗肿瘤药物 的反应也并不尽一致，对不同脏器或 不同组织学类型的肿瘤采用相同的用 药方案，效果更是千差万别。目前大 多数化疗是采用的对某种脏器既定的 联合方案,仍有一定的盲目性。
集落形成法的优点
抑制纤维母细胞的增殖，不受肿瘤细胞 以外的细胞的影响。 下层滋养层可加入各种辅助分子，更利 于肿瘤的生长。 直接测定药物对肿瘤细胞中最活跃的成 分肿瘤干细胞的影响。
集落形成法的缺点
高纯度单细胞悬液的制备困难。 所形成的细胞集落并非都是肿瘤
细胞集落。 成功率低，有一定的难度。 培养周期长，需10天左右。
肿瘤药物敏感实验
化疗的重要性
自1946年Gillman和Phillip报道氮芥类 药物治疗造血系统肿瘤以来，化学治疗巳取 得很大的进步。目前化学治疗已使绒癌、恶 性淋巴瘤、睾丸精原细胞瘤、小细胞肺癌等 多种恶性肿瘤获得治愈的机会，大多数恶性 肿瘤能得到缓解，化疗在恶性肿瘤的治疗中 具有不可替代的地位。
肿瘤药敏的方法学
肿 瘤 细 胞 药 敏
体内法
裸鼠皮下移植 裸鼠肾包膜下移植 裸鼠原位移植 染料排斥法 集落形成法 同位素法 四唑蓝比色法
体外法
裸鼠肾包膜下移植
裸鼠肾包膜下移植实验是肿瘤细
胞药敏体内实验最常用的方法， 但由于裸鼠需要在无菌条件下饲 养，而且肾包膜下移植实验操作 复杂，实验周期长，不易在临床 广泛开展。
3HTdR掺入法
用培养液调整细胞浓度为1×105/ml。将 此浓度的细胞接种于微量培养板，每孔 100μl，每3孔为一组，加入100μl含有化 疗药的培养基，培养 52 小时，加入 20 μl 3HTdR, 实验结束后，吸弃上清，加入 0.3 ％ 胰蛋白酶消化细胞，用多头细胞收集器收 集细胞。最后用液体闪烁计数仪测定每分 钟脉冲数（CPM）值。
2.化学治疗的抗药性
有些肿瘤对某些药物存在先 天耐药,还有些肿瘤经化疗缓解， 肿瘤敏感株杀灭，耐药株成为 复发的根源，而且对以后的化 疗抵抗。
3. 抗癌药物的毒性
所有抗肿瘤药物在杀伤肿瘤细胞 的同时，也杀伤正常的组织细胞，尤 其是增殖旺盛的骨髓造血细胞和胃肠 道细胞。期望通过增大剂量、增加用 药品种、缩短间隔时间的方法来提高 抗癌效果，则将进一步加重毒性作用。
MTT法注意事项
血供丰富的肿瘤组织在制取肿瘤单细胞悬 液时，大量的红细胞影响测定，可用红细 胞裂解液裂解红细胞。 有色的抗癌药物对吸光度有影响，可用同 浓度的药物作为本底，去除药物的影响。 吸弃上清时要注意不要吸掉结晶物，一般 要先离心，板底留约30μl的培养基
谢 谢！