免疫荧光技术
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免疫荧光技术 常用实验类型
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免疫荧光技术在临床检验中的应用
一、细菌学方面
国内纪宝宏根据对854名不同对象的检查,证实麻风间接荧光抗体吸收 （FLA-ABS） 试验对发现麻风亚临床感染有较高的敏感性和特异性,免疫流行 病学调查如同时使用麻风菌素和FLA-ABS试验,可发现以后可能发展为多菌型 麻风的高危人群,即麻风菌素阴性,FLA-ABS阳性者。 庄玉辉用荧光抗休染色检查脑脊液(CSF)内结核菌，阳性率为28.30，而 抗酸染色法阳性率为18,9帕，后者较前者差。结果表明结核菌用荧光抗体检 查技术检查结脑者的CSF显示快速、敏感等优点，对结核性脑膜炎早期诊断 有意义。
6
二、真菌学方面
国内采用荧光染色：皮屑、甲屑、毛发等标本经20%KOH溶液处理后加少 量0.1%吖啶橙染液，盖以盖玻片，微微加温（脓、痰、尿、脊髓液或分泌物直 接涂片加少许1%吖啶橙染液加盖玻片），置荧光显微镜下观察菌丝或孢子的荧 光反应，阳性证明有真菌存在，但不能确定菌种。
7
三、寄生虫方面
国内1976年83118部队医院防疫所应用轻便荧光光源及吖啶橙染色检查疟原 虫。在荧光显微镜下，疟原虫及白细胞的核呈明亮的黄绿色荧光，疟原虫和淋巴 细胞的浆呈红色荧光，正常红细胞不着色。在暗绿色视野中，白细胞如夜空中的 明月一般，疟原虫的核象亮晶晶的星星，疟原虫的核浆与西蒙氏染色结果基本一 致，能清楚辨别环状体、滋养体、裂殖体各期。 国外Ckman LRR用可吮橙染色离心寄生虫快速诊断疟疾。疟原虫在紫外光 源下观察，核呈绿色(DNA ),胞质呈橙色(RNA)。
免疫荧光技术及其 在临床检验中的应用
胡诗帆 S132220001
免疫荧光技术又称荧光素标记技术，是指将免疫学方 法与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布 的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从 而可对抗原进行细胞定位。它是在免疫学、生物化学和显微 镜技术的基础上建立起来的一项技术。
8
四、免疫学方面
该领域应用较多的为间接荧光抗体法，如抗肾上腺皮质抗体、抗肝细胞膜抗
原自身抗体、抗胰岛细胞抗体，抗骨骼肌抗体、抗平滑肌抗体、抗线粒体抗体、 抗胃壁细胞抗体、抗肾小球基底膜抗体，抗组蛋白抗体，抗DNA抗体、抗核抗 体等。用该组织制作冷冻切片为底物片用异硫氰酸荧光素标记抗人IgG。
异硫氰酸荧光素(FITC)
Megakaryocytes with or without anti-megakaryocyte antibodies detected by indirect im-munofluorescent methnod
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36例SLE伴血小板减少患者中抗巨核细胞抗体阳 性者占7例(19. 4% ),30例血小板正常的SLE患者中有2 例(6.7%)，而30名正常人对照组中仅有1例(3.3% )， 后者与SLE伴患者血小板减少患者与正常人对照组相 比，差异有显著性。同时我们发现，在血小板减少和 血小板正常的SLE患者中抗巨核细胞抗体阳性病例在 幼稚巨核细胞分类中无差异(2.8%vs3.3%)。 本研究通过检测抗巨核细胞抗体，初步探讨了自 身抗巨核细胞抗体在SLE伴发血小板减少中的作用。
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谢谢！
免疫学方法
荧光标记技术
免疫荧光技术
2
免疫学方法：抗原抗体特异结合
荧光标记技术：利用一些能发射荧光的物质共价 结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上， 利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。
3
免疫荧光技术- 基本原理
免疫荧光技术是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与显 微示踪的准确性相结合。 以荧光素作为标记物，与已知的抗体(或抗原)结合、但 不影响其免疫学特性。然后将荧光素标记的抗体作为标准试 剂，用于检测和鉴定未知的抗原。 在荧光显微镜下，可以直接观察呈现特异荧光的抗原抗 体复合物及其存在部位。
10
间接免疫荧光检测 系统性红斑狼疮患者血清抗巨核细胞抗体
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一种累及 多系统、多脏器的自身免疫性疾病，血小板减少是SLE患者较常见的血液 系统表现之一。自身免疫因素被认为是引起血小板减少的主要原因。有 文献报道，抗血小板抗体、抗磷脂抗体等自身抗体可造成外周血中血小 板破坏或凝集，导致循环血小板减少。
11
抗巨核细胞抗体荧光检测方法
取出冷冻骨Hale Waihona Puke Baidu玻片
室温晾干
滴加PBS(PH7. 4 ) 10%兔血清封闭骨髓标本
加入待测血清样品
PBS洗涤
稀释的FITC兔抗人IgG抗体
30min
37℃避光
PBS洗涤
观察
5min
1:1的瑞氏染液+磷酸缓冲液
12
检测结果
13
A ：blank control B：case of negative anti-rnegakaryocyte antibody C:： case of positive antimegakaryocyte antibody
间接免疫荧光检测自身抗核抗体
9
五、肿病细胞及其它
翟春玺、张风菊研究表明，癌细胞胞浆中所含RNA较正常细胞显著增多 ，AO能与RNA结合成AO-RNA复合体，显红色荧光，RNA愈丰富其红色荧 光愈强。胞核所含的DNA较正常细胞显著增多，DNA与AU结合成AO-DNA 复合体，呈绿色荧光，同时DNA含量愈丰富，其绿色荧光愈强。核仁是RNA 成分，呈红色荧光，癌细胞可显示绿色胞核，红色核仁，新鲜深红色胞浆， 成为对照鲜明的荧光图象。 其它，免疫荧光法定量检查非妊娠血清的胎盘蛋白5单克隆抗休荧光抗体 优化试剂检测沙眼衣原体，应用双色荧光标记单克隆抗体和流式细胞计鉴定 移植肾组织的单个核细胞浸润，用荧光灶测定法快速诊断甲型和乙型流感病 毒，韦荣氏球菌以紫外线照射出现荧光。
免疫荧光技术 常用实验类型
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免疫荧光技术在临床检验中的应用
一、细菌学方面
国内纪宝宏根据对854名不同对象的检查,证实麻风间接荧光抗体吸收 （FLA-ABS） 试验对发现麻风亚临床感染有较高的敏感性和特异性,免疫流行 病学调查如同时使用麻风菌素和FLA-ABS试验,可发现以后可能发展为多菌型 麻风的高危人群,即麻风菌素阴性,FLA-ABS阳性者。 庄玉辉用荧光抗休染色检查脑脊液(CSF)内结核菌，阳性率为28.30，而 抗酸染色法阳性率为18,9帕，后者较前者差。结果表明结核菌用荧光抗体检 查技术检查结脑者的CSF显示快速、敏感等优点，对结核性脑膜炎早期诊断 有意义。
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二、真菌学方面
国内采用荧光染色：皮屑、甲屑、毛发等标本经20%KOH溶液处理后加少 量0.1%吖啶橙染液，盖以盖玻片，微微加温（脓、痰、尿、脊髓液或分泌物直 接涂片加少许1%吖啶橙染液加盖玻片），置荧光显微镜下观察菌丝或孢子的荧 光反应，阳性证明有真菌存在，但不能确定菌种。
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三、寄生虫方面
国内1976年83118部队医院防疫所应用轻便荧光光源及吖啶橙染色检查疟原 虫。在荧光显微镜下，疟原虫及白细胞的核呈明亮的黄绿色荧光，疟原虫和淋巴 细胞的浆呈红色荧光，正常红细胞不着色。在暗绿色视野中，白细胞如夜空中的 明月一般，疟原虫的核象亮晶晶的星星，疟原虫的核浆与西蒙氏染色结果基本一 致，能清楚辨别环状体、滋养体、裂殖体各期。 国外Ckman LRR用可吮橙染色离心寄生虫快速诊断疟疾。疟原虫在紫外光 源下观察，核呈绿色(DNA ),胞质呈橙色(RNA)。
免疫荧光技术及其 在临床检验中的应用
胡诗帆 S132220001
免疫荧光技术又称荧光素标记技术，是指将免疫学方 法与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布 的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从 而可对抗原进行细胞定位。它是在免疫学、生物化学和显微 镜技术的基础上建立起来的一项技术。
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四、免疫学方面
该领域应用较多的为间接荧光抗体法，如抗肾上腺皮质抗体、抗肝细胞膜抗
原自身抗体、抗胰岛细胞抗体，抗骨骼肌抗体、抗平滑肌抗体、抗线粒体抗体、 抗胃壁细胞抗体、抗肾小球基底膜抗体，抗组蛋白抗体，抗DNA抗体、抗核抗 体等。用该组织制作冷冻切片为底物片用异硫氰酸荧光素标记抗人IgG。
异硫氰酸荧光素(FITC)
Megakaryocytes with or without anti-megakaryocyte antibodies detected by indirect im-munofluorescent methnod
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36例SLE伴血小板减少患者中抗巨核细胞抗体阳 性者占7例(19. 4% ),30例血小板正常的SLE患者中有2 例(6.7%)，而30名正常人对照组中仅有1例(3.3% )， 后者与SLE伴患者血小板减少患者与正常人对照组相 比，差异有显著性。同时我们发现，在血小板减少和 血小板正常的SLE患者中抗巨核细胞抗体阳性病例在 幼稚巨核细胞分类中无差异(2.8%vs3.3%)。 本研究通过检测抗巨核细胞抗体，初步探讨了自 身抗巨核细胞抗体在SLE伴发血小板减少中的作用。
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谢谢！
免疫学方法
荧光标记技术
免疫荧光技术
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免疫学方法：抗原抗体特异结合
荧光标记技术：利用一些能发射荧光的物质共价 结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上， 利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。
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免疫荧光技术- 基本原理
免疫荧光技术是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与显 微示踪的准确性相结合。 以荧光素作为标记物，与已知的抗体(或抗原)结合、但 不影响其免疫学特性。然后将荧光素标记的抗体作为标准试 剂，用于检测和鉴定未知的抗原。 在荧光显微镜下，可以直接观察呈现特异荧光的抗原抗 体复合物及其存在部位。
10
间接免疫荧光检测 系统性红斑狼疮患者血清抗巨核细胞抗体
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一种累及 多系统、多脏器的自身免疫性疾病，血小板减少是SLE患者较常见的血液 系统表现之一。自身免疫因素被认为是引起血小板减少的主要原因。有 文献报道，抗血小板抗体、抗磷脂抗体等自身抗体可造成外周血中血小 板破坏或凝集，导致循环血小板减少。
11
抗巨核细胞抗体荧光检测方法
取出冷冻骨Hale Waihona Puke Baidu玻片
室温晾干
滴加PBS(PH7. 4 ) 10%兔血清封闭骨髓标本
加入待测血清样品
PBS洗涤
稀释的FITC兔抗人IgG抗体
30min
37℃避光
PBS洗涤
观察
5min
1:1的瑞氏染液+磷酸缓冲液
12
检测结果
13
A ：blank control B：case of negative anti-rnegakaryocyte antibody C:： case of positive antimegakaryocyte antibody
间接免疫荧光检测自身抗核抗体
9
五、肿病细胞及其它
翟春玺、张风菊研究表明，癌细胞胞浆中所含RNA较正常细胞显著增多 ，AO能与RNA结合成AO-RNA复合体，显红色荧光，RNA愈丰富其红色荧 光愈强。胞核所含的DNA较正常细胞显著增多，DNA与AU结合成AO-DNA 复合体，呈绿色荧光，同时DNA含量愈丰富，其绿色荧光愈强。核仁是RNA 成分，呈红色荧光，癌细胞可显示绿色胞核，红色核仁，新鲜深红色胞浆， 成为对照鲜明的荧光图象。 其它，免疫荧光法定量检查非妊娠血清的胎盘蛋白5单克隆抗休荧光抗体 优化试剂检测沙眼衣原体，应用双色荧光标记单克隆抗体和流式细胞计鉴定 移植肾组织的单个核细胞浸润，用荧光灶测定法快速诊断甲型和乙型流感病 毒，韦荣氏球菌以紫外线照射出现荧光。