蛋白质分离技术1
人教版高中生物选修一专题五《DNA和蛋白质技术》知识点归纳
专题五ＤＮＡ和蛋白质技术课题一ＤＮＡ的粗提取与鉴定一、提取DNA的溶解性原理包括哪些方面？1.DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精。
①DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度有何特点？要使DNA溶解，需要使用什么浓度？要使DNA析出，又需要使用什么浓度？在0.14mol/L时溶解度最小；较高浓度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。
②在溶解细胞中的DNA时，人们通常选用2mol/LNaCl溶液；将DNA分子析出的方法是向溶有DNA的NaCl溶液中缓慢注入蒸馏水，以稀释NaCl溶液。
酒精是一种常用有机溶剂，但DNA却不能溶于酒精（特别是95％冷却酒精），但细胞中蛋白质可溶于酒精。
2.从理论上分析，预冷的乙醇溶液具有以下优点。
一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；二是降低分子运动，易于形成沉淀析出；三是低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。
3.采用DNA不溶于酒精的原理，可以达到什么目的？将DNA和蛋白质进一步分离。
4.提取DNA还可以利用DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理。
利用该原理时，应选用怎样的酶和怎样的温度值？蛋白酶，因为酶具有专一性，蛋白酶只水解蛋白质而不会对DNA产生影响。
温度值为60～80℃，因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。
补充：DNA的变性是指DNA分子在高温下解螺旋，其温度在80℃以上，如在PCR技术中DNA变性温度在95℃。
5.洗涤剂在提取DNA中有何作用？洗涤剂将细胞膜上的蛋白质，从而瓦解细胞膜。
6.当鉴定提取出的物质是否是DNA时，需要使用什么指示剂进行鉴定？在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色。
原理总结：通过利用不同浓度NaCl溶液溶解或析出DNA，可以从细胞中提取和提纯DNA；再利用酒精进一步将DNA与蛋白质分离开来，达到提纯的目的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是DNA。
二、实验材料的选取不同生物的组织中DNA含量不同。
1 m naoh洗脱蛋白
1 m NaOH 是一种浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液，通常用于蛋白质的洗脱。
在蛋白质的分离和纯化过程中，有时需要使用洗脱剂来将目标蛋白质从结合剂上洗脱下来。
而1 m NaOH常常被用作洗脱剂，其原理是利用NaOH的碱性性质来中和结合剂上与目标蛋白质结合的酸性基团，从而将目标蛋白质从结合剂上解离下来。
使用1 m NaOH进行洗脱时，需要注意控制好洗脱条件，如洗脱液的流速、洗脱液的温度和洗脱液的浓度等。
同时，也需要注意保护目标蛋白质的生物活性，避免在洗脱过程中造成蛋白质的变性或失活。
以上内容仅供参考，建议查阅关于蛋白质分离和纯化的专业书籍或咨询专业人士，获取更准确的信息。
拟南芥总蛋白提取
河北经贸大学毕业论文拟南芥蛋白不同提取方法的SDS—PAGE凝胶电泳分析专业名称：生物技术班级：2003 02学生姓名：***指导教师：**完成时间：2007年6月河北经贸大学毕业论文摘要植物蛋白提取方法有很多种，不论使用哪一种方法，均必须在操作中保存生物大分子结构的完整性，保存活性防止变性及降解现象的发生。
因蛋白空间结构主要依靠氢键、盐键和范德华力的存在，遇酸、遇碱、高温、剧烈的机械作用及强烈的辐射等均可导致活性丧失，因此选择的条件应为十分温和。
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术作为分离鉴定生物大分子的一种实验技术手段，已经成为分子生物学实验室中的重要技术之一。
本试验采用三种不同的方法（两种蛋白溶解法，一种蛋白沉淀法）分别提取拟南芥不同组织（拟南芥整个植株，拟南芥叶片，拟南芥愈伤组织）的蛋白，然后用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行电泳分析，通过分析凝胶电泳图谱比较分析不同提取液提取蛋白的效果优劣从而确定较好的蛋白提取法，以及拟南芥植株不同组织含有的不同蛋白。
实验结果表明提取液2提取蛋白的效果最好，电泳条带最清楚，提取液3即三氯乙酸丙酮次之，提取液1即PBS溶液最次；并且拟南芥总蛋白跑的电泳谱带最多且最清晰，叶片蛋白谱带最少且较模糊，说明植物各组织的蛋白含量与种类存在差异，这与其功能性质具有相关性，叶片电泳谱带少说明叶片蛋白只含有总蛋白的一部分，由于根部蛋白受培养基中的琼脂的影响而出现一条粗带。
另外，本实验采取了快速脱色和脱色液脱色两种不同的脱色法，结果表明快速脱色法不仅简单方便效果更好适于推广致用。
关键词SDS-PAGE电泳；拟南芥蛋白；蛋白质分析I河北经贸大学毕业论文AbstractThere are many methods of the withdrawtion of the plant proteins, no matter any method, it must preserve the biology macromolecular structure to be integrity in the operation, preserve activity to prevent the degradation and degeneration phenomenon. Space for protein structure mainly rely on hydrogen bonding, salt bonding and the Vander Waals bonding, the existence of the event acid, alkali treatment, high temperature, Mechanical dramatic role and strong radiation can lead to the loss of activity, it should choose the conditions for the very modest. SDS-PAGE as the isolation and identification of biological macromolecules in one of laboratory means, it has become one of the important laboratory technique in Molecular biology.This experiment uses three different methods (two methods are proteins todissolve solution, one method is protein precipitation) withdraws the tissues, protein of Arabidopsis thaliana ( all the protein of Arabidopsis thaliana, the leaf protein of Arabidopsis thaliana, the injuries tissue protein of Arabidopsis thaliana),and then the protein atlas in different tissues and organs of Arabidopsis thaliana were analyzed with SDS polyacrylamidegel, and then, through the analysis of the SDS-PAGE picture we can analysis the different extract buffer and the different protein of the different organizations.Finally, the results indicate that the best method is extract buffer 2 —the SDS-PAGE picture is the clearest, the extract buffer 3 that is the trichloroacetic acid acetone next, the last is the extract buffer 1 which is PBS. The kinds of protein in the whole Arabidopsis thaliana were most and clearest in these three tissues, the kinds of protein in the leaf were least, this phenomenon can be explained by that the protein's content and the protein's type are different, this indicates that the number of the strip belt band has the relevance with the function nature, the phenomenon that the number of the leaf protein is the least indicate that the content and type of the leaf protein are only a part of the whole protein of Arabidopsis thaliana; as aII河北经贸大学毕业论文result of that the culture medium has influence with the root protein, the picture of the whole protein has a thick belt. In addition, this experiment takes two different bleaching methods, one is rapid bleaching, the other is bleaching liquid, the result shows that the rapid bleaching method not only simple and convenient, but also have a better effect, so we can use it extensively.Keywords SDS-PAGE electrophoresis; Arabidopsis thaliana protein; The protein analysisIII河北经贸大学毕业论文目录1 引言 (1)1.1拟南芥简介 (1)1.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (2)1.3拟南芥蛋白提取 (3)1.4实验研究的意义 (3)1.5展望 (4)2材料、主要试剂及主要仪器 (4)2.1实验材料 (4)2.1.1拟南芥培养 (4)2.1.2培养拟南芥愈伤组织 (4)2.2主要试剂及药品 (5)2.2.1溶液的配置 (5)2.2.2所用主要药品和试剂 (7)2.3 主要仪器 (8)3实验方法 (8)3.1样品蛋白的制备——蛋白质的提取 (8)3.1.1提取液1、2和水提取蛋白 (8)3.1.2提取液3提取蛋白 (9)3.1.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (9)4结果与分析 (10)4.1不同方法提取拟南芥不同组织蛋白的效果比较分析 (10)4.2丙酮法提取蛋白与其它提取法的比较 (11)4.3拟南芥蛋白分子量分析 (13)5讨论 (13)5.1金属离子螯合剂在蛋白提取中起重要作用 (13)5.2关于谱带倾斜现象 (13)5.3关于拟南芥各组织蛋白 (13)5.4染色、脱色 (14)6结论 (15)参考文献 (16)致谢 (18)1河北经贸大学毕业论文拟南芥蛋白不同提取方法的SDS—PAGE凝胶电泳分析1 引言1.1 拟南芥简介拟南芥（Arabidopsis thaliana）十字花科。
高中生物苏教版选修三课件第一章第三节蛋白质工程
(4)治癌酶的改造：癌症的基因治疗分两个方面：药物作用于 癌细胞，特异性地抑制或杀死癌细胞；药物保护正常细胞免受化 学药物的侵害，可以提高化学治疗的剂量。通过改造治疗癌症的 酶，能够达到更好的治疗效果。
(5)嵌合抗体和人缘化抗体：通过蛋白质工程对抗体进行改 造，增强机体的免疫力。
以对概念的比较分析为依据，考查基 因工程和蛋白质工程的异同
蛋白质工程的应用
1．提高酶的热稳定性 方法一：将酶分子中的天__门__冬__酰__胺__和_谷__氨__酰__胺__转变为其他 氨基酸。 方法二：在蛋白质分子中引入_二__硫__键__。
2．生物工程制药 (1)实例1：鼠源杂交瘤抗体的改造。 ①改造方法：在_基__因__水平上对抗体进行重组，产生人恒定区 和鼠可变区嵌合抗体。 ②结果：对人体的不良反应_减__少__。 (2)实例2：对t-PA的改造。 ①t-PA功能：溶解_血__栓__块__，医治心肌梗死等疾病。 ②改造方法：将t-PA分子中的天门冬酰胺替换为_谷__氨__酰__胺__。 ③结果：t-PA在_血__液__循__环__中停留时间_大__大__延__长__，疗效更加 显著。
改善蛋白质的性质和功能
1．对天然蛋白质进行改造，是通过直接对蛋白质分子进行 操作来实现的吗？
提示：不是，由于基因决定蛋白质，因此要对蛋白质的结构 进行设计改造，最终必须通过改造基因来完成。
2．蛋白质工程操作程序的基本思路与基因工程有什么不同？ 提示：基因工程是按照中心法则进行的：基因→表达(转录和 翻译)→形成氨基酸序列的多肽链→形成具有高级结构的蛋白质→ 行使生物功能，基本上是生产出自然界已有的蛋白质。蛋白质工 程却与之相反，一般是先创造出适合人类需求的新基因，然后使 其表达出具有特定结构和功能的蛋白质。蛋白质工程可以创造出 自然界不存在的蛋白质。
实验一、血液标本提取DNA(蛋白酶K-酚抽提法)
实验一、血液标本提取DNA（蛋白酶K-酚抽提法）一、实验原理离心分离到外周血的白细胞层；用细胞裂解液溶解细胞膜、核膜，使组蛋白与DNA分离，再用酚、三氯甲烷/异戊醇抽提去除蛋白质，最后经乙醇沉淀即可得到基因组DNA片段。
二、实验步骤：1、血液标本处理 1.0ml抗凝全血(ACD、EDTA抗凝均可)2000rpm离心10min（1.5mlEP管）。
轻轻去上清液（血浆），吸出淡黄色悬浮液（白细胞层）置于另一2.0mlEP管中。
（约50μl）2、细胞裂解加入10倍体积组织细胞裂解液，37℃1h，3、加入蛋白酶K消化加入蛋白酶K至终浓度100μg/ml（约4μl），充分混匀，37℃震荡12-24h或37℃1h后，56℃水浴3h。
保温过程中不时摇动，混匀反应液。
液体逐渐变粘稠，表明已有DNA释放出来，操作应轻柔。
4、酚抽提：将上述溶液冷却至室温，加等体积的Tris饱和酚（pH8.0）溶液，温和缓慢颠倒离心管10min，混匀两相成乳液。
12000rpm 5分钟，两相分层。
用宽口径移液管小心吸出上层粘稠的水相，移至一新的2.0mlEP管中。
（小心一点，不要吸入蛋白层。
如交界处有白色沉淀，需重新抽提有机相，用酚重新抽提两次，合并水相）5、三氯甲烷/异戊醇抽提上清液加等体积三氯甲烷：异戊醇（24：1），倒转混匀10分钟，12000rpm5分钟，取上层水相0.5ml入另一新的2.0mlEP管；6、DNA沉淀上清液中加0.2倍体积3.0mol/L 醋酸钠，再加2倍体积的4℃冰箱冷却后的无水乙醇，轻柔振摇，充分混匀；应可看到白色絮状物（DNA）。
12000rpm 5分钟，弃上清液；7、纯化：加1ml 70%乙醇洗涤，12000rpm 离心5分钟，去上清夜，重复1次；（此过程不得振荡摇动）8、溶解：弃上清液后，自然干燥（挥发痕量乙醇）后，用30μl pH8.0TE完全溶解，保存在-20℃备用。
三、注意事项1、加样准确，操作轻柔；微量加样器绝对不能超过最大量程；2、加酚试剂时，不要接触到皮肤上，有腐蚀性；如不小心弄到，立即用清水冲洗；3、取上清液时，不可吸到下层溶液；4、加TE液后轻摇10min溶解DNA或-4˚C保存待用。
高中生物选修一血红蛋白的提取和分离(2)
第5．3 血红蛋白的提取和分离【学习目标】凝胶色谱法的原理和方法样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填【基础知识预习】1．凝胶色谱法凝胶色谱法也称做，是根据分离蛋白质的有效方法。
凝胶实际上是一些由构成的多孔球体，在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量较小的蛋白质进入凝胶内部的通道，路程，移动速度；而相对分子质量的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速度。
相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。
2．缓冲溶液缓冲溶液的作用是。
缓冲溶液通常由溶解于水中配制而成的。
生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，例如：血浆的pH是，要在实验条件下准确模拟生物体内的过程，必须保持体外的pH与体内的基本一致。
3．电泳电泳是指。
许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上。
在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷的电极移动。
电泳利用了待分离样品中各分子以及分子本身的、的不同，使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。
两种常用的电泳方法是和，在测定蛋白质分子量时通常使用。
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于以及等因素。
4．蛋白质的提取和分离蛋白质的提取和分离一般分为四步：、、和。
【教学过程】【课题背景】：新华网首尔１２月２９日电（记者干玉兰）韩国浦项工业大学科学家２９日宣布，他们已查明可抑制艾滋病病毒感染的“ＴＲＩＭ５”蛋白质核心部分的结构。
浦项工业大学生物科学系教授吴秉夏等人，当天公开了“ＴＲＩＭ５”蛋白质内核心部分“Ｂ３０．２／ＳＰＲＹ”的三维分子结构，并称已弄清楚这一结构的正确位置及它与其他结构之间的相互作用。
研究成果发表在最新一期《分子细胞》杂志上。
2００４年英国《自然》杂志曾刊登论文说，“ＴＲＩＭ５”蛋白质可有效抑制艾滋病病毒的感染。
此后，世界各地的很多科学家开始研究“ＴＲＩＭ５”蛋白质的结构，但到目前为止尚未有人宣称取得突破性进展。
细菌总蛋白的提取方法
细菌总蛋白和膜蛋白提取方法一、从新鲜样品中提取总蛋白（简易法）1、自配裂解液（pH ）：50 mM Tris-HCl，2 mM EDTA, 100 mM NaCl，% Triton X-100，调pH 值至备用；用前加入100 μg/ml 溶菌酶，1μl/ml 的蛋白酶抑制剂PMSF。
该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g湿菌体。
2、将40ml 菌液在12000g，4℃下离心15分钟收集菌体，沉淀用PBS悬浮洗涤2遍，沉淀加入1ml裂解液悬浮菌体。
3、超声粉碎，采用300w，10s超声/10s间隔，超声20min，反复冻融超声3次至菌液变清或者变色。
4、1000g离心去掉大碎片，上清可直接变性后PAGE电泳检测，或者用1% SDS溶液透析后冻存。
缺点：Western blotting结果表明，疏水性跨膜蛋白提取效率有限。
二、从Trizol裂解液中分离总蛋白1、Trizol溶解的样品研磨破碎后，加氯仿分层，2-8℃下10000g离心15min，上层水相用于RNA提取，体积约为总体积的60%。
2、用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。
每使用1ml Trizol加入无水乙醇混匀，室温放置3min，2-8℃不超过2000g离心5min。
3、将上清移至新的EP管中，用异丙醇沉淀蛋白质。
每使用1ml Trizol加入异丙醇，室温放置10min，2-8℃下12000g离心10min，弃上清。
4、用含有0.3M 盐酸胍的95%乙醇洗涤。
每1ml Trizol加入2ml洗液，室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清，重复洗涤2次。
最后加入2ml无水乙醇，涡旋后室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清。
5、冷冻干燥5-10min，1%SDS溶液溶解，反复吹打，50℃温浴使其完全溶解，2-8℃下10000g 离心10min去除不溶物。
6、替代方案：将3中的酚醇上清液移至小分子量透析袋中，在2-8℃的1% SDS溶液中透析3次，1000g离心10min去除沉淀，上清可直接用于蛋白实验。
实验一鸡卵类粘蛋白的分离与纯化(共23张PPT)
鸡卵类黏蛋白纯品的制备
【操作步骤】
1)量取已处理的DEAE-纤维素50 mL，用60 mL pH 6.5 磷酸盐缓冲液浸泡约15mim，脱气。
2）装柱 将脱气后的DEAE-纤维素装入柱内。用pH 6.5 磷酸盐缓冲液平衡，流出液在核酸蛋白质检测仪上绘出稳定 的基线即可加样。
鸡卵类黏蛋白纯品的制备
2）装柱 将柱子垂直地安装好，关闭层析柱出水口，
将脱气后的凝胶缓缓地倒进柱内，使之自然沉降。
凝胶层析对鸡卵类黏蛋白提取液的纯化
3）平衡 打开核酸蛋白检测仪、记录仪电源，将柱出
水口与核酸蛋白检测仪比色池进液口相连，开启柱口下夹 子，用约2倍体积的pH6.5磷酸盐缓冲液平衡。直至流出液 在蛋白检测仪上绘出稳定的基线。
8)倾去上清，浑浊液转到离心管内，于 3500r/min 离 心10min , 沉淀抽真空干燥，即可得到透明胶状物－鸡 卵类粘蛋白。
实验结果与数据处理
1)鸡卵类粘蛋白（mg/mL）= —A—280—×稀—释—倍—数— 2)鸡卵类粘蛋白的产率（mg/mL）=100mL鸡蛋清得 到鸡卵粘蛋白的mg数。
鸡卵类黏蛋白的提取
2) 4h后, 3000r/min离心10min 。收集上清液，再 用滤纸过滤，除去上清液中脂类物质及其它不溶物。
滤液量体积，转入500 mL烧杯内，缓慢加入3倍体积冷 丙酮，搅匀，用塑料薄膜封严，置冰箱放置2h。
鸡卵类黏蛋白的提取
3)小心虹吸出部分上清液，剩余部分全部转移到离心管
里，经平衡后以3500r/min 离心10min，弃清液，沉淀 初步提取得到的鸡卵类粘蛋白，经DEAE-纤维素离子交换柱进一步纯化，可除去少量的杂蛋白。
凝胶层析对鸡卵类黏蛋白提取液的纯化 1）凝胶的处理 量取100mL Sephadex G-25凝胶，加入200mL磷酸盐缓冲液，沸水浴中1h。 选择性沉淀法从鸡蛋清中提取鸡卵类黏蛋白；
生物分离工程实验-实验一
六、注意事项
5、实验过程中一定要记得测定A、B两管的下层水相的体积！ 6、测定吸光值时，注意一定要将溶液装到比色皿高度的2/3左右，不得低
2）原液B （1mg/ml）分别取0.5、1、2、3、4、5ml，用 0.1MKCl的水溶液（pH 7.2）稀释至5ml，配成0.1、 0.2、 0.4、 0.6、 0.8,、1.0mg/ml的溶液，以稀释液为空白对照， 其他操作同上。
பைடு நூலகம்
五 结果与计算
1、原液A和原液B分别以吸光度值A为纵坐标，牛血清蛋白 量（ mg/ml ）为横坐标作标准曲线图，线性回归，求直线 方程和R2。
2、测吸光度值时，若要进行稀释，则需用相应A原液所用的缓冲液稀释A原 液的水相，用B原液缓冲液稀释B原液的水相。
3、紫外分光光度计：必须使用石英比色皿
4.1、原液A操作中，离心完成后，会形成一种上相油层、中间白色乳浊液层、 下层水相的状态，而且下层水相体积很小，测定该下层溶液光度值时，可以 采用医用针筒抽取出来，并记下其总体积，若针筒长度不够，可以剪去针筒 外端两个突起再吸；然后吸出其水相到干净试管中（注意不要吸入乳浊 液！），并确定其吸出体积， 用0.1MKCl的乙酸-乙酸钠缓冲液稀释到5ml （计算其稀释倍数），在280nm下测吸光值。
3）KCl ：防止水相乳化，影响萃取物与亲水头部的作用力， 离子浓度越大，萃取率越小。同时影响反胶束的大小。
四、 实验操作
1、萃取：在两只50mL离心管中分别加入10ml原液A和原液B，再分别加 入10ml反胶束相溶液，在旋涡混合器上充分混合5min，达到萃取平衡。
第二节蛋白质一级结构的测定方法
蛋白质序列测定的基本战略和步骤
一 蛋白质序列测序的基本战略 1、直接法（测蛋白质的序列） 对于一个纯蛋白质，理想方法是从N端直接测至C端，
但目前只能测60个N端氨基酸。 2、间接法（测核酸序列推断氨基酸序列） 蛋白质化学家收集的一个蛋白质资料库（database or
各种氨基酸侧链基团的性质对于氨基酸与离子交 换树脂，结合的情况有相当复杂的影响。在氨基酸自 动分析仪的记录上可以看出：天冬氨酸（pI为2.98） 最先随洗脱液下来，赖氨酸（pI为9.74）最后下来， 三个中性氨基酸如:甘氨酸（pI为5.97）、苏氨酸 （pI为6.53）和亮氨酸（pI为5.98）洗脱的顺序又如 何呢? 苏氨酸应当带有较多的正电荷，与树脂结合比 较紧，不易被洗脱下来，但是由于羟基具有极性，减 弱了树脂对氨基酸的吸引力。所以反而比甘氨酸和亮 氨酸后被洗脱下来。甘氨酸和亮氨酸相比，亮氨酸侧 链疏水性强，与树脂结合紧，后甘氨酸被洗脱下来。
（2）C-末端分析
A.肼解法
无水肼NH2NH2 100℃ 5-10h。 苯甲醛沉淀氨基酸的酰肼，C端游离氨基酸 留在上清中。 Gln（谷氨酰胺）、Asn（天冬酰胺）、 Cys（半胱氨酸）、Arg（精氨酸）不能产 生游离的羧基末端aa。
（2）C-末端分析 B.羧肽酶水解法
羧肽酶可以专一性地水解羧基末端氨基酸。根 据酶解的专一性不同，可区分为羧肽酶A、B和C。 应用羧肽酶测定末端时，需要事先进行酶的动力学 实验，以便选择合适的酶浓度及反应时间，使释放 出的氨基酸主要是C末端氨基酸。
氨肽酶法
氨肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽链 的N-端逐个的向里水解。根据不同的反应 时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和 数量，按反应时间和氨基酸残基释放量作 动力学曲线，从而知道蛋白质的N-末端残 基顺序。