蛋白质分离技术
蛋白质分离与纯化技术的原理及方法
蛋白质分离与纯化技术的原理及方法蛋白质是生物体内重要的基本分子组成，对于维持正常生命活动和疾病诊断都具有重要的意义。
但是，大多数蛋白质在生物体内含量非常低，而其他非蛋白质物质影响蛋白质的检测和分离，因此需要分离和纯化。
本文将详细介绍蛋白质分离与纯化技术。
一、蛋白质分离技术的原理蛋白质分离技术是指根据生物分子的特异性，将混合的蛋白质样品分离为纯度高的蛋白质样品的一种技术。
蛋白质分离技术主要基于蛋白质之间不同的特异性，如不同蛋白质之间的分子量、等电点、亲和性、化学性质等。
目前，常用的蛋白质分离技术包括血凝素亲和层析，酸碱沉淀，凝胶过滤层析，离子交换层析等。
在这些技术中，用于分离纯化特定蛋白质的介质通常都是指具有某种亲和性的化合物。
例如，离子交换层析的介质是酰胺基结构化支链多孔聚合物，允许基于蛋白质的带电性进行区分和分离。
二、蛋白质纯化技术的原理在蛋白质的分离基础上，蛋白质纯化技术是指将分离出来的蛋白质再次通过特殊的操作方法，使蛋白质纯度相对较高，以获取更精确的蛋白质信息。
纯化方法的选择和分离方法的选择有关。
一般而言，蛋白质分离后，样品中常常含有一定的杂质。
因此，在纯化前应该清洁样品。
清洁样品的方法可以是简单的酸洗化或钠氢硝酸纯化。
为了获得高纯度的蛋白质，需要使用更高效的纯化方法，如离子交换，凝胶过滤，凝胶电泳等。
除此之外，还有一些高端的纯化技术如傅立叶红外显微光谱（FTIR），二维蛋白质凝胶电泳，蛋白质结构分析和序列识别等。
这些纯化技术在制备高纯度蛋白质样品中都有广泛的应用。
三、蛋白质分离和纯化的方法（一）离子交换层析技术离子交换是分离和分析离子化合物的一种方法，其原理是根据样品分子溶液里的离子性质（酸性或碱性）将蛋白质通过介质分离。
离子交换层析主要分为阴离子交换（AEC）和阳离子交换（CEC）两种，每种层析介质都包括两种类型的树脂：强的交换树脂（强酸性或强碱性）和弱的交换树脂。
强交换树脂具有极高的层析能力和选择性，但有时会在操作中造成带电蛋白质的不良堵塞。
蛋白质的分离纯化
蛋白质的分离纯化蛋白质是生命体中最基本的分子之一，它在细胞内发挥着重要的功能。
由于蛋白质的复杂性和多样性，研究人员通常需要从复杂的混合物中分离和纯化蛋白质。
蛋白质的分离纯化是生物化学和生物技术领域中非常重要的一项工作，它为我们深入研究蛋白质的结构和功能提供了必要的条件。
蛋白质的分离纯化可以通过多种不同的方法实现，这些方法包括离心法、凝胶过滤法、电泳法、层析法等。
在选择合适的方法时，研究人员需要考虑到蛋白质的特性以及实验的要求。
离心法是最常用的分离方法之一，在离心过程中，通过调整离心力和离心时间，可以实现不同密度的蛋白质的分层。
这种方法适用于分离大分子量的蛋白质。
凝胶过滤法是利用孔径不同的凝胶将蛋白质分离开来。
通常使用的凝胶有琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶，这些凝胶具有不同的孔径，可以根据蛋白质的分子量选择合适的凝胶进行分离。
电泳法是基于蛋白质的电荷和分子量差异而进行分离的方法。
最常用的电泳方法是SDS-PAGE电泳，通过使用SDS（十二烷基硫酸钠）对蛋白质进行解性和蛋白质间的形成复合物，使得蛋白质在电泳过程中仅仅受到电场力的影响，从而实现蛋白质的分离。
层析法是一种利用物质在载体上的分配和吸附性质进行分离的方法。
常见的层析方法有凝胶层析、亲和层析、离子交换层析等。
凝胶层析是通过利用载体颗粒的孔径进行分离，亲和层析是将特定配体固定在载体上，与目标蛋白质结合，从而实现分离，而离子交换层析是利用载体表面电荷与目标蛋白质的电荷相互作用进行分离。
在进行蛋白质的分离纯化时，需要注意以下几个关键步骤。
首先是样品制备，通常样品要经过细胞破碎、蛋白质提取等步骤，使得目标蛋白质从复杂的混合物中提取出来。
其次是样品的处理，包括去除杂质、调整蛋白质的溶液环境等。
然后是选择合适的分离方法，根据蛋白质的特性和实验要求来确定最适合的方法。
最后是纯化过程中的监测和分析，通过使用各种蛋白质分析方法，如SDS-PAGE、Western blot等，来确定目标蛋白质的纯化程度和鉴定其存在。
蛋白质相分离
蛋白质相分离引言蛋白质相分离是一种重要的实验技术，用于分离和纯化蛋白质混合物中的不同成分。
本文将探讨蛋白质相分离的原理、方法和应用。
蛋白质相分离的原理蛋白质相分离的原理基于蛋白质在不同条件下的物化性质差异。
蛋白质的物化性质包括分子质量、溶解度、电荷、极性等。
在蛋白质相分离实验中，通过调节条件，如pH值、温度、离子浓度等，可以使目标蛋白质与其他成分分离，达到纯化的目的。
蛋白质相分离的方法1. 过滤法过滤法是蛋白质相分离中最常用的方法之一。
通过选择合适的孔径的滤膜，可以将不同分子质量的蛋白质分离。
较大分子质量的蛋白质无法通过滤膜，而较小分子质量的蛋白质则可以通过滤膜，从而实现分离。
2. 凝胶电泳凝胶电泳是一种基于蛋白质电荷和分子质量差异的相分离方法。
通常使用聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶作为分离介质。
在电场作用下，根据蛋白质电荷的不同，蛋白质会在凝胶上形成不同的带状区域，实现分离。
3. 离子交换层析离子交换层析是一种基于蛋白质电荷差异的相分离方法。
根据蛋白质的净电荷，在带有电荷的离子交换树脂上进行吸附和洗脱实现蛋白质分离。
4. 亲和层析亲和层析是一种基于蛋白质与亲和剂之间的特异性相互作用的相分离方法。
通过将亲和剂固定在固定相上，然后将蛋白质混合物通过，蛋白质与亲和剂结合，其它成分可被洗脱，实现蛋白质的纯化。
蛋白质相分离的应用1. 生物医学研究蛋白质相分离是生物医学研究中不可或缺的技术。
通过分离纯化蛋白质，可以研究蛋白质的结构、功能和相互作用。
同时，蛋白质相分离也有助于发现新的生物标志物，用于疾病的诊断和治疗。
2. 药物研发蛋白质相分离在药物研发中起着重要的作用。
药物研发过程中需要纯化目标蛋白质，以进行活性检测、结构研究等。
通过蛋白质相分离技术，可以有效地提高药物研发的效率和成功率。
3. 食品工业蛋白质相分离也在食品工业中得到广泛应用。
通过蛋白质相分离技术，可以从原料中纯化蛋白质，用于食品的功能性增强和改良。
根据分子大小分离蛋白质的方法
根据分子大小分离蛋白质的方法蛋白质是生命体中非常重要的分子，它们在细胞的结构和功能中起着关键作用。
为了研究蛋白质的特性和功能，科学家们经常需要对蛋白质进行分离和纯化。
分离蛋白质的一个重要方法是根据蛋白质的分子大小进行分离。
本文将介绍几种常用的根据分子大小分离蛋白质的方法。
一、凝胶过滤层析法凝胶过滤层析法是一种基于分子大小的常用分离技术。
其原理是利用孔径大小不同的凝胶材料，将大分子蛋白质滞留在凝胶中，而小分子溶质可以顺利通过凝胶。
常用的凝胶材料有琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶等。
根据需要选择不同的凝胶孔径，可以实现对不同分子大小的蛋白质进行分离。
二、聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的蛋白质分离技术。
它利用电场作用将蛋白质分子按照大小进行分离。
在聚丙烯酰胺凝胶中，较大的蛋白质分子迁移速度较慢，而较小的蛋白质分子迁移速度较快。
通过调整电场强度和时间，可以实现对不同分子大小的蛋白质进行分离。
三、尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的变性凝胶电泳方法。
尿素是一种强变性剂，可以使蛋白质分子解离成单体，并且具有较好的可溶性。
在尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳中，蛋白质分子的迁移速度主要取决于它们的电荷和分子大小。
通过调整电场强度和时间，可以实现对不同分子大小的蛋白质进行分离。
四、尺寸排阻色谱尺寸排阻色谱是一种利用固定相孔径大小进行分离的色谱技术。
在尺寸排阻色谱中，较大的蛋白质分子无法进入固定相孔径，因此会以较快的速度从色谱柱中洗脱，而较小的蛋白质分子则会在固定相中发生多次扩散，从而保留更长的时间。
通过调整固定相的孔径，可以实现对不同分子大小的蛋白质进行分离。
五、离心过滤法离心过滤法是一种简便快速的蛋白质分离方法。
它利用离心力将大分子蛋白质沉淀在滤膜上，而小分子蛋白质则通过滤膜被洗脱出来。
通过选择不同孔径的滤膜，可以实现对不同分子大小的蛋白质进行分离。
根据分子大小分离蛋白质的方法有凝胶过滤层析法、聚丙烯酰胺凝胶电泳、尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳、尺寸排阻色谱和离心过滤法等。
蛋白质的分离和纯化技术
蛋白质的分离和纯化技术蛋白质是生命活动的重要组成部分，广泛存在于个体组织中，参与细胞各方面生理过程。
蛋白质的研究对于生命科学领域的发展有着极为重要的作用。
然而，对于蛋白质的分离与纯化技术，科学家们远非游刃有余。
因此，本文将深入探究蛋白质的分离与纯化技术。
一、蛋白质的分离技术蛋白质的分离技术是指将蛋白质分离出不同的组成分。
这一技术对于深入理解蛋白质的结构与性质具有至关重要的意义。
在蛋白质的分离技术中，一般采用以下几种方法。
1. 色谱法色谱法是一种常用的蛋白质分离技术。
该技术利用分子在色谱柱内路程的长短及其与固定相的亲疏性不同进行分离。
色谱法的种类繁多，包括离子交换色谱、凝胶过滤色谱、逆相色谱等等。
其中，离子交换色谱是一种常用的技术，其原理是利用带电离子在固定相和流动相之间的移动，实现蛋白质分离。
2. 应用电泳法电泳法是一种通过电场力使带电分子（如蛋白质等）在凝胶或液体中运动的技术。
电泳法分为水平电泳和竖直电泳两种。
其中，竖直电泳依托了载体凝胶或聚丙烯酰胺凝胶，通过蛋白质在其上的移动距离从而进行分离。
而水平电泳利用了专门的电泳分离仪器，将蛋白质定向在凝胶内运动，从而完成分离。
3. 超高速离心法超高速离心法是一种通过在高速旋转离心管内快速离心并重复洗涤，分离出不同种类的蛋白质的技术。
其原理是根据分子量大小、形状及密度的不同，将蛋白质分离开来。
超高速离心法的优点在于适用范围广、精度高。
二、蛋白质纯化技术蛋白质纯化技术是指将带有杂质的蛋白质组分经过一系列处理后，得到较为单一、纯度高的蛋白质的技术。
蛋白质纯化技术对于蛋白质结构及性质的研究极为重要。
在蛋白质的纯化技术中，一般采用以下几种方法。
1. 电吸附法电吸附法是一种利用电动势引起蛋白质在吸附固定相上的吸附性分离方法。
其基本原理是电动势过程将分子有序地排列在吸附剂上，从而实现蛋白质的吸附。
该方法适用于小分子量蛋白，具有纯化速度快，操作简便等特点。
2. 亲和层析亲和层析是官能团彼此配对的分子间吸引力引导下发生的某种物质在吸附剂上选择性吸附的分离方法，分离了同种蛋白彼此间在电性等方面的异质。
蛋白质分离纯化技术
蛋白质分离纯化技术
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目录
CONTENTS
1
蛋白质鉴定
2
蛋白质分离纯化技术
蛋白质分离纯化技 术是生物化学研究 的重要手段，下面 是蛋白质分离纯化 的一些基本技术和
方法
样品准备
样品准备
1.1 细胞破碎
细胞破碎是蛋白质提取的第一步，常见的细胞破 碎方法有物理法、化学法和生物酶学法
蛋白质分离纯化
2.2 根据电荷分离纯化
2.2.1 电泳 电泳是在电场作用下，带电粒子在介质中移动的现象。根据带电粒子在电场中 的移动速度不同，可以将不同电荷的蛋白质分离开来 2.2.2 等电聚焦电泳
等电聚焦电泳是将pH梯度与电泳相结合的技术，可以分离等电点不同的蛋白质
2.2.3 离子交换色谱 离子交换色谱是一种利用离子交换剂将带电粒子 从溶液中分离出来的技术，根据离子交换剂的电 荷性质不同，可以选择性吸附不同电荷的蛋白质
蛋白质分离纯化
2.4 根据生物学活性分离纯化
2.4.1 免疫吸附纯化
免疫吸附纯化是一种利用抗原-抗体之间的特异性结合进行蛋白质纯化的技术。在 免疫吸附纯化中，将特异性抗体包被在固相载体上，再将待纯化的蛋白质溶液通 过该柱子，抗原-抗体复合物会吸附在柱子上，而其他杂质则会被洗脱下来。最后 通过改变柱子的条件，使抗原-抗体复合物解离下来，得到纯化的蛋白质
蛋白质分离纯化
蛋白质分离纯化
2.1 根据分子量分离纯化
2.1.1 透析 透析是一种将溶液中的小分子物质与大分子物质分离开来的方法，主要用于去 除蛋白质中的小分子杂质 2.1.2 凝胶过滤 凝胶过滤是一种根据蛋白质分子大小不同进行分离的技术，大分子不能进入凝 胶内部的通道，而小分子则可以进入 2.1.3 超滤 超滤是一种膜过滤技术，通过不同孔径的超滤膜 ，将分子量不同的蛋白质分离
蛋白质分离和纯化的方法和技术
蛋白质分离和纯化的方法和技术蛋白质是生命体中极其重要的一种物质，它是细胞的基本组成单位，参与了多种生物学过程。
研究蛋白质在细胞中的功能与结构，需要对蛋白质进行高效、可靠的分离和纯化。
本文将介绍常用的蛋白质分离和纯化的方法和技术。
一、离子交换层析离子交换层析是分离蛋白质最常用、最成熟的方法之一。
其原理是利用蛋白质的电荷性质与离子交换树脂的对应性质，进行蛋白质的分离。
离子交换树脂可分为正离子交换树脂和负离子交换树脂两种类型。
正离子交换树脂的功能基团有负电荷，故可吸附具有正电荷的物质，例如氨基酸、多肽或蛋白质N端等；负离子交换树脂的功能基团有正电荷，故可吸附具有负电荷的物质，例如天冬氨酸、谷氨酸、磷酸基或蛋白质C端等。
根据目标蛋白质的电荷性质，选择合适的离子交换树脂进行分离。
离子交换层析速度较快，可分离多种电荷性质的蛋白质，但对样品的盐浓度要求较高，易受pH和盐浓度的影响，操作时需谨慎。
二、凝胶过滤层析凝胶过滤层析是利用孔径大小对蛋白质进行分离的方法。
凝胶过滤层析常用的凝胶有玻璃纤维、纤维素等。
玻璃纤维凝胶一般有不同的颗粒大小，大的颗粒孔径大，小的颗粒孔径小。
蛋白质分子较小，可通过大孔径的颗粒进入凝胶孔隙，而较大的物质被挡在颗粒外部无法穿过凝胶。
因此，蛋白质经过凝胶时易出现分子量排阻效应，使得小分子在大分子之前流出，从而实现了蛋白质的分离。
凝胶过滤层析操作简单，无需特殊设备或条件，但分离程度相对较低，不适宜纯化目标蛋白质。
三、亲和层析亲和层析是利用蛋白质与亲和柱中特定配体发生特异性结合，从而对蛋白质进行分离的方法。
亲和层析适用于具有特定结构、功能或序列的蛋白质，例如抗体、标签化蛋白、细胞受体等。
常见的亲和柱配体有融合蛋白、金属离子、细胞色素C等。
蛋白质样品在亲和柱上进行结合，待不结合蛋白质被洗脱后对结合蛋白质进行洗脱。
亲和层析具有选择性强、纯化程度高等优点，但亲和柱的制备成本较高，操作上也需注意其特异性。
蛋白质组学的分离技术
蛋白质组学的分离技术引言：蛋白质是生物体内最重要的分子之一，它们在细胞内发挥着各种生物学功能。
为了研究蛋白质的功能和相互作用，科学家们开发了各种蛋白质组学的分离技术。
这些技术可以将复杂的混合物中的蛋白质分离出来，并进行进一步的研究和分析。
本文将介绍几种常用的蛋白质组学分离技术。
一、凝胶电泳凝胶电泳是最常用的蛋白质分离技术之一。
它利用凝胶的孔隙性质将蛋白质按照分子大小分离开来。
其中，聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）是最常用的凝胶电泳技术之一。
在SDS-PAGE中，蛋白质首先被处理成带有负电荷的复合物，然后通过电场在凝胶中迁移。
根据蛋白质的分子大小，蛋白质会在凝胶中形成一系列的带状条带，这样就可以将蛋白质按照分子大小进行分离。
二、液相色谱液相色谱也是一种常用的蛋白质分离技术。
它利用各种填料对蛋白质进行分离。
其中，凝胶过滤色谱是常用的液相色谱技术之一。
在凝胶过滤色谱中，蛋白质溶液通过填料时，蛋白质按照分子大小进行筛选，较大分子的蛋白质无法通过填料，而较小分子的蛋白质可以通过填料，从而实现了蛋白质的分离。
三、亲和层析亲和层析是一种利用亲和性分离蛋白质的技术。
它利用特定的亲和剂与目标蛋白质之间的相互作用，将目标蛋白质从混合物中分离出来。
例如，可以利用亲和层析柱中的亲和剂与目标蛋白质之间的特异结合，将目标蛋白质保留在柱中，而其他非特异结合的蛋白质则被洗脱出来，从而实现了目标蛋白质的分离。
四、二维凝胶电泳二维凝胶电泳是一种结合了凝胶电泳和液相色谱的高级分离技术。
它可以将蛋白质按照分子大小和等电点进行分离。
首先，蛋白质经过等电聚焦分离，根据蛋白质的等电点将其分离成水平方向的斑点。
然后，将凝胶垂直方向旋转90度，进行SDS-PAGE分离，根据蛋白质的分子大小将其分离成垂直方向的斑点。
通过这两次分离，可以得到一个蛋白质斑点图谱，方便进一步的蛋白质分析和鉴定。
结论：蛋白质组学的分离技术是研究蛋白质功能和相互作用的重要工具。
蛋白质分离纯化的技术
蛋白质分离纯化的技术前言蛋白质是生物体内非常重要的大分子有机物质，具有各种生物学功能，如结构支持、催化反应、传递信息、运输物质及免疫防御。
而蛋白质的研究和应用，早已成为生命科学的热门领域。
然而，大多数生物体中的蛋白质都混杂着众多的其他大分子物质，为了研究或应用某种特定蛋白质，就需要将它从其它物质中分离纯化出来。
今天我们就要来讲一讲蛋白质分离纯化的技术。
一、蛋白质分离的基本原理蛋白质分离的基本原理是利用不同的性质来分离具有不同特性的蛋白质。
蛋白质的各种性质包括分子大小、分子形状、电荷、亲疏水性、氨基酸序列等。
根据这些不同的性质，分别选择不同的分离纯化方法，可以实现不同程度的分离纯化效果。
二、蛋白质分离纯化技术的分类根据分离方式的不同，蛋白质分离纯化技术可以分为以下几类：1. 分子筛层析：分子筛层析是根据蛋白质的分子大小、形状来进行分离，其原理是在一定的缓冲液中，将特定孔径大小的陶瓷或聚合物微球填充进层析柱，根据蛋白质的分子大小，从层析柱中流出不同的蛋白质。
这种方法可以使蛋白质得到较好的分离纯化，但需要考虑蛋白质的保护。
2. 表面等电聚焦（IEF）：表面等电聚焦是根据蛋白质的等电点来进行分离，其原理是在聚丙烯酰胺凝胶电泳板上加上一组垂直于电泳方向的电场，在酸性一端放置一种酸性缓冲液，碱性一端放置一种碱性缓冲液，中间分别加入样品，蛋白质会在等电点处停留，使得不同等电点的蛋白质得到了分离和收获。
这种方法可以进行多品种、高分辨率的蛋白质分离。
3. 亲和层析：亲和层析是根据蛋白质与其他化合物的特异性相互作用进行分离，其原理是特定的化合物置于层析柱中，当特定的蛋白质与化合物结合时，蛋白质就可以纯化出来。
如在层析柱中放入钙离子，就可以纯化出骨钙蛋白，并且可以通过控制钙离子浓度来实现蛋白质的分离。
4. 透析：透析是将样品分子分离于透析膜之内或之外的方法。
通常将混合物放置于透析袋内，在培养基、缓冲液等适当环境中，透析袋内的小分子会从透析膜渗透出去，而较大的蛋白质则被留在透析袋内。
蛋白质分离和纯化技术的研究和应用
蛋白质分离和纯化技术的研究和应用蛋白质是生物体内最基本的分子，其担负着细胞结构与功能、物质转运、信号传递等重要生理功能。
由于生物样品中蛋白质种类众多、含量差异较大，为了深入揭示蛋白质的生物学功能和结构特性，必须对蛋白质进行精确分离和纯化。
本文将介绍蛋白质分离和纯化技术的研究和应用。
一、蛋白质分离技术蛋白质分离是指将复杂的蛋白质混合物进行分离，得到不同种类的纯化蛋白质的过程。
在蛋白质分离的基础上，再进行进一步纯化，能够更好地揭示蛋白质的生物学特性。
（一）凝胶电泳凝胶电泳是当前最常用的蛋白质分离技术之一。
它基于蛋白质的电荷、大小、形状和亲疏水性等性质，利用电场将蛋白质分子沿着凝胶移动，实现分子大小的分离。
凝胶电泳具有分离效果好、操作简单易行、样品消耗量小以及可视化等优点。
（二）液相色谱液相色谱（Liquid chromatography）是一种通过化学亲和性、分子大小、极性与非极性等属性分离物质的分离技术。
常用的液相色谱有透析液相色谱、醚基、硅烷基、反相、离子交换、凝胶过滤等类型。
其中反相色谱在蛋白质分离中尤为重要，它基于不同蛋白质在疏水性基质表面的分配系数不同，以蛋白质的亲水性为基础进行分离。
二、蛋白质纯化技术蛋白质纯化是指在获得蛋白质的基础上，通过不同的纯化技术去除其中的杂质，得到纯度高的蛋白质分子。
蛋白质的纯化技术主要分为两类：非特异性纯化和特异性纯化。
（一）非特异性纯化非特异性纯化是指利用物理化学性质对样品进行分步纯化，将目标分子与混杂物质逐步分离开来的方法。
常用的非特异性纯化技术有盐析、凝胶过滤和透析等。
其中，盐析技术是常用的一种非特异性纯化技术，它利用富集目标蛋白质对盐的结合能力高于混杂蛋白质的特性，将混杂蛋白质和目标蛋白质分离。
（二）特异性纯化特异性纯化是指通过蛋白质与配体、抗体等生物学活性团之间的特异作用进行分离纯化的方法。
常用的特异性纯化技术包括亲和层析、免疫亲和层析等。
其中，亲和层析是一种重要的特异性纯化技术，它通过识别目标蛋白质与固定于固相材料上的亲和基团之间的特异性互作来分离纯化蛋白质。
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• ⑶内水体积：因为凝胶为三维网状结构，颗粒内部 仍有空间，液体可进入颗粒内部，这就分间隙的总 和为内水体积，又称定相体积，常用Vi表示。 不包 括固体支持物的体积（Vg）。 ⑷峰洗脱体积：是指被分离物质通过凝胶柱所需洗 脱液的体积，常用Ve 表示。
• 当使用样品的体积很少时，（与洗脱体积比较可以 忽略不计），在洗脱图中，从加样到峰顶位置所用 洗脱液体积为Ve。 当样品体积与洗脱体积比较不能 忽略时，洗脱体积计算可以从样品体积的一半到峰 顶位置。当样品很大时，洗脱体积计算可以从应用 样品开始到洗脱峰升高的弯曲点（或半高处）。
3. 凝胶的种类和性质
(1)交联葡聚糖凝胶（Sephadex) 1) Sephadex G G 后的数字为凝胶吸水值的10倍。 G 反应凝胶的交联程度、膨胀程度和分部范围。 2） SephadeX LH—20，是Sephadex G—25的羧丙基衍生物，溶于 水和亲脂性溶剂，用于分离不溶于水的物质。
概念（排阻层析，分子筛层析）：当生物大分子通过装
有凝胶颗粒的层析柱时，根据它们分子大小不同而进 行分离的技术。
原理：凝胶颗粒内部具有多孔网状结构，被分离的混合
物流过层析柱时，比凝胶孔径大的分子不能进入凝胶 孔内，在凝胶颗粒之间的空隙向下移动，并最先被洗 脱出来；比网孔小的分子能不同程度的自由出入凝胶 孔内外，在柱内经过的路程较长移动速度较慢，最后 被洗脱出来。
（二）排阻层析 （凝胶层析）
凡是利用生物大分子的相对分子质量差异进行层 析分离的方法，均称之为排阻层析。
用于层析的分离介质称为排阻层析介质。 凝胶层析介质主要是以葡聚糖、琼脂糖、聚丙烯
酰胺等为原料，通过特殊工艺合成的层析介质。 目前已成为生物化学、分子生物学和生物制药 的研究和生产中必不可少的分离介质。
700
700
3
1
40-120 1.5±0.2 2.5-3.5
1500
1500
3
1
粗 100-300
Sephadex 中粗
G-25
细
50-150 20-80
2.5±0.2
4-6
1000-5000
100-5000
6
2
超细 10-40
粗 100-300
Sephadex G-50
中粗 细
50-150 20-80
(2)琼脂糖凝胶（Sepharose ; pharmacia;Bio-Gel(Blo-Rad) 依靠糖链之间的次级键维持网状结构，琼脂糖密度越大，网状结
构越密集。 (3)聚丙烯酰胺
一种人工合成的凝胶，以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联 而成。交联剂越多，孔隙度越小。 商品名为生物胶—P（Bio-Gel P). (4) 聚丙乙烯凝胶（Styrogel) 大网孔结构。
1、凝胶层析的特点及应用
• 特点：设备简单、操作方便、样品回收 率高、实验重复性好、特别是不改变样 品生物学活性等优点。
• 用途：蛋白质(包括酶)、核酸、多糖等生 物分子的分离纯化，同时还应用于蛋白 质分子量的测定、脱盐、样品浓缩等。
2、凝胶层析的ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ理
凝胶层析的固定相是惰性的珠状凝胶颗粒，凝胶 颗粒的内部具有立体网状结构，形成很多孔穴。
品名
Sephadex G-1O Sephadex G-15
葡聚糖凝胶(Sephadex )的物理特性
干胶颗粒 直径/μm
得水值 Wf/g.g-1
床体积 /mL.g-1
最适分段分离范围
球蛋白分 线性葡聚糖 子质量／Da 分子质量/Da
溶胀所需 时间/h
20℃
lOO ℃
40-120 1.0±0.1 2-3
>9810(100)
>9810(100)
4905(50) 3434(35) 1472(15) 981(10)
4. 层析柱的重要参数
• ⑴柱体积：柱体积是指凝胶装柱后，从 柱的底板到凝胶沉积表面的体积。在色 谱柱中充满凝胶的部分称为凝胶床，因 引柱体积又称“床”体积，常用Vt 表示。 ⑵外水体积：色谱柱内凝胶颗粒间隙， 这部分体积称外水体积，亦称间隙体积， 常用Vo表示。
四、层析技术
• 层析法也称色谱法，是1906年俄国植物学家Michael Tswett发现并命名的。他将植物叶子的色素通过装填 有吸附剂的柱子，各种色素以不同的速率流动后形成 不同的色带而被分开，由此得名为“色谱法” （Chromatography) 。
• 后来无色物质也可利用吸附柱层析分离。 • 1944年出现纸层析。 • 以后层析法不断发展，相继出现薄层层析、气相层析、
5.0±0.3
9-11
1500-30000
500-10000
6
2
超细 10-40
Sephadex G-75
中粗 超细
40-120 10-40
7.5±0.5 12-15
3000-70000
1000-50000
24
3
Sephdex G-100
中粗 40-120 超细 10-40
10±l.0 15-20 4000-150000 1000-100000
高压液相层析、亲和层析、凝胶层析等。
（一）层析的分类
• 按层析的分离机理分类
• 排阻层析(exclusion chromatography) • 离子交换层析(ion exchange chromatography) • 吸附层析(absorption chromatography) • 分配层析(partition chromatography) • 亲和层析(affinity chromatography) • 金属螯合层析(metal chelating chromatography) • 疏水层析(hydrophobic chromatography) • 反向层析(reverse phase chromatography) • 聚焦层析(focusing chromatography) • 灌注层析(perfusion chromatography)
48
5
Sephadex G-150
中粗 超细
40-120 10-40
15±1.5 20-30 5000-400000 1000-150000
72
5
Sephadex 中粗 G-200 超细
40-120 10-40
20±2.0 30-40 5000-800000 1000-200000
72
5
最大流体 静力压/Pa (cmH2O) >9810(100) >9810(100)