发酵工程第三章发酵工业原料及其处理
发酵工程第三章工业用培养基制备
反应时间短（<2hrs），产品质量较好 对原料要求较低，淀粉乳浓度较高 对淀粉颗粒大小无严格要求
淀粉水解糖的制备
• 几种水解方法的比较
• 从时间上看： 酸解法最快，酶解法最慢
• 从原料转化率和糖液质量上看： 酶解法>酸酶法>酶酸法>酸解法
淀粉水解糖的制备
三、氮源物质
• 氮源物质是培养基的主要成分之一。
所以应该少量（0.05-0.1％），多次（1次/12 小时）。同时要注意前体物质被作为营养物质利 用。
五、补料
• 补料解决的问题：
菌体早衰；料粘，搅拌能耗高，消泡难，溶氧降低， 渗透压高。
• 补料有利于：
丰富培养基；产物合成旺盛期延长；控制PH和代 谢方向；补足发酵液体积。
• 补料的目的和方法：
限制生长速度； 仅维持呼吸，半饥饿状态，利于 产物合成；控制好时间、速率和配比。
酶酸结合法之一，酸酶法 反应原理：
酸水解
糖化酶
淀粉———>糊精、低聚糖 ———>葡萄糖
优点：
产品质量高，反应时间较短（<2d） 对原料要求较低，淀粉乳浓度较高 用酸量少
淀粉水解糖的制备
酶酸结合法之二，酶酸法 反应原理：
淀粉—淀—粉—酶> 糊精、低聚糖
酸水解 ———>
葡萄糖
30min
30min
优点：
三、按培养基的成分和目的
2、 鉴别性培养基 培养基中加有能与某一菌的无色代谢
产物发生显色反应的指示剂，从而达到只 须用肉眼辨别颜色就能方便的从近似菌落 中找出目的菌菌落的培养基。
最常见的鉴别性培养基是伊红美蓝乳 糖培养基，即EMB 培养基。
四、按生产工艺的要求
发酵工程第三章培养基
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培养基：广义上讲培养基是指一切可供微生物细胞生长 繁殖 所需的一组营养物质和原料。同时培养基也为微
葡萄糖效应
这是大肠杆菌首先利用葡萄糖进展生长繁殖，在 葡萄糖耗尽后，过一段时间菌体才开场利用乳糖 再生长繁殖。后来的酶学试验证实，当葡萄糖存 在时，细菌不利用其他糖。在上述培养基中即使 参加乳糖酶诱导物，葡萄糖没耗尽，利用乳糖的 酶系也不能合成。
葡萄糖效应是由葡萄糖的某种分解代谢物引起的， 这种代谢物阻遏了细菌能够利用其他糖的酶的生 成。
气搅拌性能以及发酵产物的后期处理。
3.1 发酵工业培养基的根本要求
必须提供合成微生物细胞和发酵产物的根 本成分；
有利于减少培养基的单耗，即提高单位营 养物质的转化率；
有利于提高产物的浓度，以提高单位容积 发酵罐的生产能力；
有利于提高产物的合成速度，缩短发酵周 期；
尽量减少副产物的形成，便于产物的别离 纯化，并尽可能减少产生“三废〞物质；
次参加，并强强搅拌； 二是氨水中含有多种嗜碱性微生物，因此在使用前要用石棉等
过滤介质进展过滤除菌，防止因通氨而引起的染菌。
毛霉产蛋白酶的研究
陈涛，中国酿造，2004
初始pH的影响: pH偏酸比较好，中性蛋白酶影响大
无机氮源的影响： 硫酸铵>硝酸铵>硝酸钠>尿素
2、有机氮源
来源：工业上常用的有机氮源都是一些廉价的原料，花生饼 粉、黄豆饼粉、棉子饼粉、玉米浆、玉米蛋白粉、
《发酵工程》课程教学大纲
《发酵工程》课程教学大纲课程名称：发酵工程课程类别：专业选修课适用专业：食品科学与工程考核方式：考察总学时、学分： 32 学时、2 学分一、课程教学目的发酵工程是整个生物技术的核心，是工业微生物实现试验室与工厂化生产的具体操作，是生物技术在生产实践中应用的原理及方法的一局部，是基因工程及酶工程等生物技术工业化的过程与方法。
因此，通过对《发酵工程》的学习，不仅把握发酵工程原理及发酵优化把握过程，而且对系统了解生物技术及其工业化应用都具有深远的意义。
另外，通过《发酵工程》试验及发酵工程各论的了解，不仅能够把握发酵工艺操作从小试到放大的具体过程及反响过程把握方法，而且进一步了解了目前发酵行业的具体产品生产工艺，从理论到方法学会发酵工程这一门技术，对发酵生产能够进展指导与分析。
二、课程教学要求通过本课程的教学，应使学生把握发酵工程学的根本学问和根本技能，了解现代生物工程技术的进展与应用状况，具备确定的微生物生产工程技能。
通过本课程的学习，使学生深刻理解发酵工程的微生物学原理，结实把握发酵工业菌种的筛选、驯化、培育与保藏，好氧、厌氧发酵工艺的调控与治理，了解发酵产品提取与精制的原理、流程及常见发酵产品的生产过程。
三、先修课程食品微生物学、生物化学。
四、课程教学重、难点重点：发酵工程的概念、特点；工业微生物菌种的退化、复壮与保藏；工业上常用作碳源、氮源的原料；淀粉水解糖的制备方法；微生物对培育基中的碳源代谢；酒精发酵机制；好氧发酵罐构造和功能；温度、 pH 和泡沫对发酵过程的影响；不同时间及染菌程度对发酵的影响；种子、空气、培育基和设备染菌及防治；细胞裂开方法及裂开率的测定；盐析法分别发酵产物。
难点：影响种子培育的因素和种子质量的把握；发酵生产的前体物质和促进剂、抑制剂有机酸发酵机制；染菌的检查推断及缘由分析；离子交换法原理和离子交换树指的构造与分类，膜和膜分别的根本理论。
五、课程教学方法与教学手段多媒体教学,课堂讲授与实践相结合。
(精品)【发酵工程】第三章_发酵工业培养基设计1
二、氮源
1、功能 用于构成微生物菌种的菌体细胞物质。 提供合成含氮产物所必须的氮成分。
2、类型 有机氮和无机氮。
1）无机氮源 种类：氨盐、硝酸盐和氨水
特点：微生物对它们的吸收快，所以也称之为迅 速利用的氮源。但无机氮源的迅速利用常会引起 pH的变化如：
例：谷氨酸发酵
有害物资：胶体成分（起泡、结晶）、钙盐（结晶） 生物素（发酵控制）
预处理：澄清→脱钙→脱除生物素
例：柠檬酸发酵
有害物质：铁离子含量高（导致异柠檬酸的生成） 预处理：→黄血盐
③ 淀粉、糊精 使用条件：微生物必须能分泌水解淀粉、糊精的酶。 缺点：难利用、发酵液比较稠、一般>2.0%时加
入一定的α-淀粉酶； 成分比较复杂，有直链淀粉和支链淀粉。
④缬氨酸、半胱氨酸和α-氨基己二酸可以提高青
霉素和头孢菌素的产量 。
尿素： ①成分单一的有机氮； ②在青霉素和谷氨酸生产中使用，可使α-酮戊 二酸还原并氨基化，提高谷氨酸的生产。
氮源使用注意问题：
有机氮源和无机氮源应当混合使用
早期：容易利用易同化的氮源—无机氮源 中期：菌体的代谢酶系已形成、则利用蛋白质
毛霉产蛋白酶的研究
陈涛，中国酿造，2004
初始pH的影响: pH偏酸比较好，中性蛋白酶影响大
无机氮源的影响： 硫酸铵>硝酸铵>硝酸钠>尿素
氨水
产链霉素时： 合成1moL链霉素需要消耗7moL氨。
产红霉素时： 可以提高红霉素的产率和有效组分的比例。
使用时注意： ① 使用时要用石棉等过滤介质进行除菌（噬碱
优点：来源广泛、价格低，可以解除葡萄糖效应。
例：地衣芽孢杆菌生产α-淀粉酶 碳源对生长和产酶的影响
第3节 发酵工程及其应用
第3节发酵工程及其应用学案设计学习目标1.概述发酵工程及其基本环节。
2.举例说明发酵工程在生产上有重要的应用价值。
自主预习一、发酵工程的基本环节发酵工程一般包括,扩大培养,培养基的配制、,接种,,产品的分离、提纯等方面。
1.选育菌种:性状优良的菌种可以从中筛选出来,也可以通过或获得。
2.扩大培养:工业发酵罐的体积一般为几十立方米到几百立方米,接入的菌种总体积需要几立方米到几十立方米,因此在发酵之前还需要对菌种进行。
3.配制培养基:在菌种确定之后,要选择原料制备培养基。
在生产实践中,培养基的配方要经过才能确定。
4.灭菌:发酵工程中所用的菌种大多是单一菌种。
一旦有杂菌污染,可能导致产量大大下降。
因此和都必须经过严格的灭菌。
5.接种:将扩大培养的菌种和灭菌后的加入发酵罐中。
6.发酵罐内发酵:大型发酵罐有计算机控制系统,能对发酵过程中的温度、pH、溶解氧、罐压、通气量、搅拌、泡沫和营养等进行监测和控制。
在发酵过程中,要随时检测培养液中的、等,以了解发酵进程。
还要及时添加必需的,要严格控制、和溶解氧等发酵条件。
7.分离、提纯产物:如果发酵产品是微生物细胞本身,可在发酵结束之后,采用、等方法将菌体分离和干燥,即可得到产品。
如果产品是代谢物,可根据产物的性质采取适当的、和措施来获得产品。
二、发酵工程的应用1.在食品工业上的应用(1)生产传统的发酵产品,如。
(2)生产各种各样的食品添加剂,如通过发酵制得的柠檬酸,由发酵可以得到谷氨酸,谷氨酸经过一系列处理就能制成味精。
(3)生产酶制剂,如α-淀粉酶、β-淀粉酶、脂肪酶等。
2.在医药工业上的应用工程、工程等的广泛应用给发酵工程制药领域的发展注入了强劲动力。
3.在农牧业上的应用(1)生产微生物肥料。
微生物肥料利用了微生物在代谢过程中产生的、等来增进土壤肥力,改良土壤结构,促进植株生长,常见的有、等。
(2)生产微生物农药。
微生物农药是利用或来防治病虫害的。
微生物农药作为的重要手段,将在农业的方面发挥越来越重要的作用。
发酵工程复习
第一章 总论 发酵工程：就是研究利用生物的新陈代谢作用生产一定的产品或达到其他社会目的的工程科学。 发酵过程的特点：①一般操作条件比较温和；②以淀粉、糖蜜等为主，辅以有、无机氮源为原料；③过程反应以生命体的自动调节方式进行；能合成复杂的化合物如酶、光学活性体等；能进行一些特殊反应，如官能团导入；④发酵工业与其他工业相比，相对投资较少，见效较快，具有经济和效能的统一性。 发酵过程的分类：①按获取能量的方式分为好氧发酵、厌氧发酵；②按发酵原料可分为糖质原料发酵、烃类原料发酵；③按产物类型可分为初级代谢产物发酵、次级代谢产物发酵；④按发酵状态分为固态发酵、液态发酵、液体表面发酵、液体深层发酵；⑤按发酵工艺类型分为批式发酵（分批发酵）、半连续发酵。连续发酵等。 发酵工业生产流程：①发酵原料的预处理；②培养基配制；③发酵培养基的配制与灭菌；④无菌空气制备；⑤微生物菌种制备和扩大培养；⑥发酵；⑦发酵产品的分离和纯化。 发酵工业的历史渊源：（1）天然发酵阶段，1857年巴斯德证明发酵是由于微生物的作用，彻底否定了自然发生说，证实发酵由微生物引起，免疫学—预防接种。（2）纯培养技术的建立，科赫，德国细菌学家对病原菌的研究做出了卓越的贡献，成为细菌学奠基人之一。科赫发明了固体培养基和把混合培养物纯化的技术，并用在固体培养基上划线接种的方法获得了单一的纯种。这种技术使细菌学发生革命性的变化，在1892－1900年之间，几乎所有细菌疾病的病原体都被分离出来。（3）通气搅拌发酵技术的建立，1929年，英国科学家弗莱明发现青霉素；1940年，英国科学家弗洛里和前恩分离出青霉素；1942年，青霉素工业化生产；1944年，世界第二个抗生素-链霉素诞生。开拓了以青霉素为先锋的庞大的抗生素发酵工业；建立了深层培养法，把通气搅拌技术引入发酵工业。（4）代谢控制发酵和现代发酵工程技术的发展，使用诱导物；诱变菌株；降低分解代谢产物浓度，减少阻遏的发生；解除反馈抑制-筛选抗反馈抑制突变。 发酵工程的发展趋势：利用遗传工程等先进技术，人工选育和改良菌种；采用发酵技术进行高等动动植物细胞培养；固定化技术广泛应用；开发和采用大型节能高效的发酵装置，自动控制将成为发酵生产控制的主要手段；发酵法生产单细胞蛋白；应用代谢控制技术，发酵生产氨基酸；将生物技术理广泛地用于环境工程。 发酵工程的服务领域：食品工业、医药工业、化学工业、能源开发、环境治理。 生物技术的三个特点：①多学科、综合性的科学技术；②反应中需要生物催化剂的参与，它是游离或固定化细胞或酶的总称；③生物技术最后的目的是建立工业生产过程或进行社会服务，成为生物反应过程。 生物工程，以生物科学和生物技术为基础，结合化学工程、机械工程、环境工程等工程科学，研究和发展利用生物体系或其中的一部分生产有益于社会的产品或达到一定社会目标的过程工程科学。研究领域：基因工程、酶工程、细胞工程、发酵工程。 第二章 发酵工业微生物菌种制备原理和技术 发酵工业对菌种的要求：①能在廉价原料制备的培养基上迅速生长并生成所需的代谢产物，且产量高；②培养条件易于控制；③生长迅速，发酵周期短；④满足代谢控制的要求；⑤抗噬菌体和杂菌的能力强；⑥遗传性状稳定，菌种不易退化变异；⑦在发酵过程产生的泡沫要少，这对提高装料系数、提高单罐产量、降低成本有重要意义；⑧对需要添加的前体物质有耐受力，并且不能将前体物质作为一般碳源利用；⑨不是病原菌，同时在系统发育上与病原菌无关，不产生任何有害的生物活性物质，以保证安全。 常用的微生物：细菌、酵母菌、霉菌、放线菌、担子菌、藻类。 微生物菌种的选育：自然选育、诱变育种、杂交育种、原生质体融合、基因工程育种。 （1）自然选育：利用菌种自然突变进行菌种筛选的过程。自然突变是指微生物在没有人工参与下所发生的突变。引起自然突变两个原因是多因素低剂量的诱变效应和互变异构效应。 （2）诱变育种：理论基础是基因突变。基本方法：出发菌株的选择（应有一定的目标产物的生产能力，产量高、对诱变剂敏感性大、变异幅度广）；诱变剂的使用方法（单一诱变剂处理、复合诱变剂处理）；诱变剂的用量选择（用致死率作为选择适宜剂量的依据）。 （3）杂交育种：利用不同菌株之间遗传物质的交换、重组，使不同菌株的优良性状集中在重组体中，获得新菌株的方法。 （4）原生质体融合：是指使用人工方法使两个或两个以上的植物细胞合并形成一个细胞的技术。 菌种退化 定义：指在经过较长时间传代保藏之后，菌株的一个或多个生理性状和形态特征逐渐减退或消失的现象。 原因：①基因突变；②变异菌株性状分离；③连续传代；④其他因素，如温度、湿度、培养基成分及各种培养条件。 防止方法：①控制传代次数：尽量避免不必要的接种和传代，在传代的时候尽量同时移植较多斜面菌种；②选择合适的培养条件：选择一个适合原种生长的条件可防止菌种的衰退；③利用不同类型的细胞进行传代：特定的菌株采用特定的细胞形式进行传代；④选择合适的保藏方法。 退化菌种的复壮：使退化的菌种重新回复原来的优良特征，叫做复壮。 菌种的保藏： 原理：根据菌种的生理生化特点，人为创造条件使孢子或菌体的生长代谢活动尽量降低，以减少其变异。 方法：①斜面低温保藏法；②石蜡油封保藏法；③砂土管保藏法；④冷冻干燥法；⑤超低温保藏法。 工业微生物种子的扩大培养 定义：种子扩大培养指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入固体试管斜面活化后，再经过摇瓶或者静置培养，以及种子罐逐级扩大而获得发酵量高、生产性能稳定、数量充足、不备杂菌和噬菌体污染的生产菌种的纯种制备过程。这些纯种培养物称为种子。 种子必须满足的条件：①菌体的纯种培养物总量适宜，以保证在发酵罐中有适当的接种量；②微生物菌种的生命力旺盛，移接到发酵罐中后能迅速生长，利于缩短延滞期，提高发酵设备的利用率；③菌种能保持稳定的生产性能，生理状态稳定；④无杂菌和噬菌体的污染。 种子罐级数：是指制备种子需逐级扩大培养的次数，取决于菌种生长特性、孢子发芽及菌体繁殖速度、所采用发酵罐的容积。谷氨酸二级发酵（一级种子罐扩大培养）。青霉素三级发酵（二级种子罐扩大培养）。 种子扩大培养的方法：① 表面培养法；② 固体培养法；③液体深层培养法（三角瓶摇床震荡或转式培养）；④载体培养法。 液体深层培养法基本操作控制点：①灭菌：在种子罐扩大培养和发酵前必须进行培养基灭菌，通常用蒸汽灭菌，或用连续加热灭菌器灭菌后不断输入罐体内；②温度控制：不论是灭菌后还是发酵过程中，温度都会改变，所以必须有冷却水循环进行温度控制；③通气、搅拌：空气通过滤过器后从底部送入，通过搅拌后成为空气微气泡，搅拌同样可以使物料与菌体充分结合，促进传热等。 种子质量 判断： ①pH； ②培养基的成分；③显微镜下观察菌体和培养液外观；④其他参数，如酶活力等。 标准：种子质量的最终指标是考察其在发酵罐中所表现出来的生产能力。①细胞或菌体：菌体的形态、菌液浓度和培养基的外观是重要的指标；②生化指标：种子液的各类生化参数也是菌体繁殖的反映；③产物生成：种子液中产物的生成量也是考查种子质量的指标；④酶活力：测定某种酶活力作为种子质量的标准，是一种新方法。 影响因素：种子的质量优劣除取决于本身的遗传特性外，还与培养条件直接有关。①培养基：生产过程中种子质量不稳定主要是原材料质量波动的结果，所以不同条件下培养的结果对种子质量影响也比较大。②种龄与接种量：对数期的种子利于发酵，接种量的大小直接影响发酵周期。③培养温度和湿度：培养温度直接影响生长和酶的合成。选择合适的温度对发酵效果有很大的影响。培养基的湿度则可能直接影响种子的生长速度。④pH：培养基的氢离子浓度对微生物生命活动有显著影响。⑤通风和搅拌：工业上在考虑满足菌体生长与合成酶的情况下，还要考虑经济效果。通气量与菌种、培养基性质和培养阶段有关。⑥泡沫：泡沫长期存在影响微生物对氧的吸收，妨碍二氧化碳排除，因而破坏生理代谢正常进行，不利于发酵。⑦染菌的控制：染菌的原因包括设备、管道、阀门不洁或损坏、灭菌不彻底、空气净化不好、无菌操作不严或菌种不纯。⑧种子罐级数的决定：种子罐级数取决于菌种性质、菌种的数量、繁殖速度、发酵罐中最低接种量等。 异常表现：①菌种生长发育缓慢或过快：根据培养条件和通气条件确定是否种子异常。②菌丝结团：液体培养条件下，繁殖的菌丝并不分撒而是聚成团状称为菌丝团，菌丝结团与搅拌效果差和接种量小有关系。③菌丝粘壁：种子培养过程中，由于搅拌效果差，泡沫过多及种子罐装料系数过小，使菌丝逐步粘在罐壁上。 种子培养基及其制备 微生物代谢产物分为初级代谢产物和次级代谢产物。初级代谢产物：微生物产生的自身生长繁殖必须的代谢产物，如氨基酸、核苷酸、维生素等；次级代谢产物：与微生物生长繁殖无明确关系的代谢产物，如抗生素、色素等。 培养基是人们提供微生物生长繁殖和生物合成各种代谢产物所需要的按一定比例配制的多种营养物质的混合物。种子培养基是供孢子发芽、生长和菌体繁殖用的培养基。 培养基各成分的功能： （1）碳源主要功能：在微生物细胞内经过一系列复杂的化学变化后成为微生物自身的细胞物质，为微生物维持生命活动提供能量。 （2）氮源主要功能：为微生物生长提供氮素来源，碳源不足时可作为厌氧微生物在厌氧条件下的能量来源。 （3）无机盐类主要功能：构成菌体的成分，作为酶的组成部分或维持酶的活性，调节渗透压、pH、氧化还原电位等。 （4）生长因子是一类对微生物正常代谢必不可少的微量的有机物。主要功能：构成辅酶的组成部分，促进生命活动进行。 （5）水的主要功能：水占了细胞重量的绝大部分，是微生物生长所必需的；水是良好的溶剂，微生物所需的营养物及代谢产物必须溶解于水中，才能通过细胞膜而被排出或吸收；体内各种生化反应，必须在水溶液中方能进行。 培养基的类型、优点和用途： （1）根据来源分类：①天然培养基，利用动植物或微生物体或其提取物制成的培养基，化学成分不清楚，比较复杂。优点：取材方便、营养丰富、种类多样、配制方便、价格低廉；缺点：成分不稳定。适合配制大生产中的种子培养基。②合成培养基，用化学成分明确的物质配制而成的培养基。优点：成分精确、重演性高；缺点：价格昂贵、配制繁琐。一般仅用于实验室进行生物量测定、菌种选育及遗传分析等方面的工作。③半合成培养基，既含有天然成分又含有纯化学试剂的培养基。 （2）根据外观分类：①固体培养基，在液体培养基中加入一定量的凝固剂使其成为固体状态。可用于菌种的分离和鉴定、检验杂菌、选种育种、菌种扩大培养、菌种保藏以及抗生素等生物活性物质的生物测定等。②液体培养基，未加任何凝固剂呈液体状态的培养基。在发酵工业中应用广泛，如在摇瓶种子扩大、种子罐种子扩大时一般都采用液体培养基。③半固体培养基，凝固剂含量较少的一种培养基。常用于观察微生物的运动特征、噬菌体效价滴定等。 （3）根据功能分类：①孢子培养基，供菌种繁殖孢子用的培养基。②种子培养基，供孢子发芽、菌体反之的培养基。 培养基配制的原则：①选择适宜的营养物质；②营养物质浓度及配比合适；③选择合适pH；④氧化还原电位的影响；⑤营养成分的加入顺序。 培养基成分配比的选择：①明确培养的目的；②合理考虑经济因素；③总结前人经验；④采用单因子试验、正交试验和均匀试验确定配方。 第三章 发酵工业原料及其处理 淀粉水解糖的酶水解法 酶水解法制葡萄糖可分为两步：第一步是利用液化酶使糊化淀粉水解成糊精和低聚糖等，使粘度大为降低，流动性增高，工业上称为液化；第二步是利用糖化酶将糊精或低聚糖进一步水解为葡萄糖，生产上称为糖化。由于采用了酶液化和酶糖化工艺，故也称为双酶水解法。 优点：①淀粉水解是在酶的作用下进行的，酶解反应条件教较温和，对设备要求低，不需高温高压设备；②微生物酶作用专一性强，副反应少，水解糖液纯度高、颜色浅、质量高；③可在较高淀粉乳浓度下水解，水解糖液的还原糖含量可达到30%以上；④可采用粗原料，省去粗原料加工成精制淀粉的生产过程；⑤由于微生物酶制剂中菌体细胞的自溶，使得糖液的营养物质较丰富，简化了发酵培养基。 缺点：①生产周期较长；②要求的设备较多，设备投资大；③由于酶本身是蛋白质，易造成糖液过滤困难。 葡萄糖值，即DE值，公式为： DE=还原糖/干物质×100％ 实际计算公式： DE=还原糖/（干物质×糖液的相对密度）×100％ 消毒与灭菌 消毒：采用物理或化学方法杀死环境中的病原微生物，但一般只能杀死营养细胞而不能杀死细菌的芽孢。灭菌：采用物理或化学方法杀死或除去环境中的所有微生物，包括营养细胞、细菌芽孢和孢子。 消毒与灭菌的区别：①消毒与灭菌的概念；②消毒不一定能够达到灭菌的要求，而灭菌则可以达到消毒的目的。 灭菌方法：干热灭菌法、湿热灭菌法、射线灭菌法、化学药品灭菌法、过滤除菌法等。 常见的灭菌药剂及其浓度：高锰酸钾溶液（0.1%~0.25%），75%酒精溶液，甲醛（37%），过氧乙酸（0.02%~0.2%），苯酚（0.1%~0.15%） 培养基灭菌 致死温度：杀死微生物的极限温度。致死时间：在致死温度下，杀死全部微生物所需要的时间。热阻：是指微生物在某一特定条件（主要是温度和加热方式）下的致死时间。 微生物的热死定律——对数残留定律，微生物的个数减少的速度与任一瞬间残存的菌数成正比： dN / dt = - k N 式中，N为培养基中残留活菌数，个；t为灭菌时间，min；k为反应速率常数，也称比死亡速率常数，min-1。 积分后两边取对数： t = 1 / k·ln（No / Nt）或t = 2.303 / k·lg（No / Nt） 式中，No为开始灭菌时原有的活菌数，个；Nt为经过时间t后残留菌数，个。一般采用Nt = 0.001，即1000次灭菌中有一次失败。 影响培养基灭菌效果的因素有：微生物的热阻、灭菌温度和时间、培养基的成分和物理状态、pH、微生物数量、微生物细胞含水量、微生物细胞菌龄、蒸汽中空气的排出情况、搅拌和泡沫等。 第四章 无菌空气的制备