血清胆固醇参考测量程序分光光度法
血清总胆固醇(TCH)测定及临床意义
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地区调查所得参考值高低不一，以致各地区有各自的高Tc划分标准。现在国际上以显著增加冠心病危险的Tc水平（医学决定水平）作为划分界限。在方法学标准化的基础上，采用共同的划分标准，有助于避免混乱。 我国《血脂异常防治建议》提出的标准为：理想范围：＜5.2mmol/L(＜200mg/dL) 边缘升高：5.23～5.69mmol/L(201～219mg/dL)升高：≥5.72mmol/L （≥220mg/dL） 美国胆固醇教育计划（ncep），成人治疗组提出的医学决定水平如下：理想范围：＜5.2mmol/L(＜200mg/dL)边缘升高：5.2～6.2mmol/L(200～239mg/dL)升高：≥6.21mmol/L（≥240mg/dL）【临床意义】 影响Tc水平的因素有：①年龄与性别：Tc水平往往随年龄上升，但到70岁后有所下降。中青年期女性低于男性，50岁以后女性高于男性。②长期的高胆固醇、高饱和脂肪和高热量饮食，可使Tc增高。 ③遗传因素。④其它：如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使Tc升高。 增高：高总胆固醇是冠心病的主要危险因素之一，有原发和继发两种，原发常由遗传因素引起如家族性高胆固醇血症（低密度脂蛋白受体缺陷）、家族性apob缺陷 症、多源性高Tc、混和性高脂蛋白血症等。继发的见于肾病综合征、甲状腺功能减退、糖尿病、胆总管阻塞、粘液性水肿、妊娠等。
MMFSCNG食品中胆固醇的测定方法
MM_FS_CNG_0356食品 胆固醇 分光光度法 MM_FS_CNG_0356 食品中胆固醇的测定方法 1.适用范围 本方法适用于各类动物性食品中胆固醇的测定。 2.原理概要 当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合反应，产生颜色物质。因此可先对食品样品进行提取和皂化，用硫酸铁铵试剂作为显色剂，测定食品中胆固醇的含量。 3.主要试剂和仪器 .主要试剂 石油醚； 无水乙醇； 浓硫酸； 冰乙酸：优级纯； 磷酸； 胆固醇标准物质； 胆固醇标准液； 胆固醇标准储备液（1mg ／mL ）：精确称取胆固醇100mg ，溶于冰乙酸中，并定容至100mL 。此液至少在2个月内保持稳定； 胆固醇标准常备液（100μg ／mL ）：吸取胆固醇标准储备液10mL ，用冰乙酸定容至100mL 。此液用时临时配制； 铁矾显色剂； 铁矾储备液：溶解硫酸铁铵[ FeNH 4（SO 4）2·H 2O]于100mL85％磷酸中，贮于 干燥器内，此液在室温中稳定； 铁矾显色液：吸取铁矾储备液10mL ，用浓硫酸定容至100mL 。贮于干燥器内，以防吸水； 50％氢氧化钾溶液：称取50g 氢氧化钾，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL ； 5％氯化钠溶液：称取5g 氯化钠，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL ； 钢瓶氮气：纯度％。 .仪器 实验室常用设备； 721型分光光度计； 电热恒温水浴； 电动振荡器； 具玻塞试管：体积10mL 、25mL 。 4.过程简述 .胆固醇标准线 吸取胆固醇标准常备液、、、、分别置于10mL 试管内，在各管内加入冰乙酸使总体积皆达4mL 。沿管壁加入2mL 铁矾显色液，混匀，在15～90min 内，在560～575nm 波长下比色。以胆固醇标准浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标做标准曲线。 .样品测定
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇 【原理】 血清中总胆固醇(total cholesterol ，TC)包括游离胆固醇(free cholesterol ，FC)和胆固醇酯(cholesterol ester ，CE)两部分。血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA)，胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和过氧化氢，H 2O 2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC 含量成正比。 【试剂】 1．胆固醇液体酶试剂组成(具体含量见相关文献) GOOD's 缓冲液(pH6.7) 50mmol/L 胆固醇酯酶 ≥200U/L 胆固醇氧化酶 ≥100U/L 过氧化物酶 ≥3 000U/L 4-AAP 0.3mmol/L 苯酚 5mmol/L 2．胆固醇标准溶液5.17 mmol/L (200 mg/dl) 精确称取胆固醇200 mg ，用异丙醇配成100 ml 溶液，分装后，4℃保存，临用取出。也可用定值的参考血清作标准。 【操作步骤】 终点法检测TC 按下表依次加样。 酶法测定TC 操作步骤 项目 测定管 标准管 空白管 血清(μl) 50 － － 标准液/定值血清(μl) － 50 － 蒸馏水(μl) － － 50 酶试剂(μl) 1.50 1.50 1.50 混匀后，37℃保温5 min ，用分光光度计比色，于500 nm 波长处以空白管调零，读出各管吸光度。 【计算】 血清TC (mmol/L)＝ 标准管吸光度 测定管吸光度 ×胆固醇标准液浓度
【参考范围】血清参考值：3.0～5.20 mmol/L；危险阈值：5.20～6.20 mmol/L；高胆固醇血症：≥6.20 mmol/L。 【临床意义】 1．TC增高常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症(如家族性高胆固醇血症、家族性ApoB缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等)、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。 2．TC降低常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝脏疾病、严重感染、营养不良、肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症晚期等。 【注意事项】 1．试剂中酶的质量影响测定结果。 2．若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成分中去掉胆固醇酯酶即可。 3．检测标本可为血清或者血浆(以肝素或EDTAK2抗凝)。 【评价】本方法线性范围为≤19.38 mmol/L (750 mg/d1)。 本方法特异性好和灵敏度高，既可用于手工操作，也可自动化分析；既可作终点法检测，也可作速率法检测。 在终点法中血红蛋白高于2 g/L时引起正干扰；胆红素高于0.1 g/L时有明显负干扰；血中维生素C与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使结果降低。但是在速率法中上述干扰物质影响较小。高TG血症对本法无明显影响。 检测TC的血清(浆)标本密闭保存时，在4℃可稳定1周，－20℃可稳定半年以上。
血清胆固醇的定量测定
血清胆固醇的定量测定 摘要：目的：定量测定人血清胆固醇。方法：采用磷硫铁法测定胆固醇含量。结果：该人血清胆固醇为132mg/ml。结论：该人的胆固醇含量正常。 关键词：胆固醇；磷硫铁法 胆固醇参与血浆蛋白的组成，是细胞膜的结构成分，胆汁酸盐，肾上腺皮质激素，维生素D等的前体。胆固醇的测定方法包括化学显色法（磷硫铁法和邻苯二甲醛法）和酶学法（试剂盒），本实验采用磷硫铁法测定血清胆固醇。血清经无水乙醇处理，蛋白质被沉淀，胆固醇则溶在无水乙醇中。在乙醇提取液中加入磷硫铁试剂，胆固醇和试剂会产生紫红色化合物，呈色度与胆固醇含量成正比，可用比色法测定。 1 仪器与试药 1.1 仪器 721型分光光度计；离心机；试管；EP管； 1.2 药品与试剂人血清；10%三氯化铁溶液；磷硫铁试剂；胆固醇标准溶液；无水乙醇 2 方法 2.1 胆固醇的提取取人血清约100μL，分装到两个EP管中，每个管中分别加入200μL无水乙醇，摇匀，每个管中加入无水乙醇1000μL，摇匀，静置10min，离心（3000rpm，5min），得到上清液备用。 2.2 比色测定取三支试管，分别按照表1加入如下试剂。摇匀，室温静置10min。将混合溶液加入比色皿中，若比色皿过大，可加入无水乙醇稀释，放入分光光度计中进行测定吸光度。 表1 试管编号1（测定管）2（标准管）3（空白管）胆固醇提取液 1.0ml ———— 胆固醇标准液—— 1.0ml ——无水乙醇———— 1.0ml 磷硫铁试剂 1.0ml 1.0ml 1.0ml 2.3 计算人血清胆固醇=(OD 2/OD 1 )×0.08×(100/0.04)= (OD 2 /OD 1 )×200，其中， OD 2表示测定管的吸光度，OD 1 表示标准管的吸光度。 3 结果与讨论 3.1 计算结果 OD 2为0.096，OD 1 为0.145，计算可得，人血清胆固醇为132mg/ml. 3.2 讨论正常人胆固醇含量约为110-220 mg/ml，从结果来看，我们可以看处这个人的胆固醇含量是正常的。在实验操作中，配制试剂时要格外吸小心，看清标注以免搞错，胆固醇过高，会引起动脉粥样化，甚至引起冠心病，胆固醇过低，会使人抵抗力不足，容易引发感染性疾病。
高密度脂蛋白胆固醇测定试剂(盒)技术审评规范
高密度脂蛋白胆固醇测定试剂（盒）技术审评规范 （2014版） 一、前言 本审评规范旨在指导注册申请人对高密度脂蛋白胆固醇测定试剂（盒）注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。 本审评规范是对高密度脂蛋白胆固醇测定试剂（盒）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本审评规范是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本审评规范。 本审评规范是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本审评规范相关内容也将适时进行调整。 二、适用范围 高密度脂蛋白胆固醇测定试剂（盒）用于体外定量测定人血清和/或血浆中的高密度脂蛋白胆固醇的含量。 从方法学考虑，本文主要指采用分光光度法原理，利用全自动、半自动生化分析仪或分光光度计，在医学实验室进行高密度脂蛋白胆固醇定量检验所使用的临床化学体外诊断试剂。本规范不适用于干式高密度脂蛋白胆固醇测定试剂（盒）。 依据《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》（以下简称《办法》）高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒管理类别为Ⅱ类，分类代号
为6840。
三、基本要求 （一）综述资料 综述资料主要包括产品预期用途、临床意义、产品描述、有关生物安全性的说明、研究结果的总结评价以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《办法》和《体外诊断试剂注册申报资料基本要求》（国食药监械〔2007〕609号）的相关要求。下面着重介绍与高密度脂蛋白胆固醇测定试剂（盒）预期用途有关的临床背景情况。 高密度脂蛋白(HDL)具有抵御斑块形成的作用，是一种抗动脉粥样硬化的脂蛋白。它的含量与动脉管腔狭窄程度呈负相关，高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）低于0.9mmol/L(35mg/dl)是冠心病危险因素，HDL-C增高，大于1.55mml/L(60mg/dl)被认为是冠心病负危险因素。HDL-C降低也多见于心、脑血管病，肝炎，肝硬化等患者。高脂血症往往伴低HDL-C。肥胖者HDL-C也多偏低。吸烟可使HDL-C下降。饮酒及长期体力活动会使HDL-C升高。测定人血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量是判别低高脂蛋白血症的重要指标。 注：若注册申报产品声称临床意义超出此内容范围，应提供相关文献或临床研究依据。 （二）产品说明书 说明书承载了产品预期用途、试验方法、检测结果解释以及注意事项等重要信息，是指导实验室工作人员正确操作、临床医生针对检验结果给出合理医学解释的重要依据。因此，产品说明书是体外诊断试剂注册申报最重要的文件之一。产品说明书的格式应符合《体外诊断试剂说明书编写审评规范》的要求，结合《体外诊断试剂说明书编写指导原则》的要求，下面对高密度脂蛋白胆固醇测定试剂（盒）
总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂比色法)
总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP 单试剂比色法) 简介： 胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物，分子式C 27H 46O ，分子量为3860.65。胆固醇广泛存在于动物体内，其中脑、神经组织最丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高。 Leagene 总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP 单试剂比色法)又称胆固醇氧化酶法或胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联法等，血液中的胆固醇约1/3为游离胆固醇，2/3为与脂肪酸结合的胆固醇酯，后者被CEH 水解为游离胆固醇，使4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)反应，生成红色醌亚胺色素(Trinder 反应)。分光光度计在500~520nm 处进行比色测定。本试剂盒用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 样本处理： ①血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。 ②细胞样本： a 、取适量的细胞(一般推荐>106以上)，离心，弃上清，留取沉淀。 b 、用PBS 或生理盐水清洗1~2次，离心，弃上清，留取沉淀。 c 、加入200~300μl 的PBS 或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率300W ，每次3~5s ，间隔30s ，重复3~5次。亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心，待用。 ③组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)：生理盐水或PBS(ml)=1：9的比例，加入生理盐水或PBS ，冰浴条件下手动或机械匀浆。离心，取上清待用。 2、 分光光度计(1ml 比色杯)、半自动生化分析仪TC 测定操作: 编号 名称 TC1213100T Storage 试剂(A): COD-PAP 工作液 Good's buffer 2×50ml -20℃ 避光 胆固醇氧化酶 胆固醇激酶 稳定剂 试剂(B): TC 标准(5mmol/L) 1ml -20℃ 避光 试剂(C): ddH 2O 1ml RT 使用说明书 1份
财务尽职调查业务约定书(模板)
尽职调查业务约定书 甲方： 乙方： 丙方： 甲方及乙方共同委托丙方对乙方有限责任公司进行相关的尽职调查，经三方协商，达成以下约定： 一、尽职调查服务范围 甲方、乙方共同委托丙方提供尽职调查服务，具体内容包括但不限于： 1、乙方截至年月日及年10月31日的重要财务事项，包括乙方的资产和负债状况、实际盈利状况、现金流量状况、税务事项、财务影响等； 2、与债务重组相关的信息；主体资格、股权结构、治理结构、对外投资、关联关系；经营业务开展情况；资产抵押状况；担保与质押；重大合同；诉讼及争议；资产中的取回权、别除权、抵消权、留置权；管理层和员工等等。 3、丙方对甲方、乙方委托的尽职调查、执行下列由双方商定的程序并向甲方乙方报告得出的结果： 按照《中国注册会计师相关服务准则第4101号—对财务信息执行商定程序》对甲方提供的原始财务报表及相关财务资料进行了解、复核、分析，但不执行《中国注册会计师审计准则》、《中国注册会计师审阅准则》规定的审计与审阅程序。 4、乙方执行的是商定程序业务，并不构成审计或审阅。
二、甲方、乙方的责任及义务 (一)甲方及乙方的责任和义务 1.及时请乙方为执行上述商定程序提供所要求的全部会计资料和其他有关资料。 2.为丙方派出的有关工作人员提供必要的工作条件和协助，主要事项将由丙方于业务工作开始前提供清单。 3.按本约定书的约定及时足额支付业务费用。 三、丙方的责任和义务 (一)丙方的责任 按照《中国注册会计师相关服务准则第 4101 号——对财务信息执行商定程序》的规定和本约定书的要求，执行上述双方商定的程序，并对实施程序的结果出具报告。 (二)丙方的义务 1.按照约定时间完成商定程序业务，出具报告。时间由双方作口头约定。 2.除下列情况外，丙方应当对执行业务过程中知悉的信息予以保密：(1)取得甲方的授权；(2)根据法律法规的规定，为法律诉讼准备文件或提供证据，以及向监管机构报告发现的违反法规行为；(3)接受行业协会和监管机构依法进行的质量检查；(4)监管机构对乙方进行行政处罚(包括监管机构处罚前的调查、听证)以及乙方对此提起行政复议。 四、业务收费 1.本次尽职调查服务的收费人民币万元整。 2.在签订本约定书后，丙方人员进场后十五天内支付60%，丙方提交尽职调查报告初稿后3日内，支付剩余40%。
胆固醇含量检测
法测定鸡蛋中胆固醇含量 一、原理 当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合反应，产生颜色物质。因此可先对食品样品进行皂化和提取，用硫磷铁试剂作为显色剂，测定食品中胆固醇的含量。 在样品的冰乙酸提取液中加磷硫铁试剂，胆固醇与试剂反应产生紫红色化合物，颜色的深浅与胆固醇的量成正比，可用分光光度计在波长560nm?处测定。 二、实验仪器及试材 1.仪器：分光光度计、水浴锅 2.试剂：本实验用水均需用蒸馏水或去离子水。试剂纯度均为分析纯。 （1）石油醚（沸点30-60℃）、无水乙醇、冰乙酸。 （2）50%氢氧化钾溶液：称取50g氢氧化钾，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL。 （3）25%氯化钠溶液：称取25g氯化钠，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL。 （4）10% 三氯化铁溶液：将10g FeCl3·6 H2O溶于磷酸中，定容至100 mL，储于棕色瓶中，冷藏保存。 （5）磷硫铁试剂：取10% 三氯化铁溶液1.5mL于100mL棕色容量瓶内，加浓硫酸定容至刻度。 （6）胆固醇标准储液：准确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，定容至100mL。 （7）胆固醇标准溶液：临用前将储液用冰乙酸稀释10倍。 三、实验方法与步骤 1.样品胆固醇提取 准确称取充分混匀的鸡蛋约0.20g于25mL具塞比色管中，加入0.5mL50%氢氧化钾溶液和4.5mL无水乙醇，振荡混匀，在80℃恒温水浴中皂化20min。皂化时每隔5min振摇一次使皂化完全。皂化完毕，取出比色管，冷却。加入 3mL 25%氯化钠溶液后再加入10mL石油醚，盖紧玻璃塞，振摇1min，静置分层。 取上层石油醚液1mL，置于25mL具塞比色管内，在65℃水浴中让石油醚自然挥发干，加入4mL冰乙酸，轻摇使胆固醇溶解，待测。 2.样品和标准胆固醇含量测定 另取两支25mL具塞比色管，一支（空白管）加入4mL冰乙酸，一支（标准管）加入1mL胆固醇标准溶液（0.1mg/mL）和3mL冰乙酸。包括样品管，各
实验三血清总胆固醇的测定
实验三血清总胆固醇的测定 目的要求 了解并掌握胆固醇测定的原理和方法。 实验原理 血清胆固醇(chol)测定是动脉粥样硬化性疾病防治、临床诊断和营养研究的重要指标。正常人血清胆固醇含量范围为100 ~ 250mg/mL。 胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆蛋白的组成，而且也是细胞的必要结构成分，还可以转化成胆汁酸盐、肾上腺皮质激素和维生素D等。胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式存在，统称总胆固醇。总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。本实验采用前一种方法。 胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质，此物质在550nm波长处有最大吸收。因此，可用比色法作总胆固醇的定量测定。胆固醇含量在400mg/100mL以内时，与光吸收值呈良好线性关系。 本法不必离心，颜色产物也比较稳定。 试剂和器材 一、试剂 邻苯二甲醛试剂：称取邻苯二甲醛50mg，以无水乙醇溶至50mL冷藏，有效期为一个半月。 混合酸：冰乙酸100mL与浓硫酸100mL混合。 标准胆固醇贮存液（1mg/mL）：准确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，定溶至100mL。 标准胆固醇工作液（0.1mg/mL）：将上述贮存液以冰乙酸稀释10倍，即取10mL用冰乙酸稀释至100mL。 二、测试样品 0.1mL人血清以冰乙酸稀释至4.00mL。 三、器材 试管1.5×15cm（×11）；移液枪，量筒50mL分光光度计。 操作方法 一、制作标准曲线 取9支试管编号后，按下表顺序加入试剂：
加毕，温和混匀，20～37℃下静置10分钟，在550nm波长处测定光吸收值。以总胆固醇量（mg%）为横坐标，光吸收值为纵坐标做出标准曲线。 二、样品测定 取3支试管编号后，分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定： 加毕，温和混匀，20～37℃下静置10分钟，在550nm下测定光吸收值。然后，从标准曲线上可查出样品中总胆固醇的含量。 注意事项 1.本法在20～37℃条件下显色。 2.混合酸粘度比较大，颜色容易分层，比色前一定要混匀。 思考题 1. 本实验操作中特别需要注意些什么？为什么？ 2. 酯类难溶于水，将它们均匀分散在水中则形成乳浊液，为什么正常人血浆和血清中含有酯类虽多，但却清澈透明？
执行商定程序的模板
注册会计师执行商定程序的报告 广会所专字[2010]第10001320018 号 广州市广百股份有限公司: 我们接受委托,对广州市新大新有限公司(以下简称:“新大新公司”)2009 年度实际净 利润与利润预测数的差异情况进行比对并执行了与贵公司商定的程序。这些程序经贵公司同意,其充分性和适当性由贵公司负责。执行这些程序仅是为了协助贵公司评价新大新公司 2009 年度实际净利润与利润预测数的差异。按照《企业会计准则》编制2009 年度财务报表 及计算2009 年度净利润是新大新公司管理当局的责任;按照委托目的最终确定充分、适当的商定程序是贵公司管理当局的责任;我们的责任是按照《中国注册会计师相关服务准则第4101 号—对财务信息执行商定程序》和业务约定书的要求执行商定程序,并报告执行程序的结果。 我们对新大新公司2009 年度实际净利润与利润预测数的差异情况进行核查所执行的商 定程序及执行商定程序的结果报告如下: 一、执行的程序: 1.获取新大新公司2009 年度经审计的财务报表(该报表已经广东正中珠江会计师事务
所审计,并出具“广会所审字[2010]第09005830049 号”无保留意见审计报告),查阅新大 新公司相关的财务报表、会计凭证、账册及其他相关财务资料,并核对2009 年度的净利润。 2.取得2009 年3 月9 日广州百货企业集团有限公司与广州市广百股份有限公司签订的《盈利预测补偿协议》,了解新大新公司2009 年度利润预测数及预测依据等相关情况。 3. 比较和计算新大新公司2009 年度实际净利润与利润预测数的差异,对照《盈利预测 补偿协议》中的条款,检查实际净利润是否达到利润预测数。2 二、执行程序的结果: 1、执行第一项程序,我们发现新大新公司所有会计资料反映的2009 年度净利润与经审 计后的净利润数额一致,未发现需对当期审计后净利润产生实质性影响的调整事项,2009 年度新大新公司实际净利润为2,015.41 万元。 2、执行第2 项程序,我们了解到,广州百货企业集团有限公司与广州市广百股份有限 公司就新大新公司2009 年至2011 年三年盈利预测补偿事宜,该协议中的预测利润为:根据北京立信资产评估有限公司2009 年3 月3 日出具的立信评报字[2009]第004 号《资产评估报告》采取收益现值法预测新大新公司2009 年、2010 年、2011 年净利润分别为1,765.50 万元、1,761.73 万元、1,778.02 万元。
血清胆固醇含量的测定实验报告
实验二 血清胆固醇含量的测定的实验报告 实验目的：学会利用氧化酶法测定血清胆固醇含量的原理和方法。 实验原理：血清胆固醇由游离胆固醇（30%）和胆固醇酯（70%）组成。血清胆固醇经酯化酶水解后，生成游离胆固醇和脂肪酸；在胆固醇氧化酶的作用下，游离胆固醇产生的H 2O 2与4-氨基安替比林和DHBS 反应生成微红色的醌亚胺。醌亚胺在520nm 有特异吸收，反应产生的颜色与胆固醇含量成正比。 胆固醇酯+ H 2O ???→?胆固醇酯酶 胆固醇+脂肪酸 胆固醇+O 2?? ??→?胆固醇氧化酶 △4胆甾烯酮+ H 2O 2 H 2O 2+4-氨基安替比林+DHBS ???→?过氧化物酶 醌亚胺+ H 2O 实验步骤： 1、取2支试管分别加入的血清和标准胆固醇溶液，并分别标注为“H ”和“SH ”试管。往每支试管加入的沉淀剂，在室温下静置15min ，用2000rad/min 的离心机分离10min 。 2、准备5支试管分别标注为“T ”（总胆固醇）、“H ”（高密度脂蛋白胆固醇）、“ST ”（标准总胆固醇）、“SH ”（标准高密度脂蛋白胆固醇）、“B ”（空白实验）。按照下表准备各支试管：（标准胆固醇浓度为50mg/dL ）
3、准备好以上试管后，充分混合并在37。 的温度下放置20min ，用波长520nm 的分光光度计测量各支试管的吸光度值。 实验结果： 计算公式：总胆固醇=ST T 吸光度值吸光度值×02 .01 .0×50 高密度脂蛋白胆固醇=SH H 吸光度值吸光度值×50 代入数据得：总胆固醇=252 .0167 .0×02.01.0×50=（mg/dL ） 高密度脂蛋白胆固醇=430 .0605 .0×50=（mg/dL ）
实验七__胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇
生物化学与分子生物学设计实验 （胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇及二乙酰一肟法测定血清尿 素） 小组成员： 班级：麻醉11-2班 日期：2012年12月19 胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇及二乙酰一肟法测定血清尿素 实验目的 1、掌握酶法测定总胆固醇的原理和方法。 2、学习用比色法测定血清尿素。
3、巩固有关胆固醇和尿素的知识。 4、进一步熟练UV2100型分光光度计的 重点、难点： 重点：1、氧化酶法测定总胆固醇的原理 2、二乙酰一肟法测定血清尿素的注意事项 难点：氧化酶法测定总胆固醇的原理 一、实验原理 （一）氧化酶法测定血清总胆固醇 血清总胆固醇(TC)包括：游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)两部分。本实验是胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化物酶相偶联发生的偶联反应。 第一步：血清胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA) 。 第二步：胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和H 2O 2。 第三步：H 2O 2 在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成 苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC含量成正比。 （二）二乙酰一肟法测定血清尿素 二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4，5-二甲基-2-氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。因二乙酰不稳定，故由试剂中二乙酰一肟与强酸作用产生二乙酰。 二、操作步骤 （一）氧化酶法测定血清总胆固醇 终点法检测TC，取试管3支按下表依次加样。 酶法测定TC操作步骤 加入物(μl)空白管标准管测定管 血清－－20 标准液或定值血清－20－ 蒸馏水20－－
酶试剂 1 000 1 000 1 000 混匀后，37℃保温10 min，每管加3ml水混匀，用分光光度计比色，于500 nm波长处以空白管调零，读出各管吸光度。 （二）二乙酰一肟法测定血清尿素 取试管3支，按下表依次加样。 二乙酰一肟法操作步骤 加入物(ml)空白管标准管测定管 血清－－ 尿素标准应用液－－ 蒸馏水－－ 二乙酰一肟溶液 酸性试剂 混匀，置沸水浴加热12min，取出置冷水中冷却5min，以空白管调零，在540nm处读取各管吸光度。 三、注意事项 （一）氧化酶法测定血清总胆固醇 1、最后加酶试剂，各管反应时间应一致； 2、比色应在30min内完成； 3、试管在操作前尽量保持干燥； 4、试剂中酶的质量影响测定结果； 5、若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成分中去掉胆固醇酯酶即可。 （二）二乙酰一肟法测定血清尿素 1、试剂中加入氨基硫脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象，(每小 时小于5%)。煮沸显色经冷却后，应及时比色。 2、尿液中尿素也可用此法测定，但因浓度高，需先用去离子水作50倍以上稀释。 3、注意洁净干燥，加量务必准确。 4、水浴时注意打开水浴箱盖，以免水汽入管。 5、酸性试剂中酸的含量较浓，要小心使用。
商定程序业务约定书
商定业务约定书 甲方：xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 乙方：xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 根据《中华人民共和国合同法》、《中华人民共和国注册会计师法》及中国注册会计师审计准则的有关规定，经双方友好协商，甲方委托乙方对甲方投资建设的xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx建设资金投资情况进行审计并出具审计报告事宜达成一致。经双方商定如下协议： 一、委托业务范围：甲方投资建设的xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx。 二、委托业务工作方式：送达审计 三、收费标准：根据贵州省物价局、省财政厅[2011]24号文件执行，分项目出具审计报告，xxxxxxxxxxxxxxxxxx。 四、其他事项： 1、上述商定事项为甲方委托乙方的商定业务，除上述约定审计范围外，乙方不对贵公司的其他资金进行审计也不发表审计意见； 2、甲方应在xxxx年xx月xx日前向乙方提供所有与本审计项目有关的全部资料； 3、本审计业务的约定期间为xxxx年xx月日至xxxx年xx月日，共个工作日，如有特殊情形，可适当延期； 4、乙方根据本业务约定的审计范围，客观的向甲方出具本商定业务约定项目审计报告； 5、乙方出具报告的份数为x份。 五、乙方必须恪守职业道德，不得对处泄露与本商定业务有关的任何财
务等商业密秘。 六、甲方承诺积极配合乙方实施本项目审计事项。 七、本委托业务结束，乙方出具正规发票，甲方一次性支付约定的业务费用。 八、本协议甲乙双方不按合同约定履行各自义务均属违约，若出现违约行为，按《中华人民共和国合同法》相应条款办理。 九、本协议一式两份，甲乙双方各执一份，具备同等法律效力，经双方签字盖章后正式生效。 甲方：xxxxxxxxxxxxxx乙方：xxxxxxxxxxxxxxxxxx 地址：地址：xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 法人或授权代表：法人或授权代表：xxxxxxxxxx 联系人：联系人：xxxxx 联系电话：联系电话：xxxxxxxxxxxx 日期：xxxx年xx月xx日日期：xxxx年xx月xx日
总胆固醇测定试剂盒标准操作程序.
总胆固醇测定试剂盒标准操作程序 1. 摘要 本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆样本中总胆固醇的含量。 2. 适用范围 程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清样本中总胆固醇的含量。 3. 职责 使用AU5811自动生化分析仪进行测定总胆固醇浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。 4. 检测方法 上海科华生物工程股份有限公司生产的总胆固醇测定试剂盒采用的是氧化酶法。 5. 原理 O H ESPAS O H O H O O H 222222244+???→?+-+-?+????→?++???→?+醌亚胺氨基安替比林胆甾烯酮 游离胆固醇脂肪酸 游离胆固醇总胆固醇过氧化物酶胆固醇氧化酶胆固醇酯酶 ESPAS:N-乙基-N-(3-磺丙基)-间-茴香胺 血清中的总胆固醇在胆固醇酯酶的作用下水解成游离胆固醇和脂肪酸,游离胆固醇在胆固醇氧化酶的催化下,氧化成Δ4-胆甾烯酮和双氧水,最后双氧水在过氧化物酶的催化下与色原底物4-氨基安替比林和ESPAS 反应生成红色化合物醌亚胺。 由于醌亚胺在波长550nm 处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内，550nm 处吸光度的变化值与样本中总胆固醇的含量成正比 6. 仪器 AU5811自动生化分析仪 7. 试剂 7.1 试剂来源： 上海科华生物工程股份有限公司提供 7.2 试剂瓶内主要成分： R1：胆固醇酯酶、抗坏血酸氧化酶、过氧化物酶、ESPAS （ADPS ）； R2：胆固醇氧化酶、4-氨基安替比林； 校准品：胆固醇 7.3 试剂稳定性：
高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒(直接法-选择抑制法)产品技术要求rzsd
高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒（直接法-选择抑制法） 组成： 适用范围：本试剂盒用于体外测定人血清中高密度脂蛋白胆固醇的含量。 1.1产品型号/规格及其划分说明 1.1.1液体单试剂 1.1.2液体双试剂
1.2主要组成成分
2.1外观 2.1.1 液体单试剂 2.1.1.1 试剂（R）应为浅粉色透明溶液，无混浊，无未溶解物； 2.1.1.2 校准品应为淡黄色冻干粉； 2.1.1.3 试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。 2.1.2 液体双试剂 2.1.2.1 试剂1(R1)应为无色透明溶液，无混浊，无未溶解物； 2.1.2.2 试剂2(R2)应为无色透明溶液，无混浊，无未溶解物；2.1.2.3 校准品应为淡黄色冻干粉； 2.1.2.4 试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。 2.2 净含量 试剂（R）的净含量不少于标示值。
试剂1(R1)、试剂2(R2)的净含量不少于标示值。 2.3 试剂空白吸光度 在主波长600nm、副波长700nm处（光径1cm），试剂空白吸光度A ＜0.05。 2.4分析灵敏度 测量1mmol/L的被测物时，吸光度变化ΔA＞0.04。 2.5 线性范围 在[0.2，2.5]mmol/L线性范围内，线性相关系数r≥0.995。 在[0.2，1.0]mmol/L范围内，绝对偏差不超过±0.1mmol/L；在 (1.0，2.5]mmol/L范围内，相对偏差不超过±10%。 2.6 精密度 2.6.1 重复性 重复测定(0.8±0.2)mmol/L和(1.5±0.5)mmol/L的样品，变异系数CV≤4%。 2.6.2 批间差 相对极差≤5%。 2.7 准确度 测定标准物质GBW09179，测定值与靶值的相对偏差不超过±10%。 2.8 稳定性 原包装的HDL-C试剂盒在2℃～8℃避光保存，有效期为18个月。 试剂盒在规定的储存条件下保存至有效期满后，检测2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7项，结果应符合各项目的要求。 2.9 校准品批内瓶间差 校准品批内瓶间差（变异系数CV）≤5%。 2.10 校准品复溶稳定性 用HDL-C试剂盒分别测定复溶后2℃～8℃放置5天，-20℃放置1个月的校准品，测定值与校准品标示值相对偏差应不超过±5%。
【免费下载】执行商定程序业务约定书
附录4101-1：对财务信息执行商定程序业务约定书参考格式 业务约定书 甲方：ABC公司 乙方：××会计师事务所 兹由甲方委托乙方对……(特定财务信息)执行商定程序业务，经双方协商，达成以下约定： 一、委托目的与工作范围 1.乙方接受甲方委托，为了协助甲方……（具体目的），对……（特定财务信息)执行经甲、乙双方共同协商确定的程序。 2.乙方对……(特定财务信息)执行下列由双方商定的程序并向甲方报告得出的结果： （详细列出拟执行的程序的性质、时间和范围） 3.乙方执行的是商定程序业务，并不构成审计或审阅，因此乙方不发表任何审计或审阅意见。 二、甲方的责任和义务 （一）甲方的责任 根据《中华人民共和国会计法》和《企业财务会计报告条例》，甲方及甲方负责人有责任保证会计资料的真实性和完整性。因此，甲方管理层有责任妥善保存和提供和本业务有关的全部资料，这些资料必须是真实的和完整的。 （二）甲方的义务 1.及时为乙方执行上述商定程序提供所要求的全部会计资料和其他有关资料。
2.为乙方派出的有关工作人员提供必要的工作条件和协助，主要事项将由乙方于业务工作开始前提供清单。 3.按本约定书的约定及时足额支付业务费用以及乙方人员在执行业务期间的交通、食宿和其他相关费用。 三、乙方的责任和义务 （一）乙方的责任 按照《中国注册会计师相关服务准则第4101号——对财务信息执行商定程序》的规定和本约定书的要求，对……(特定财务信息)执行上述双方商定的程序，并对实施程序的结果出具报告。 （二）乙方的义务 1.按照约定时间完成商定程序业务，出具报告。乙方应于20×2年×月×日前出具报告。 2.除下列情况外，乙方应当对执行业务过程中知悉的甲方信息予以保密：（1）取得甲方的授权；（2）根据法律法规的规定，为法律诉讼准备文件或提供证据，以及向监管机构报告发现的违反法规行为；（3）接受行业协会和监管机构依法进行的质量检查；（4）监管机构对乙方进行行政处罚（包括监管机构处罚前的调查、听证）以及乙方对此提起行政复议。 四、业务收费 1.本次业务收费是以乙方各级别工作人员在本次业务中所耗费的时间为基础计算的，乙方预计本次业务的费用总额为人民币××元。 2.甲方应于本约定书签署之日起×日内支付×%的业务费用，剩余款项于[报告草稿完成日]结清。 3.如果由于无法预见的原因，致使乙方从事本约定书所涉及的业务服务实际时间较本
总胆固醇(total cholesterol,TC)含量测定试剂盒说明书
货号：MS2409 规格：100管/96样总胆固醇（total cholesterol，TC）含量测定试剂盒说明书 微量法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： TC包括游离胆固醇和胆固醇酯。TC是指组织中所有脂蛋白所含胆固醇之总和。 测定原理： 利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇（FC）和游离脂肪酸（FFA），从而把胆固醇酯 转化为FC；进一步利用胆固醇氧化酶催化FC氧化，生成△4-胆甾烯酮和H 2O 2 ；最后利用过氧 化物酶催化H 2O 2 氧化4-氨基安替比林和酚，生成红色醌类化合物；在500nm有特征吸收峰，其 颜色深浅与TC含量成正比。 自备实验用品及仪器： 水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。 试剂组成和配置： 试剂一：异丙醇100mL（自备）； TC工作液：液体20mL×1瓶，4℃保存； TC标准品：液体1mL×1支，0.5μmol/mL，4℃避光保存。 TC的提取： 1、组织中TC的提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约 0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清，即TC待测 液。 2、细胞、细菌中TC的提取：先收集400-500万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加1mL试剂 一，超声波破碎1min（强度20％，超声2s，停1s），即TC待测液。 3、血清（浆）等样品：直接测定。 测定操作： 1. 可见分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到500 nm，蒸馏水调零。 2. TC工作液置于37℃水浴30min。 3. 标准管：在在微量石英比色皿/96孔板中依次加入50 μL TC标准品和150μLTC工作液，混匀，静置24h后于500nm处比色，记为A标准管。 4. 测定管：在在微量石英比色皿/96孔板中依次加入50 μL TC待测液和150μLTC工作液，混匀，静置24h后于500nm处比色，记为A测定管。 注意：标准管只需测定一次。 计算公式： 1. 血清（浆）中TC含量计算： TC（μ mol /dL）=C标准液×A测定管÷A标准管×100 =50×A测定管÷A标准管 C标准液：0.5μmol/mL；100 mL：1dL=100 mL。 2. 组织中TC含量计算： (1)按样本蛋白浓度计算 第1页，共2页
执行商定程序的报告三篇
执行商定程序的报告三篇 篇一：执行商定程序的报告 对财务信息执行商定程序，是指注册会计师对特定财务数据、单一财务报表或整套财务报表等财务信息执行与特定主体商定的具有审计性质的程序，并就执行的商定程序及其结果出具报告。 我们接受XX公司委托，对20xx年度至20xx年度广告费支出与执行了商定程序。这些程序经XX公司管理层同意，其充分性和适当性由XX公司负责。我们的责任是按照《中国注册会计师相关服务准则第xxx号—对财务信息执行商定程序》和业务约定书的要求执行商定程序，并报告执行程序结果。本业务的目的仅是为了协助XX公司及第三方阅读并理解XX公司20xx年度至20xx年度广告费支出之用。现将执行的程序及得出的结果报告如下： 一、执行的程序 我们执行的程序仅限于：查阅XX公司指定的20xx年度至20xx年度关于广告费支出的凭证资料和部分购买包装物合同，XX公司指定的广告费包括购买包装物、印刷费、报纸刊登费以及宣传过程中发生的差旅费和招待费等支出。 二、执行程序的结果 经执行上述的商定程序，我们没有发现XX公司指定的20xx年度至20xx年度的广告费支出与上述不符的情况。 XX公司20xx年度至20xx年度广告总支出金额为xxxxx元，各年度广告支出总情况见下表：
xx号》的规定，我们执行的商定程序并不构成对贵公司所提交的有关财务资料审计或审阅，因此我们不对上述广告费发表审计或审阅意见。如果执行商定程序以外的程序，或执行审计或审阅，我们可能得出其他应报告的结果。 本报告中涉及相关数据仅在符合所商定程序含义条件下有效。在不符合所商定程序条件下或与其他数据相联系并作出相关判断的情况下无效。 本报告目的旨在协助XX公司及相关第三方阅读并理解XX公司20xx年度至20xx 年度广告费支出之用，因使用不当的责任与本会计师事务所和注册会计师无关。
分光光度法测定胆固醇含量
实验八、分光光度法测定胆固醇含量 一、实验目的 1、学习721分光光度计的使用 2、掌握分光光度法测定胆固醇含量的原理 3、学习并掌握利用分光光度法制作胆固醇含量标准曲线的方法 二、实验原理 当一束平行的单色光照射到有色溶液时，光的一部分被溶液吸收，一部分透过溶液。假设入射光强度为I 0，透过光强度为It ，溶液的浓度为C ，液层宽度为b ，则 b C K I I A t ??==0 log （朗伯－比尔定律的数学表达式） 式中：A 为吸光度，没有单位 K 随C 、b 的单位而不同 C ：g/L, b : cm , k: L/g·cm ,为吸光系数； C ：mol/L, b : cm , k: L/mol·cm ,为摩尔吸 光系数 以上式子表明：当一束单色光通过有色溶液时，其吸光度与溶液浓度及宽度成正比。当k 、b 都一定时，A 与C 成正比，因此若已知浓度溶液（即试样溶液）的吸光值As ，在相同条件下测出未知浓度溶液的吸光值Ax ，则试样溶液的浓度Cx 可通过下式求出： s s x x x s x s C A A C C C A A ?=?=（标准对照法，适用于非经常性的分析工作） 若是经常性的批量测定，则应用标准曲线法，即配制一系列已知浓度的标准溶液，在选定波长处，用同样的比色皿分别测其吸光值。作出“吸光值/含量”的标准曲线，在相同条件下测定未知浓度试样的吸光值，直接可从标准曲线上查出相应的浓度。 三、实验药品及仪器 药品: FeCl 3·6H 2O ，磷酸(A.R. 即“分析醇”) ， 浓硫酸（A.R.）， 胆固醇（C.P.）， 无水乙醇。 试剂：10％三氯化铁溶液：10g FeCl 3·6H 2O 溶于磷酸，定容至100ml ，存棕色瓶中，冷藏 磷硫铁试剂（P-S-Fe 试剂）：取1.5ml 10％三氯化铁溶液于100ml 棕色容量瓶加 T ＝－ I 0 I t （透光度或透光率）