葛根含量测定方法(葛根素)
清热降糖颗粒中葛根素的含量测定
【关键词】高效液相色谱法；,,清热降糖颗粒；,,葛根素摘要：目的应用高效液相法测定清热降糖颗粒中葛根素的含量。
方法以甲醇-水（24∶76）为流动相，用外标法定量。
结果葛根素在0.037 8~0.472 5 μg范围内，葛根素峰面积值与进样量呈良好的线性关系；回归方程为：y=4 047.36x-1.77，r=0.999 9；加样回收率为102.6%，rsd=0.98%（n=5）。
结论该法简便、准确、灵敏度高，可作为该品含量测定方法。
编辑。
关键词：高效液相色谱法；清热降糖颗粒；葛根素清热降糖颗粒处方由葛根等药材组成，具有滋阴清热，生津止渴作用。
主治糖尿病阴虚热盛重症，可降血糖，改善胰岛素抵抗。
用于咽干口燥，心烦畏热，渴喜冷饮，多食渴饥，溲赤便秘，舌红苔黄，脉细滑数等症。
葛根素是葛根的主要有效成分，因此采用高效液相法测定葛根素的含量，为控制本制剂质量提供实验依据。
1 器材1.2 试剂均为色谱纯。
1.3 试药葛根素对照品：由中国药品生物制品检定所提供（供含量测定用，批号：0752-9907）；清热降糖颗粒由江苏省中西医结合医院制剂室提供。
2 方法与结果2.1 色谱条件zorbax sb-c18（ф4.6 mm×150 mm）；流动相：甲醇-水（24∶76）；流速：1.0 ml/min；检测波长：250 nm；柱温：30℃。
2.2 供试品溶液的制备取本品内容物适量，研细，精密称取0.25 g，加入30%乙醇溶解并定容至100 ml，精密量取1 ml，加30%乙醇定容至25 ml，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。
2.3 对照品溶液的制备及标准曲线绘制2.3.1 对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品2.362 5 mg，置25 ml量瓶中，加30%乙醇至刻度，摇匀，精密量取2 ml，置10 ml量瓶中，加30%的乙醇至刻度，摇匀，即得。
2.3.2 标准曲线绘制精密吸取上述葛根素对照品溶液，加甲醇配成不同浓度的溶液。
葛根素及总黄酮含量测定
1.1 材料与仪器 LC-10AT 型高效液相色谱仪：日本岛津仪器株
式会社、SPD-10A 紫外检测器、浙江大学 N2000 色谱数据工作站：浙江大学智达信息工程有限公 司、UV-2550 双光束紫外分光光度计：日本岛津 仪器株式会社、DHG101 电热恒温鼓风干燥箱：巩 义市英峪予 华仪器厂、LQH2000 超 声波清 洗 器 ： 上海科导仪器有限公司、AR1140 分析天平：奥豪 斯国际贸易公司。
利用紫外分光光度计法，采用葛根素为标准 品，测定饮料中的总黄酮含量。 1.4.2 标准曲线
精密称取 10mg 葛根素（中国药品生物制品检定 所：110752-200511）于 50ml 容量瓶中，用 95%的 乙醇溶解至刻度，得标准品溶液；量取标准品溶 液 1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置于 50ml 容 量瓶中，用乙醇定容（95%乙醇 10ml，用水定容至 100ml， 为 参 比 溶 液）； 用 参 比 溶 液 调 零 ， 用 适 当 浓度标准液在紫外区间（350~190nm）峰值检测，总 黄酮最大吸收峰在 251nm 处。在 251nm 处测定各 标准液吸光值 A，以葛根素浓度 C（×10-3mg/ml）为横 坐标，吸光度 A 为纵坐标，绘制标准曲线。 1.4.3 精密度、重复性和稳定性试验 1.4.3.1 精密度试验
0.228
（mg/ml）
0.15 0.135 0.1
0.05
0 葛根饮料
0.083
0.108 0.084
0.032
枳椇饮料 罗汉果饮料 竹叶饮料
3 结论
分别采用 HPLC 法和 UV 法检测了市场上 4 种 植物饮料中葛根素及总黄酮含量。检测结果显示， HPLC 法 和 UV 法 平 均 回 收 率 分 别 为 100.01% 和 100.03%；RSD 分别为 0.12%和 0.25%，该方法准 确，稳定，重现性高，可为植物饮料质量控制提 供理论依据。
高效液相色谱法测定葛根中葛根素的含量
和葛 根样 品溶 液 各 2 L 0 ,进 入 高 效 液相 色谱 仪
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20 0 8年第 1 0期
25 m . 0n
中 国饲 料
表 3 葛根素的 回收率
24 3 作 曲线 称 取 0 1 根 素 标 准 品 , . - . 0g葛 0 用
w s la dtem bl p a e a ta o: a r( 5 5 , eU ee t n w v ln t a 2 0n T ee a o d l e r a 8 n o i h s w s h n l t 2 : )h V d tc o a e ghw s 5 m. r w s o n a C h e me w e 7 t i e h g i r a o s i i i te cn e t t nrn eo 0～1 0 I / f u rr a i P ea a o aa r 0 9 9 . ea — e t n hpw t nh o c nr i g f li h ao a 2 4 g ~ mL o p eai i R dx u r ieL b t nn r e(= . 9 ) h V 9 T
3 0%乙醇溶 液溶 解 并定 容至 2 ,该溶 液浓 度 5mL 为 4 0 ~ / L 移 取 葛 根 素 标 准 贮 备 液 0 gm .
05 1 ,.,., .,.,. mL分别 用 3 .. . 1 20 25 30 3 0 5 5 0%乙醇 溶 液稀 释并 定 容 至 1 L 0m .其 相 应 浓 度分 别 为 : 2 ,0 6 ,0 10 10 10~ / L 现 配现 用 .分 0 4 ,0 8 ,0 ,2 ,4 gm .
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中 国饲 料
20 0 8年 第 l 0期
不同种类食物中葛根素含量的测定
１ ． 标准溶液 的制备 ．３ ２
混合液溶解后 ， 配制成浓度为 ３１５ ６２ 、２ 、５ ５ 、 ． 、． １． ２ 、０ ２ ５ ５
１０ ０ 咖 Ｌ的溶液 ， 分别取上述溶液各 ｌ 进样 ， ０ 在上
述色谱条件下分析 ， 录色谱峰面积 ， ３１５ｐ ／ Ｌ 记 在 ． ｇｍ ～ ２ ，
共采 集 ６ ０种食物样 品 ， 分别 由重 庆 、 广州 、 天津 、 武汉 ４个不 同地 区提供 ， 主要包括蔬菜 、 水果及 干豆类 食 物 。蔬 菜 水果 样 品用 自来 水 、 馏 水反 复 冲洗 干 蒸 净， 晾干 ， 按我 国居 民食用 习惯将可食用 部分 （ 不少 于
３ ０只切成丁块并混合均匀 ， ０ ） 冷冻干燥 ２ 后取 出 ， ４ｈ 分
摘 要： 用 Ｈ Ｌ 采 Ｐ Ｃ方法 ， 测定采 集于不 同地 区的 ６ ０种食物 样品 中葛根素 的含量 ， 以了解 葛根素 在不 同食 物 中的
分布 与含 量情况 。 经测定 ， ６种蔬 菜中检 出葛根 素 ， 中含量最 高的是 芋 头， 在 其 含量（ 干重 ） １． ／ ０ｇ 水果 为 ８６ ｍｇ１ ｏ ０ ０ 样品 只在 芒果 中检 出葛根素 ， 含量（ 干重 ） ０９ ￣ｌ０ｇ 干豆类食物样 品只在绿 豆 中检 出葛根素 ， 量（ 重） 为 ． ｍ Ｏ ｏ ７ 含 干 为
ｄ ｔｒ ｎ ｄ．ｔ ｅ ａ ｎ ｈ ｉｔ ｂ ｔｏ ｕ ｒ ｒｎ ｉ ｄｆｅｅ ｔ ｏ ｄ ．Ｔｈ ｅ ｕｔ ｓ ｏ ｄ ｔ ａ ｕ ｒ ｒｎ ｅｅ ｍｉ ｅ ０ ｘ ｍｉ ｅ ｔ ｅ ｄ ｓｒ ｕ ｉｎ ｐ ｅ ａ ｉ ｎ ｉ ｒ ｎ ｆｏ ｓ ｉ ｆ ｅ ｒ ｓ ｌ ｈ ｗｅ ｈ ｔ ｐ ｅ ａｉ ｗａ ｓ ｓ
葛根素吸光系数
葛根素吸光系数葛根素是一种天然的红色素，具有抗氧化、抗癌、降血压、降血脂等多种功效，是目前备受研究的新型生物活性物质之一。
葛根素吸光系数是指其在特定波长下的吸光度值，是衡量其纯度和浓度的重要指标。
以下为详细介绍：一、葛根素吸光系数的意义葛根素作为一种天然红色素，在食品、药品、化妆品等各个领域都有广泛的应用。
然而，由于其在产品加工过程中容易受到热、光、氧等因素的影响，导致其纯度和浓度下降，因此如何准确测定葛根素的含量显得十分必要。
而葛根素吸光系数则是一种测定葛根素含量的常用方法之一，具有快速、准确、便捷等优点。
二、葛根素吸光系数的测定方法测定葛根素吸光系数的方法主要有分光光度法和高效液相色谱法。
其中，分光光度法是目前比较流行的方法。
具体步骤如下：1. 取适量葛根素样品，加入适量的色谱纯水，制成10mg/L的葛根素溶液。
2. 将所得溶液分别置于1cm宽的量筒中，用紫外分光光度计在517nm 处测定其吸光度，记录数值。
3. 根据质量浓度关系式计算得到葛根素样品在517nm处的吸光系数。
三、葛根素吸光系数的数值葛根素吸光系数一般在517nm处测定，其参考值范围为12.5-37.5，具体数值还需根据实验条件和测定方法等因素而定。
需要提醒的是，在实际应用中，吸光系数数据往往会受到多种因素的影响，如溶液浓度、溶解度、温度、pH值等，因此需要科学合理的方法进行测定和比较。
四、结论葛根素作为一种营养保健品，其吸光系数的测定对于保证其纯度和浓度具有非常重要的意义。
通过分光光度法可测定得到葛根素在特定波长下的吸光度值，进而计算得到其吸光系数。
然而，需要注意的是，葛根素吸光系数的数值常受到多种因素的影响，因此在实际应用中需要格外小心。
葛根泡腾片中葛根素含量的测定
© 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
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1198
光谱实验室
第 25 卷
D eterm ina tion of Puerar in in Rad ix Puerar iae Effervescen t Tablet
2 实验部分
2. 1 仪器与试剂 W a ters515 高 效 液 相 色 谱 仪, W a ters2487 单 波 长 紫 外 检 测 器, V enu sil M P 2C 18 色 谱 柱
(150mm ×4. 6mm ; 5Λm ) , R heodyne 7725i 型手动进样器, Em pow er 色谱工作站 (美国W a ters 公司 产品) ; H Y24 型振荡器 (常州国华电器有限公司) ; 超纯水仪 (北京历元电子仪器技贸公司) ; PH SJ 2 4A 实验室pH 计 (上海精密科学仪器有限公司) ; 津腾微孔过滤膜 (直径 50mm , 孔径 0. 45Λm )。
第 25 卷, 第 6 期 2008年11月
光 谱 实 验 室
C h inese J ou rna l of S p ectroscopy L abora tory
葛根中葛根素的高效液相色谱分析
葛根中葛根素的高效液相色谱分析【摘要】目的测定不同产地葛根中葛根素的含量。
方法用HPLC法测定，以MeOH-H2O-HAc（25∶75∶0．5）为流动相，250 nm为检测波长。
结果葛根素在0．026～1．95 μg与峰面积呈良好线性关系（r=0．999 8）,平均回收率为97．3%,RSD为1．35%(n=5)。
结论该法简单、快速、准确,适用于葛根中葛根素含量的测定。
【Abstract】Objective Determination of Puerarin in the Redix Puerariae from different areas.Methods Puerarinwere determined by HPLC.The mobile phase wasMeOH-H2O-HAc（25∶75∶0．5）.Detection wavelength was at 250 nm.Results The Puerarin curve showed good linear correlation within 0．026-1．95 μg(r=0．999 8).The average recovery of Puerarin was 97．3% with RSD of 1．35%(n=5).Conclusion The method is simple and can be used to determine Puerarin with quick and accurate.【Key words】Redix puerariae; Puerarin;HPLC葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata (Willd.) Ohwi的干燥根,是常用中药材,具有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻功效，用于外感发热头痛、项背强痛、口渴、消渴、麻疹不透、热痢、泄泻、高血压颈项强痛等[1]。
现代研究证实，葛根中的主要有效成分为葛根素等异黄酮类化合物，具有抗炎解热、扩张冠状动脉血管、增加冠状动脉血流量的作用，同时也有降低血压的作用。
葛根素的提取和含量测定
纤维素钠为黏合剂的硅胶 Z 薄层板 （厚度 =>? ! ； &） 氯仿 $ 甲醇 $ 水 （# \ = 0 > \ ? 0 =>） 为展开剂； 展 距 ] 1&；
作者简介： 马家骅 （ !"#" $ ） ， 男， 正攻读药剂学专业的硕士学位。 % $ &’()： *(’+,’&’ - !./ 0 12& （ 324456728958: ’,:+24） ， % $ &’()： ;’8<&(8<!. - !./ 0 12& ! 通讯作者
点样量与峰面积的线性关系良好。 0 范围内， " 按 ! " # " % 方法的精密度考察 取 葛根 素 样品 # 份， 项 下 方 法 分 别 制 备 供 试 品 溶 液， 测定峰面 “- . ! . ( ” 积， 计算， %&’ ’ - . (- 8 。 ! "# "& 稳定性试验 精密吸取 供 试 品 溶 液 - " 点 1， 于硅胶 9 薄 层 板 上， 展 开， 取 出， 晾 干。 每 隔 - : 扫
葛根为豆科植物野葛 9($,3,*3 40@3.3 （ N())9 0 ） JV +Q( 或甘葛藤 9($,3,*3 .#0:-0%** Y58:+ 0 的干燥根。葛 根中的主要有效成分为葛根素、 大豆苷元、 大豆苷等 异黄酮类化合 物。 葛 根 素 有 刺 激 血 液 循 环 的 作 用， 对垂体后叶素引起的急性心肌出血有保护作用。临 床上以葛根素为 主 要 成 分 的 葛 根 素 注 射 液， 治疗视
葛根素的提取和含量测定
马家骅 ! ， 杨 明 !! ， 曹世栋 = ， 袁叶飞 ! ， 王毓杰 !
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葛根含量测定方法（葛根素）
葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根。2005版《中国药典》一部采
用高效液相色谱法测定其葛根素的含量。
一、高效液相色谱法
2005版《中国药典》葛根含量测定项下：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（25：75）
为流动相；检测波长为250nm。理论板数按葛根素峰计算应不得低于4000。
供试品溶液的制备：取本品粉末约0.1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入30%乙醇50ml，
称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，
取续滤液，即得。
HPLC法测定葛根及其制剂中葛根素的含量时，使用最多的流动相系统为甲醇-水系统，
另外还有甲醇-水，加醋酸调节pH等。
A：以甲醇-水为系统的，常见的比例及实验条件为：
①Waters2695/ 2996/ Empower 色谱系统；色谱柱Symmetry C18 柱( 3.9mm×150mm, 5
μm)；流动相：甲醇-水(25：75)；DAD检测波长254nm；柱温35℃。
②SP8800 型高效液相色谱泵；Hypersil ODS (4.6mm×250mm,5μm大连依利特科学有
限公司)；流动相：甲醇-水(30：70)；柱温40℃；检测波长250nm。
③Waters高效液相色谱仪；十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）；甲
醇-水（40：60）为流动相；检测波长为250nm；柱温30℃。
④美国Spectra-Physics 液相色谱仪；色谱柱Lunm C18 (150mm×4.6mm, 5μm ) 不锈
钢柱(美国Phenom enex 公司)；流动相为甲醇-水(28：72)；检测波长250nm；柱温30℃。
B：乙腈-水系统：
①LC-10ATvp高效液相色谱仪；Hypersil ODS 色谱柱(4.6mm×150mm,5μm)；乙腈-水
(15：85)为流动相；检测波长250nm。
②TSP 高效液相色谱仪；色谱柱Turner C18H37（5μm，4.6mm×150mm）；流动相：乙
醇-水(43：207)；柱温30℃；检测波长250nm。
C：加酸调节的，如：
①LC-10A高效液相色谱仪；色谱柱为ODSC18柱（5μm，4.6mm×150mm）；流动相为甲醇
-水（35：65），内含0.01%醋酸；柱温35℃；检测波长251nm。
②SP-8800高效液相色谱仪；色谱柱ODS-C18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：甲醇
-1.4%醋酸溶液( 22：78 )；柱温室温；测定波长: 250nm。
③美国Beckman公司高效液相色谱仪；Hypersil ODS柱（2.5μm，4.6mm×250mm）；流
动相为甲醇-氯仿-1.5%冰醋酸（22：1：77）；检测波长250nm。
④SP1000 高效液相色谱泵；色谱柱YMC C18不锈钢柱(4.6mm×150mm,5μm)；流动相：
甲醇-水醋酸(42∶100：0.2)；检测波长250nm；柱温:室温。
其它如：吕竹芬等测定心血宁滴丸中葛根素的含量，采用高效液相色谱法，Dikma
piamonsil C18色谱柱(4.6mm×200mm,5μm)，以甲醇-乙腈-水(30：2 ：65)为流动相，流速
为1.0mL/min，检测波长250nm。
颜春华等测定脑得生片中葛根素的含量，采用日本岛津LC-4A高效液相色谱仪；色谱柱
DiamonsilTM (钻石) C18(200mm×4.6mm,5μm)；流动相：乙腈-甲醇-0.1%枸橼酸溶液(5：
25：75)；紫外检测波长250nm；柱温室温。
制备样品溶液时，一般以30%乙醇、50%乙醇、乙醇、甲醇、流动相或盐酸溶液（9→1000）
等为溶剂，采用超声法提取。
二、其它
杨振林等测定葛根冲剂中葛根素含量，采用薄层- 紫外分光光度法，751GD 型分光光度
计(上海分析仪器总厂)。薄层层析硅胶G板,以氯仿-甲醇-水(7：28：0.2)为展开剂,在紫外
灯(365nm)下定葛根素位置,刮下斑点,用甲醇洗脱,测定波长为251±1nm。
崔小兵等测定通脉颗粒剂中葛根素及阿魏酸的含量，采用双波长(λ1= 250nm ,λ
2=313nm) 梯度洗脱法。Waters 2690 型高效液相色谱仪；色谱柱Kromasil C18柱(4.6mm×
250mm，5μm)；柱温为30℃,甲醇-1%醋酸水梯度洗脱；检测波长为250nm；柱温30℃。
方崇波等采用离子络合紫外分光光度法测定葛根素及其制剂的含量，采用UV4/2401 紫
外分光光度计(岛津)。方法：:在pH=4.0条件下,葛根素和Al3+形成络合物,在339.8 nm波
长处通过测定吸收度的改变来测定含量。