cho细胞培养基础知识
2022高中生物糖类的知识点总结
2022高中生物糖类的知识点总结高中生物糖类的知识一、元素：只有CHO二、地位作用1.生命活动的主要能源物质：70%的生命活动2.细胞和生物体的结构成分三、结构组成1.碳水化合物：Cn(H2O)m;不是H:O=2:1就是糖，如CH2O(甲醛);不是所有糖H:O=2:1，脱氧核糖：C5H10O4;不是所有糖都甜，单糖、二糖一般有甜味;不是有甜味的都是糖，人造甜味剂2.单体：单糖(1)六碳糖：C6H12O6① 葡萄糖，存在于动、植物中，细胞中主要能源物质;果糖，存在于植物中，提供能量② 半乳糖：存在于动物中，提供能量(2)五碳糖：构成核酸成分;分类，核糖C5H10O5，脱氧核糖C5H10O43.二糖：C12H22O11(1)分类：麦芽糖=葡萄糖+葡萄糖，存在于植物中;蔗糖=葡萄糖+果糖，存在于植物中;乳糖=葡萄糖+半乳糖，存在于人和动物中(2)功能：水解成单糖而供能4.多聚体：多糖：(C6H10O5)n，生物体内的糖类绝大多数为多糖，高中课本只研究由葡萄糖构成的多糖;糖蛋白中是另一种多糖(1)淀粉，存在于植物中，储存能量。
水解：淀粉→麦芽糖→葡萄糖。
消化：淀粉→麦芽糖→葡萄糖→糖原(多余的葡萄糖)→脂肪(2)糖原：存在于人和动物中;肝糖原，有氧呼吸分解为葡萄糖，储存能量，调节血糖;肌糖原，无氧呼吸分解为乳酸，分解供能(3)纤维素：存在于植物中;植物细胞壁的成分;很难被消化，借助微生物的协同作用一、分类1.能否被水解及水解产物多少：单糖、二糖、多糖2.来源和归属：(1)动植物共有：脱氧核糖、核糖、葡萄糖(2)动物特有：半乳糖;乳糖;糖原(3)植物特有：蔗糖、麦芽糖;淀粉、纤维素3.功能(1)能源物质：葡萄糖(2)储能物质：淀粉、糖原(3)结构物质：脱氧核糖、核糖、纤维素(4)参与信息交流：糖蛋白4.是否具有还原性(1)还原糖：葡萄糖、果糖、半乳糖;麦芽糖、乳糖(2)非还原糖：蔗糖;淀粉、纤维素、糖原二、物质鉴定1.还原糖(1)取材：还原糖含量高、白色或近于白色的植物组织，如苹果、梨的匀浆(2)试剂：斐林试剂，甲:0.1g/ml的NaOH;乙:0.05g/ml的CuSO4(3)现象：浅蓝色→棕色→砖红色沉淀(4)备注：甲乙液等量混合;50-65℃水浴加热;沉淀2.淀粉(1)取材：马铃薯的匀浆(2)试剂：碘液(棕红色)(3)现象：蓝高中生物各题型解题方法1、曲线类答题模板曲线图题可以用“读轴——看线——综合分析”三步进行分析，即先看横纵坐标的含义，分清自变量和因变量，包括数量单位也要看清楚，是量还是率。
鸡胚细胞的原代培养
2.塑料篮子内：无菌袖套
操
1. 2. 3. 4. 5. 6.
作
照egg, 画气室线。 戴无菌袖套。点燃酒精灯，手部消毒。 台面消毒; 将egg置于蛋座（气室朝上），外表消毒。 中镊敲碎蛋壳，沿气室线剥开。 小镊撕内膜，挑出鸡胚→培养皿A中清洗。
标记气室示意图
操
• • • • • •
作
照egg, 画气室线。 戴无菌袖套。点燃酒精灯，手部消毒。 台面消毒; 将egg置于蛋座（气室朝上），外表消毒。 中镊敲碎蛋壳，沿气室线剥开。 小镊撕内膜，挑出鸡胚→培养皿A中用 Hank’s液清洗。
鉴定各种细胞产物的程序。
无血清培养液中补加物具有独特性：适用于某
种细胞株的培养液，很可能不适合另一种细胞 株的生长。即使同源组织的不同细胞株，所需 补加物也不同。
无血清培养基的目前使用情况：尚处于研究阶
段，难以推广。目前，绝大多数人工合成培养 基使用时还需添加血清
人间充质干细胞无血清培养基:上海依科赛公司 CHO无血清培养基：维森特公司 树突状细胞无血清培养基：达优公司
肺
肝
腿部 肌肉
肾脏
摘自 《细胞培养基本知识》-Invitrogen
注 意
清理台面,用品洗净,交回。酒பைடு நூலகம்灯和酒精棉球瓶要补 加酒精。 实验报告：这次的原代培养与细胞传代和冻存的实验 一起写一份细胞报告。 重点：要对实验结果进行分析和讨论。 实验考核：本次实验的实验结果记入一次实验课成绩 考核内容。无菌实验操作记入实验考核。
鸡胚细胞的原代培养
摘自 《细胞培养基本知识》-Invitrogen
细胞培养的用途
照片来自 《动物细胞培养-基本技术指南》
提
纲
1.培养基的类型及配制 2.原代培养的过程 3.原代培养的注意事项 4. 本次实验操作要点 5.实践操作
CHO细胞表达系统
CHO细胞表达系统原理分子生物学、分子免疫学等学科的发展使基因工程疫苗具有越来越重要的地位。
在基因工程疫苗研究的动物细胞表达系统中，最具代表性的就是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary，CHO)。
它是用来表达外源蛋白最多也最成功的一类细胞。
本文就CHO细胞表达系统在疫苗研制中的应用做一综述。
CHO细胞表达体系及其特点诞生于70年代末的基因工程药物因其具有其他药物无法比拟的优点，已迅速成为制药工业中一个引人瞩目的领域。
1995年美国基因工程药物销售额约为48亿美元，1997年超过60亿美元，年增长率达20％以上。
各国政府将其视为新的经济增长热点而给予了大力支持。
基因工程药物研究与开发的主要环节包括：①基因的克隆和基因工程菌的构造；②重组细胞的培养；③目的产物的分离纯化等。
针对这些主要环节，研究人员正致力于高效表达、培养工艺及下游分离纯化等方面的研究。
随着基因工程技术的不断发展，目前已有多种表达系统可用于生产具有医疗价值的人或动物来源的蛋白质(表1)。
大肠杆菌(E.coli)是使用最早的表达系统，其显著优点是易于操作，产量高，成本低，但由于用E.coli生产的蛋白质药物因缺乏糖基化而在人体内易被降解，因此它的药放大大降低。
此外，它还存在易产生内毒素和包涵体的问题。
真核细胞中CHO细胞是目前重组糖基蛋白生产的首选体系；因为与其他表达系统相比，它具有许多优点：①具有准确的转录后修饰功能，表达的糖基化药物蛋白在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然蛋白分子；②具有产物胞外分泌功能，便于下游产物分离纯化；③具有重组基因的高效扩增和表达能力；④具有贴壁生长特性，且有较高的耐受剪切力和渗透压能力，可以进行悬浮培养，表达水平较高；⑤CHO细胞属于成纤维细胞(fibroblast)，很少分泌自身的内源蛋白，利于外源蛋白的分离。
但CHO细胞培养成本高，条件难掌握，易污染，在一定程度上影响了它的广泛应用。
高三生物知识点必背考点总结
高三生物知识点必背考点总结高三生物知识点必背考点总结大全现在很多高考生已经开始备战高考了，生物这门科目应该怎么复习呢?知道哪些生物知识点才是需要重点把握的吗?以下是小编准备的高三生物知识点必背考点总结，欢迎借鉴参考。
高三生物知识重点1. 植物向性运动产生的原因：单一方向的刺激。
(单侧光、重力)2. 双缩脲试剂先加氢氧化钠溶液(A液)，再加硫酸铜溶液(B液)，用硫酸铜溶液滴入氢氧化钠溶液中，目的是保证碱性环境。
3. 斐林试剂混匀后再用，现配现用，目的是为了获得氢氧化铜4. 元素组成：糖类(CHO)蛋白质(CHON(S))脂质(CHO(NP))核酸(CHONP)5. 小麦萌发期间，大分子分解成小分子进行供能，消耗胚乳中的淀粉，转化成葡萄糖来利用。
6.种子萌发期间，有机物的种类增加，总量减少。
7. 反射活动必须经过5个完整的反射弧结构，否则不能成为反射活动。
8. 抗体的形成一定需要生物膜参与。
(属于分泌蛋白相关的细胞器有：核糖体、内质网、高尔基体、线粒体)9. 缺少硼(B)元素，植物只开花不结果。
因为其作用是促进花粉萌发和花粉管的伸长10. 微量元素和大量元素是根据在生物体内含量命名，和他们的作用大小无关，都很重要。
11. 生物界和非生物界的统一性体现在元素的种类上，差异性体现在元素的含量上。
12. 生物体内的无机盐不都以离子状态存在(Ca、Fe是稳定的化合物，N、P、Mg是不稳定的化合物，K是离子)。
但是大部分的无机盐还是以离子的形式存在13. 一条含n个氨基酸的多肽链，其肽建数n-1，如果形成的为环状肽则肽建数为N 个。
14.胆固醇属于脂质，具有构成生物膜和参与血液中的脂质运输的作用。
动物含量比较多，植物含量很少甚至不含有。
15. 主动运输、胞吞胞吐都需要消耗能量。
16. 协助扩散和主动运输都能体现细胞膜的选择透过性(和载体蛋白有关)。
17. 胞外酶：在细胞外面起作用的酶。
如消化酶、溶菌酶。
18. 生物膜的结构特点：具有一定的流动性功能特点：选择透过性。
[课件]动物细胞体外培养知识PPT
![[课件]动物细胞体外培养知识PPT](https://img.taocdn.com/s3/m/4884b7c981c758f5f61f6770.png)
3、细胞传代操作 （1）先用酒精棉擦拭需要放入超净台的物品，然后将物品 放入超净台进行操作。 （2）无菌取样，通常检测细胞密度、活度、葡萄糖、乳酸 ，根据实验优化等还需要检测其他各项生化指标。 （3）根据预先实验设计的传代密度或者稀释比例来添加新 鲜培养基进行传代，记录代次。 （4）在进行方瓶、滚瓶等大瓶传代时，需要两名实验员密 切配合操作，并由监控员协助进行物品传递等工作。因此 熟练各环节的细节操作对于保证无菌来说非常重要。
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一、基本概念
1、细胞培养：动植物细胞在体外条件下存活和生长，此 时细胞不再形成组织，主要是指用来生产次生代谢产物为 目的的大规模细胞培养技术。 2、动物细胞体外培养的生长类型：贴附型和悬浮型。 3、动物细胞大规模培养技术：是建立在贴壁培养法和悬 浮培养法的基础上，融合了固定化培养、流式细胞术、生 物反应器技术等而发展起来的。主要包括悬浮培养、微载 体培养、微囊化培养、中控纤维培养等。
液氮中长期保存。
温度降低原则：达到4度，然后达到-20度冷冻状态，再转移 到-70度，18h后，在液氮中保持。
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2、细胞复苏操作 （1）登记要取用的细胞。 （2）快速取出细胞放于准备好的37度水浴中，快速溶解 。
（3）将溶解的冻存管细胞离心，根据细胞特性，选择合 适的离心强度。
（4）酒精棉擦拭冻存管后放于超净台，将细胞沉淀用新 鲜培养基重悬后臵于离心管中进行离心。洗涤步骤，去除 DMSO。 （5）细胞用新鲜培养基传入培养瓶中。
化学限定培养基---不含蛋白水解物，均为已知化学结构。
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三、基本过程
1、从整个操作过程来说包括： （1）细胞小瓶培养---传代操作 （2）细胞大规模培养---转瓶、反应器操作 （3）细胞冻存和复苏---原则
基因工程基础知识复习归纳
基因工程复习归纳第一章绪论1.基因工程的定义：是指按照人们的愿望，经过严密的设计，将一种或多种生物体〔供体〕的基因与载体在体外进展拼接重组，然后转入另一种生物体〔受体/宿主〕内，使之按照人们的意愿稳定遗传、并表达出新的性状的技术。
2.基因工程概念的开展：遗传工程→DNA重组技术→分子/基因克隆〔Molecular/Gene→基因工程→基因操作。
应用领域以“基因工程〞、“DNA重组〞为主基因工程基因工程的历史性事件1973：Boyer和Cohen建立DNA重组技术1978：Genetech公司在大肠杆菌中表达出胰岛素1982：世界上第一个基因工程药物重组人胰岛素上市1988：PCR技术诞生1989：我国第一个基因工程药物rhIFNα1b上市2003: 世界上第一个基因治疗药物重组腺病毒-p53上市3.基因工程的三大关键元件基因〔供体〕：外源基因、目的基因载体：能将外源基因带入受体细胞，并能稳定遗传的DNA分子〔克隆载体、表达载体〕。
宿主〔受体〕：，能摄取外源DNA、并能使其稳定维持的细胞〔组织、器官或个体〕。
4.基因工程的根本步骤〔切、接、转、增、检〔大肠杆菌是中心角色〕〔1〕目的基因的获取：从复杂的生物基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等步骤，别离出带有目的基因的DNA片断。
〔2〕重组体的制备：将目的基因的DNA片断插入到能自我复制并带有选择性标记〔抗菌素抗性〕的载体分子上。
〔3〕重组体的转化：将重组体〔载体〕转入适当的受体细胞中。
〔4〕克隆鉴定：摘要转化成功的细胞克隆〔含有目的基因〕。
〔5〕目的基因表达：使导入寄主细胞的目的基因表达出我们所需要的基因产物。
第二章 DNA重组克隆的单元操作一、用于核酸操作的工具酶1.限制性核酸内切酶(主要存在于原核细菌中，帮助细菌限制外来DNA的入侵)。
限制性核酸内切酶的功能与类型其中II型限制性核酸内切酶：切割位点专一，适于DNA重组，是DNA重组中最常用工具酶。
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cho细胞培养基础知识
CHO细胞（Chinese Hamster Ovary cells）是一种在生物医药
领域中广泛应用的哺乳动物细胞系。
CHO细胞最早于1957年
从中国仓鼠卵巢中分离出来，并在实验室中久经培养和改良。
CHO细胞系具有许多优点，如较高的细胞生长速度、易于培
养和维持、对病毒感染的抵抗性等。
因此，CHO细胞系被广
泛用于生物医药领域中的蛋白质表达、病毒疫苗生产和药物筛选等方面。
CHO细胞培养基是用于细胞培养的基本培养液。
它提供了细
胞所需的营养物质和生长因子，同时维持细胞在体外的自由生长状态。
CHO细胞培养基的主要组成部分包括：基础培养液、补充物和 pH 调节剂。
基础培养液是细胞生长和繁殖所需的基本营养物质的来源。
CHO细胞需要一定的糖类、氨基酸、无机盐和维生素等营养
物质来满足其生长和代谢的需求。
常用的CHO细胞培养基基
础液包括 Dulbecco's Modified Eagle Medium（DMEM）和Iscove's Modified Dulbecco's Medium（IMDM）等。
CHO细胞培养基的补充物主要包括血清和其他添加剂。
血清
是CHO细胞培养中最常用的补充物之一，它提供了细胞生长
所需的营养物质和生长因子。
然而，由于血清存在着传染病的风险、批次之间的变异性较大等问题，越来越多的研究者开始使用无血清培养基来代替传统的血清培养基。
无血清培养基通常采用人血浆蛋白替代血清，或添加其他生长因子、激素和细胞因子等来维持细胞生长。
除了血清外，CHO细胞培养基中还可以加入一些其他的添加
剂来提高细胞的生长和产物表达。
例如，普通培养基PI值较低，而加入polyethyleneimine（PEI）或lipofectamine（LF）
等转染试剂能够提高细胞的转染效率。
此外，亲和调节因子、抗氧化剂和基因选择素等也是常用的培养基添加剂。
pH 调节剂是控制CHO细胞培养基 pH 值的重要组成部分。
CHO细胞对 pH 值的变化非常敏感，过高或过低的 pH 值都会
影响细胞的正常生长和代谢。
因此，在培养过程中需要添加能够维持适宜 pH 值的缓冲液，如碳酸氢盐缓冲液。
细胞培养过程中的环境条件也对CHO细胞的生长和表达产物
起到重要的影响。
温度是最基本的参数之一，CHO细胞通常
在 37℃的环境中生长最佳。
此外，培养基的氧气浓度、二氧
化碳浓度和搅拌速度等也会影响细胞的生长和产物表达。
总而言之，CHO细胞培养基是CHO细胞培养的基础知识之一。
它提供了细胞所需的营养物质和生长因子，帮助细胞在体外保持生长状态。
CHO细胞培养基的组成包括基础培养液、补充
物和 pH 调节剂。
合理的选择和使用培养基成分，可提高细胞
的生长和产物表达效率，为细胞培养和生物医药研究提供可靠的基础。
在未来，随着技术的不断进步和发展，定制化的
CHO细胞培养基也将逐渐应用于具体的实验需求中。