循环肿瘤细胞的研究与应用
实时荧光定量PCR检测外周血循环肿瘤细胞的研究
实验讨论
实时荧光定量PCR技术的实验结果准确可靠，但也存在一些争议。其中之一 是引物特异性问题，如果引物与非目标序列发生交叉反应，将导致实验结果的偏 差。另一个问题是荧光信号的干扰，可能会影响实验结果的准确性。为确保实验 结果的可靠性，可以通过设计特异性强的引物、选择高质量的试剂和优化实验条 件等措施来降低误差。
研究现状
实时荧光定量PCR技术是一种在PCR反应过程中加入荧光基团，通过荧光信号 的积累对PCR产物进行实时检测的方法。近年来，该技术在外周血循环肿瘤细胞 检测领域取得了重大进展。国内外学者针对不同的肿瘤类型，对实时荧光定量 PCR技术进行了方法学研究和应用探索。例如，Liu等建立了针对结直肠癌细胞的 实时荧光定量PCR检测方法，并成功应用于临床样本的检测。
2、计算拷贝数：通过比较已知标准品和未知样品的荧光信号强度，可以计 算出未知样品中目标DNA的拷贝数。
实时荧光定量PCR技术在科学研究和工业生产中具有重要的应用价值。例如， 该技术可用于研究基因表达差异，比较不同组织或不同个体之间的基因表达谱； 还可用于检测基因突变和遗传疾病，如地中海贫血、囊性纤维化等疾病；此外， 实时荧光定量PCR技术还广泛应用于病毒检测和定量分析，如HIV、HBV等肝炎病 毒、SARS冠状病毒等。
参考内容
实时荧光定量PCR技术是一种在生物医学领域广泛应用的技术，主要用于检 测和定量DNA分子的数量和浓度。该技术的出现和发展，使得科研人员能够更准 确、快速地研究基因表达、遗传变异等相关问题。本次演示将详细介绍实时荧光 定量PCR技术的原理、实验流程、结果分析和应用实例，以期让更多人了解这一 重要的生物技术。
பைடு நூலகம்
方法与材料
实时荧光定量PCR技术的主要步骤包括引物设计、反应体系构建、数据采集 和分析等。在引物设计时，需要选择特异性强的引物，以避免非特异性扩增和交 叉反应。反应体系构建包括DNA模板、引物、dNTPs、Taq酶和荧光染料等组分的 添加和混合。数据采集主要通过荧光信号的强度和PCR产物的量之间的关系来实 现定量分析。
乳腺癌循环肿瘤细胞临床应用研究进展_齐晓伟
〖综述·讲座〗乳腺癌循环肿瘤细胞临床应用研究进展齐晓伟, 姜军第三军医大学西南医院乳腺疾病中心,重庆400038Advance in th e clinical utility of circulatin g breast-tumor cellQi X iao-wei,J iang J unBreast Disease Center,Southwest Hospital,T hird Military Medical University,Chongqing400038,P.R.China【摘要】 目的:总结乳腺癌循环肿瘤细胞(CTC)的临床应用价值。
方法:以乳腺肿瘤、CT C、微转移为关键词,检索1999-01-2008-11PubMed、Ovid、Science Direct、Springer、CNK I和维普数据库的相关文献。
纳入标准:关于CTC或微转移与乳腺癌预后或辅助治疗疗效关系的文献。
共纳入分析43篇文献。
结果:初次治疗前转移性乳腺癌患者CTC≥5个/7.5mL或Ⅰ～Ⅲ期乳腺癌患者CTC阳性均可提示预后不良;第1个周期化疗后转移性乳腺癌患者CTC增加到或仍维持在≥5个/7.5mL提示治疗无效或效果不佳,辅助治疗期间Ⅰ～Ⅲ期乳腺癌患者外周血CT C的变化情况与疗效密切相关;原发肿瘤细胞HER-2阴性而CT C HER-2为阳性的患者仍可获益于Herceptin 治疗。
结论:检测乳腺癌CT C有助于准确的判断预后,并为及时评判和监测辅助治疗效果提供依据,有利于患者的个体化治疗,具有重要的临床应用价值。
中华肿瘤防治杂志,2009,16(5):394-398[ABSTRACT] OBJEC TIVE:T o summarize the clinical sig nificance o f circula ting breast-tumor ce ll.METHODS:K ey w ord:breast neo-pla sm,cir cula ting tumo r cell(C TC),microme ta stasis.Retrieval sy stem:P ubM ed,O vid,Science Direct,Spring er,CNK I,Weipu D ata.T he time limit:1999-01-2008-11.T he enrolled cr iteria:a-bout the relationship be tween CT C or micrometastasis and prog no sis o r responsive ness to adjuvant the rapy of patients with breast cancer. O ver all,43lite rature wa s cited.RESULTS:T he eleva tion of CT C (≥5/7.5m L)fo r me ta sta tic breast cancer pa tients a nd presence o f C TC fo rⅠ～Ⅲpatie nts were asso ciated with poo r outcome.CT C inc reasing to or remaining at the elevated level after the fir st cycle o f chemo thera py for the metastatic setting sug gested the curr ent treat-ment wa s ineffectiv e o r unsa tisfactory.Change s of CT C during the adjuva nt the rapy for the non-metastatic set ting pr ovided useful info r-mation abo ut the efficacy o f treatment.Her ceptin was beneficial to patients w ho se HER-2was neg ativ e in prima ry tumo r cell but posi-tive in CT C.C ONC LUSION:Detection o f CT C play s a vital ro le in the management of breast cancer,used fo r estimation a nd pr ediction o f prog nosis,mo nitoring and assessment o f respo nsiv eness to thera-py as w ell as st ratifica tion of patients to adjuvant therapy.C h in J Cancer P rev Treat,2009,16(5):394-398【关键词】 乳腺肿瘤;循环肿瘤细胞;微转移;预后;辅助治疗;综述文献[KEYWORDS] breast neoplasm;circulating tumo r cell;microme ta stasis;prog no sis;adjuvant therapy;review liter ature 【中图分类号】 R737.9 【文献标识码】 A 【文章编号】 1673-5269(2009)05-0394-05 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,远处转移是导致患者死亡的主要原因。
循环肿瘤细胞在肺癌治疗中的研究进展
ｐＡ 监控 优 于 Ｆ ＤＧ—Ｅ ／ Ｔ 检 查 。２ １ 在 一项 关 于 种 阳性捕 获法使 用是 基 于上皮 源 的 Ｅ Ｃ Ｍ 抗体 ， Ｐ ＴＣ ００年
ｐＡ 转移性乳腺癌 Ｃ Ｃ与骨转移关系研 究中， Ｔ 大量数据 利用磁微粒直接在血液中抓取 Ｅ Ｃ Ｍ 抗原表达的 ＰＡ 可见 Ｃ Ｃ ≥２ 个／． ｍ１ 者 中 ９％有 骨转移 ， Ｔ ｓ １ ７５ 患 ６ 且 肿 瘤 细胞 ，部分 Ｅ Ｃ Ｍ 抗体 表达低 下或 下调 的肿 前 全部为多处骨转移。Ｃ Ｃ计数越 高， Ｔ 越与多处骨转 瘤细胞可能未被检测到，目 尚未发现特异性特别 所 Ｔ 移 或 多器 官转 移相 关 。 由此可 见 ， Ｔ 的检 测 可作 高 的肿 瘤标 志 物 ， 以 Ｃ Ｃ检 测 的敏感 性及特 异性 Ｃ Ｃ
・３ ６７ ・
查、 放射性核素检查 以及血 清肿瘤标志物检测 ， 根据 相对于有创操作 ， 通过 Ｃ Ｃ来监测， Ｔ 可行性及可操 ＷＨ Ｏ或 Ｒ Ｃ Ｓ 标准来评价药物疗效 ， Ｅ ＩＴ 但仍缺乏足 作性较强。Ｆ ｈ 等通过 Ｃ Ｃ检 测 ７ 例原发肿瘤 ｅｍ Ｔ ７
够 敏 感性 及特 异性 。 目前发 现 Ｃ Ｃ 检 测 可有效 预 Ｈ Ｒ－ Ｔ Ｅ ２阴性 或 不详 的 复发 乳腺 癌 患者 的 ＨＥ ． Ｒ２突
测肺癌药物治疗疗效， 为临床方案选择提供有力证 变 状 态 ，发 现 ｌ ５例检 测 出 ＨＥ ． Ｒ ２阳性 。并且 在 据。Ｍａ ｈｗ Ｇ ｔ ｅ ．Ｋ ｅｓ ｔ ｒｂ 等对 １ １ Ｉ 期或 Ｉ ０例 Ｉ Ｉ Ｖ期 ＨＥ 一 Ｒ ２常规检 测 阴性 而 Ｃ Ｃ检 测 阳性 患者 中， Ｔ 使用 ＮＳ Ｌ 患者在标准化疗治疗前及治疗后分别抽取 针对该基 因过度表达 药物 曲妥珠单抗治疗仍有一 ＣＣ 血标本检测循环肿瘤细胞 ， 结果发现 Ｉ Ｓ Ｌ Ｖ Ｎ Ｃ Ｃ外 定疗效。可见通过 Ｃ Ｃ 检测基 因水平有一定临床 Ｔ 周血循环肿瘤细胞个数明显高于 ＩＢ或 Ｉ Ａ期患 意义 。 目 Ｇｅｒｅ ｒｎｏｓ ｅｌ ｃ中心 已开展 一项 Ｉ Ｉ Ｉ Ｉ ｏｇｓ ａｃｉＬ ｃｅ Ｆ ｒ
研究循环肿瘤细胞检测在卵巢上皮性肿瘤中的应用进展
综述与进展研究循环肿瘤细胞检测在卵巢上皮性肿瘤中的应用进展余盛权，黄浩#（广东医科大学，广东湛江 524000）摘要：目的：卵巢上皮性癌（EOC）发病隐匿，早期诊断困难，易发生侵袭及转移，发展迅速，确诊时往往处于疾病晚期。
因此，研究卵巢癌细胞恶性生物学行为的分子机制尤为重要。
近年来，循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cells, CTCs）检测技术取得了快速发展，对恶性肿瘤辅助诊断、疗效评价、预后监测等具有重要的指导作用。
本研究分析CTCs在EOC的研究进展。
关键词：卵巢上皮性；循环肿瘤细胞检测；恶性肿瘤妇科恶性肿瘤中，卵巢癌死亡率最高，且发病率呈逐年上升，全球每年卵巢癌新发病例达20万，死亡率高达14万[1]。
卵巢癌死亡率高的原因之一是大多数患者在确诊时已经出现转移[2]。
卵巢癌发病隐匿，早期诊断困难，易发生侵袭及转移，确诊时患者通常处于疾病晚期。
晚期卵巢癌五年生存率仅为20%，早期患者可达85％~90％[3]。
液体活检（Liquid BioPsy, LB）微创技术快速发展，利用高通量测序技术检测脱落进入血液的肿瘤细胞或其DNA、RNA。
相较于传统的组织活检，具有操作简便、可重复性好、无创、非侵入性等优势[4]。
该项技术是通过检测血液或尿液等体液中某些生物活性分子，从而做出诊断。
目前，临床上产前筛查所使用的无创基因检测即为液体活检的标志性应用之一。
液体活检常见的检测项目包括循环肿瘤DNA（Circulating Tumor DNA，CT DNA）、循环肿瘤细胞（Circulating Tumor cell, CTCs）[5]及肿瘤细胞来源的外泌体（Tumor Cell-Drived Exosomes, TEXs）[6]。
1 CTCs概述CTCs指存在于外周血中各类肿瘤细胞的统称，因自发或诊疗操作从实体肿瘤病灶（原发灶、转移灶）脱落，大部分CTC在进入外周血后发生凋亡或被吞噬，少数能够逃逸并锚着发展成为转移灶，增加恶性肿瘤患者死亡风险。
循环肿瘤细胞检测技术及临床应用
基金项目：上海市科委自然基金项目（１５ＺＲ１４３７９００）资助*通讯作者文章编号：１００７－４２８７（２０１５）０７－１２２３－０５循环肿瘤细胞检测技术及临床应用曹雅楠，庄文芳，盛慧明*（上海交通大学医学院附属同仁医院检验科，上海２００３３６）循环肿瘤细胞（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ，ＣＴＣ）计数有助于早期诊断肿瘤转移，反映患者的治疗效果及肿瘤预后。
近年来循环肿瘤细胞检测的广泛应用大力推进了相关技术的发展。
本文对近年来外周血循环肿瘤细胞检测技术的发展，临床及研究领域的应用情况及未来展望做一简要综述。
循环肿瘤细胞（ＣＴＣ）一经发现，就得到了广泛重视，ＣＴＣ被认为是肿瘤播散转移的标志。
研究表明，肿瘤组织每天会释放大量肿瘤细胞入血，但在循环中的存活率极低，大多会发生凋亡，只有少量具有强侵袭力的肿瘤细胞可表达凋亡抑制因子得以存活［１］，这些存活下来的肿瘤细胞即ＣＴＣ。
ＣＴＣ在外周血中含量极少，一般每１０６-１０７个白细胞中仅含有１个。
所以，ＣＴＣ检测首先要进行细胞富集，以提高检测灵敏度，再对富集的细胞进行ＣＴＣ检测。
１ ＣＴＣ富集技术１．１ 以形态学为基础的富集ＣＴＣ细胞体积大，直径超过２５μｍ，胞核形状不规则，核浆比异常。
肿瘤细胞体积分离法和核孔分析技术通过滤网可将直径大于８μｍ的肿瘤细胞分离，但此类方法敏感性较低［２］。
基于密度梯度分离原则的Ｏｎｃｏｑｕｉｃｋ，利用单个核细胞较其它血液成分相比密度低，采用１．０７７ｇ／ｍｌ的密度梯度将单个核细胞和肿瘤细胞与血液其它成分分离，同时增加设置多孔屏障，进而分离得到更加纯化的目的细胞［３］。
１．２ 以免疫学为基础的富集免疫磁珠法将磁性微珠包被单抗形成免疫磁珠，再结合靶细胞上的对应抗原形成抗原-抗体-磁珠复合物，在外加磁场作用下定向移动、吸附，进而与其它细胞分离。
该分离技术的方法有两种：（１）阳性分离法是直接从细胞混合液中分离出靶细胞；（２）阴性分离法则是利用免疫磁珠去除无关细胞，利用抗ＣＤ４５抗体或抗ＣＤ６１抗体去除血液中的巨核细胞和血小板，使靶细胞得以纯化［４］。
文档：循环肿瘤细胞(CTC)
循环肿瘤细胞(CTC)循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cell; CTC)通常是指因自发或诊疗操作引起的从原发灶或转移灶侵入人体外周血的肿瘤细胞。
此概念是在1869年由Ashworth等首次提出的，2015年研究人员成功培育出第一株由CTC产生的永生细胞株。
CTC一般以单细胞或者细胞团的形式存在于循环系统中，大部分侵入循环系统的肿瘤细胞会在短期内死亡，只有极少数具有高度转移倾向和活力的CTCs才能存活下来，并在一定条件下发展为转移灶。
一般在外周血中大约105~107个单核细胞中才有一个CTCs，因此为获得更好的灵敏度和特异性，对检测技术的要求极高。
由于CTCs检测的对象是血液标本，取材比传统意义上的组织活检更便捷且重复性强，属于“液态活检”的一种。
就概念而言，广义液体活检指从血液、尿液、唾液甚至脑脊液等人体体液中获取相关疾病信息的技术。
临床科研中应用的液体活检，主要是通过检测并分析血液中的循环肿瘤细胞（circulating tumor cells，CTCs）、游离肿瘤脱氧核糖核酸片段（Circulating Tumor DNA ，ctDNA）、外泌体(exosomes)、分泌物（secretomes）等组分对患者进行早期筛查、诊断并监测癌症发展演变的技术。
近年来，CTCs在临床应用的研究获得了长足的发展，积累的研究表明CTCs可更有效的反应肿瘤在机体内的发生、发展、转移、复发的情况，对预后判断、疗效检测及转移机制研究有更切实的指导意义。
间变性淋巴瘤激酶(Anaplasticlymphomakinase, ALK)基因是一种致癌驱动基因。
突变、基因扩增或染色体重排均可以导致ALK基因异常激活，从而促进肿瘤生长。
在3-7%的非小细胞肺癌患者中ALK基因重排是一个独特的分子子集，主要是由于该基因发生重排并与其他基因进行了融合。
Vincent Faugeroux等证实在ALK阳性的非小细胞肺癌患者中通过检测CTCs发现了ALK重排，这项研究为ALK阳性的患者在使用ALK抑制剂治疗诊断方面提供了新的观点。
循环肿瘤细胞在小细胞肺癌诊疗中的研究进展_
方法,虽任重道远但未来可期。
3 2 CTCs 与 SCLC 的 分 期
恶 性 肿 瘤 的 TNM 国 际 分 期
已经有长达几十年的历史,在长期的临床工作中发现 TNM
分期有着自 己 的 局 限 性, 有 些 肿 瘤 在 早 期 已 经 发 生 转 移,
低,大部分患者确诊 时 已 属 于 晚 期, 只 有 大 约 1/3 的 患 者
或部分缓解后,对患 者 预 后 长 期 随 访 目 前 只 有 影 像 学 检 查
SCLC) 占肺癌总数的 15% 左 右
。SCLC 的 早 期 诊 断 率 较
[
2]
确诊时属于局限期,中位生 存 期 为 25 个 月,5 年 生 存 率 为
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膜过滤上皮肿瘤细 胞 体 积 分 离 法 等; 检 测 鉴 定 技 术 主 要 分
单纯肿瘤体积以及浸 润 程 度 并 不 能 完 全 反 映 恶 性 肿 瘤 的 实
循环肿瘤细胞检测在晚期肿瘤患者维持治疗中的应用
循环肿瘤细胞检测在晚期肿瘤患者维持治疗中的应用连洁;杨宇【摘要】循环肿瘤细胞(CTC)检测敏感性和特异性较高,且创伤小、取材方便,具有可重复性,其在肿瘤早期诊断、临床分期、指导治疗及预测预后等方面的优势已得到临床认可,但CTC作为维持治疗疗效判定指征的意义尚未明确.本文针对CTC提取分离、检测方法、临床应用以及维持治疗期间检测的意义予以综述.%Circulating tumor cells(CTC)detection, due to its good sensitivity and specificity, less trauma, convenience and repeatability of obtaining materials, has gained clinical consensus for its advantages in early diagnosis, clinical staging, guiding treatment and predicting prognosis.However,it still remains unclear that the significance of CTC as an indicator for maintenance therapy. In this paper,we reviewed the extraction,isolation,detection and clinical application of CTC,and its value in maintenance therapy.【期刊名称】《中华老年多器官疾病杂志》【年(卷),期】2018(017)005【总页数】3页(P394-396)【关键词】维持治疗;循环肿瘤细胞;晚期肿瘤【作者】连洁;杨宇【作者单位】哈尔滨医科大学附属第二医院肿瘤内科,哈尔滨150001;哈尔滨医科大学附属第二医院肿瘤内科,哈尔滨150001【正文语种】中文【中图分类】R730.5近年来，恶性肿瘤的发病率和死亡率呈逐年上升的趋势，成为威胁人类生命的重要原因之一。
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循环肿瘤细胞的研究与应用
随着生物技术和医学研究的不断发展，循环肿瘤细胞成为了近
年来备受关注的研究对象。
循环肿瘤细胞，简称CTCs，是指在肿
瘤细胞侵袭时，从原发病灶进入血液循环系统并进行远处转移的
肿瘤细胞。
它们携带着原发病灶的基因和表型，并具有高度恶性
和耐药性，因此对肿瘤的治疗和预后具有重要意义。
本文将就循
环肿瘤细胞的研究和应用展开讨论。
一、循环肿瘤细胞的检测方法
当前，循环肿瘤细胞的检测方法主要分为两类：常规检测法和
新型检测法。
常规检测法包括细胞计数、荧光原位杂交、PCR检
测以及CBA等技术，这些技术检测CTCs的成功率很高，检测结
果稳定，但检测时间和成本较高。
而新型检测法包括微流控芯片、纳米技术、磁性分选和激光捕获等，这些技术具有快速、准确、
高通量、低成本的特点，已经成为研究CTCs的热点方向之一。
二、循环肿瘤细胞的应用
CTCs在肿瘤预后评估、肿瘤筛查及监测、肿瘤治疗和个体化
治疗等方面应用广泛。
其中，肿瘤预后评估是CTCs应用的最主要领域之一。
CTCs的高度恶性和耐药性使得它们成为肿瘤复发和转
移的主要来源，并且预后较差的肿瘤患者体液中CTCs的含量显著高于预后良好的患者。
肿瘤筛查及监测也是CTCs应用的重要领域之一。
CTCs可以帮助早期发现肿瘤并进行监测，及时进行治疗，
降低死亡率。
此外，CTCs还可作为肿瘤治疗和个体化治疗方案的
重要参考依据。
三、CTCs在肿瘤治疗中的作用
近年来，随着药物治疗的不断进步，肿瘤治疗已经从传统的化疗、放疗等单一治疗方式发展到了多学科综合治疗。
在肿瘤细胞
的治疗过程中，CTCs具有重要的作用。
首先，CTCs可以通过对
肿瘤细胞的检测，制定个体化治疗方案，加强肿瘤治疗的有效性。
其次，CTCs可能会通过参与肿瘤微环境的调节以及肿瘤干细胞的
转化等机制，对肿瘤治疗中的复发和转移产生作用。
这些结果表明，针对CTCs的治疗将为肿瘤治疗提供潜在治疗潜力。
四、循环肿瘤细胞的研究进展
目前，循环肿瘤细胞的研究主要集中在三个方面：CTCs的分
子生物学特征，CTCs与肿瘤干细胞的关系和肿瘤微环境中CTCs
的作用。
在对CTCs的分子生物学特征的研究中，尽管CTCs的缺
乏对诊断和治疗的限制，但它们的分子特征仍是为研究者提供了
有关肿瘤的宝贵信息。
此外，研究还表明，CTCs和肿瘤干细胞具
有比较相似的表型和功能，两者之间密不可分，这为单个CTCs的分离和基于CTCs的肿瘤治疗提供了一定的可能性。
在最新的研究中，研究者探索CTCs在肿瘤微环境中的作用，发现CTCs不仅可以影响肿瘤细胞的生长和血管生成，还能影响肿瘤治疗的效果。
五、未来发展趋势
未来，随着循环肿瘤细胞研究技术的进一步发展和研究深入，人们对于CTCs的认识将会更加深入，在肿瘤预防、筛查、治疗中将会得到越来越广泛的应用。
同时，未来的研究将更加关注于CTCs在肿瘤微环境中的作用及其与肿瘤干细胞的关系，这将推动肿瘤治疗更加个体化和准确。
总之，CTCs是肿瘤研究领域中备受瞩目的研究对象，它们在肿瘤治疗、预后评估和肿瘤筛查监测等方面的应用将会得到更加广泛的关注。
未来，随着研究的深入和技术的进步，CTCs的应用前景必将更加广阔。