红细胞悬液的配制
实验一红细胞计数
实验一红细胞计数一、实验目的：掌握红细胞计数原理及技术。
二、实验原理：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经过换算示得每升血液内的红细胞数。
三、实验器材及试剂：显微镜、血红蛋白吸管、计数板、盖玻片、生理盐水。
四、实验操作：1、取试管1支，加稀释液3.98ml或1.99ml。
2、用清洁干燥的微量吸管准确吸取末梢血10微升。
3、擦去管尖外部余血、轻轻注入红细胞稀释液底部，再吸取上层稀释液清洗吸管2-3次，立即摇匀。
4、将计数池与盖玻片用软布料擦净，将盖玻片覆盖于计数池上。
5、用吸管吸取混匀的红细胞悬液，充入计数池中。
6、静止2-3分钟，待经红细胞下沉后，用高倍镜或低倍镜计数中央大方格内四角和正中五个中方格内的红细胞数。
五、计算N(五个中方格内RBC数)×5×10×106×200=N×1012个/升×5：表示5个中方格内RBC数换算为1个大方格内RBC数× 10：1个大方格容积、0.1ul、换算为1ul内RBC数× 106：1ul换算为1升内红细胞数× 200：稀释倍数六、正常参考值正常参考值：成年男性：4.00-5.50×1012/升成年女性：3.50-5.00×1012/升新生儿： 6.00-7.00×1012/升实验二血红蛋白测定一、实验目的：掌握氰化高铁血红蛋白比色法原理及技术。
二、实验原理：血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外各种血红蛋白可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与CNˉ结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋（HicN）。
HicN最大吸收峰540nm，最小吸收波谷504nm，在特定的条件下，毫摩尔消光系数为44L.mmol-1 .cm-1 ，因此根据标本的吸光度，即求得血红蛋白浓度。
三、实验操作：1、取指血20ul，加到5ml血红蛋白转化液中，混匀，静止5分钟。
红细胞凝集抑制试验影响因素的分析
鸡红细胞凝集抑制试验影响因素的分析红细胞凝集试验和红细胞凝集抑制试验是兽医界相关实验室最为常用的实验之一。
由于其具有便于操作、快捷、成本较低的特点，是畜禽疫病诊断及免疫状态监测特别是禽流感、新城疫等重大动物疫病免疫监测最为重要的方法之一。
影响血凝抑制试验的因素：1、对于试验器材及试验环境的要求实验时应选用数字式单道和多道移液器，平时要做到移液器的效验及保养工作，这对保证移液器的准确性非常重要。
每次使用完毕，要将移液器量程调至最大刻度，以保证移液器内弹簧的最好灵敏性。
实验时所用的抗原应选用国家指定单位生产的标准抗原，这对于保证实验结果的准确性和各单位所做的实验结果的可对照性非常重要。
实验时的室内温度不宜过高或过低，应配备有温度控制设备或恒温箱。
96孔v型微量血凝板如不具备较好的洗涤设施时，建议使用一次性96孔v型微量血凝板。
2、1%红细胞悬液的配置配置血凝抑制试验用的红细胞最好选用成年SPF公鸡，抗凝剂不要保存时间时间过长。
红细胞的浓度要尽量准确，一免不同实验室读出结果有较大差距。
如果红细胞配置浓度偏低，血凝价可能偏高，血凝抑制价可能偏低。
如果红细胞配置浓度偏高，血凝价可能偏低，血凝抑制价可能偏高。
红细胞离心洗涤结束后，要将洗头放入离心管的最底部来吸取红细胞进行稀释配制，如随意从红细胞液体上层吸取血细胞进行稀释配制，将会造成配置的血细胞浓度偏低，因洗涤红细胞后弃去的PBS液或生理盐水会有一些残留在红细胞上层。
3、标准抗原对试验结果的影响四单位标准抗原配置的准确与否是血凝抑制试验中非常重要的一环。
标准抗原血凝单位的高低对实验结果有很大影响，如果标准抗原血凝价偏高，测定的血清抗体效价将偏低，反之则待测定的血清的抗体效价偏高。
所以标准抗原配置及检测的准确性对实验结果将产生较大的影响。
使用过的标准抗原再次使用时，应重新进行检测。
未检测抗原血凝效价，即按前一次检测抗原的血凝单位进行配制标准抗原，这样的血凝抑制试验结果是不准确的。
吸收试验标准操作规程(sop)
吸收试验标准操作规程一、目的为规范红细胞吸收试验的技术操作，保证结果的准确性，从而辅助血型的鉴定以及保证交叉配血的正确进行。
二、适用范围输血科负责进行红细胞吸收试验来检测血型弱表达抗原等试验的技术人员。
三、原理红细胞血型抗原（包括亚型等弱表达抗原）与相应抗体在一定条件下反应，抗体可逆性结合在红细胞血型抗原上，相应抗体效价下降或者检不出，进一步对吸收后红细胞做放散试验，可以从放散液中检出相应的抗体。
四、步骤和方法（1）检测红细胞弱抗原1、将受检红细胞用生理盐水充分洗涤3次，末次将盐水倒尽，制备成洗涤压积红细胞。
2、在压积红细胞中加入2倍容量含于检测目标抗原相对应的人源抗体血清，密封混匀。
3、根据目标抗原—抗体反应的特性分别放在不同条件下吸收：ABO血型系统弱抗原4℃至少1h，Rh血型系统弱抗原应放在37℃吸收30—60min，每10min混匀1次。
4、吸收后以1300g离心3min，取上层血清即为吸收液。
测定人源抗体血清吸收前、后抗体效价。
5、结果判读：<1>如吸收后血清抗体效价比吸收前降低2个稀释倍数以上或者检不出抗体，则表明红细胞表达目标抗原。
<2>若效价无下降则表明红细胞不表达目标抗原。
<3>若效价下降未达到2个稀释倍数则不能确定红细胞是否表达目标抗原，需要对吸收后红细胞进行放散试验来决定受检红细胞是否表达目标抗原。
（2）冷自身抗体吸收1、采集受检者2份标本：一份抗凝血约10ml，尽快置入37℃浴箱孵育30—60min，离心分离血浆和红细胞；另一份不抗凝血至少3ml，放置4℃自然凝固，使红细胞充分吸收冷抗体后，离心分离血清和红细胞。
2、用预温的37℃生理盐水充分洗涤从抗凝血标本中分离出的压积红细胞3—4次，取50微升加生理盐水1ml配成5%红细胞悬液，取1滴该悬液与2滴红细胞不规则抗体筛选阴性的AB型血清反应，120g离心１min后观察结果。
根据是否凝集来确定冷抗体是否已洗涤干净。
间接凝集实验及致敏红细胞制备方法
间接凝集实验及致敏红细胞制备方法将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关的颗粒载体上，然后与相应的抗体结合，也可出现颗粒载体的凝集现象，称为间接凝集反应。
间接凝集反应比直接凝集反应敏感性为高，可用于微量抗体或抗原的检查。
一、间接血球凝集实验间接血球凝集实验是根据红血球表面的吸附作用而建立起来的。
将细菌可溶性抗原提出使之吸附于红血球表面，此时红血球即称为“致敏红血球”。
这种致敏的红血球具有细菌的抗原性，与相应的抗血清相遇可产生凝集现象。
间接血凝抗原的制备可用加碱或加热的方法使菌体中的多糖物质浸出，去除类脂以免干扰红血球的吸附作用。
但如系蛋白质时则用来吸附的红血球需先用鞣酸予以处理。
（一）材料1、抗原—伤寒杆菌O抗原2、免疫血清：伤寒杆菌O901免疫兔血清3、25%绵羊红血球悬液，生理盐水，试管吸管等（二）方法1、“O”抗原的制备：将每毫升100亿的伤寒杆菌“O”菌悬液，置100℃水浴中2小时，离心沉淀吸取上清夜，分装无菌试管，放4℃冰箱备用。
2、致敏红血球悬液制备：取一定稀释度的抗原加等量2.5%绵羊红血球悬液，混合后放37℃水浴箱中，每隔15分钟取出振摇一次，共经2小时。
然后取出，用生理盐水洗涤3次，而配制成0.5%悬液即成。
3、实验步骤：（1）小试管9只标好号码于试管架上。
（2）第1管加入0.9毫升生理盐水，其余各管各加入0.5毫升。
（3）以吸管吸取已加热灭菌的免疫血清0.1毫升加入第1管，混匀后吸取0.5毫升注入第2管，同样第2管的血清与盐水混匀后吸取0.5毫升注入第 3管。
如此依次稀释直至第8管。
自第8管吸出0.5毫升弃去。
第9管不加血清作对照。
（4）于每管加入0.5毫升已经致敏的0.5%绵羊红血球悬液，混匀后放入37℃水浴中2小时后观察结果。
凡最高血清稀释度的免疫血清试管中呈现完全血凝者，即为该血清的间接血清效价。
二、致敏红细胞的制备（一）直接法1、取10%双醛固定的红细胞悬液1ml，离心沉淀后，将压积细胞悬于0.1mol/L、pH4.0醋酸缓冲液5ml中。
ABO、Rh-血型鉴定
2021/4/27
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盐水法操作程序： 1、取小试管2支，标明主、次侧。主侧：受血者血清2滴
加供血者3～5%生理盐水红细胞悬液1滴；次侧：供血 者血清2滴加受血者3～5%生理盐水红细胞悬液1滴。 2、混匀，以1000r/min，离心1min，取出，先目测上层液 体是否溶血，再轻轻摇动试管，检查红细胞是否凝集。
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Rh(D)血型定型
目的：鉴定红细胞表面是否含有D抗原。 适用范围：受血者、献血者Rh(D)血型鉴定 使用器材和材料：Rh抗(-D)标准血清、吸管、玻片等
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方法：玻片法
原理：根据抗D抗体与对应红细胞抗原的凝集 反应，区分Rh(D)阳性和Rh(D)阴性。
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结果判断：与盐水法相同。
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注意事项：
1、用EDTA抗凝血浆代替血清配血，但不能用肝 素抗凝血配血，因为肝素对聚凝胺有中和作用。
2、病人使用肝素后要加双倍量聚凝胺。 3、聚凝胺试剂使用前应恢复至室温。 4、和试剂比例要恰当，增加血清（浆）和红细胞
量时，LISS及聚凝胺、重悬液的量也要增加，否 则，灵敏度会降低4～8倍。
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血型凝集示意图
抗-
抗-A
抗（-D）
B
抗-
抗-A
抗（-D）
B
抗-
抗-A
抗（-D）
B
2021/4/27抗-
抗-A
抗（-D）
血型：AB型 Rh(D)：阳性
血型：B型 Rh(D)：阴性
血型：A型 Rh(D)：阳性
血型：O型 Rh(D)：阳性
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反定法（试管法）
输血科ABO型试剂红细胞制备标准操作规程
输血科ABO型试剂红细胞制备标准操作规程1 .目的为规范A、B、0型试剂红细胞制备的技术操作，保证血型血清学实验的准确性，依据《输血实验室管理程序》4.1,9(6)条款的要求制定本规程。
2 .适用范围适用于医疗机构输血科制备A、B、0型试剂红细胞。
3 .职责医疗机构输血科技术人员负责A、B、0型试剂红细胞的制备。
4 .原理将已知A、B、0型的红细胞洗涤并配成试验所需浓度，用单克隆抗-A、抗-B试剂验证红细胞血型抗原特异性、直接抗球蛋白实验(DAT)证实没有被抗体致敏后用于血型血清学试验。
5 .所需设备和材料5.1设备普通离心机，血型血清学专用离心机，微量移液器，普通显微镜。
5.2材料已知A、B、0型健康献血者抗凝血，红细胞不规则抗体筛选阴性的AB型血清，单克隆抗-A、抗-B试剂，抗球蛋白试剂。
6 .环境条件室温应保持在18~27C,湿度应保持30%~70‰7 .步骤与方法7. 1取3支试管，分别标记为Ac、Be、Oco7.2选取已知ABo血型的A、B、。
型健康献血者抗凝血各3份,每份ImL7.3将A、B、0型献血者各3份抗凝血分别加入对应标记的Ac、Be、Oc试管中。
7.4将3支试管离心去血浆，将压积红细胞用生理盐水洗涤3次，去除最后一次洗液后分别用生理盐水配成10%的红细胞悬液，4C保存，7天内使用，使用时根据试验要求再用生理盐水配成需要的浓度。
8.质量控制8.1质量控制操作步骤8.1.1观察配制的A、B、。
型试剂红细胞悬液有无凝块，离心观察悬浮红细胞上层生理盐水颜色，判断有无溶血。
8. 1.2取试管9支，使配制的A、B、O型试剂红细胞（浓度3%,每管50UI）分别与单克隆抗-A、抗-B及红细胞不规则抗体筛选阴性的AB型血清反应（每管加相应试剂或血清100 Ul）,鉴定红细胞的抗原特异性。
8. 1.3取试管3支，分别加配制的A、B、O型试剂红细胞（浓度3%,每管50u1）,生理盐水洗涤3次后做DATo8.2A、B、。
去白细胞悬浮红细胞和全血的区别
去白细胞悬浮红细胞和全血的区别在医学领域，常常需要对血液样本进行处理和分离，以研究、诊断或治疗目的。
其中，去白细胞悬浮红细胞和全血是两种常见的处理方式。
本文将重点介绍这两种处理方式的区别。
去白细胞悬浮红细胞去白细胞悬浮红细胞（Leukoreduced Red Blood Cells，简称L-RBCs）是指通过去除血液中的白细胞，得到的红细胞悬液。
其主要目的是减少输血时潜在的不良反应。
处理方法通常，去白细胞悬浮红细胞的制备方法主要包括以下几个步骤：1.采集血液样本：从供血者采集的全血中获取。
2.红细胞分离：通过离心等方法将红细胞与其他血液组分分离。
3.去除白细胞：利用滤器或离心等技术去除血液中的白细胞。
4.悬浮红细胞复滤：再次将悬浮红细胞进行滤过，以确保去除残留的白细胞。
优点与应用去白细胞悬浮红细胞相比于全血，具有以下优点：1.减少过敏反应：白细胞是引发输血不良反应的主要原因之一。
通过去除白细胞，可以大大降低输血过程中患者的过敏反应风险。
2.减少感染风险：白细胞是血液中的免疫细胞，在输血过程中可能引发感染。
去除白细胞可以减少感染风险。
3.提高质量：去白细胞悬浮红细胞相比于全血，红细胞浓度更高，红细胞活性更好。
去白细胞悬浮红细胞主要应用于以下方面：•输血：去白细胞悬浮红细胞可以减少输血反应的风险，提高输血效果。
•科研：去白细胞悬浮红细胞在实验室研究中被广泛应用，例如细胞培养、体外实验等。
全血全血是指从供血者采集到的未经处理的血液样本。
全血包含了血浆、红细胞、白细胞和血小板等各种成分。
应用全血在临床诊断和输血中有广泛的应用。
全血可用于以下方面：•血常规检测：全血可用于进行血细胞计数、血红蛋白测定等基本的血液检查。
•输血：全血可直接用于输血给患者，包含了各种血细胞和血浆组分，适用于各种血液疾病患者。
优点与注意事项全血相比于去白细胞悬浮红细胞，存在以下特点和注意事项：1.保存时间有限：全血的保存时间相对较短，通常在采集后的几个小时内进行处理或使用。
机能实验学 7溶血实验(罗肖)
实验目的
熟悉ABO血型鉴定的方法，充分认识输血 时血型不合所造成的严重后果。
材料
对象 人。 试剂和药品 抗A抗体，抗B抗体，生理盐水 装置和器材 采血针，玻片，牙签，75％酒
精棉球，干棉球，碘酒棉球。
准确无误。
试管中加入红细胞悬液后混匀时，不可用力 ﹑快速振荡，以免人为造成红细胞破裂。
观察实验结果时勿将试管从试管架上拿出， 应水平端起试管架进行观察。
溶血与药物溶血反应
前言
溶血是指红细胞破裂、溶解的一种现象，某些 药物，尤其是注射剂的毒副作用之一是引起红 细胞膜破裂、造成溶血反应;
在新药研发或药品生产中，都需要对注射剂药 品进行药物溶血实验测定。
实验方法
在玻片的两端分别滴抗A抗体、抗B抗体各 一滴，并进行标记。
用碘酒棉球消毒指端或耳垂,再用酒精棉球 消毒后,用采血针刺破皮肤,轻挤少量血液。
用洁净竹签两端各蘸取少量血液，分别加入 两种抗体中，并用牙签轻轻搅动片刻或摇动 混匀，静置35分钟以上观察。用消毒干棉 球置于伤口，并按压23分钟。
红细胞渗透脆性观察
前言
红细胞膜允许一些脂溶性物质，如O2和CO2，及 水分子自由通透。
正常红细胞置于不同浓度NaCl溶液中时，在等渗 溶液中红细胞形态与大小不变；在渗透压递减的 一系列溶液中，红细胞逐渐膨大以至破裂溶解。
前言
对低渗盐溶液抵抗力最小的红细胞，最早出现 溶血，被认为其具有最大渗透脆性。反之，渗 透脆性最小的红细胞，对低渗盐溶液有最大抵 抗力，最后出现溶血。
）、20ml试管（2个）、试管架6个，小试管 10支，三角瓶、硅胶刷、滴管、离心机、 50ml量桶、吸耳球。
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红细胞悬液的配制
1 目的
配制合格的红细胞悬液。
2 使用范围
适用于ABO血型鉴定、Rh血型鉴定、交叉配血试验及抗A和抗B血型定型试剂效价测定及稳定性和亲和力评价试验等。
3 职责
血库专业人员及本科值班人员。
4 试剂及仪器
4.1.1 生理盐水
4.1.2 离心机
5 操作规程
取红细胞加入已标记的洁净小试管(内径10mm×60mm)中，3000r/min离心5min。
弃上清，加入适量生理盐水，用吸管轻轻吹散管底红细胞，3000r/min离心5min。
重复5.1.2操作2次以充分洗涤红细胞。
用吸管小心吸取上层生理盐水并弃去，取底部压实红细胞按下表1配成不同浓度的红细胞悬液。
表1 红细胞悬液配制
悬液浓度（%）压实红细胞（滴）生理盐水（滴）
2 1 （40）
4 1 （20）
3-5 1 （16-26）
5 1 （16）
10 1 （8）
6.质量控制
配制A型和B型5％试剂红细胞悬液时需随机选用经血液中心鉴定血型的3个以上健康成人同型标准红细胞，无溶血及脂血。
配制前需按[ABO血型手工鉴定]进行正反定型。
离心时严格按照转速要求，吹散管底红细胞时动作需轻柔，防止溶血。
试管和滴管必须清洁干燥，防止溶血。
6.4 A型和B型5％试剂红细胞悬液使用前需按[ABO血型手工鉴定]进行正定型。
7 红细胞悬液的保存
配制好的5％的试剂红细胞悬液应在试管上注明红细胞血型及配制时间，并在[配制5％试剂红细胞悬液记录表]中按要求记录，加盖后2-8℃避光保存，有效期3天。
用于血型鉴定的受检者3-5%红细胞悬液可不保存。
抗A和抗B血型定型试剂效价测定及稳定性和亲和力评价试验所需红细胞悬液需现用现配，使用后勿需保存。
8 参考文献
叶应妩,王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.中华人民共和国卫生部医政司. 南京.第三版.
附表：
文件修改记录
配制5％试剂红细胞悬液记录表。