实验五、GUS染色检测基因瞬时表达
利用GUS基因表达观察启动子功能b
GUS染液的配制 母液 20mM X-gluc in dimethyformamide 0.2mM Na2HPO4 0.2mM NaH2PO4 100mM EDTA 10mM 高铁氰化钾 1% Triton-X100 最终反应液(100ul) 0.2mM Na2HPO 430.5ul 0.2mM NaH2PO4 19.5ul 100mM EDTA 10ul 10mM高铁氰化钾 10ul 1% Triton-X100 10ul X-gluc 母液 5ul ddH2O 15ul
实验步骤
育苗:拟南芥 (IAA2::uidA )种子经表面消毒后接 种于无菌的B5琼脂培养基. 生长素处理:将拟南芥小苗转接至含有生长素 (0.1M IAA)的新鲜培养基中处理1天. GUS染色:染色0.5-1.5h,叶子部分需80%酒精 中脱色30min后观察. 镜检:观察GUS表达的组织特异性,IAA对GUS表达 的影响.
Figure 1. Analysis of IAA accumulation in wild-type and aux1 Arabidopsis root apices. (A) High resolution IAA quantitation in Arabidopsis wild-type () and aux1 () root segments. (B) DIC image of whole-mount GUS-stained wild-type IAA2::uidA root apex. (C) DIC image of whole-mount GUS-stained aux1 IAA2::uidA root apex. (D) Radial section of GUS-stained wild-type IAA2::uidA root apex. Scale bars, 50 m.
gus染色原理
gus染色原理
Gus染色原理。
Gus染色是一种用于检测β-葡萄糖苷酶活性的方法，它是以β-葡萄糖苷酶的
底物5-氯-4-溴-3-吲哚基葡萄糖（X-葡萄糖）为基础的染色方法。
在染色过程中，
X-葡萄糖会被β-葡萄糖苷酶水解，产生游离的5-氯-4-溴-3-吲哚基（X-吲哚），然后X-吲哚会与染色底物中的氧化剂氧化反应，生成可见的蓝色产物，从而实现对
β-葡萄糖苷酶活性的检测。
Gus染色的原理可以分为以下几个步骤：
1. 底物水解，X-葡萄糖是β-葡萄糖苷酶的底物，当β-葡萄糖苷酶存在时，它
会催化X-葡萄糖的水解反应，将其分解为X-吲哚和葡萄糖。
2. 氧化反应，X-吲哚与染色底物中的氧化剂（如溴化4-溴-3-吲哚苯）发生氧
化反应，生成可见的蓝色产物。
3. 结果观察，通过观察样品的颜色变化，可以判断β-葡萄糖苷酶的活性水平。
活性高的样品会呈现深蓝色，活性低的样品则会呈现浅蓝色或无色。
Gus染色方法具有操作简便、结果直观、灵敏度高的特点，因此被广泛应用于
细菌、植物和动物细胞等生物体系中对β-葡萄糖苷酶活性的检测。
同时，Gus染
色还可以在组织学研究中用于检测β-葡萄糖苷酶的表达情况，为研究者提供重要
的实验数据。
总的来说，Gus染色是一种简单而有效的β-葡萄糖苷酶活性检测方法，其原理清晰，操作方便，结果可靠。
在生物学研究中具有重要的应用价值，为科研工作者提供了有力的实验手段。
通过对Gus染色原理的深入了解，可以更好地应用和优
化这一方法，为科学研究提供更加可靠的数据支持。
gus染色原理
gus染色原理Gus染色原理。
Gus染色是一种用于研究植物组织中β-葡萄糖苷酶活性的常用方法。
这种染色方法利用了β-葡萄糖苷酶对X-葡萄糖苷基苯基酚的水解作用，使得组织中含有该酶的部分在染色后呈现出蓝色的颜色。
下面将介绍Gus染色的原理及其应用。
Gus染色的原理主要是利用了β-葡萄糖苷酶对X-葡萄糖苷基苯基酚的水解作用。
X-葡萄糖苷基苯基酚是一种无色底物，在β-葡萄糖苷酶的作用下，会被水解成苯基酚和葡萄糖。
而苯基酚在碱性条件下会发生氧化反应，生成蓝色产物。
因此，含有β-葡萄糖苷酶的组织在Gus染色后会呈现出蓝色，从而可以直观地观察到该酶的活性分布情况。
Gus染色在植物学研究中有着广泛的应用。
首先，它可以用于研究植物生长发育过程中β-葡萄糖苷酶的活性分布情况。
通过对不同发育阶段的植物组织进行Gus染色，可以清晰地观察到该酶在不同组织中的表达情况，从而揭示其在植物生长发育中的作用。
其次，Gus染色还可以用于研究植物对逆境的响应机制。
在逆境条件下，植物体内的β-葡萄糖苷酶活性可能会发生变化，通过Gus染色可以对其进行快速、直观的检测，从而揭示植物对逆境的生理响应。
除了在植物学研究中的应用，Gus染色还可以用于转基因植物的筛选。
在转基因植物中，外源基因通常会与Gus基因进行融合，从而使得转基因植物组织中具有Gus活性。
通过对转基因植物进行Gus染色，可以快速、准确地筛选出具有外源基因表达的植物组织，为转基因植物育种提供了重要的技术手段。
总之，Gus染色作为一种常用的酶活性检测方法，在植物学研究中发挥着重要作用。
它不仅可以用于研究植物生长发育过程中酶活性的分布情况，还可以用于研究植物对逆境的响应机制，以及转基因植物的筛选。
相信随着技术的不断进步，Gus染色方法将在植物学研究中发挥更大的作用。
Gus染色试剂配制及使用方法
●产品简介：gus(β-glucuronidase，β-D- 葡萄糖苷酸酶)基因是目前常用的一种报告基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶(GUS)是一种水解酶，能催化许多β-葡萄糖苷酯类物质的水解，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X-gluc.htm' target=_blank>x-gluc）分解为蓝色的物质，其检测方法简单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。
因为绝大多数植物细胞内不存在内源的GUS活性，因此gus基因广泛用作转基因植物的报告基因，尤其是在研究外源基因瞬时表达的转化实验中广泛应用。
该试剂盒包含GUS染色的全部试剂，使用方便，只需将染色液和缓冲液按照比例混合即配成GUS染色液。
该试剂盒可以配制50ml GUS染色液。
●贮存和效期：X-gluc染色液-20℃保存；GUS染色缓冲液4℃贮存。
自开封之日起有效期一年。
●使用说明：一. GUS染色液配制：X-gluc染色液为50×浓缩液，使用前用GUS染色缓冲液稀释50倍即配成GUS染色液。
如0.1 ml X-gluc染色液加入到5 ml GUS染色缓冲液中，即配成5 ml GUS染色溶液。
该染色溶液最好现用现配，短期贮存可以-20℃保存2-3天。
二. GUS染色步骤：1.将准备好的材料浸泡在GUS染色液中，于25-37℃保温1小时至过夜。
2.叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2-3次，至阴性对照材料呈白色。
3.肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为GUS表达位点。
注：用于染色的植物材料的制备方法要因涉及的特定组织和器官的不同而异。
例如，拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。
但是像烟草和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在染色前切成薄片（1-3mm）。
当操作大的组织和样品时，可以选用真空渗入法来帮助底物和酶渗入细胞。
GUS能与显色底物X-gluc 反应，显现蓝色，因而可以通过组织化学染色定性研究GUS的表达水平和表达模式。
gus染色原理
gus染色原理Gus染色原理。
Gus染色是一种常用的细胞染色技术，用于检测β-葡萄糖苷酶（β-glucuronidase）的活性。
β-葡萄糖苷酶是一种水解酶，能够水解含有葡萄糖醛酸酯的底物，产生游离的葡萄糖醛酸。
Gus染色的原理是利用β-葡萄糖苷酶水解底物后产生的蓝色产物，对细胞或组织进行染色，从而观察β-葡萄糖苷酶的活性和分布情况。
在进行Gus染色之前，首先需要准备Gus染色液和底物。
Gus染色液通常由染色缓冲液、染色底物和其它辅助试剂组成。
染色底物是一种含有葡萄糖醛酸酯的化合物，一般为5-溴-4-氯-3-吲哚基葡萄糖醛酸（X-gluc）。
X-gluc在β-葡萄糖苷酶的作用下会产生蓝色的沉淀物，用于显示β-葡萄糖苷酶的活性。
辅助试剂通常包括有机溶剂、金属离子螯合剂等，用于增强染色效果和稳定染色产物。
在实际操作中，将待检测的细胞或组织样品加入Gus染色液中进行染色处理。
在适当的温度和时间条件下，X-gluc会被β-葡萄糖苷酶水解，产生蓝色的沉淀物。
通过显微镜观察染色结果，可以直观地了解β-葡萄糖苷酶在样品中的活性和分布情况。
活性高的细胞或组织会呈现出深色的染色，而活性低的则呈现较浅的染色或无染色。
Gus染色技术在植物学、动物学和微生物学等领域得到了广泛的应用。
在植物学中，可以利用Gus染色观察植物各部位中β-葡萄糖苷酶的表达情况，从而研究植物的生长发育过程和应激响应机制。
在动物学中，Gus染色也可用于研究动物胚胎发育过程中的基因表达和细胞分化情况。
在微生物学中，Gus染色可以用于检测细菌和真菌中β-葡萄糖苷酶的活性，从而研究微生物的代谢特性和环境适应能力。
总之，Gus染色技术是一种简单、直观的细胞染色方法，能够有效地检测β-葡萄糖苷酶的活性和分布情况。
通过对样品进行Gus染色，可以为细胞生物学和生物化学研究提供重要的实验数据，促进对生物学问题的深入理解和探讨。
随着生物技术的不断发展，相信Gus染色技术在生命科学领域中会有更广泛的应用和深入的研究。
农杆菌EHA105转化条件的优化及水稻愈伤组织遗传转化体系的初步建立
农杆菌EHA105转化条件的优化及水稻愈伤组织遗传转化体系的初步建立：以质粒PBI121和gfp作为外源DNA转化农杆菌EHA105，通过对EHA105生长状态的测定，并对重悬液Cacl浓度，速冻时间和热处理温度等实验条件逐一进行筛2选，以确定EHA105的最优转化条件。
然后，分别用被转化的农杆菌侵染水稻愈伤组织。
结果表明，农杆菌 OD值接近0.6经过20mmol/L Cacl2重悬细胞，液氮速冻5600分钟后于28?处理5分钟，农杆菌的转化效率最高。
愈伤组织经GUS染色或荧光观察，外源基因已经转入水稻种子中。
农杆菌；水稻愈伤组织；遗传转化: Agrobacterium tumefaciens EHA105 was transformed by the plasmid PBI121 and gfp. To difine the best experimental conditions for transformationof A.tumefaciens the growth rate of the A.tumefaciens EHA105 was measured ,andthe concentration of resuspension solution,freezing time and the thawingtemperature were tested. And then infected mature rice in order to inducecallus with Agrobacterium tumefaciens respective .Result: By resuspended inCaclbuffer, frozen in liquid nitrogen for 5 min and thawed in 28? for 5 2min, the efficiency of transformation was the best. The callus was dyed byGUS or seen by fluorescence, which can testify that exterior gene has beentransferred into rice.Agrobacterium tumefaciens; rice callus; Genetic transformation水稻是世界上重要的粮食作物，并已为分子生物学研究的模式作物之一。
不同调控序列作用下GUS基因在烟草中瞬时表达活性
不同调控序列作用下GUS基因在烟草中瞬时表达活性谢伟;乐超银;郭政宏;戴志鹏;刘敏;姚伟【期刊名称】《植物学报》【年(卷),期】2007(024)004【摘要】以pBI121为出发质粒,利用烟草泛素启动子Ubi.U4、CaMV35S启动子以及Kozak序列构建4种GUS基因表达载体,通过叶盘转化法转化烟草叶片,检测瞬时表达活性,研究不同调控序列对外源基因表达的调控作用.结果表明:CaMV35S 启动子附加Kozak序列后使GUS活性比独立使用CaMV35S提高了近2倍;双CaMV35S启动子附加Kozak序列驱动GUS基因的表达活性与单CaMV35S附加Kozak序列相当;烟草泛素启动子附加Kozak序列的表达活性为CaMV35S启动子附加Kozak序列的1.5倍;Ubi.U4-CaMV35S复合启动子附加Kozak序列驱动GUS基因表达水平最高,其表达效率是双CaMV35S启动子附加Kozak序列调控下GUS表达效率的3倍,为CaMV35S独立作用时的10倍.【总页数】7页(P452-458)【作者】谢伟;乐超银;郭政宏;戴志鹏;刘敏;姚伟【作者单位】三峡大学生物技术研究中心,宜昌,443002;三峡大学生物技术研究中心,宜昌,443002;三峡大学生物技术研究中心,宜昌,443002;三峡大学生物技术研究中心,宜昌,443002;三峡大学生物技术研究中心,宜昌,443002;三峡大学生物技术研究中心,宜昌,443002【正文语种】中文【中图分类】Q94【相关文献】1.不同调控因子下GUS基因在马铃薯块茎中瞬时表达的影响 [J], 舒锐;姚甜甜;李燕;臧传江;焦健;兰成云;刘少军2.不同调控序列控制下的gus基因在柑桔原生质体中的瞬间表达 [J], 王锋;朱祯3.不同调控序列控制下的GUS基因在水稻和毛白杨愈伤组织中的瞬时表达 [J], 刘根齐;李秀丽;杨春玲;陈钟;赵世民4.GUS基因在烟草原生质体中的瞬时表达 [J], 王业5.内源β-微管蛋白侧翼序列调控下条斑紫菜原生质体GUS基因的瞬间表达 [J], 宫倩红;于文功;戴继勋;刘红全;徐日富;管华诗;潘克厚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
GUS染色操作
Updated 03/05/09 powered by Li-WenyangGUS染色操作1．取材（避免夹伤）；2．PBS漂洗3次；3．加入染色液，37C避光反应（如何控制反应时间：” Incubate seedlings at 37C until the desired staining intensity is observed”, ACC培养基上 5X EBS-GUS/Col-0 3天黄化苗经染色约2小时，在根的上半部就会有明显蓝色出现）；4．回收染液；5．PBS漂洗3次；6．固定液室温固定2~4小时，或者过夜；7．95%乙醇（目的是使用接近固定液浓度的乙醇）漂洗数次至脱掉色素（室温或者37C均可）；8．70%乙醇漂洗（目的是让材料在接近生理浓度时恢复形状）；9．透明液室温透明15’，或者过夜（推荐1~24h）；10．临时压片观察，照相。
注明：阴影字为快捷操作步骤，另外绿苗在此操作基础上需要进行脱色／透明操作，快捷步骤为100%乙醇、37C漂洗数次至脱掉绿色。
●PBS：100mM磷酸盐缓冲液A液：3.582g Na2HPO4·12H2O溶解于无菌蒸馏水，定容至10ml；B液：1.56g NaH2PO4·2H2O溶解于无菌蒸馏水，定容至10ml；取5.77ml A试剂、4.23ml B试剂混合，无菌蒸馏水定容至100ml；●staining buffer取40ml PBS，依次加入试剂：0.01861g EDTA0.01211195g 六氰合铁(II)酸钾0.016462g六氰合铁(III)酸钾（加入铁盐的目的：防止无色反应中间产物渗漏）用PBS定容至50ml，加入1% Trrton-X 100，避光保存；●GUS染液用EP管称取适量X-gluc粉末，加入少量DMSO或 N,N-二甲基甲酰胺助溶（一般溶解10mg 粉末约10~20ul二甲基甲酰胺），然后用staining buffer配成终浓度为1mg/ml的GUS染液，避光保存；●固定液无水乙醇：冰醋酸=9：1●透明液：30 ml H2O80 g 水合氯醛10 ml 100%甘油搅拌约1小时，使之充分溶解●背景GUS 基因由大肠杆菌E. coli 菌株K12 中uidA (也称为gusA) 基因座编码。