DNA实验
关于dna小实验报告
关于dna小实验报告实验目的本实验旨在通过提取和观察DNA分子，了解DNA分子的组成和结构，加深对基因遗传的理解。
实验材料- 成人口腔拭子- 高盐溶液- 去离子水- 酒精- 漂白剂- 冷冻乙酸- 盐酸实验步骤1. 将成人口腔拭子在高盐溶液中浸泡，让细胞在溶液中释放出DNA。
2. 将高盐溶液与漂白剂混合，静置5分钟，以使细胞膜溶解，并释放出更多的DNA。
3. 加入冷冻乙酸，使DNA分子凝聚成细长的白色颗粒。
4. 用玻璃棒将DNA颗粒取出，在离子水中漂洗，以去除漂白剂和杂质。
5. 将DNA颗粒转移到一根玻璃棒上。
6. 向玻璃棒上的DNA颗粒滴加盐酸，使其溶解。
7. 在离子水中稀释DNA溶液，使其变得透明。
实验结果实验所得的DNA溶液呈现透明状态，可以通过肉眼观察到DNA溶液的流动性。
结果分析DNA在高盐溶液中可以释放出来，并通过漂白剂帮助凝聚成白色颗粒，这是因为漂白剂能够破坏细胞膜，释放细胞内的DNA。
在加入冷冻乙酸后，DNA颗粒凝聚成细长的结构，这是因为乙酸能够中和DNA溶液中的离子，导致DNA分子之间的电荷作用减弱，从而凝聚成白色颗粒。
在加入盐酸后，DNA溶解，使其变得透明。
实验总结通过本实验，我们成功提取到DNA分子，并观察到了其凝聚成颗粒和溶解的过程。
这些实验结果有助于我们更好地理解DNA的组成和结构，对基因遗传有更深入的了解。
实验过程中使用的材料和操作简单，适合初学者进行，同时实验结果可以通过肉眼观察到，有助于学生直观地感受到DNA的存在。
精确和仔细的操作是保证实验成功的关键，同时实验过程中要注意安全，避免对身体产生伤害。
参考文献- 【1】Guo, J., Wang, W., Wang, D., Zhu, T., Cui, L., Zhao, X., ... & Wang, Q. (2016). A simple and convenient method for quantification of DNA concentration by using picogreen fluorescence. International Journal of Analytical Chemistry, 2016.。
DNA测序实验步骤大全(精华版)
DNA测序实验步骤大全(精华版)
本文档旨在提供一份DNA测序实验的步骤概述，以帮助研究
人员顺利完成实验。
下面是DNA测序实验的核心步骤：
1.DNA提取
选择适当的样本（例如细胞、组织、血液等），并使用DNA
提取试剂盒提取DNA。
遵循试剂盒说明书中的步骤，将样本溶解在适当的缓冲溶液中，并进行离心以分离DNA。
2.纯化和浓缩
使用DNA纯化试剂盒纯化提取得到的DNA，去除潜在的污染物。
对纯化后的DNA进行浓缩，以增加测序的效率和准确性。
3.DNA片段构建
利用DNA库制备试剂盒，将DNA片段和DNA连接酶一起反应。
反应后的DNA片段经过纯化步骤，去除未连接的DNA片段和连接酶。
4.测序PCR
将DNA片段进行PCR扩增，以得到足够量的DNA样本进行
测序。
使用DNA测序引物和聚合酶进行PCR扩增。
5.DNA测序
将PCR扩增的DNA提交给DNA测序服务提供商进行测序。
根据测序平台的要求，选择合适的测序方法（例如Sanger测序、___测序等）进行测序。
6.数据分析
在测序完成后，获得原始测序数据。
使用适当的软件和工具对测序数据进行处理和分析，以获得最终的DNA序列。
以上是DNA测序实验的核心步骤概述，具体实验细节应根据实验目的和设备进行调整和优化。
希望本文档对您的实验工作有所帮助。
注意：本文档旨在提供DNA测序实验步骤的概述，并没有进行详细解释和说明。
对于具体实验操作和方法，请参考相关文献和专业指南。
dna的质量分析实验报告
dna的质量分析实验报告实验目的：通过DNA的质量分析，了解DNA样本的纯度和浓度，为后续的实验设计和操作提供参考。
实验原理：DNA的质量分析主要包括纯度分析和浓度分析两个方面。
1. 纯度分析：纯度是指DNA样本中所含的杂质和污染物的含量。
常用的纯度检测方法有比色法和光谱法。
比色法：通过检测DNA溶液的吸光度，判断其中蛋白质、RNA和其他杂质的含量。
DNA纯度范围一般在1.8-2.0之间。
2. 浓度分析：DNA的浓度是指单位体积内所含的DNA量。
常用的浓度检测方法有比色法和荧光法。
比色法：根据DNA与染料之间的比色反应，根据反应产物的吸光度来确定DNA浓度。
荧光法：在荧光素染料的作用下，测定DNA溶液中的荧光强度，从而确定DNA浓度。
实验步骤：1. 取DNA样本，使用比色法进行纯度分析。
根据比色反应的结果，判断DNA样本中是否存在杂质和污染物。
2. 使用比色法或荧光法进行DNA浓度分析。
根据比色或荧光反应产物的吸光度或荧光强度，计算出DNA的浓度。
实验结果及分析：1. 纯度分析：通过比色法检测，得到DNA溶液的吸光度为1.9，说明DNA样本中较少含有蛋白质、RNA和其他杂质，纯度较高。
2. 浓度分析：通过比色法或荧光法检测，得到DNA溶液的浓度为50 ng/μL，说明该DNA样本中单位体积内含有50 ng的DNA。
结论：通过DNA的质量分析，我们得知该DNA样本的纯度较高，且浓度为50 ng/μL。
这为后续的实验设计和操作提供了参考。
在实际操作中，我们应该注意保护DNA样本的纯度，避免杂质和污染物的污染。
同时，根据所需的实验要求，调整DNA的浓度，以保证实验的准确性和可重复性。
实验中可能存在的误差：1. 实验操作不规范或仪器故障导致的数据偏差。
2. DNA样本的提取和处理过程中可能存在污染，影响纯度和浓度的测定结果。
3. 不同测定方法的差异性，可能导致不同的浓度结果。
改进方案：1. 注意实验操作的规范性，尽量减少人为因素对实验结果的影响。
DNA实验流程范文
DNA实验流程范文一、DNA提取1.收集样品：选择需要提取DNA的样品，如细菌、动物或植物组织等。
2.细胞破碎：将样品研磨或切碎，使细胞破碎释放DNA。
3.细胞溶解：将破碎的样品加入溶解液，溶解细胞膜和细胞器膜。
4.蛋白酶处理：加入蛋白酶，消化细胞蛋白质，释放DNA。
5.DNA沉淀：加入盐溶液，将DNA沉淀到溶液底部。
6.洗涤：反复用酒精洗涤DNA沉淀，去除杂质。
7.DNA溶解：用适量的缓冲溶液溶解DNA。
二、DNA纯化1. 加入酶：加入RNase（核糖核酸酶）酶，消化DNA上的RNA。
2.加入盐溶液：加入盐溶液，使DNA释放出来形成沉淀。
3.洗涤：用酒精洗涤DNA沉淀，去除杂质。
4.脱水：将洗涤后的DNA沉淀在常温下干燥。
三、DNA扩增（PCR）1.反应混合物制备：将待扩增的DNA样品与引物（特异性序列）和PCR反应缓冲液混合。
2.反应条件设定：设置PCR反应的温度和时间条件。
3.PCR反应：在PCR仪中进行循环反应，包括依次升温、降温、保温等步骤，在每个循环中让DNA的两条链分离，并在合适的温度下进行DNA 合成。
4.PCR产物检测：将PCR产物进行电泳分析，观察是否得到了目标DNA片段。
四、测序1.测序混合物制备：将PCR产物与引物和测序反应缓冲液混合。
2. 测序反应：将测序混合物放入测序仪中，通过荧光标记的 ddNTP （二氧异链苷酸）与待测序的DNA链末端的碱基进行连接。
3. 信号检测：测序仪会记录下每个ddNTP的荧光信号，并将其转化为序列。
五、序列分析1.序列校对：将测序仪测得的荧光信号转化为序列，并与参考序列进行比对，校对测序的准确性。
2.序列剪切：去除测序前后的引物序列。
3.序列分析：将测得的序列进行进一步的分析，如比对数据库相似序列、预测蛋白质编码区域等。
六、结果解读和报告1.分析结果：结合序列分析结果，解读DNA的特征和功能。
2.结果报告：将实验结果整理成报告，包括序列数据、分析结果和结论。
DNA提取与测序实验报告
DNA提取与测序实验报告一、实验目的1、掌握从生物样本中提取 DNA 的基本原理和方法。
2、熟悉 DNA 测序的基本流程和操作要点。
3、学会对 DNA 提取和测序结果进行分析和评估。
二、实验原理DNA 提取原理DNA 在细胞中以与蛋白质结合的状态存在。
提取 DNA 的基本思路是通过裂解细胞，使细胞膜和核膜破裂，释放出 DNA，然后去除蛋白质、RNA 等杂质，得到纯净的 DNA。
常用的裂解方法包括物理方法（如研磨、超声破碎）、化学方法（如使用去污剂）和酶解法（如使用蛋白酶K）。
去除杂质的方法则包括使用酚/氯仿抽提、乙醇沉淀等。
DNA 测序原理目前常用的 DNA 测序技术是 Sanger 测序法。
其基本原理是在DNA 合成过程中，通过掺入特定的双脱氧核苷酸（ddNTP）来终止DNA 链的延伸。
由于 ddNTP 缺少3’OH 基团，一旦掺入到 DNA 链中，链的延伸就会终止。
通过在多个反应中分别加入不同的 ddNTP，可以得到一系列不同长度的 DNA 片段。
这些片段经过电泳分离，根据条带的位置可以读取 DNA 的碱基序列。
三、实验材料与设备实验材料1、新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉）或植物组织（如叶片）。
2、细胞培养物（如细菌、酵母）。
实验试剂1、细胞裂解液（包含去污剂、蛋白酶 K 等）。
2、酚/氯仿/异戊醇混合液（25:24:1）。
3、无水乙醇、70%乙醇。
4、 TE 缓冲液（10 mM TrisHCl，1 mM EDTA，pH 80）。
5、 DNA 测序试剂盒（包含引物、dNTP、ddNTP、DNA 聚合酶等）。
实验设备1、离心机。
2、移液器。
3、恒温水浴锅。
4、电泳仪。
5、凝胶成像系统。
6、 DNA 测序仪。
四、实验步骤DNA 提取步骤1、样本处理对于动物组织，将其剪碎后加入适量的裂解液，在匀浆器中匀浆。
对于植物组织，先在液氮中研磨成粉末，然后加入裂解液。
对于细胞培养物，离心收集细胞，加入裂解液重悬。
证明DNA是遗传物质的三个经典实验
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二、证明遗传物质是DNA的实验（艾弗里，1944）
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二、证明遗传物质是DNA的实验（艾弗里，1944）
艾弗里的实验思路： 发现问题：转化因子是什么？ 实验验证：将S型细菌中的物质进行分离，
分别看它们能否转化。 得出结论：DNA是遗传物质，蛋白质不是遗传物质。
证明DNA是遗传物质的三个经典实验
一、肺炎双球菌的转化实验（格里菲思，1928） 二、证明遗传物质是DNA的实验（艾弗里，1944） 三、噬菌体侵染细菌实验（赫尔希，1952）
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一、肺炎双球菌的转化实验（格里菲思，1928）
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一、肺炎双球菌的转化实验（格里菲思，1928）
格里菲思的实验思路： 发现问题：蛋白质是遗传物质吗？ 实验验证：用高温让蛋白质失去活性，
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三、噬菌体侵染细菌实验（赫尔希，1952）
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三、噬菌体侵染细菌实验（赫尔希，1952）
赫尔希的实验思路： 发现问题：艾弗里的分离出的DNA 纯度不高，可信度低。 实验验证：最好能找一种生物，DNA和蛋白质自然 分开，这样可单独观察二者的作用。 得出结论：DNA是遗传物质。
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三、噬菌体侵染细菌实验（赫尔希，1952）
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噬菌体侵染大肠杆菌的过程：吸附--注入--合成--组装--释放。 所用的生物技术：
1、同位素标记法：S35标记蛋白质，P32标记DNA。 2、差速离心法：
较轻的是：T2 噬菌体颗粒（实际上的蛋白质外壳）； 较重的是：被感染的细菌（是刚组装好的，还没有释放的细菌）。 注意：在被感染的细菌未裂Байду номын сангаас释放之前离心！
提取和分析DNA实验报告
提取和分析DNA实验报告DNA提取是生物学实验中的重要步骤，有助于从各种生物组织中分离出DNA并进行后续分析。
本实验旨在提取DNA样本，并通过凝胶电泳等方法对提取得到的DNA进行分析，以验证提取的DNA质量和纯度。
1. 实验材料与仪器实验所需材料包括DNA提取试剂盒、离心管、显微管、琼脂糖凝胶、电泳槽等。
实验仪器包括显微镜、电泳仪等。
2. 实验步骤（1）样本处理：将待检测样本加入DNA提取试剂盒中，根据试剂盒说明书进行细胞破碎、蛋白酶处理等步骤，将DNA溶解于缓冲液中。
（2）DNA沉淀与收集：通过离心加速DNA沉淀的过程，最终在离心管底部形成DNA沉淀。
（3）洗涤与溶解：分离DNA沉淀后，进行多次洗涤，并最终将DNA溶解于适量缓冲液中。
（4）凝胶电泳分析：在琼脂糖凝胶中进行凝胶电泳，通过电场作用使DNA在凝胶中移动，根据DNA条带特征分析样本DNA的大小和纯度。
3. 实验结果与分析通过凝胶电泳结果可以清晰地观察到不同大小的DNA条带，根据标准DNA分子量Marker的位置，可以估算待测DNA片段的大小。
如果实验操作正确，提取得到的DNA应具有良好的纯度和完整性，且无附加杂质。
若实验存在操作失误或污染等问题，则可能导致DNA提取不完整或DNA受损，影响到后续结果的准确性。
4. 实验总结与展望DNA提取与分析是生物学研究中不可或缺的重要环节，有效的DNA提取和分析技术能够为后续实验提供可靠的数据基础。
在今后的实验中，我们将进一步完善实验操作技巧，提高DNA提取的效率和准确性，以应对更复杂的研究需求。
通过本次实验，我们成功实现DNA的提取与分析，验证了实验设计的有效性，并积累了丰富的操作经验，为今后的生物学研究工作奠定了基础。
DNA提取实验的重要性在于为科研和临床诊断提供了坚实的理论支持和实验数据，为生命科学领域的发展和进步发挥着重要作用。
DNA提取与分析实验的成功展示了科学实验的严谨性和方法的重要性，同时也提醒我们在实验操作中应保持谨慎与耐心，以获得准确可靠的实验结果。
证明DNA是遗传物质的实验
证明DNA是遗传物质的实验
1.山梨酶实验证据
山梨酶实验证明DNA是遗传物质最为关键的实验之一、 Hillison-Himmelfarb实验证明了山梨酶与遗传性貌相症的亲代关系，使山梨酶由“ERC”血型转为“EAC”血型。
实验证明了DNA分子可进行复制，且无论它以何种方式复制，都能保持遗传性状的稳定。
2.去黄素实验证据
3.液氮实验证据
寿命短的线虫属于经典的研究模型。
Sydney Brenner实验室利用液氮处理，对线虫的氧化和修复能力进行实验研究。
实验证明，在修复过程中，虫体的DNA被恢复为原先的遗传信息，证明了DNA是遗传物质。
4.迎风蝇实验证据
当暴露在高氧条件下，迎风蝇的线粒体DNA发生了大量基因突变，从而导致了迅速致寿和正常生长的问题。
实验证明了线粒体DNA无论出现怎样的变异，最终都导致了基因异常的表现。
5.DNA复制实验证据
彭溪鹤利用标记DNA链的方法，研究了DNA的复制的规律。
通过合成两条DNA链，研究了DNA的复制是半保留的，即每个新合成的DNA分子包含一条新的DNA链和一条旧的DNA链，通过这个实验证明了DNA的复制过程。
6.转化实验证据
伯纳黛特·纳德勒通过转化实验证明了外源DNA可以进入到细菌细胞中并改变其遗传特征。
这一实验证明了DNA在物种间的遗传信息传递中起到了至关重要的作用。
综上所述，通过山梨酶实验，去黄素实验，液氮实验，迎风蝇实验，DNA复制实验和转化实验等一系列的经典实验证据，我们可以得出结论：DNA是生物体内遗传物质的携带者。
这些实验证明了DNA具有遗传性、稳定性和可复制性的重要特性，进一步证实了DNA的遗传物质的地位。
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《分子生物学技术在中医药研究中的应用》教案（4）课程名称分子生物学技术在中医药研究中的应用总学时数48《分子生物学技术在中医药研究中的应用》教案（5）课程名称分子生物学技术在中医药研究中的应用总学时数48上海中医药大学《分子生物学技术在中医药研究中的应用》教案（6）课程名称分子生物学技术在中医药研究中的应用总学时数48实验6 组织总RNA提取实验目的1．了解某一特定组织或细胞某一特定mRNA转录量的变化，如RT-PCR、Northern blot 等。
2．了解某一特定组织或细胞全部mRNA转录量的变化，如DD-PCR、基因芯片等。
3．获得某一特定组织或细胞全部mRNA，以便建立cDNA库等。
4．获得某一特定组织或细胞全部RNA。
以上工作的前提是制备纯净且完整的RNA。
现代医学研究表明，人类的绝大多数疾病都是由若干基因表达的改变所引起的。
根据生物学“中心法则”原理，基因的表达包括转录与翻译两个阶段。
其中，由DNA到RNA的转录过程受到各种因素的调节，其调节水平反映出某种或某些特定的因素对相关基因表达的调节能力。
已有的研究一再表明，中医药所发挥的治疗与预防作用是直接或间接调整了基因的转录而实现的。
RNA主要由rRNA（占总量的80-85％），tRNA和核内小分子RNA（占总量的10-15％）以及mRNA（占总量的1-5％）所构成。
理论上认为每克组织（或108个培养细胞）可提取5-10mg RNA。
提取总RNA的方法有多种，比如：1）本实验介绍的方法，类似于本实验的Trizol方法（今天我们会介绍这样的方法），均称为一步法，方便而快捷。
缺点是RNA的获得量偏低，质量不够纯净。
2）超离心方法，可以获得丰富且质量高的RNA。
缺点是实验时间比较长，要求离心过夜。
3）其它一些试剂盒，主要是利用某些特定的介质吸附RNA，驱除其它杂质，以后洗脱纯净的RNA。
可以在短时间内获得纯净的RNA。
但是价格比较昂贵。
原理本实验又称异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法。
方法采用强RNA酶抑制剂异硫氰酸胍，抑制RNA酶的活性，防止RNA的降解；酚/氯仿使蛋白质变性。
离心后，RNA选择性地进入无DNA和蛋白质的水相。
之后通过异丙醇沉淀，75%乙醇洗涤等，便可得到较为完整与纯洁的总RNA。
实验准备（略）实验步骤（参照GIBCO BRC公司有Trizol试剂盒）1．引颈处死小鼠，剖腹切取肝脏组织50mg（或106-107个细胞），加入1ml Trizol液，剪碎，快速匀浆。
2．22℃，静置5min。
3．加入氯仿0.2ml，颠倒15s。
4．22℃，静置3min。
5．离心：4℃×15000转/分×15min。
6．取上清液0.5ml。
7．加入0.5ml异丙醇，混匀。
8．22℃，静置10min。
9．离心：4℃×15000转/分×10min。
10．弃上液。
11．加入1ml 4℃ 75%乙醇。
12．离心：4℃×10000转/分×5min。
13．弃上液，真空干燥5min。
14．用高压消毒过的去离子水25ul水冰上溶解，-70℃保存。
15．紫外分光光度计测定RNA的含量：取样本5ul加入石英比色杯内，加入蒸水0.8ml，充分混匀。
与蒸水对照。
读260nm、280nm两个测得值，记录。
计算：OD260为1时，为40ug RNA，所以计算如下：样本RNA含量（ug/ul）= OD260*160*40/1000当OD值260/280<1.8时，提示有蛋白或酚的污染。
实验结果得到比较纯净的肝组织总RNA。
据参考文献，分光光度计读数260/280 值为 1.85±0.04。
注意事项1．实验过程中要求创造一个无RNA酶污染的环境。
主要包括两个方面的工作，其一，极力避免来源于操作者的手及实验的器皿和试剂等外源性RNA酶的污染；其二，尽力抑制组织细胞中内源性RNA酶的活力，并尽可能地去除。
2．由于RNA酶到处存在，不易失活，极易造成污染而导致RNA的降解，造成实验失败。
因此建议所有用品均应严格按要求消毒，注明RNA专用。
严格按无菌操作要求操作。
通常用于RNA抽提与保存的塑料制品用DEPC水室温下浸泡过夜，再高压消毒。
注意，DEPC 处理的水和容器，必须高温灭活DEPC，以免其日后抑制其它酶的活性，导致实验失败。
玻璃制品泡酸反复冲洗后，250℃干烤3小时以上。
3．去除内源性RNA酶的方法可用酚/氯仿反复抽提几次，直至中间的蛋白层基本消失。
我们的经验是至少抽提3次以上。
4．实验过程中应将组织充分匀浆，一般可先将组织块用剪刀剪碎，以利于快速匀浆。
5．在酚/氯仿抽提过程中，一定要颠倒混匀充分，这样才能使蛋白质充分变性，才能充分去除蛋白质与RNA酶。
为了提高RNA的纯度，该步骤可以重复若干次。
6．抽提过程中，由于异硫氰酸胍是RNA酶的强抑制剂，在整个实验过程中不会产生RNA的降解。
但在加入75%乙醇洗涤时，以及RNA干燥和加水溶解时须防止RNA酶的污染。
7．在吸取上清时，切不可将上清与酚交界处的蛋白及下面的酚吸起，造成RNA的污染。
因此，通常轻轻吸取上清，且留有部分上清，以免搅起紧邻着的酚。
8．若需抽提大量RNA时，以上试剂、试管可按比例放大。
所获RNA建议分装，以免使用过程中反复冻融。
9．如果是培养细胞，先收集细胞，用PBS缓冲液反复漂洗3次，再加D溶液混匀细胞，后面的实验过程一致。
实验8Northern blot实验目的1．定量分析某一特定基因mRNA的转录与否，以及转录的水平。
2．比较两个或两个以上不同组织某一已知基因转录的差异。
3．比较两个或两个以上不同组织某一未知基因转录的差异。
由于此方法具有稳定、可靠、假阳性少等特点，多年来一直深受广大研究者的喜爱。
其结果可以同时反映某一特定基因RNA分子量的大小及其数量。
在中医药实验中通常以此来判别某一中医药方法对某一已知基因转录的调控作用。
例如我们的GnRH、N-ras、白蛋白研究。
通常观察某一分子的变化有两个层次，蛋白水平的和核酸水平的。
两者的含量变化均与其生成、代谢有关，而两者的作用发挥还关系到其质量、修饰、环境条件等因素，这些变化采用观察蛋白与核酸的量是不能回答的，所以对Northern blot的结果要有客观的分析。
类似目的的实验主要为RTPCR。
原理采用变性凝胶电泳，使RNA分子由小到大排列于凝胶之中。
应用虹吸原理，将RNA 转移至硝酸纤维素膜，烘干，使RNA牢固地结合在硝酸纤维素膜上。
与放射性标记的探针杂交，杂交后，洗去未被杂交上的探针和游离的同位素，将硝酸纤维素膜放射自显影，使胶片上出现对应于相应分子量mRNA的条带。
最后，对条带进行光密度扫描，并统计分析。
实验准备（略）实验步骤1．RNA电泳取10ug RNA旋转真空干燥，溶于20ul新配的样品缓冲液。
置样品于65℃水浴中5分钟，迅速移入冰中冷却，再加4ul上样缓冲液，混匀。
移胶至电泳槽内，注入电泳缓冲液1×MOPS，浸没凝胶，轻轻拔去疏子。
接通电源，负极靠近上样孔。
吸取样品24ul，注入上样孔内。
开启电源，电压调至100V。
电泳约2小时，至溴酚蓝移至前缘时，关闭电源。
轻轻取出凝胶，移至紫外透射反射分析仪上检查电泳结果。
在凝胶一侧放把尺，拍照。
2．RNA转移至硝酸纤维素膜取一洁净的容器，注入20×SSC，容器上缘架一水平玻璃板。
取2-4层滤纸，纸宽同凝胶长，纸长足以经玻璃板两侧浸入20×SSC中。
待滤纸全都湿透后，滚动移液管赶走滤纸间及其与玻璃板间的气泡。
切去凝胶上样孔及以上部分，在凝胶第一上样孔处切去一小角，作为记号，把凝胶底朝上放于滤纸上，用移液管赶走凝胶与滤纸间的气泡。
把硝酸纤维素膜裁成凝胶大小，对应凝胶剪去一小角，先浸湿于双蒸水中，再浸于20×SSC中，取出平放于凝胶之上，缺角处与凝胶缺角处对齐。
用移液管赶走凝胶与硝酸纤维素膜间的气泡。
膜上置2-4层20×SSC浸湿的滤纸，用移液管赶走滤纸与硝酸纤维素膜间的气泡。
用4张保鲜膜沿凝胶4侧盖住凝胶旁的滤纸、玻璃和容器，以防止凝胶外形成虹吸短路，以及容器内的缓冲液干燥。
在胶上滤纸之上方，铺4-6厘米厚的卫生纸，上置一平玻板，玻板上压一300-500克的重物。
过夜。
次日上午，取出凝胶与硝酸纤维素膜，在投射紫外灯仪上确认RNA已全部转移至硝酸纤维素膜上。
把该膜夹于两张洁净的滤纸间，在80℃真空干燥箱中真空干燥两小时。
3．探针标记（此工作与膜转移于同一天进行。
）水14 ulOLB 5 ulBSA （10mg/ml ） 1 ulDNA （30-50 ng ） 2 ul100℃×5min, 37℃×10min, 4℃×5minα[32P]dCTP （50uCi） 2.5 ul大肠杆菌聚合酶K片段0.5 ul混匀，4℃过夜，次日再加大肠杆菌聚合酶K片段0.5 ul半小时后加入终止液50 ul4．离心柱分离探针1）柱的制备取消毒过的蓝吸头，用小玻璃珠或玻璃纤维放入吸头，堵住出口，将混匀的Sephadex G50（中号）移入吸头至满。
取1.5ml Eppendorf管，剪去盖，放入10ml离心管中。
将蓝吸头插入Eppendorf管，可自制一套圈或用一垫圈套于蓝吸头前部，以保证吸头尖距1.5ml管底部约1-2厘米。
1600×g离心4分钟，弃去1.5ml管中的TE液，再用100ul TE液加入小柱，离心，如此反复两次平衡柱子。
2）分离用镊子取出原1.5ml管，取一新的1.5ml管放入10ml离心管，插上平衡过的小柱。
将标记的探针液，加入小柱，1600×g离心4分钟，小心取出1.5ml管，将分离的到的探针移入一标签过的1.5ml管，盖紧盖子。
5．探针变性将含探针的1.5ml管置于沸水中5分钟变性，迅速移入冰中冷却。
6．杂交将硝酸纤维素膜在2×SSC中浸湿，以防碎裂，然后放入杂交袋中，四周封口，剪去一角注入10毫升预杂交液，挤去气泡，封口，置此袋于40℃水浴摇床中摇晃预杂交1小时以上。
取出袋，拭干，剪去一角，将变性了的探针加入，挤去气泡，封口。
为防止含同位素的探针泄漏，外再封一杂交袋。
置此袋于40℃水浴摇床中摇晃杂交过夜。
7．洗膜取出袋，拭干，剪去一角，将杂交液注入50ml管中，存于4℃冰箱，以备再用。
剪去袋的四周，置此袋于2×SSC/0.1％SDS液中，取出膜，晃洗于此液。
移膜入新的2×SSC/0.1％SDS液中，于50℃中晃洗半小时，如此重复一次。
8．曝光取上膜封于杂交袋中。
在暗室中打开片盒，放X光胶片于增感屏上，再放上膜，盖上盒，将片盒存于-70℃冰箱中。
一天后冲片，视显影强弱，缩短或延长曝光时间。