lamp检测技术原理
三种核酸检测方法
三种核酸检测方法
目前常用的三种核酸检测方法为：
1. PCR（聚合酶链式反应）：PCR 是一种常用的核酸检测方法，通过引物与目标序列的互补配对，利用酶的作用在体外复制目标DNA 或RNA 片段，进行扩增后，通过荧光探针或凝胶电泳等方法进行检测。
PCR 方法具有高灵敏度和特异性，可以检测极微量的目标核酸。
2. LAMP（等温扩增法）：LAMP 是一种基于异构酶的等温扩增技术，可以在恒温条件下，通过多个特异性引物和DNA 聚合酶，实现核酸片段的高倍增。
LAMP 技术不需要特殊设备和高精度温控，成本较低，操作方便，适用于一些基层医疗机构进行疫情监测。
3. NGS（高通量测序）：NGS 是一种高通量测序技术，可以同时测定数百万条DNA 或RNA 片段的序列，广泛应用于基因组学和转录组学研究。
在核酸检测领域，NGS 技术可以通过对样本进行高通量测序，快速检测和鉴定病原体的基因组序列，对于新型病毒的检测和变异分析具有较高的灵敏度和准确性。
然而，NGS 技术需要专业的设备和分析软件，成本较高，操作复杂，一般用于重大疫情的溯源和研究。
基于LAMP技术的微生物病原诊断研究进展
立的 LAMP 检测结果，在检出率以及检测时限上，后者更加 具备优势［2］。在植物病毒的应用上，各大研究机构陆续建立 LAMP 检测。汤等通过建立辣椒黄脉病毒 ＲT － LAMP［3］，证 明其与 ＲT － PCＲ 相比，在使用成本、检出率上性能更优，操 作简便，更适应基 层 检 测 需 求，该 点 也 被 多 家 实 验 机 构 所 证 实。在细菌的检测方面，LAMP 技术在副溶血弧菌［4］，大肠埃 希菌，猪链球菌等多类菌种的检测应用上体现较好的发展潜 力，具备较高的研究价值。LAMP 技术在检测时间，人力耗费 以及相关准确度上，与 PCＲ，ＲT － PCＲ 相比表现出较好的效 果，对多菌种的三重 LAMP 技术构建实验，有结果显示检出率 可高达 PCＲ 检测的 1 000 倍。在虫媒螺旋体等地区病原大面 积普查上，LAMP 技术操作简单，却有着重要的指示价值。
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Industrial & Science Tribune 2018 （17） 1
产业与科技论坛 2018 年 第 17 卷 第 1 期
基于因子分析的河北省公共服务 均等化水平评价研究
一、引言 临 床 常 见 微 生 物 病 原 主 要 为 细 菌，病 毒 和 寄 生 虫 三 大 类。鉴于社会发展 过 程 中，各 类 病 原 变 异 株 的 出 现，现 代 医 学诊治技术已将诊疗目标延伸至分子诊疗层次。传统检测 技术多见 ELISA、PCＲ、ＲT － PCＲ。在实际的临床应用中，上 述三项技术表现出较多弊端： ELISA 的使用需基于单克隆抗 体，灵敏度较低，诊断误差较大； PCＲ 法，易因交叉感染而造 成假阳性，影响诊疗效果； 误差较小，灵敏度较为准确的 ＲT － PCＲ 则因为其较高的使用成本，难以适用于基层检测。相 较三者，LAMP 技术具有干扰性强，具有较高特异性，且突破 了传统技术在仪器昂贵等成本上的限制，适用于野外采样等 快速检测，其应用 普 及 在 疫 病 防 控，病 原 检 测 研 究 等 方 面 具 有重要意义。 二、技术简介 LAMP，全名为环介导等温扩增技术，是一项基于核酸扩 增原理的分子技术。目前除了原有 LAMP 技 术，还 有 双 重 LAMP，三重 LAMP，ＲT － LAMP 等应用，现易广泛应用于生命 科学的 DNA 与 ＲNA 领域。传统检测技术多见 ELISA、PCＲ 和 ＲT － PCＲ，但在实际的临床应用中，传统三项技术表现出 诸多弊端： ELISA 的使用需基于单克隆抗体，灵敏度较低，诊 断误差较大； PCＲ 法，易因交叉感染而造成假阳性，影响诊疗 效果； 误差较小，灵敏度较为准确的 ＲT － PCＲ 则因为其较高 的使用成本，难以适用于基层检测。相较三者，LAMP 技术具 有干扰性强，具有 较 高 特 异 性，且 突 破 了 传 统 技 术 在 仪 器 昂 贵成本上的限制，适 用 于 野 外 采 样 等 快 速 检 测，其 应 用 普 及 在疫病防控，病原检测研究等方面具有重要意义。 三、LAMP 技术在病毒，细菌检测中的应用 国内赵等应用 LAMP 技术，建立了肠道腺病毒的肉眼可 视化检测［1］，广西大学梁等比对家蚕 BmNPV 常规 PCＲ 与建
LAMP技术原理和引物设计
LAMP原理及引物设计与实例．LAMP引物的设计LAMP引物的设计主要是针对靶基因的六个不同的区域，基于靶基因3' 端的F3c、F2c和Flc区以及5' 端的Bl、B2和B3区等6个不同的位点设计4种引物。
FIP(Forward Inner Primer)：上游内部引物，由F2区和F1C区域组成，F2区与靶基因3’端的F2c区域互补，F1C区与靶基因5' 端的Flc区域序列相同。
F3引物：上游外部引物(Forward Outer Primer)，由F3区组成，并与靶基因的F3c区域互补。
BIP引物：下游内部引物(Backward Inner Primer )，由B1C和B2区域组成，B2区与靶基因3' 端的B2c区域互补，B1C域与靶基因5' 端的Blc区域序列相同.B3引物：下游外部引物(Backward Outer Primer )，由B3区域组成，和靶基因的B3c区域互补。
2．扩增原理60-65℃是双链DNA复性及延伸的中间温度，DNA在65℃左右处于动态平衡状态。
因此，DNA在此温度下合成是可能的。
利用4种特异引物依靠一种高活性链置换DNA聚合酶。
使得链置换DNA合成在不停地自我循环。
扩增分两个阶段。
第1阶段为起始阶段，任何一个引物向双链DNA的互补部位进行碱基配对延伸时，另一条链就会解离，变成单链。
上游内部引物FIP的F2序列首先与模板F2c结合（如图B所示），在链置换型DNA聚合酶的作用下向前延伸启动链置换合成。
外部引物F3与模板F3c结合并延伸，置换出完整的FIP连接的互补单链（如图C所示）。
FIP上的F1c与此单链上的Fl 为互补结构。
自我碱基配对形成环状结构（如图C所示）。
以此链为模板。
下游引物BIP与B3先后启动类似于FIP和F3的合成，形成哑铃状结构的单链。
迅速以3' 末端的Fl区段为起点。
以自身为模板，进行DNA合成延伸形成茎环状结构。
lamp产物检测方法(一)
lamp产物检测方法(一)LAMP产物检测概述LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification）是一种高效、快速、特异性强的核酸检测技术，已广泛应用于医学、生物学、环境科学等领域的产物检测中。
本文将介绍LAMP产物检测的几种常用方法。
方法一：实时荧光检测实时荧光检测是LAMP检测中最常用的方法之一。
通过添加与LAMP引物配对的荧光探针，荧光信号与目标基因的扩增有关。
实时荧光检测可以提供实时的扩增曲线，并且可以基于荧光信号强度计算出目标物的浓度。
该方法结果灵敏度高，操作简便。
方法二：封闭管内检测封闭管内检测适用于大规模样本分析。
在封闭管中进行LAMP反应，通过观察管内的颜色变化来判断是否存在目标产物。
通常，反应阳性样品呈黄色或绿色，而阴性样品为紫色。
方法三：便携式检测设备随着便携式检测设备的发展，LAMP产物检测也可以在户外或实验室之外进行。
便携式检测设备结合了实时荧光检测和封闭管内检测的优势，能够有效地检测目标产物，并且具有高灵敏度和快速反应的特点。
方法四：电化学检测电化学检测是一种基于电化学信号变化来判断目标产物的方法。
通过引入与目标基因相关的电化学标记物，可以在反应过程中测量电流或电压的变化。
该方法具有高灵敏度、快速反应和较低的成本。
方法五：便携式PCR检测仪器结合LAMP传统的PCR（Polymerase Chain Reaction）方法在LAMP产物检测中也得到广泛应用。
便携式PCR检测仪器结合LAMP技术，可以提供更高的扩增效率和较低的虚警率。
结论LAMP产物检测是一种快速、高效、特异性强的核酸检测技术。
实时荧光检测、封闭管内检测、便携式检测设备、电化学检测和便携式PCR检测仪器结合LAMP是几种常用的方法。
根据实际需要，可以选择适合的检测方法进行LAMP产物检测。
（以上内容仅供参考，请根据实际情况进行操作）LAMP产物检测概述LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification）是一种高效、快速、特异性强的核酸检测技术，已广泛应用于医学、生物学、环境科学等领域的产物检测中。
环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测转基因玉米LY038
２ ０ ０ ０ ； Ｅ ｕ ｒ ｏ ｐ ｅ ａ ｎ ， ２ ０ ０ ３ ａ ； Ｅ ｕ ｒ ｏ ｐ ｅ ａ ｎ ， ２ ０ ０ ３ ｂ ） 。２ ０ ０ ２年 酶 ， 天然 玉 米 Ｄ Ｈ ＤＰ Ｓ的活 性 受 到赖 氨 酸 反馈 抑 制
３月 ２ ０日， 我 国 国务 院颁 布 了《 农 业 转 基 因生 物 安 的调 节 ， 因ｃ Ｄ Ｈ ＤＰ Ｓ 对 赖 氨 酸反 馈 抑 制 条例 》 指 出凡 在 中 国境 内销 售 列 入 在 玉米 中 的的表达 使 得赖氨 酸在 籽粒 中的积 累 ， 提 农 业转 基 因生物 标 识 目录 的农业 转基 因生 物 ， 应 当 高 了营养 价值 （ Ｌ ｕ ｃ ａ ｓ ｅ ｔ ａ １ ． ， ２ ０ ０ ７ ； Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ ｅ ｔ ａ １ ． ， ２ ０ １ １ ） 。
１ 结 果 与 分 析
法 因其具 有 高特异 性 、 高灵 敏度 得到 了最 广泛 的应 １ ． １ Ｌ Ａ ＭＰ产 物的验 证 用（ 许 文涛 等， ２ ０ ０ ８ ） 。然 而 Ｐ Ｃ Ｒ方法 需要热 循 环设 依据 ｃ ｏ ｒ ｄ ａ ｐ Ａ基 因 使 用 日本 荣 岩 株 式 会 社 备， 并 且 需 要专 业 人 员操 作 ， 限制 了该方 法 在 基层 Ｌ Ａ ＭＰ引物 在 线设 计软 件设 计 引物 ， 筛选 出了一 组 检测 中的应 用 。环 介 导等 温扩 增技 术（ １ ｏ ｏ ｐ — ｍｅ ｄ ｉ ａ ｔ ． Ｌ Ａ ＭＰ引物 用于扩 增 Ｌ Ｙ０ ３ ８ ， 通过 ２ ％琼脂糖 凝胶 电 ｅ ｄ ｉ ｓ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ｍａ ｌ ａ ｍｐ ｌ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ， Ｌ ＡＭＰ ） 是 Ｎｏ ｔ ｏ — 泳分析 ， 该 引物扩 增 出Ｌ Ａ ＭＰ 典型 的阶梯状 产物（ 图 ｍｉ 等 发 明的 一 种 新 型 的等 温 扩 增 技 术 （ Ｎｏ ｔ ｏ ｍｉ ｅ ｔ １ ） 。为 了验证 该扩增产物是特异 的， 对该产物进 行酶 ａ １ ． ， ２ ０ ０ ０ ； Ｎａ ｇ ａ ｍｉ ｎ ｅ ｅ ｔ ａ １ ． ， ２ ０ ０ ２ ） 。 该方 法 是 对 目的 切分析 。在 扩增 区域 Ｆ １ 内有 Ｅ ｅ ｏ ＲＶ位 点， 将Ｌ ＡＭＰ 基因的６ 个 区域 设计 ４ － ６ 条 特 异性 引物 ， 利 用 链置 扩增 产物 稀释 １ ０ 倍， 用Ｅ ｃ ｏ ＲＶ酶 切分 析 ， 有 两条 大 换 酶在 ６ ０ ～ ６ ５ ℃等 温条 件 下 １ ｈ内就 可 将 目的基 因 小分 别为 ６ ４ 和１ ７ ８ ｂ ｐ 条 带产生 （ 图１ ） ， 与预 期相 符 ， 扩增 １ ０ ９ ～ １ ０ １ ０ 倍， 扩 增 产 物 既可 通 过 电泳 法 来 检 说 明设计 的引物是理想 的， 可 以用于后续研 究。 测， 也可 以通 过 加 入 ＤＮＡ结 合 染 料观 察 颜 色 变 化
LAMP
LAMP（环介导等温扩增）技术2011-07-28 11:46 来源：北京蓝谱点击次数：1341 关键词：LAMP PCR技术环介导等温扩增分享到：收藏夹腾讯微博新浪微博开心网PCR方法在人类及动植物疾病基因诊断、食品分析和环境监测等领域发挥着举足轻重的作用，其灵敏度高、特异性好，是目前最精准的基因诊断方法。
然而PCR方法操作起来较复杂，对仪器和人员要求比较高，不适合基层或现场快速诊断，因此在国内的推广速度并不是很快。
2000年日本学者Notomi在Nucleic Acids Res杂志上公开了一种新的基因诊断技术，即LAMP (L oop-mediated isothermal amplification),中文名为“环介导等温扩增反应”，受到了世卫组织WHO、各国学者和相关政府部门的关注，短短几年，该技术已成功地应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中，在这次甲型H1N1流感事件中，日本荣研化学公司接受WHO的邀请进行H1N1 LAMP试剂盒的研制。
通过荣研公司近十年的推广，LAMP技术已广泛应用于日本国内各种病毒、细菌、寄生虫等引起的疾病检测、食品化妆品安全检查及进出口快速诊断中，并得到了欧美国家的认同。
LAMP方法的优势除了高特异性、高灵敏度外，操作十分简单，对仪器设备要求低，一台水浴锅或恒温箱就能实现反应，结果的检测也很简单，不需要像PCR那样进行凝胶电泳，LAMP反应的结果通过肉眼观察白色浑浊或绿色荧光的生成来判断，简便快捷，适合基层快速诊断。
可以预见，在未来的基因诊断领域，LAMP方法将占据大壁江山。
目前，在万方数据库搜索LAMP文章500多篇。
详见：/paper.asp x?q=loop-mediated+isothermal+amplification&o=sortby+CitedCount+CoreRank+date+relevanc e%2fweight%3d5&f=top&n=10&p=11. 优缺点介绍：LAMP方法优点：灵敏度高（比传统的PCR方法高2～5个数量级）；反应时间短（30～60min就能完成反应）；临床使用不需要特殊的仪器（试剂盒研发阶段推荐用实时浑浊仪）；操作简单（不论是DNA还是RNA，检测步骤都是需将反应液、酶和模板混合于PCR管中，置于水浴锅或恒温箱中63℃左右保温30～60min，肉眼观察结果）。
LAMP技术研究进展及其在动物疫病检测中的应用
LAMP技术研究进展及其在动物疫病检测中的应用LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification）技术是一种能够在恒温下快速、高效地进行核酸扩增的方法。
它通过特殊的引物和酶，在简单的实验条件下可以在短时间内扩增大量目标DNA序列，并且具有高度的特异性和灵敏性。
LAMP技术最早由日本学者Notomi等人于2000年首次提出，自此以后，LAMP技术在许多领域得到了广泛的应用，尤其在动物疫病检测中。
1.快速诊断：LAMP技术可以在一个小时内进行核酸扩增反应，比传统的PCR方法要快得多。
这对于迅速确定疫病的诊断结果非常重要，可以提高动物疫病的早期预警和防控能力。
2.高度特异性：LAMP技术使用多个特异性引物，在同一个反应体系中进行扩增，可以显著提高对目标序列的特异性识别能力。
这对于区分不同疫病病原体或者同一病原体的不同亚型具有重要意义，可以帮助鉴定传染病源和病原菌的变异。
3.高灵敏性：LAMP技术不仅在快速扩增速度上具有优势，还在扩增效果上具有高灵敏性。
在初始目标DNA浓度低至10个分子时，LAMP技术仍能够进行有效扩增，这对于低浓度病原体的检测非常关键。
4.操作简便性：LAMP技术不需要复杂的设备和特殊的实验条件，只需要一个简单的恒温器就可以进行核酸扩增反应。
这极大地降低了操作门槛，使得不同实验室和场所都可以进行动物疫病的检测工作。
5.物价低廉：LAMP技术所需的试剂和设备成本相对较低，特别是与PCR技术相比较，更加经济实惠。
这对于资源有限的地区和农村地区的疫病监测和防控工作尤为适用。
目前，LAMP技术已经在许多动物疫病的检测中得到了应用。
比如，它被成功用于禽流感、猪瘟、传染性胸膜炎、家禽新城疫等重大疫病的快速检测。
通过该技术，可以快速而准确地检测出病原体的存在，为疫病的早期检测和防控提供了有力的手段。
总之，LAMP技术在动物疫病检测中具有广阔的应用前景。
随着该技术的不断进步和完善，相信将能够更好地满足动物疫病检测的需求，为动物疫病的防控提供更加可靠、快速和经济实惠的手段。
LAMP技术及其在微生物检测中的应用
１ Ｌ ＡＭ Ｐ技 术 简 介 １１ Ｌ ． ＡＭＰ技 术 原 理
Ｌ ＭＰ法 是 由 Ｎ ｔ 等 … Ａ ｏｏ ｍｉ １于 ２ ０ ０ ０年 开 发 出 来 的 一 种
同 样 认 为 Ｌ ＭＰ技 术 特 异 性 和 灵 敏 性 高 。 国 内刘 全 英 等¨】 Ａ
采 用 Ｌ Ｐ技 术 扩 增 了 大 肠 杆 菌 Ｏ１ ７特 异 性 基 因 ， 与 Ｍ Ａ ５ 并
《 海 畜牧兽 医通 讯》 ２ １ 上 ０ ０年 第 ５期
・ １・ ６
Ｌ ＡＭＰ技 术 及其 在 微 生物 检 测 中 的应 用
鞠 慧 萍 宋 白薇 石 建 华 葛 睛 颖
（苏 州 出入境 检验 检疫 局 江 苏 苏 州 ２ ５ ０ ） １ １４
近年 来 ， 着 食 品 安 全 事 件 的 频 繁 发 生 ， 品安 全 问题 随 食
１ ２ Ｉ Ｍ Ｐ 技 术 的 优 缺 点 ． Ａ
１２ １ 优 点 ：１ 特 异 性 强 、 敏 度 高 。４条 引 物 可 以 严 格 识 ．． （） 灵 别 靶 核 酸 序 列 上 的 ６个 独 立 区 域 ， 应 过 程 不 会 受 到 反应 混 反 合 物 种 非 靶 序列 Ｄ Ａ 的 影 响 ， 证 了 Ｌ ＭＰ扩 增 的 高度 特 Ｎ 保 Ａ
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lamp检测技术原理
LAMP（loop-mediated isothermal amplification）技术是一种新开发的核酸扩增技术，采用了一种较为简单的反应体系，它利用单一的酶就能在恒温下迅速扩增寡核苷酸序列。
相对于PCR技术，LAMP技术具有操作简便、响应时间短、在复杂的基因组背景下具有更高的特异性和灵敏度等诸多优点。
本文主要介绍LAMP技术的原理和优缺点以及应用前景。
一、LAMP技术原理
LAMP技术的核心是利用反转录酶将RNA模板转录成具有这种序列的cDNA，然后利用核酸聚合酶扩增cDNA。
其反应原理基于无需热循环多重扩增（muliple displacement amplification）的核酸扩增技术，主要分为两个阶段：
第一阶段：反应的产物是DNA扩增物。
在此过程中，LAMP引物包括两个外部引物F3和B3，以及两个内部引物FIP和BIP。
FIP包含与F3序列完全匹配的5'端及与目标序列互补的3'端，BIP则包含与B3序列完全匹配的5'端及与目标序列互补的3'端。
引物F3和B3均相似于PCR反应中的起始引物，用于启动扩增反应。
内部引物FIP和BIP通常由两个互补的寡核苷酸序列构成，这个引物可以形成一个干扰环（intra-loop），这个结构能够保护引物与目标序列的杂交效率，并促进反向归一分支（reverse transcription displacement loop，RTDL）的形成。
…
1. 优点
（1）不需要高昂的设备和专业技术
（2）无需基因分离，避免污染和误差
（3）反应耗时短，使其更易于操作
（4）对反应体系的优化可以大大提高扩增效率
（5）对于丰富的背景DNA和RNA不敏感，具有更高的特异性
（6）精确和准确度高，可以探测到低浓度的目标核酸
2.缺点
（1）由于插入引物扩增导致的较多的非特异性扩增，使得LAMP扩增产品更难直接测序，容易产生误导性解释。
（2）单一目的基因的特异性鉴定
LAMP技术在许多领域都已得到了广泛的应用，如常见病的快速诊断、医疗卫生、食品安全、生物防治以及环境监测等方面。
随着LAMP技术的逐渐成熟，它将在日益广阔的范围内得到更广泛的应用。