决明子中蒽醌化合物的提取工艺研究

其中大黄酚，4,6,7-三甲氧基芦荟大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和
大黄素-6-O-β-龙胆二糖苷的含量较高，分别达到7.05 ,7.46,8.50
mg/g。
粗提物1 050714-19 100
%
0 050714-18 100
1
2
3
6
7
5
9
4
8
6: Diode Array 440
7.82e4 A
1.2 决明子中蒽醌化合物的提取
称取一定量的决明子粉末，加入提取溶剂后回流提取，抽滤后收 集滤液，减压浓缩至干燥后得到决明子蒽醌提取物。
1.3 总蒽醌含量的测定 参照文献[6,7]的方法测定提取物中总蒽醌的含量。(1) 标准曲线
的绘制:精确称取大黄素 8.7 mg，加入少量甲醇，超声波处理促进其 溶解，定容置于 100 mL 棕色容量瓶中。分别取 0，0.2，0.4，0.8， 1.0，2.0 mL 标准溶液，加甲醇补足至 2 mL，加 2 mL 醋酸镁-甲醇溶 液（1%）后震荡混匀。以 0.5%醋酸镁-甲醇溶液为空白，510 nm 测其 吸光度。以吸光度 A 为纵坐标，浓度 C (μg/mL)为横坐标，绘制标 准曲线（A = 0.0162C + 0.0029，R2 = 0.9999）。(2) 样品中蒽醌含 量的测定:精密吸取待测样 10 mL,置于烧瓶中，减压蒸干溶剂，加入 50 mL 硫酸（20%），水解 2 h（85 ℃），冷却后用乙酸乙酯提取 3 次， 每次 10 mL，减压蒸干后，用甲醇溶解即得总蒽醌。取 2.0 mL 样品 溶液与 2 mL 醋酸镁-甲醇溶液（1%）震荡混匀，测其吸光度值（510 nm）。
条件下进行验证试验，蒽醌得率为 8.05 mg/g 原料。虽然提取得率有
所降低（同直观最佳提取条件相比），但缩短了提取时间，这相对于
生产成本而言是非常有益的。
表 1 正交试验方案以及试验结果
实验 号
乙醇浓度 （V/V）/%
固液比
时间/h
温度 /℃
蒽醌得率 /（mg.g-1
原料）
1
1 (60) 1 (1:20) 1 (1) 1 (50)
2 结果与讨论
2.1 正交试验优化提取工艺
根据预实验中的单因素试验结果，选取提取溶剂（乙醇浓度）、 固液比、温度和时间作为考察因素，以蒽醌得率（mg/g 原料）为指 标，进行正交试验。具体方案和结果见表 1。
极差越大，说明该因素的水平变动时，对实验的影响最大，所以 可以从极差的大小来确定影响因素的主次顺序。由表 1 可以看出，乙 醇浓度的极差最大，其次是固液比，再次是时间，最后是温度，说明
决明子中蒽醌化合物的提取工艺研究
Extraction of anthraquinones compounds from the seed of Cassia
tora L.
贾振宝
丁霄霖
JIA Zhen-bao DING Xiao-lin
（江南大学食品学院，江苏 无锡 214036）
(School of Food Science and Technology, Southern Yangtz
2
0.03
0.193
温度
0.01
2
0.006
0.035
注：误差自由度为零，将平均平方和最小的一项作为误差项，F0.05(2， 2)=19.00, * 表示差异显著
2.2 提取物中蒽醌化合物含量
采 用 回 流 提 取 方 法 制 备 的 决 明 子 提 取 物 中 总 蒽 醌 含 量 为 67.6 mg/g干重。决明子中蒽醌化合物的组成非常复杂，目前文献已经报道 的蒽醌化合物就有30多种[8～11]。我们利用RP-HPLC对提取物中的9种蒽 醌化合物进行定量分析。在2.4的色谱条件下，9种蒽醌标准样品的 HPLC色谱图见图1A。各蒽醌标准样品达到基线分离，且峰形较好。决 明子蒽醌提取物的HPLC色谱图见图1B。以峰面积进行定量分析，结果 见表3。通过RP-HPLC测定的9种蒽醌化合物的总量为30.96 mg/g干重，
参考文献 1 Yen, G. C; Chen, H. W.; Duh, P. D. Extraction and
Identification of an antioxidative component from JueMingzi (Cassia tora L.) [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry,1998(46):820～824. 2 Wu, C. H.; Hsieh, C. H., Song Tuzz Ying., et al. Inhibitory Effect of Cassia tora L. on Benzo(α)pyrene-Mediated DNA Damage toward HepG2 Cells [J].Journal of Agricultural and
本研究优化了酒精回流提取决明子中蒽醌化合物的工艺条件，并 利用 RP-HPLC 对提取物中的蒽醌化合物组成进行了初步分析。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂
决明子（Cassia tora L.）:购于无锡山禾药业公司，粉碎后过 _________________ 作者简介：贾振宝（1976-），男，江南大学食品学院在读研究生。 E-mail: zhenbaojia@ 收稿日期：2006-02-14
成分
保留时间/min 含量/(mg.g-1)
4,6,7-三甲氧基芦荟大黄素 -8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷
8.95
7.05
大黄素-6-O-β-龙胆二糖苷
12.08
1.59
2-甲氧基大黄酚-8-O-β-D吡喃葡萄糖苷 黄决明素
8-甲氧基大黄素 8-甲氧基大黄酚
大黄素 大黄酚 大黄素甲醚 总蒽醌
15.21
A: 蒽醌标准品
B: 蒽醌提取物
1、4,6,7-三甲氧基芦荟大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 2、大黄素
-6-O-β-龙胆二糖苷 3、 2-甲氧基大黄酚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖
苷 4、黄决明素 5、8-甲氧基大黄素 6、 8-甲氧基大黄酚
7、 大黄素 8、 大黄酚 9、大黄素甲醚
表 3 决明子提取物中蒽醌化合物含量
anthraquinone components were quantitatively determined by HPLC analysis. Ketwords: Cassia tora L.；Anthraquinones；Extraction
决明子是豆科植物决明（Cassia obtusifolia L.）或小决明 （Cassia tora L.）的成熟干燥种子，是常用中草药。决明子在我国 种植面积广泛，为药食同源植物，具有调节血脂、降压和抗突变的功 能[1,2]。由于中草药成分非常复杂，将其有效成分浓缩富集是科学规 范开发利用中药材的前提。决明子中主要的功效成分是蒽醌化合物， 目前国内关于决明子中蒽醌化合物提取分离的报道很少。中药有效成 分的提取主要有溶剂提取、微波辅助提取、超声波辅助提取和超临界 流体萃取等方法[3～5]。有机溶剂萃取具有操作简便、设备简单和生产 成本低等优点，是目前应用最多的提取方法，特别是进行工业化大规 模生产时，一般均采用溶剂萃取的方法。
根据标准曲线计算蒽醌化合物含量。
1.4 HPLC 分析
色谱分析条件：HPLC 分析采用美国 Waters 公司 2690 型液相色 谱仪；检测波长为 440 nm；色谱柱为 Lichrospher C-18 (2.1×250 mm)；流动相为 70%甲醇水溶液（含 1%乙酸）；柱温为 30 ºC；流速为 0.3 mL/min；进样量为 10 μL。
40 目筛，收集筛下物备用； 大黄酚、大黄素甲醚、8-甲氧基大黄酚、大黄素、黄决明素和
8-甲氧基大黄素、2-甲氧基大黄酚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，4,6,7三甲氧基芦荟大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，大黄素-6-O-β-龙胆 二糖苷：均采用柱层析方法从决明子中分得，通过 NMR 和 MS 鉴定了 结构，纯度均大于 98%（HPLC）。
Food Chemistry,2001(49):2579～2586. 3 黄瑞华,韩伟,周永传,等.微波辅助提取淫羊藿饮片中淫羊藿苷的
影响实验最大的因素是乙醇浓度，然后是固液比，而温度和时间对实
验的影响则比较小。从表 2 的方差分析可以看出，乙醇浓度对决明子
中蒽醌化合物提取率有显著影响因素（p＜0.05)，固液比、温度和固
液比对提取率影响不显著。
综合极差分析和方差分析结果，选取最佳的提取条件为：乙醇浓
度 70%（V/V），温度 50 ℃，固液比 1:25，提取时间为 1.5 h。在此
18.41 19.03 20.01 22.78 23.86 25.53
0.64
1.31 0.84 1.32 2.25 7.46 8.50 67.60
3 结论 通过正交实验优选了决明子中蒽醌化合物的提取工艺条件：乙醇
浓度为70%（V/V），温度为50 ℃，固液比为1:25，提取时间为1.5 h, 蒽醌得率为8.05 mg/g原料，乙醇浓度对蒽醌提取率具有显著的影响。
7.11
2
1
2 (1:25) 2 (1.5) 2 (60)
7.58
3
1
3 (1:30) 3 (2) 3 (70)
7.68
4
2 (70)
1
2
3
7.84
5
2
2
3
1
8.14
6
2
3
1
2
7.97
7
3 (80)
1
3
2
7.21
8
3
2
1

7.34
KⅠ KⅡ KⅢ 极差 R