4 实验三 细菌的芽孢染色
实验三细菌的简单染色和革兰氏染色
四、实验步骤
1、简单染色： （1）涂片：注意取菌不要太多； （2）干燥：室温自然干燥； （3）固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，
通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）； （4）染色：涂片加草酸铵结晶紫染液或齐氏石炭酸复 红染液 1min； （5）水洗：自来水冲洗，直至流下的无色； （6）干燥：自然晾干或用电吹风吹干； （7）镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的 视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏 油，油镜观察细菌的形态。
3. 选用幼龄的细菌。若菌龄太老，由于菌体死亡或自
溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。
六、实验报告
1、结果
给出枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，金黄色葡 萄球菌形态图，并注明其革兰氏染色反应。
2、思考题
（1）简单染色法中各步骤的注意事项是什么？
（7）混合涂片法：按上述方法，在同一载玻片上，以大肠 杆菌和枯草芽孢杆菌或大肠杆菌和金黄色葡 萄球菌作混合涂片、染色、镜检进行比较。
G+ 干燥、固定 结晶紫染色
G-
碘液媒染 乙醇脱色 蕃红复染
Figure Mixed culture of large Gram positive rod and small Gram negative rods.
菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质而且肽菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质而且肽聚糖层较薄交联度低故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类聚糖层较薄交联度低故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质增加了细胞壁的通透性使刜染的结晶紫和碘的复脂质增加了细胞壁的通透性使刜染的结晶紫和碘的复合物易于渗出结果细菌就被脱色再经番红复染后就成合物易于渗出结果细菌就被脱色再经番红复染后就成红色
实验三
细菌的简单染色和革兰氏染色
细菌的特殊染色法实验报告
细菌的特殊染色法实验报告一、实验目的学习掌握芽孢、荚膜和鞭毛的染色原理和方法。
二、实验原理芽孢染色法是根据细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理,用不同的染料进行染色，使芽孢和菌体呈不同颜色而便于区别。
芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，当用弱碱性染料孔雀绿在加热的情况下进行染色时，此染料可以进入菌体及芽孢使其着色，而进入芽孢的染料则难以透出。
若再复染(蕃红液)，则菌体呈红色而芽孢呈绿色。
观察荚膜通常采用负染色法，即将菌体染色后，再使背景着色，从而把荚膜衬托出来。
观察鞭毛是采用在染色的同时将染料堆积在鞭毛上使它加粗的方法。
细菌只有在个体发育到一定的时期才具有鞭毛，一般在多次移种之后，在其旺盛生长阶段染色。
三、实验用品1、器材(1)显微镜(2)载波片(3)接种环(4)酒精灯(5)香柏油(6)二甲苯(7)无菌水(8)1%盐酸(9)电炉(10)墨汁(11)20%CuSO4(12);95%乙醇(13)擦镜纸等2、试剂和材料(1)菌种:巨大芽孢杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌等(2)芽孢染色用7.6%饱和孔雀绿液、0.5%蕃红液(或石炭酸复红液和吕氏美蓝液)。
(3)莢膜染色用刚果红、明胶水溶液、吕氏美蓝液等。
(4)鞭毛染色用硝酸银染色液(A、B液)或Leifson染色液(A、B、C液)。
四、实验方法与步骤1、芽孢染色:有两种常用的方法。
(1)孔雀绿染色法:取干净载片按无菌法取巨大芽孢杆菌菌体少许制成涂片，风干固定后，在涂菌处滴加法7.6%的孔雀绿饱和水溶液，染色10分钟后，用水冲洗，再用0.5%恭红花红液染色彩1分钟，水洗，风干后镜检。
芽孢被染成绿色，营养体呈红色。
(2)石炭酸复红染色法:在一支小试管(10X 100mm)中，滴入3--4滴蒸溜水，用接种环取巨大芽孢杆菌于水中，充分搅匀，使菌体分散，制成较浓的菌悬液。
然后滴加等体积的(3-4滴)石炭酸复红液摇匀。
将此试管放入沸水浴中煮10-15分钟,使芽孢及菌体着色。
细菌芽孢染色实验报告
1. 了解芽孢的形态和结构特点；2. 掌握芽孢染色原理和操作方法；3. 观察芽孢的染色效果，加深对芽孢形态结构的认识。
二、实验原理芽孢是细菌在生长发育过程中形成的一种特殊细胞形态，具有厚而致密的壁，透性低，对各种不利因素如高温、冷冻、射线、干燥、化学药品和染料等具有很强的抵抗力。
芽孢染色法是一种特殊染色方法，通过使用特定染料对芽孢进行染色，使芽孢和菌体呈现不同的颜色，便于观察和鉴别。
三、实验材料1. 菌种：巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）2. 染料：7.6%饱和孔雀绿液、0.5%蕃红液（或石炭酸复红液和吕氏美蓝液）3. 仪器：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、滴管等四、实验步骤1. 菌种培养：将巨大芽孢杆菌接种于营养琼脂斜面，37℃培养24小时。
2. 涂片：取一洁净无脂的载玻片，中央滴一小滴无菌水，用无菌操作的方法从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成薄膜，涂片面积约为1-1.5cm²，涂片于室温中自然干燥。
3. 固定：将菌面朝上，通过火焰2-3次固定（温度以不烫手为宜）。
4. 初染：在制片上滴加7.6%饱和孔雀绿液，染色5-10分钟。
5. 水洗：用自来水冲洗掉多余的染料。
6. 复染：在制片上滴加0.5%蕃红液，染色1-2分钟。
7. 水洗：用自来水冲洗掉多余的染料。
8. 吸干：用吸水纸吸干制片上的水分。
9. 观察显微镜：将制片置于显微镜下观察，观察芽孢的染色效果。
在显微镜下观察到，巨大芽孢杆菌的菌体呈红色，芽孢呈绿色，两者颜色对比明显。
芽孢位于菌体中央或次极端，使菌体膨大呈梭状。
六、实验讨论1. 芽孢染色法是一种特殊染色方法，可以观察到芽孢的形态和结构特点。
通过染色，芽孢和菌体呈现不同的颜色，便于观察和鉴别。
2. 在实验过程中，应注意控制染色时间，避免染色过度或不足。
染色时间过长，芽孢和菌体颜色过深，影响观察；染色时间过短，芽孢和菌体颜色过浅，难以观察。
3. 在实验操作过程中，应严格无菌操作，避免污染制片。
试验细菌芽孢染色法
• 1．为什么芽孢染色要加热?为什么芽孢及营养体 能染成不同的颜色?
• 2．试设计实验如何鉴定某一产芽孢菌株的芽孢形 态、着生位置及所属分类地位。
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细菌芽孢的基本构造
孢外壁
芽孢具有多层厚而
芽孢衣 皮层
致密的胞膜，由内向
芽孢壁 外依次为核心、内膜、
芽孢质膜 芽孢质
芽孢壁、皮质、外膜、
芽孢核区 芽孢壳和芽孢外衣 .
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细菌芽孢的基本特性
❖ 形成芽孢需要一定的外界条件，这些条件因菌种而异。炭疽芽孢杆菌在有氧(O2) 条件下才能形成芽孢，而破伤风芽孢杆菌则在无氧条件下形成芽孢。通常细菌 在营养不足时形成芽孢，但苏云金芽孢杆菌是例外。
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细菌芽孢的基本特性
❖ 芽孢对恶劣环境条件有很强的抵抗能力，尤其耐高温。有的芽孢可耐100℃沸 水煮沸数小时。在一定条件下，芽孢保持活力数年至数十年之久。高温灭菌的 判断标准就是细菌的芽孢是否被杀灭。
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细菌芽孢的基本特性
❖ 芽孢在适宜条件下，营养物如葡萄糖、乳酸和水分，会发芽形成菌体，但细菌的 数量并未增加，所以芽孢不是一种繁殖方式。
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芽孢抵抗力强的原因
❖ 1.芽孢含水量少，蛋白质受热后不易变性； ❖ 2.芽孢具有多层致密的厚膜，理化因素不易透入； ❖ 3.芽孢中含有一种特有的化学组分吡啶二羧酸（DPA），DPA与钙结合生成的
钙盐能提高芽孢中各种酶的热稳定性。
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三、实验器材
• 1.菌种：枯草芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌。
实验三 细菌的简单染色与形态观察
实验三细菌的简单染色与形态观察实验三细菌的简单染色与形态观察实验三细菌的简单染色和形态学观察一、目的要求：1.了解并掌握简单细菌染色的机理和技术；2.学会用油镜观察细菌细胞的形态。
2、实验材料：1株：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌aureus等培养好的细菌斜面；2.染料：结晶紫3.其他：显微镜、玻片、接种环、酒精灯、无菌水、雪松油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸。
3、基本原则：染色是细菌学上一个重要而基本的操作技术。
因细菌细胞小而且透明，当把细菌悬浮于水滴内，用光学显微镜时，由于菌体和背景没有显著的明暗差，因而难以看清它们的形态，更不易识别其结构，所以，用普通光学显微镜观察细菌时，往往要先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用，可以更清楚地观察到细菌的形状及其细胞结构。
用于微生物染色的染料是苯环上带有显色基团和辅助基团的有机化合物。
显色基团决定了化合物的颜色特征，助色基团决定了化合物的成盐性。
染料通常是盐，分为酸性染料和碱性染料。
在微生物染色中，碱性染料更常用，如亚甲基蓝、结晶紫、碱性红、砂黄、孔雀绿等。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
此法操作简便，适于菌体一般形状和细菌排列的观察。
常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性和弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料电离后带有正电荷，很容易与菌体结合使细菌着色。
通过本实验，我们可以学习和掌握细菌染色技术，了解细菌细胞的形态，巩固课堂知识，增加感性知识。
四、方法与步骤：（一）制片1.涂片：在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴蒸馏水，用接种环以无菌操作从枯草芽孢杆菌从斜面上取少量真菌苔藓，放入水滴中，搅拌均匀，涂膜，涂膜面积约1~1.5cm2。
2.干燥：室温下自然干燥3.固定：手执载玻片一端，使涂菌一面向上，通过火焰2~3次。
此操作也称热固定，其目其主要目的是使细胞质凝固，以固定细胞形状，并使其牢固地附着在载玻片上。
4.染色：将涂片放在水平位置，滴下结晶紫染色液（最好只覆盖涂片），染色1分钟左右。
细菌的芽孢染色法
实验材料
• 试管菌种：枯草芽孢杆菌的斜面菌种
• 试剂：二甲苯、香柏油、蒸馏水、5%孔雀绿水溶液、 0.5%沙黄水溶液
⑷加热：用木夹子夹住玻片在火焰上加热，使染料冒蒸汽 （但不沸腾），切勿使染料蒸干，必要时可添加少许染料。 加热时间从冒蒸汽开始计算约4~5min。
⑸脱色：倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为 止。
⑹复染：用沙黄染液，复染2~3min，倾去染色液， 水洗。
⑺镜检：待干燥后，置于油镜下观察。
结果：芽孢呈 色，菌体为 色。
• 器材：显微镜、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、小试 管（1×6.5）、烧杯（300ml）、试管架、电炉
实验步骤
• 1．
⑴ 清洗玻片：將玻片用洗衣粉洗净，晾干
⑵ 制备涂片：加1滴生理盐水于玻片上，用接种环从斜面上 挑取2~3环的菌苔于生理盐水并充分打匀，干燥、固定。
⑶加染色液：加5%孔雀绿水溶液3~5滴于已固定的涂片上。
应用微生物与免疫学
实验目的
• 学习并掌握细菌芽孢染色的原理和方法
• 细菌的芽孢是某些细菌的特殊结构。
• 芽孢是某些细菌生长到一定阶段在体内形成的一个圆形或 椭圆形的休眠体，它对不良环境具有很强的抗性。在合适 条件下，可吸水萌发，重新形成一个新的菌体。
• 芽孢的大小、形状及其在菌体内的位置是鉴定细菌的重要 依据。在一般实验室中通常用芽孢染色法来观察其形态。
土壤中枯草芽孢杆菌的分离与鉴定之细菌芽孢染色法
土壤中枯草芽孢杆菌的分离与鉴定之细菌芽孢染色法一、实验目的1.学习掌握芽孢染色法并了解芽孢的形态特征2.学习并掌握荚膜染色法并了解荚膜的形态特征3.学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征4.巩固显微镜操作技术及无菌操作技术二、实验原理1.细菌的芽孢具有厚而致密的壁不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）。
2.芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上色又难以脱色这一特点而设计的。
3.所有的芽孢染色法都基于同一个原则：除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽孢着色，再使菌体脱色，而芽孢上的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色，然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而更能明显地衬托出芽孢，便于观察。
4.染色方法：改良后的Schaeffer-Fulton氏染色法三、实验仪器及材料1.菌种：枯草芽孢杆菌2.染色剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液3.仪器或其他用具：Eppendorf管架、载玻片、显微镜、电磁炉、搪瓷杯等。
四、实验步骤1.制备菌悬液：在EP管中滴两滴生理盐水，挑取2-3环菌苔加入到含生理盐水的EP管中，混合均匀。
2.染色：在EP管中滴加2-3滴孔雀绿染液，盖紧EP管，将EP管插入浮筏中，放进沸水中加热15-20分钟，加热过程需要有人看护，随时控温，防止沸水进入EP管。
3.涂片固定：取半滴经孔雀绿染色的菌悬液在载玻片的中央，用接种环将菌液涂抹均匀，将载玻片用法电风机冷风吹干，经过酒精灯火焰固定三次。
4.脱色：待玻片冷却后，水洗脱色。
5.复染：滴加数滴0.5%番红水溶液在菌膜上，染色2min，再水洗。
6.镜检：将晾干后放在显微镜下观察。
五、实验结果结果描述：大部分菌体被染成红色，少部分被染成绿色，说明有芽孢产生，但是芽孢的数量没有菌体多，芽孢被染成绿色，菌体被染成红色，由绿色芽孢的外面还包裹着一层淡红色带可知，该芽孢是内生芽孢，芽孢呈椭圆形，位于菌体的中央，是中央生的芽孢，同时可以观察到枯草芽孢杆菌的大小比平常的小得多。
实验细菌的芽孢、荚膜染色
在接触细菌和染色液时，应佩戴 个人防护用品，如实验服、口罩、
手套等。
实验过程中如发生意外情况，应 立即停止实验，采取相应措施， 并及时向实验室管理人员报告。
废弃物处理要求
实验过程中产生的废弃物应按照 实验室规定进行分类处理。
废弃的染色液和培养基应进行灭 菌处理后才能倒掉，避免对环境
造成污染。
实验结束后，应及时清理实验台 面和地面，保持实验室整洁卫生。
通过显微镜观察染色后的 菌体和芽孢，可以清晰地 分辨出菌体和芽孢的颜色 和形态。
荚膜染色结果观察
通过显微镜观察染色后的 菌体和荚膜，可以观察到 荚膜的存在、形态和分布 情况。
结果分析
根据观察到的染色结果， 可以对细菌的种类、形态 和生理特性进行分析和判 断。
02
实验原理
芽孢染色原理
芽孢染色是一种用于 检测细菌芽孢的染色 技术。
THANK YOU
03
实验材料与试剂
实验材料：细菌芽孢、荚膜样本
芽孢样本
选择具有代表性的芽孢细菌样本，如炭疽芽孢杆菌。
荚膜样本
选择具有明显荚膜的细菌样本，如肺炎球菌。
试剂：染色液、缓冲液等
染色液
用于对细菌芽孢和荚膜进行染色的特定染色液，如结晶紫染 色液、姬姆萨染色液等。
缓冲液
用于维持染色过程中pH值的稳定，常用的有磷酸盐缓冲液。
通过染色，可以将芽 孢与菌体区分开来， 便于观察和计数。
芽孢是某些细菌在不 利环境下形成的抗逆 性休眠体，具有极强 的抵抗力。
荚膜染色原理
荚膜染色是一种用于检测细菌 荚膜的染色技术。
荚膜是某些细菌在生长过程中 分泌形成的细胞外多糖物质， 具有免疫逃逸、抗吞噬等功能。
通过染色，可以将荚膜与菌体 区分开来，便于观察和鉴别。
实验报告2-细菌的荚膜染色、芽孢染色及其运动性观察实验报告
细菌的荚膜染色、芽孢染色及其运动性观察实验报告马子午生命科学学院食品科学与工程专业 14101班 02号1.引言1.1实验目的学习荚膜染色技术，观察和分辨细菌的荚膜形态，进一步理解细菌细胞的特殊结构；了解细菌芽孢染色的原理意义，掌握芽孢染色的方法。
学习水浸片的制作方法，观察细菌的运动。
1.2实验原理芽孢染色法：芽孢具有厚而致密的壁，通透性低，对各种不利因素如高温、冷冻、射线、干燥、化学药品和染料等具有很强的抵抗力。
因此，当用一般染色方法染色时，只能使菌体着色，芽孢不易着色（芽孢呈透明）或仅显很淡的颜色。
威力使芽孢着色便于观察，需采用特殊染色法——芽孢染色法。
先用一弱碱性染料，如孔雀绿或碱性品红在加热条件在进行长时间染色，此染料不仅可以进入菌体，也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经睡洗脱掉，而进入芽孢的染料则难以透出。
若再用复染液（如番红染液）或衬托染液（如黑色素液）处理，芽孢和菌体就呈现不同的颜色，借此将芽孢与菌体区别开。
荚膜染色法：荚膜的主要成分是多糖，多糖与染料亲和力差，不易着色，但荚膜通透性较好，某些染料可通过荚膜使菌体着色，正因如此，染色后呈浅色或无色的菌体就形成了一个明显的色差，荚膜染色常采用负染法，即将背景染成淡蓝色，此法使菌体和背景显色以衬托无色的荚膜。
细菌的运动性观察：细菌是否具有鞭毛是细菌分类鉴定的主要特征之一，因鞭毛较细，在普通光学显微镜下不易观察，但有鞭毛的细菌在液体中能借助鞭毛的旋转和摆动使菌体能定向的运动，可以借此判断细菌是否有鞭毛。
2.材料与方法2.1材料与试剂枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），孔雀绿，番红染液，无菌水，6%的葡萄糖，胶质芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus），黑色素液，甲醇，甲基紫染液，香柏油，二甲苯。
2.2仪器与设备显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯，接种环，镊子，试管，凹玻片，擦镜纸，吸水纸。
2.3方法与步骤2.3.1细菌的芽孢染色法取一支试管，滴一滴无菌水，用接种环取2~3环枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）充分混合成菌悬液，再滴加两滴孔雀绿，沸水浴15~20分钟后用接种环取3~5环菌悬液涂抹在载玻片上，自然干燥，固定，冷却后水洗至水流无色，用吸水纸吸干后滴加番红染液复染5分钟，用吸水纸吸干多余染料，在显微镜下镜检。
芽孢染色常用方法
芽孢染色是一种常用的微生物实验室技术，用于观察和鉴定细菌的孢子形态和结构。
以下是芽孢染色的常用方法：
1. 热锡烙法（Heat-fixed smear）：将含有芽孢的菌落用细火加热，使其附着在玻璃片上固定。
2. 革兰氏染色法（Gram staining）：首先用洗涤液将玻璃片上的菌落冲洗，接着用紫晶染液染色，再用碘液做固定，用乙醇洗去多余的染色剂，最后用洗涤液冲洗，接着用红素染液染色，最后用洗涤液冲洗干净。
3. 铁血素染色法（Iron-hematoxylin staining）：将菌落固定在玻璃片上，然后用铁血素溶液浸泡一段时间，最后用去离子水冲洗干净。
4. 格拉姆染色法（Spore staining）：将菌落固定在玻璃片上，然后用绿基（Malachite Green）染液浸泡，将玻璃片放入蒸汽中加热，再用水洗去多余染液，最后用红素染液进行反染。
以上是几种常用的芽孢染色方法，具体使用哪种方法取决于实验目的和需求。