原花青素测定方法
葡萄籽提取物中原花青素含量的测定
ｍＩ和 一定 体 积 的 浓 盐 酸 ， 匀 ， 于 （０± 摇 置 ２
关键词
葡萄籽． 原花青 素，香 草醛法，音量测定
原 花青 素是指 从植 物 中分离得 到 的一类
在热酸 处理 下 能产 生花 色 素 的 多酚 化 合 物 。 近 年来 ， 类 化 合物 所 体 现 的 生物 活 性 屡 见 该
公司 产 品 （ ｓ ； 萄 籽精 提 取 物 为 四 川大 Ｙ Ｐ） 葡 力 天然 产 物 公 司产 品 （ Ｄ ； 萄 籽 提 取 物 Ｓ Ｐ） 葡 制 成品 为美 国 Ｌ ＨＰ公 司产 品。
已有 多家 企 业 正 着 手 该 类 产 品 的生 产 。 目
ＵＶＱ５ １ Ｃ型 光 谱 仪 为 日本 岛津 公 司 ０Ｐ
产 品
前， 关于原 花青 素的 测定 方法还 无统 一 标准， 而文献报道 的几 种 方 法 中， 丁醇 法 ＿ 受 原 正 ２ 花青 素结构 的影 响较 大 ， 于 低 聚 合 度 原 花 对 青 素 的测 定并不适 宜 ； 草 醛． 酸法 ＿ 由于 香 硫 ３ ］ 硫 酸的强 氧化作 用也 使得 测定结 果偏 低 。本
１ ７
维普资讯 Βιβλιοθήκη 食 品与 发 酵 工 业
Ｆ ｏ ｎ ｅｎ ｎａｉ ｎ ｕｔｅ ｏｄａｄＦｒｌ ｔｔ ｎｌｄ ｓ ｉ ｅ ｏ ｒ￣
Ｖ ｌ２ Ｎ ． ｏ ８ ｏ３
５ ０ ｍ 处的 吸光 度 ， ０ｎ 由标 准 曲线求 得 试 样 中
原花青素功效成分及卫生指标检验规范
功效成分及卫生指标检验规范功效成分及卫生指标检验规范1 主题内容和适用范围1.1 本规范规定了保健食品和原料的卫生要求、功效成分和卫生指标的检验项目和方法。
1.2 本规范适用于保健食品的检验受理、项目的确定和方法的选择。
2 基本要求2.1 凡保健食品，必须符合"保健食品通用卫生要求"，该"要求"所列的各项目必须按规定执行。
附表1所列检测项目是对"保健食品通用卫生要求"补充规定。
2.2 保健食品中使用的添加剂必须符合＂GB2760食品添加剂使用卫生标准＂规定的品种名单。
检测机构根据产品配方检测合成色素、防腐剂、甜味剂及抗氧化剂的含量。
2.3 凡使用有机溶剂提取物为原料的产品，其使用的有机溶剂要符合GB2760附录D食品工业用加工助剂推荐名单要求。
2.4 保健食品应具有与产品配方和申报的保健功能相适应的功效成分或特征成分，申报时须检测配方中主要原料所含的功效成分或特征成分。
附表2所列原料为主的产品须检测表中规定的项目。
2.5 保健食品评审专家委员会可根据产品的具体配方、工艺等相关资料，要求申报单位检测指定的项目。
2.6 功效成分、特征成分、营养成分及卫生学指标的检测方法应根据其产品适用的方法学范围选择国家标准、卫生部部颁标准、行业标准以及国际上权威分析方法进行测定。
2.7 在没有相应的标准方法之前，其产品中所声称（具有）的功效成分或特征成分的检测方法及检测所需的标准品对照品及特殊试剂均由申报单位提供，并说明其产品中功效成分或特征成分分析方法的来源。
如属自主开发研究的分析方法，需提供方法学研究的相关资料，同时将方法学研究的资料报卫生部保健食品功效成分检测协作组（中国疾病预防控制中心营养与食品安全所）备案，必要时卫生部将组织方法学验证，其费用由申报单位承担。
2.8 检验机构受理保健食品检测时，申报单位应提供该产品的配方、工艺及企业标准等相关资料。
原花青素简介
原花青素（Proantho Cyanidins，PC），又名缩合鞣质，可视作花青素( cyanidin)类物质的聚合物，是自然界中广泛存在的一类多酚类化合物。通常将从植物中分离得到的一切无色的、在无机酸存在和加热处理下能产生红色花青素( cyanidin)的一类多酚化合物统称为原花青素（赵平2011）。最初是在20世纪40年代从花生仁的包衣中提取出来，在50年代又被法国科学家从海松树皮中发现并提取出来，并将其提取率提高到达85%。近来，研究证明原花青素是很强的抗氧化剂，可以清除自由基，其抗氧化、清除自由基的能力是维生素E的50倍、维生素C的20倍，能防治80多种因自由基引起的疾病，包括心脏病、关节炎等，还具有改善人体微循环功能（张长贵2009）。目前，原花青素作为营养强化剂、天然防腐剂、天然抗氧化剂、DNA保护剂等，被广泛应用于食品、药品、化妆品等领域。
4.3 pH示差法
pH示差法是利用原花青素在不同pH下呈色不同的性质进行检测。pH 1.0时，原花青素颜色最深; pH 4.5时，以无色的半缩酮形式存在。pH示差法是基于此反应来快速准确地测量花青素含量的方法（Clifford et al 2000）。pH示差法是一种简便的测定原花青素含量的方法，能很好地消除溶液中杂质对测定结果的影响,可信度较高。
2化学结构及分类
原花青素是以黄烷-3-醇为结构单元通过C-C键聚合而形成的化合物，起初称为黄烷醇类或归于缩合鞣质。其结构分类主要取决于五方面：（1）黄烷-3-醇单元的类型；（2）单元之间的连接方式；（3）聚合程度（组成单元的数量）；（4）空间构型；（5）羟基是否被取代（如羟基的酯化、甲基化等）。根据原花青素的聚合程度可分为单倍体（monomer）、寡聚体（oligomer）和多聚体（polymer）（Alan et al 2008）。其中单倍体是基本结构单元，寡聚体由2～10个单倍体聚合而成，多聚体则由10个以上的单倍体聚合而成（张慧文2015）。
市售蔬菜中原花青素的提取与测定
关键词 ： 原花青素 ； 提取 ； 测定
Ｅｘ ｒ ｃ ｉ ｎａ ｔ ｒ ｉ ｔｏ ｏ ｏ ｎｔ ｏ ｙ ｎ ｄｉｓｉ ｇ ｔ ｌｓｏ ｅＭ ａ ｋ ｔ ｔ ａ ｔｏ ｎｄ Ｄｅ ｅ ｍ ｎａ ｉｎ ｆＰｒ ａ ｈ ｃ ａ ｉ ｎ ｎ Ｖｅ ｅａｂｅ ｆｔ ｒ ｅ ｈ ＹＡＮＧ ａ － ｕ ， ＡＮＧ ｉ ｇ ＭＡ ｎ Ｘｉ ｏ ｈ ｉ Ｗ Ｌｎ ， Ｙａ
菜 中原 花 青 素含 量 高 低 的规 律 ， 比较 了 ２ 提 取 方 法 的提 取 效 果 。 用 ７ 并 种 ５％的 乙醇溶 液 作 为 提 取 剂 ， 照 料 液 比 为 按
ｌ． ：１ ９ ４的比值 分别在室温和 ７ ℃的恒温水浴 中提取 ３ ｒｉ后 ， Ｏ ０ ｎ 采用紫外分光光度 法测定提取液 中原花 青素的含量。 ａ
ｐ ｏ ｎ ｈ ｃ ａ ｉ ｉｓａ ｄ ｏ ｔ ｉｅ ｏ ｄ ｒｓ ｌ． ｅｒ ｌ ｆｔ ｅｃ ｎｅ ｔ ｆｐ ｏ ｎ ｈ ｃ ａ ｉ ｉ ｓｗａ “ ｏｏ ｇ ｔ ｒ ａ ｔ ｏ ｙ ｎ ｄ ｎ ｎ ｂａｎ ｄａｇ ｏ ｅ ｕｔ Ｔｈ ｅｏ ｏ ｔｎ ｒ ａ ｔ ｏ ｙ ｎ ｄ ｎ ｓ ｃ ｌｒｉ ｌ ｈ ， ｕ ｈ ｏ ｓｉ ｔ ｅ ｌｗｅ ｅ ｅｓ ｔ ｅ ｄ ｒ ｅ ｕ ｐ ｅ ｏ ｔｎ ｓｈ ｇ ｅ ” ｈ ｏ ｒｌｖ ｌ， ｈ ａ ｋ ｒｐ ｒ ｌ，ｃ ｎ ｅ ｔｉ ｉｈ ｒ ．Ａｎ ｔｗａ ｒ ｖ ｄ ｔ ａ ｅ ｔｎ ｏ ｌ ｋ ｘｒ ｃ ｉｎ ｄｉ ｓｐ ｏ ｅ ｈ ｔｈ ａｉ ｇ ｃ ｕｄ ｍａ ｅ ｅ ｔａ ｔ ｏ ｍｏ ｅｆ ｌ ． ｒ ｕｌ ｙ Ｋ ｅ ｒ ｓ ｐ ｏ ｎｈ ｃ ａ ｉ ｉｓ ｘｒ ｃｉｎ；ｄ ｔ ｒ ｉ ａｉｎ ｙｗｏ ｄ ： ｒａ ｔｏ ｙ ｎ ｄｎ ；ｅ ｔａ ｔ ｏ ｅｅ ｍ ｎｔ ｏ
原花青素在不同酸度条件下的稳定性研究
原花青素在不同酸度条件下的稳定性研究原花青素是一种天然的花色素，广泛存在于植物中，具有丰富的生物活性和营养保健作用。
然而，在不同的酸度条件下，原花青素的稳定性可能会发生变化，影响其在食品加工和储存中的应用。
因此，对原花青素在不同酸度条件下的稳定性进行研究非常重要。
以下是可能采取的一些研究方法和技术：1.pH值调节：可以通过改变溶液的pH值来模拟不同的酸度条件，一般采用稀酸溶液来模拟食品酸度环境。
2.分析方法：可以采用紫外-可见光谱、高效液相色谱、质谱等方法来测定样品中原花青素的含量和稳定性。
3.试样制备：将原花青素与不同的食品基质混合，制备成试样，并存放在不同酸度条件下。
4.稳定性评价：通过测定不同酸度条件下试样中原花青素的含量变化、颜色变化、光谱特征变化等来评价其稳定性。
5.影响因素研究：研究不同因素对原花青素稳定性的影响，如光照、温度、氧气、金属离子等。
综上所述，研究原花青素在不同酸度条件下的稳定性需要采用多种方法和技术，以评价其在食品加工和储存中的应用前景，并为其进一步开发和利用提供科学依据。
再写一个针对原花青素在不同酸度条件下的稳定性研究，以下是另一些可能的研究方法和技术：1.不同酸度条件下原花青素的降解动力学：可以通过测定原花青素在不同酸度条件下的降解速率常数，来比较不同酸度条件下的降解动力学，以确定最适宜的pH值范围。
2.抗氧化性评价：由于氧气可以促进原花青素的降解，因此可以采用不同的抗氧化评价方法来评估原花青素在不同酸度条件下的稳定性，如DPPH自由基清除能力、还原能力等。
3.复合物的形成：在食品加工和储存过程中，原花青素可能会与其他成分形成复合物，这可能会影响其稳定性。
因此，可以研究原花青素与其他成分的相互作用和复合物的形成，以评估其对稳定性的影响。
4.模拟胃肠道消化：可以通过模拟胃肠道消化过程来研究原花青素在不同酸度条件下的稳定性。
这可以帮助我们更好地了解原花青素在人体内的吸收和代谢过程。
原花青素的研究进展
原花青素的研究进展原花青素是一种天然生物活性物质，在植物中广泛分布。
近年来，原花青素因其独特的化学组成和多种生物活性而备受。
本文将综述原花青素的研究现状、研究方法及未来研究方向。
一、原花青素概述原花青素（Proanthocyanidins，简称PAs）是天然酚类化合物中的一种，由不同数量的儿茶素或表儿茶素通过C-C键连接而成。
原花青素在植物中主要分布于种子、果实、花瓣和叶片等部位，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、降血脂等多种生物活性。
二、原花青素的研究现状随着人们对原花青素的度不断提高，其研究已经涉及多个领域。
目前，研究者们主要原花青素的抗氧化、抗炎、抗肿瘤等生物活性。
研究表明，原花青素能够清除自由基、抑制脂质过氧化，具有明显的抗氧化作用。
此外，原花青素还具有明显的抗炎作用，能够抑制炎症因子的表达，减轻炎症反应。
抗肿瘤方面，原花青素能够抑制癌细胞增殖、诱导癌细胞凋亡，对多种癌症具有治疗和预防作用。
三、原花青素的研究方法原花青素的提取方法有多种，包括溶剂提取法、微波辅助提取法、超声波辅助提取法等。
其中，溶剂提取法是最常用的方法，以乙醇、甲醇等有机溶剂为主。
原花青素的分离方法包括高速逆流色谱、高效液相色谱等。
对于原花青素的结构测定，常用的方法有核磁共振、质谱等。
另外，为了明确原花青素的生物活性，研究者们还采用了细胞生物学、分子生物学等技术手段。
四、结论与展望原花青素作为一种天然活性物质，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多重生物活性，在预防和治疗多种疾病方面具有潜在的应用价值。
然而，目前关于原花青素的研究仍然存在一些不足之处，如提取纯度不高、体内代谢机制不明等问题。
未来研究方向之一是优化原花青素的提取纯度和方法，以提高其在实践中的应用效果。
另外，深入研究原花青素的体内代谢机制和生物活性也是非常重要的方向，有助于揭示其作用机理和实际应用效果。
同时，开展原花青素的构效关系研究，明确其作用的关键结构和活性基团，对于发现新的原花青素类药物和功能食品具有重要意义。
原花青素的研究进展
原花青素的研究进展原花青素是一种由黄烷-3-醇单体缩合而成的天然生物类黄酮物质，是一种聚多酚类的化合物，在自然界中分布广泛，其生物活性极强。
本文主要从原花青素的化学结构、生物活性、分析方法及应用等方面的进行介绍，系统地为原花青素下一步的研究及应用提供思路和参考。
标签：原花青素;化学结构;生物活性;分析方法;应用原花青素（procyanidins），又名缩合鞣质，缩合单宁，是花青素类物质的缩合物，主要存在于蔬菜、花卉及水果的果核及果皮中。
原花青素具有极强的生物活性，目前已广泛应用于食品、药品和保健品等领域里。
本文主要从原花青素的化学结构、生物活性、分析方法及应用等方面的进行介绍，系统地为原花青素下一步的研究及应用提供思路和参考。
1.原花青素的化学结构原花青素是一种由黄烷-3-醇单体缩合而成的天然生物类黄酮物质，是一种聚多酚类的化合物。
根据原花青素的聚合程度可分为单倍体、寡聚体和多聚体。
其中单倍体是构成原花青素最基本的结构单元，常见的原花青素单倍体有：儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素、表阿夫儿茶精，其化学结构见图1。
寡聚体是由2-10个单倍体聚合而成的，该成分为原花青素中研究最多的一类。
多聚体由10个以上的单倍体聚合而成，一般以混合物的形式存在。
2.原花青素的生物活性2.1抗氧化活性原花青素具有极强的抗氧化和清除自由基活性，其作用机制是原花青素的分子结构中的多个酚羟基释放出H+，竞争性地和自由基结合从而保证机体不被氧化。
其自由基清除活性远高于同等含量的维生素C和维生素E，是人类目前发现的活性最强的自由基清除剂之一。
2.2抗肿瘤活性原花青素是通过抗氧化、抗炎、调节信号分子的表达促进肿瘤细胞凋亡、阻滞细胞周期生长来达到抗肿瘤目的的。
原花青素对于多种肿瘤细胞都具有显著的杀伤作用，对于多种致癌剂在启动及促癌阶段都具有显著的抑制作用。
原花青素可有效促进癌细胞的凋亡并提高机体免疫的作用，有研究证明了原花青素可以诱导人类乳癌细胞的凋亡。
从高粱中提取原花青素
1、从高粱中提取原花青素（利用乙醇、甲醇或丙酮等有机溶剂提取），并利用树脂法进行纯化，NP一HPLC对不同聚合度的原花青素进行分离。
2、针对不同聚合度的高粱原花青素对致齲菌的生长状况的研究，可在对致齲菌进行培养的过程中加入分子量不同的高粱原花青素，再利用牛津杯法测定抑菌圈的大小，从而可以得知花青素对致齲菌生长的抑制作用菌斑采集---→细菌培养---→细菌的分离与纯化---→显微镜观察细菌进行菌种鉴定---→提取高粱原花青素，并进行分离提纯得到不同不同聚合度的纯度高的花青素---→培养基中添加不同聚合度的花青素并制成检测平板---→将各种菌的菌悬液分别涂布在平板上---→菌液扩散的同时对指示菌进行培养---→观察抑菌斑的大小---→得出高粱原花青素的聚合度与致齲菌生长之间的关系3、针对不同聚合度的高粱原花青素对致齲菌产生胞外多糖的研究，可在对致齲菌进行培养的过程中加入分子量不同的高粱原花青素，再利用苯酚硫酸法测定经花青素处理过的致齲菌产生的胞外多糖的含量。
菌斑采集---→细菌培养---→细菌的分离与纯化---→显微镜观察细菌进行菌种鉴定---→提取高粱原花青素，并进行分离提纯得到不同不同聚合度的纯度高的花青素---→培养基中添加不同聚合度的花青素并制成检测平板--→利用苯酚硫酸法测定致齲菌产生的胞外多糖的含量---→苯酚硫酸法测定致齲菌产生的胞外多糖的含量4、针对不同聚合度的高粱原花青素对致齲菌产酸的影响的研究，可在对致齲菌进行培养的过程中加入分子量不同的高粱原花青素，再对所得到的菌悬液进行酸碱滴定，从而可以确定其产酸量。
菌斑采集---→细菌培养---→细菌的分离与纯化---→显微镜观察细菌进行菌种鉴定---→提取高粱原花青素，并进行分离提纯得到不同不同聚合度的纯度高的花青素---→添加不同聚合度的花青素的培养基中分别定量培养---→以ORION 710A型pH计测定培养物上清液的pH值（或用中和法测定其产酸量）研究进度：第一周：配置致齲菌生长所需的培养基；菌斑采集，培养细菌第二周：细菌的分离纯化并分开培养，并提取高粱原花青素，对其进行分离纯化，配置成含花青素的培养基第三~五周：对所得的培养的菌体进行菌种鉴定，确定菌种无误，并将菌悬液分别在含不同聚合度花青素的培养基中分开培养（浓度梯度设定进行平行对比实验），观察抑菌圈的大小，得出花青素的与细菌生长的关系第六周：配置致齲菌生长所需的培养基；菌斑采集，培养细菌第七周：细菌的分离纯化并分开培养，并提取高粱原花青素，对其进行分离纯化，配置成含花青素的培养基第八~十周：对所得的培养的菌体进行菌种鉴定，确定菌种无误，并将菌悬液分别在含不同聚合度花青素的培养基中分开培养（浓度梯度设定进行平行对比实验），对细菌产生的胞外多糖进行测定，得到花青素的聚合度与产生胞外多糖之间的关系第十一周：配置致齲菌生长所需的培养基；菌斑采集，培养细菌第十二周：细菌的分离纯化并分开培养，并提取高粱原花青素，对其进行分离纯化，配置成含花青素的培养基第十三~十五周：对所得的培养的菌体进行菌种鉴定，确定菌种无误，并将菌悬液分别在含不同聚合度花青素的培养基中分开培养（浓度梯度设定进行平行对比实验），对细菌产生的酸量进行测定，得到花青素的聚合度与产酸量之间的关系。
原花青素
原花青素(Procyanidins,PC)是植物王国中广泛存在的一大类多酚类化合物的总称，起初统归于缩合鞣质或黄烷醇类，随着分离鉴定技术的提高和对此类物质的深入研究与深刻认识，现已成为独树一帜的一大类物质并称之为原花青素。
原花青素主要分布在葡萄、银杏、大黄、山楂、小连翘、花旗松、日本罗汉柏、白桦树、野草莓、海岸松、甘薯等植物中，但研究发现葡萄籽提取物中原花青素的含量最高。
20世纪80年代以来，人们对数十种植物的原花青素低聚体和高聚体进行了生物、药理活性的研究，发现原花青素是一种很强的抗氧化剂，具有抗氧化、抗肿瘤、保护心血管等多种生物学活性。
1原花青素抗氧化性与结构的关系原花青素呈粉末状，易溶于水、乙酸、乙醇、丙酮等溶剂。
原花青素由不同数量的儿茶素或表儿茶素结合而成，最简单的是儿茶素、表儿茶素或儿茶素与表儿茶素形成的二聚体，此外还有三聚体、四聚体等直至十聚体。
按聚合度的大小，通常将二～四聚体称为低聚体，将五聚体以上的称为高聚体。
在各类原花青素中，二聚体分布最广，研究最多，是最重要的一类原花青素。
原花青素之所以表现很强的抗氧化作用，由于B环上具有相邻二酚羟基广泛的电子非定域化，使得相应的氧化形式另外获得稳定状态。
另外，在其高分子结构中，几个与O原子邻位的二羟酚基使得原花青素充分与金属离子(Fe(III)，Cu(II)，Al(III)及蛋白结合，络合作用的贡献在于阻止了催化自由基反应的金属离子的活性，这是原花青素具有营养和生物学价值的主要特征[1]。
黄烷间的连接类型(C4与C6结合，C4与C8结合)对原花青素捕获自由基抗氧化有很大影响，提示原花青素在水溶液中所采取的构象不同影响了它们的亲水特性，因而影响了它们与水相和脂质相中过氧化氢的相互作用[2]。
二聚体中，因两个单体的构象或键结合位置的不同，可有多种异构体，已分离鉴定的8种结构形式分别命名为B1～B8，其中，B1～B4是由C4→C8键合，B5～B8由C4→C6键合。
花青素的提取
生化实验报告———————————————————————————山楂原花色素的提取一实验目的1.了解并掌握从山楂中制备原花色素的方法。
二实验原理原花色素（也称原花青素）（proanthocyanidins）是一类从植物中分离得到的在热酸条件下能产生花色素的多酚化合物。
它既存在于多种水果的皮、核和果肉中，如葡萄、苹果、山楂等。
也存在于如黒荆树、马尾松、思茅松、落叶松等的皮和叶中。
原花色素属于生物类黄酮（flavonoids），它们是由不同数量的儿茶素或表儿茶素聚合而成，最简单的原花色素是儿茶素的二聚体，此外还有三聚体，四聚体等。
依据聚合度的大小，通常将二至四聚体称为低聚体，而五聚体以上的称为高聚体。
从植物中提取原花色素的方法一般有两种，分别是用水抽提或用乙醇抽提。
其抽提物为低聚物，称之为低聚原花色素（oligometic proanthocyanidins，简称OPC）。
生理功用：1.最好的心脏保护剂，抵御引发心血管疾病的诱变因素的冲击。
2.强化血管，有消肿化瘀的功效。
减少毛细血管的阻力和改善渗透性，使细胞更容易吸收养分与排除废物。
3.高效抗氧化能力。
清除氧自由基的能力比其他天然抗氧化剂如胡萝卜素、维生素C和E、儿茶素等强很多。
4.产生组胺的抑制剂，减轻炎症。
抗过敏皮肤保健、抗衰老。
利用低聚原花青素溶于水的特点，用热水煮沸抽提原花青素，再用大孔吸附树脂吸附、洗脱得到原花青素。
D-101树脂是一种球状、苯乙烯型、非极性交联聚合物吸附剂，具有相当大的比表面积和适当的孔径，对皂苷类、黄酮类、生物碱等物质有特殊的选择性，适用于从水溶液中提取类似性质的有机物质。
三实验器材1. 新鲜山楂（或山楂片），市售。
2. 烧杯。
3. 高速组织粉碎机。
4. 玻璃层析柱1.5cm*20cm。
5. 大孔吸附树脂D-101。
6.电磁炉。
7. 不锈钢锅。
8.双层纱布。
四实验试剂1、95%乙醇（实验室提供）。
2、60%乙醇：取95%乙醇60ml，加入蒸馏水，使体积达到95ml。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
原花青素测定方法
1.电化学法
原理:
原花青素易以氢供体的形式捕捉其它开朗的自由基构成多酚自由基。
邻苯三酚在碱性
水溶液中快速出现自水解链式反应，产生中间产物超氧阴离子自由基
-(o2)。
分子量大的多酚所形成的自由基较为稳定，可以发生偶合，形成聚合的
多酚分子，同时出现竟之争反应，并使稳步引起邻苯三酚自由基链式反应的趋势弱化
或消失，整体表现为具备较强的去除自由基能力，且去除能力在一定的条件下与原花青素
的重新加入量存有线性关系，并随体系碱度的减小，羟基氢离子电离而减小。
超氧阴离子
自由基(o2-)被去除，自水解链式反应被切断，反应中止，使邻苯三酚在-0.96v(vs.sce)
的自水解峰电流增大，故可以作为原花青素的定量测定方法。
试验方法：
于5ml比色管中，加入适量浓度的原花青素鞭叶液，0.5ml0.5mol/l的tris-
hci(ph=8.33)缓冲溶液，1.0ml5.00mmol/l邻苯三酚，定容刻度，容器。
在1min-6min内，记录读取电位在(-0.8)―(-1.2v)范围内-0.96±0.02v处的二阶导数极谱波。
2.定量核磁共振法
原理:
定量核磁共振法以被测成分的特征氢核的共振吸收信号为目标进行分析，分析结果直
观且准确性好。
原花青素通常就是由表中儿茶素及儿茶素通过4→8位或4→6位的碳-碳键连接，分
解成聚合度相同、空间结构十分复杂的混合物。
但每个原花青素分子中只有一个末端单元，并且它的h-4加速度变化不显著，因此可以用它去表观样品中原花青素分子的数量。
试验方法：
用微量天平高精度称取内标物邻苯二甲酸氢钾约10mg、样品约40mg，重新加入dmso-
d6为溶剂1ml并使其充份熔化，迁移至核磁管中展开1h五音nmr分析。
检测条件：
5mmbbo接收器，600.192mhz，五音阔为12335.5hz，脉冲宽度为13μs，取样时间为17s，延迟时间为6s，取样次数为16次。
3.高效液相色谱串联质谱法
原理:
以液相色谱作为分离系统，质谱作为检测系统，经纯化后的样品在液相色谱和质谱部
分经过分离和离子化，经由检测器得到质谱图，利用多重反应监测模式对原花青素组分进
行定性和定量分析。
试验方法：
色谱条件：色谱柱waterssunfire-c18柱(150mmx2.1mmx5um)；流动相：a为0.1%甲
酸水溶液，b为乙睛；流速0.25ml/min，柱温25℃；进样量3ul，；梯度洗脱。
质谱条件：电喷雾离子化源(esi)，负离子读取，多重反应监测，毛细管电压-3500v，雾化气压力350kpa，潮湿气温度350℃，潮湿气流量6l/min，相撞能量30v。
4.香草醛-hplc结合法
原理:
原花青素和黄烷-3-醇单体的a环的化学活性较高，在酸性条件下，其上的间苯二酚
或间苯三酚与香草醛发生缩和，产物在浓酸作用下形成红色的正碳离子，样品的浓度与产
生的颜色呈正相关，在500nm波长下测定其吸光值。
同时，利用hplc法测定了主要的黄
烷-3-醇单体：儿茶素、表儿茶素的含量，以香草醛法测定的黄烷-3-醇、原花青素总量减
去hplc测定的2种单体总量之差代表样品中原花青素的含量。
试验方法：
香草醛法：比色条件的选择分别配制0.06mg/l的原花青素、0.05mg/l的儿茶素标准
品的甲醇溶液。
各质量浓度的香草醛及不同体积分数的硫酸、盐酸均用甲醇作溶剂。
反应
体系：1ml样品/甲醇+2.5ml一定体积浓度的香草醛/甲醇+2.5ml一定体积浓度的盐酸(硫酸)/甲醇，一定温度下反应一定时间后测定a500。
hplc法：儿茶素、表中儿茶素标准曲线的创建。
色谱条件：uv检测器，波长280nm，流速1ml/min，上样量10μl，柱温30℃。
流动二者：a，2%乙酸、9%乙腈水溶液；b，乙腈。
梯度模式：0min→23min→45min→50min→70min，流动二者a适当浓度梯度为
100%→100%→75%→75%→100%。
转化成标准工作液，根据数据创建儿茶素、表中儿茶素的
线性曲线。
平衡液：挑0.5g抗坏血酸放在1l容量瓶中，加约500ml双蒸水，混合，熔化
抗坏血酸，重新加入100ml乙腈，用双蒸水吸收至刻度。
标准工作液：准确称取15mg儿
茶素、20mg表中儿茶素，放在50ml容量瓶中，重新加入40ml平衡液，超声波水解直到全然熔化，用平衡液吸收至刻度，获得标准鞭叶液。
标准鞭叶液用平衡液吸收1∶2、1∶5、1∶10、1∶25、1∶50，获得标准工作液。
5.原子吸收法
原花青素能够与碱式乙酸铅出现协调反应，产生容易溶水的棕黄色结晶，经过滤器拆
分后，用原子稀释法测定滤液中过量的铅离子，可以间接测量原花青素含量。
6.高效毛细管电泳法
以低电压电场为驱动动力，以毛细管为拆分地下通道，依据样品中各组分之间运动速度和分配系数的相同而同时实现拆分的一类液相拆分技术。
毛细管电泳分离、分析葡萄原花青素，就是用硼酸盐缓冲液并使大量同分异构体和相同聚合度的原花青素拆分，各带电粒子以柱塞状向前流逝，通过检测器检测，获得电泳图谱。
当硼砂-磷酸盐缓冲液ph=9，浓度为80mmol/l时，原花青素混合物的拆分度和拆分效果最出色。
通过裂解反应，将低聚体原花青素水解，原花青素的电泳分离效果获得明显改善，在20mmol/l的硼砂-磷酸盐缓冲液中也能够获得较好的电泳图谱。
与hplc较之，毛细管电泳具备分析时间长、拆分度不好、成本低。