脂质体研究进展

・医学前沿・ＪＭｅｄＲｅｓ，Ｄｅｃ２００９。Ｖ０１．３８Ｎｏ．１２

脂质体研究进展孙欣欣金楠脂质体（１ｉｐｏｓｏｍｅ）亦称类脂小球，是指将药物包封于类脂质双分子层内而形成的微型泡囊，由不溶性的具有极性的磷脂质为主要膜材并加入胆固醇等附加剂组成。脂质体具有类似生物膜的双分子层结构囊泡，可长时间吸附于靶细胞周围，使药物充分被靶细胞、靶组织吸收。将药物做成脂质体后，具有靶向性、缓释性、组织相容性与细胞亲和性、降低药物毒性、提高药物稳定性等特点。脂质体作为新型的药物剂型可以达到提高药品安全性、有效性、稳定性和患者顺应性，降低药品不良反应的目的，所以日益受到国内外医药界的广泛重视。近年来，相关人员对脂质体做了大量的研究，并取得较大进展，现以脂质体的制备方法分类将有关最新研究作如下综述。一、脂质体的类型根据脂质体结构中所包含的类脂质双分子层的层数，可分为单室脂质体和多室脂质体。单室脂质体粒径通常０．０２～１¨ｍ，多室脂质体粒径ｌ一５肛ｍ。根据脂质体本身的特殊性，分为普通脂质体和特殊性能脂质体。普通脂质体是由一般脂质组成的脂质体，包括小单层脂质体、大单层脂质体和多层脂质体；特殊性能脂质体是指利用某些特殊的脂质材料赋予脂质体某些特殊性能，包括长循环脂质体、热敏脂质体、ｐＨ敏感脂质体、免疫脂质体、磁性脂质体、前体脂质体。＝、脂质体的制备方法目前，制备脂质体的方法较多，常用的有薄膜法、逆相蒸发法、注入法和超声波分散法等，这些方法一般称为被动载药法，而ｐＨ梯度法，硫酸铵梯度法～般被称为主动载药法。１．薄膜分散法：将类脂质及脂溶性药物溶于氯仿或其他有机溶剂中，然后将氯仿溶液在烧瓶中旋转蒸发，使在烧瓶内壁上形成薄膜；加入含有水溶性药物的磷酸盐缓冲液，不断振摇或搅拌，即可生成脂质体，其粒径为ｌ～５“ｍ。穆筱梅…采用薄膜分散法制备黄芩苷脂质体，以大豆磷脂（Ｅｐｉｋｕｍｎ２００）为原料，作者单位：４５０００１郑州大学药学院・２０・制得脂质体平均粒径为１６８ｎｍ，包封率为６３．２５％，并且体外释放具有缓释的特点。许汉林等旧１采用薄膜法制备白藜芦醇脂质体，当大豆卵磷脂与胆固醇的质量比为２：ｌ，大豆卵磷脂与白藜芦醇质量比为３：１时，包封率为９３．５２％。张伟光等＂３利用大豆粉状磷脂，用薄膜法制备阿奇霉素脂质体，以高效液相色谱法为分析手段，采用反透析法测定阿奇霉素脂质体的包封率为７５．６８％。该方法准确，可用于大豆磷脂阿奇霉素脂质体的制备，并且制备的脂质体稳定。王昭等＂ｏ以薄膜法制备粒径在１００ｎｍ左右包裹了高浓度的钙黄绿素荧光染料的脂质体，采用插入法以脂肪酰胺修饰的聚（２一乙基丙烯酸）衍生物构建热敏递药的高分子脂质体。结果发现，这种脂质体具有明显的热敏释药特性，同时采用聚（２一乙基丙烯酸）制备的脂质体还具有显著的酸敏释药特性。以聚（２一乙基丙烯酸）为热敏诱导介质制备的脂质体在体外实验中呈现出良好的热敏释药特性，且制剂制备方法简便、可靠。２．ｐＨ梯度法：ｐＨ梯度法通过调节脂质体内外水相的ｐＨ值，形成一定的ｐＨ梯度差，弱酸或弱碱药物则顺着ｐＨ梯度，以分子形式跨越磷脂膜而使以离子形式被包封在内水相中。赵春晖等”。采用ｐＨ梯度法制备硫酸卷曲霉素脂质体并将其制成冻干制剂脂质体的包封率冻干前、后分别为６５．７％、６５．２％，粒径分别为１３６ｎｍ、１４５ｎｍ；张宏梅等∞１采用ｐＨ梯度法制备重酒石酸长春瑞滨脂质体，包封率可以达到８５％以上。３．硫酸铵梯度法：硫酸铵梯度法通过游离氨扩散到脂质体外，间接形成ｐＨ梯度，使药物积聚到脂质体内。其方法为先将硫酸铵包于脂质体内水相，然后通过透析、凝胶色谱或超滤的方法除去脂质体外水相的硫酸铵。时明等｜７。采用硫酸铵梯度法制备氨溴索脂质体，包封率为８０％，体外释放符合双向动力学方程（ｒ仅＝０．９９８１和ｒｐ＝０．９９２３），有明显的缓释效果。王成涛等旧１采用硫酸铵梯度法制备ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ（豆豉纤溶酶）Ｆｓ３３ＲＧＤｓ（Ａｒｇ—Ｇｌｙ—Ａｓｐ—Ｓｅｒ）一载酶

万方数据医学研究杂志２００９年１２月第３８卷第１２期

・医学前沿・

脂质体。制得的载酶脂质体属于纳米级单室脂质体。ＲＧＤｓ一纳米脂质体中酶对于高温、极端ｐＨ、模拟胃肠道环境等条件的稳定性都有明显提高；酯酶存在时，脂质体中Ｆｓ３３释放速度明显加快，并可使血凝块完全溶解，表现出较好的溶栓效果。４．注入法：将类脂质和脂溶性药物溶于有机溶剂中（一般多采用乙醚）作为油相，水溶性药物加入磷酸盐缓冲溶液中作为水相，然后将油相经注射器缓缓注人加热至５０～６０℃（并用磁力搅拌机搅拌）的水相中，继续搅拌挥尽，即得脂质体。有机溶剂根据溶剂的不同可分为乙醇注入法和乙醚注入法。刘小平等＂１用乙醇注入法制备奥沙利铂脂质体，制得的脂质体形态均匀，包封率为６９．１０％。于波涛¨叫等利用乙醇注入法制备穿心莲内酯脂质体，并用聚乙二醇２０００修饰脂质体表面，结果优化后穿心莲内酯脂质体的包封率９２．７％，载药量９．３％。范广俊等…１以磷脂一胆固醇为包封膜材，采用注入乳匀法制备川芎嗪脂质体，所制脂质体平均粒径为２００ｎｍ，包封率和载药量分别为（３９．５０士０．６６）％和（０．７１９±０．０１１）％。５．逆相蒸发法：将磷脂等膜材溶于有机溶剂中，短时超声振荡，直至形成稳定的ｗ／Ｏ乳液，然后减压蒸发除掉有机溶剂，达到胶态后，滴加缓冲液，旋转蒸发使器壁上的凝胶脱落，然后在减压下继续蒸发，制得水性混悬液，除去未包入的药物，即得大单层脂质体。此法可包裹较大的水容积，一般适用于包封水溶性药物、大分子生物活性物质等。任文霞等¨２１采用逆相蒸发法制备茶多酚脂质体并进行质量评价，研究结果表明，在最佳配方下的包封率为５０．３７％，所制备的脂质体具有一定缓释性。苏晓明等［１纠采用逆相蒸发法制备葡激酶（ＰＫ）纳米脂质体。结果，ＰＫ纳米脂质体包封率７１．５％，回收率９３．２％。胡展红等¨４］以逆相蒸发薄膜法制备脂质体，试验中样品脂质体包封率为（４２．５±１．３）％，平均粒径为（２１０．９±２．１）ｎｍ，跨距为０．６１±０．１２。葛勇前等１１纠采用逆相蒸发法制备顺铂长循环纳米脂质体（ＬＤＤＰ），用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）法测定脂质原料、普通顺铂（ｃＤＤＰ）和ＬＤＤｐ对肺癌Ａ５４９细胞株的毒性。结果制备的ＬＤ．ＤＰ对肿瘤细胞的毒性高于ｃＤＤＰ，并可延缓Ｌｅｗｉｓ肺癌荷瘤鼠的肿瘤生长，延长小鼠生存时间。６．冷冻干燥法：将类脂质经超声处理高度分散于缓冲盐水溶液中，加入支撑剂（如甘露糖、葡萄糖、海藻酸）冷冻干燥后，再将干燥物分散到含药物的缓冲溶液中或其他水溶性介质中，即可形成脂质体。本法适于热敏型药物前体脂质体的制备，但成本较高。杨志文¨钊等采用叔丁醇一水共溶剂、冷冻干燥法制备莪术油脂质体，所制脂质体呈球形，包封率为（９２．２±３．４）％，平均粒径为（４５７．３±７．８）ｎｍ，体外４８ｈ累积释放率为９４．１％。王浩等【１７１采用薄膜分散一微孑Ｌ滤膜挤出一冷冻干燥工艺制备的紫杉醇冻干脂质体粒径均一，在１３０ｎｍ左右，其对药物的包封率较高，可保证在９０％以上，储存半年后紫杉醇的含量及包封率均未有降低。７．超声分散法：将磷脂、胆固醇和待包封药物一起溶解于有机溶剂中，混合均匀后旋转蒸发去除有机溶剂，将剩下的溶液再经超声波处理，分离即得脂质体。超声波法可分为两种“水浴超声波法和探针超声波法”，本法是制备小脂质体的常用方法，但是超声波易引起药物的降解问题。陈婷婷等¨驯先用薄膜分散一超声乳化法制备维生素Ｃ脂质体，然后将ＰＥＧ溶液与维生素ｃ脂质体混合制备ＰＥＧ包覆的脂质体。电镜照片证明ＰＥＧ在脂质体外形成了一层膜，粒径增加，脂质体经ＰＥＧ包覆后包封率增加并提高脂质体的稳定性。梁平等¨引以薄膜分散一超声法制备人参皂苷Ｒ９１脂质体，结果该法制备的脂质体为小单室脂质体，平均粒径在（２．５±ｏ．５）¨ｍ，包封率为（５１．２±１．５）％，在４℃下稳定性考察各项指标均无明显改变。近年来，脂质体在给药系统方面的研究取得了重大进展，特别是其作为抗癌药物的载体在临床的应用。目前，将中药中提取的有效成分、有效部位以脂质体为载体制成中药脂质体是我国中药新剂型研究的热点。脂质体作为靶向给药系统的载体具有简单、无毒、无免疫原性等突出的优点，但同时也有不足之处，如脂质体由于其脂溶性特点，它对于某些水溶性药物的包封率比较低，药物易于从脂质体中渗漏出来，影响其稳定性，同时常规方法制得的脂质体易于聚集和融合，储存容易变质等，这些缺点还需要进一步改进和克服。相信不久之后，脂质体将会在临床上广泛应用，发挥其独特的优势。参考文献ｌ穆筱梅．黄芩苷脂质体的制备及性质研究［Ｊ］．中成药，２００８，３０（７）：１０７７—１０７９２许汉林，张念，刘浩，等．白藜芦醇脂质体的制备工艺研究［Ｊ］．湖北中医杂志，２００９，３ｌ（２）：５５—５６３张伟光。梁继宏，肖英慧，等．大豆磷脂阿奇霉索脂质体的制备及渗漏率研究［Ｊ］．食品工业科技，２００９，３０（２）：９９一ｌｏｌ（下转第１３６页）・２１・万方数据・医学教胄・ＪＭｅｄＲｅｓ，Ｄｅｃ２００９，Ｖ０１．３８Ｎｏ．１２

的联想力和活跃的思维；③增加课堂互动，在课堂上提问，提问的内容主要是鼓励学生积极思考，而非死记知识，以活跃课堂气氛；④结合科研实际需要，使该课程的学习对其科研课题的选题、设计和试验有重要的指导意义。在实验操作中，我们将学生分为独立的实验组，整个实验过程都让学生独立操作，这在很大程度上增加了学生的动手机会；教师具体指导，并对他们在实验中提出的问题给予启发和引导；并要求学生实验操作中应有原始记录，内容包括药品的等级、生产厂家和试剂配制步骤、实验数据及操作的全部记录，这有利于培养学生严谨的科研作风【２Ｊ。硕士生经过该课程的学习后，理论水平、查阅文献的能力、实验报告的书写及科研能力均得到ｊ，显著的提高，同时激发了学生对该课程的学习热情。为达到最终的目标，要保证每个实验的顺利衔接，学生必须对每个实验的结果都给予高度的重视。发挥了学生的思维潜力，充分调动了学生动手动脑的积极性，锻炼和培养了学生自己主动获取知识和实际应用知识的能力。该课程经过几年的建设和完善，取得了一系列的成绩，２００３年获东南大学优秀研究生课程，２００６年获东南大学精品课程，并于２００６年正式出版了《高级生物化学与分子生物学实验教程》。三、加大实验教学的投入。构建高标准的实验教学平台本课程依托于“发育与疾病相关基因”教育部重点实验室的科研环境，保证了理论教学内容的前瞻性、新颖性。同时，为了改善实验条件，更好地完成研究生的实验教学，东南大学研究生院给予了极大的支持。为了较好地完成研究生的实验教学。我们在原有的生物化学实验室的基础上，东南大学研究生院通过振兴行动计划资助了８万元，于２００３年建立了“东南大学基础医学院研究生教学公共平台”，基本满足了医学院的研究生的实验教学需要，但随着研究生数景的增加及教学要求的提高，为了更好地提供研究生交流、实验、学习的一个分子生物学技术平台，提高研究生科研创新的能力，在分子生物学这一新领域不断拓展创新，２００８年１月，东南大学研究生院在原来的“东南大学基础医学院研究生教学公共平台”基础上，投资３０万元进一步建设该平台，建立“东南大学医学研究生公共基础实验教学平台”，配备了Ｅｐｐｅｎｄｏｅｆ的高速台式冷冻离心机，ＡＢＩ的ＰｃＲ仪、Ｂｉｏ—Ｔｅｋ酶标仪、天能凝胶成像系统等一批先进精密的仪器设备，基本满足了现代分子生物学实验技术和综合性实验课程的开设要求。该平台的建立，保证ｒ教学内容的前瞻性、新颖性，以及实验、实践、考试等环节的生动性和实战性，提高了研究生对分子生物学领域先进技术的全面了解，为完善研究生的知识结构，更好地培养研究生的创新能力了奠定基础。参考文献ｌ郁翰萍．培养研究生的创新能力完善研究生的实验教学．实验室研究与探索，２００５，２４（６）８８—８９２袁榴娣，李新荣，毛晓华，等．面向２１世纪，深化研究生高级生化实验的改革．东南大学学报（医学版），２００１，２０：４９—５０（收稿：２００９—０７一０８）（修回：２００９一ｌｌ一２３）