康氏木霉发酵液提取木聚糖酶的酶学性质研究

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木聚糖酶的研究进展及在生产的应用

木聚糖酶的研究进展及在生产的应用

从而使 木 聚糖降 解为 木寡糖 。 水解 产物 主要 为木 其
二糖 与低 聚木耱 , 有少 量 的 木糖 、 也 阿拉 伯 糖 和 甘
目前 , 产木 聚 糖 酶 的微 生 物 分 布 很广 , 几 十 有
露 糖 。 义上 的木 聚糖 酶是 指能够 降解 木 聚糖或 半 广 纤 维 素 的一 组 酶 的总 称 。 由于 木 聚糖 结 构 的复杂
sr cu e p y io h mi a p o e y f n t n n c a i , p l a in a dp o p cso ya a e tu t r, h s c e c l r p r ,u ci ig me h n s c t o ms a p i t n r s e t f l n s . c o x Ke y WOr s x ln s ;e d a p iain d : ya a e fe ; p l t c o
丙 氨酸 、 氨 酸 、 氨 酸 、 谷 甘 丝氨 酸 和 苏 氨酸 等 ; 糖 ⑥ 类成 分 :真核 微 生物 产 的木 聚糖 酶 通 常 为糖 基 化 酶 。 些糖 类一般 与蛋 白质 共价 连接 或与木 聚糖 酶 这
形成可 解离 复合体 。 基化 是酶对 非 常坏境 保持 稳 糖
定 的一 种手段 。
研究表明 ,添加木 聚糖酶 能降解 饲粮中的木聚糖 、 降 低食 糜 黏 度 、 少微 生 物 的定 植 、 持肠 道 正 常结 减 维 构 , 而提 高机 体对 营养 物质 的利用 率 和表 观代 谢 从  ̄( ME , 得 了 良好 的社 会 效益 和经济 效益 。 文 A )取 本 就 木 聚糖 酶 的研 究 进展 及其 在 生 产 上 的应 用 进 行
n rto a tra,i u t n prdu to fm ̄ n e,h e e r ho ya a e h sbr a o p cs Th ril e iwe lc ls utiin lmae il mm ni a d o c inpe y na c t er s a c n x ln s a o dprs e t. ea tcer ve d moe ue

食用菌废弃菌糠再利用提取木聚糖酶可能性的研究

食用菌废弃菌糠再利用提取木聚糖酶可能性的研究

食用菌废弃菌糠再利用提取木聚糖酶可能性的研究采用二硝基水杨酸法(DNS法)分别对8种大型食用真菌菌糠浸提液的产木聚糖酶的能力进行检测,最终确定:元蘑产木聚糖酶能力最强,酶活为406.98IU/g。

黑木耳LK8产木聚糖酶能力次之,酶活为384.2IU/g。

平菇产木聚糖酶能力最弱,酶活为192.05IU/g。

综合看来,食用菌真菌产木聚糖酶能力较强,其菌糠残留木聚糖酶活较高。

适合用来浸提提取粗含木聚糖酶的粗酶制剂。

标签:木聚糖酶;食用真菌;废弃菌糠;浸提木聚糖酶(xylanase)是一类能够损坏植物纤维组织,降解半纤维素,其主要成分为木聚糖的一组酶的总称,是具有可诱导性的。

木聚糖酶已被广泛应用于工业生产,动物饲料饲喂,食品加工添加,能源开发,环境治理,造纸行业以及功能性低聚糖制备等领域,同时,还可为食用菌优质品种选育及分析归类提供重要参考[1]。

木聚糖酶产生菌来源目前主要通过以下几个方法,自然菌株的筛选,或通过诱变、蛋白质工程、以及基因工程等分子技术改造产酶基因。

目前国内主流研究主要集中在利用工程化菌株来生产木聚糖酶,其中青霉、木霉、黑曲霉、链霉菌、酵母菌[2]等研究比较多。

利用废弃菌糠浸提液提取木聚糖酶进行研究,从8种大型食用真菌废弃菌糠中筛选产木聚糖酶能力较强的真菌种类,为木聚糖酶生产提供基础的研究数据和相关参考资料,为实际生产中产生的大量菌糠进行再利用,从而创造经济价值与环境价值提供参考。

黑龙江省伊春市以2010年为例,伊春黑木耳栽培量5.1亿袋,产销量巨大,年产菌糠50万吨,然而,这大量的菌糠并没有企业或工厂能够进行生产利用,主要的处理方式即简单的原地堆砌、焚烧或掩埋,造成了严重的空气、土壤、水源的污染,如果能够成功回收废弃的菌糠对其进行在利用,将可获得经济上及环境保护治理方面的双重重大意义。

1材料与方法1.1实验材料8种(4株木耳、1株平菇、1株金针菇、1株元蘑、1株猴头菇)食用真菌菌糠为实验对象。

木聚糖酶

木聚糖酶

木聚糖酶本品精选优良菌株,经液体深层发酵精制而成的高效浓缩酶制剂。

适用于饲料、食品、酿造、果蔬汁加工、纺织等行业。

作用原理木聚糖是一种多聚五碳糖,为半纤维素的主要成分之一。

木聚糖酶是一类降解木聚糖分子中β-1,4-木糖苷键的酶系,主要包括内切β- 1,4-木聚糖酶和β-木糖苷酶。

内切β-1,4-木聚糖酶以内切方式作用于木聚糖主链内部的β-1,4-木糖苷键,其主要水解产物为低聚木糖和少量木糖。

β-木糖苷酶通过水解低聚木糖的末端来催化释放木糖残基。

木聚糖彻底降解为木糖需要这两种酶的共同参与。

理化性质外观:黄色或白色粉剂及黄色液体.作用pH范围:pH3.0-7.0,最适pH为5.0作用温度范围:30-75℃,最适温度为50℃。

产品酶活木聚糖酶酶活:1~30万u/g酶活单位(U)定义:在50℃、pH5.0条件下,每分钟水解木聚糖产生1μg还原糖所需要的酶量定义为1个酶活力单位。

使用方法本品可应用于饲料、食品、酿造、果蔬汁加工,植物提取、纺织等行业。

因应用领域和生产条件等不同用量与用法而有所改变。

用户也可以结合自己的工艺条件通过试验确定最佳使用方案。

5.包装规格25kg/桶。

6.运输与贮存运输时应避免日晒,贮存于阴凉干燥环境中(25℃以下可保存18个月)。

中性蛋白酶中性蛋白酶采用枯草芽孢杆菌经深层发酵提炼而成。

广泛应用于酒精、啤酒、味精、淀粉糖、发酵工业的液化以及纺织、印染退浆等.一、产品性状:1 、产品规格:固体型分为 50000--100000u/g 。

.2、 1g固体酶粉在30℃,pH7.5条件下,1min水解酪素产生1ug酪氨酸所需的酶量为1个酶活力单位,以u/g表示。

二、产品特性:1 、热稳定性:最适作用温度40℃~50℃ 。

2 、 PH 稳定性:最适作用pH6.5~7.5,PH5.0 以下失活严重。

三、应用工艺(根据试验情况进行调整)1、饲料用酶:该酶与a-淀粉酶、酸性蛋白酶、纤维素酶、糖化酶等复合使用。

木聚糖酶产生菌的筛选及其酶学性质初步研究

木聚糖酶产生菌的筛选及其酶学性质初步研究
a l n i .A gh ye d x l n s r u i g s r i s s l c e o g tme hi ・ il y a a e p o c n t a n wa e e t d,wh s h r c e itc r t d e n t ih e z me r d o e c a a t rs is we e s u i d a d wih wh c n y s we e
CHEN n —i HUANG — i g ,Z Co g j ~, n Keyn HOU Hu
( . c o lo ae il in ea d En ie rn 1 S h o fM tra e c n gn e ig,Ce ta o t iest fFoe ty a d Te h oo y,Zh z ou4 2 0 c S n r lS u h Unv r i o rsr n c n lg y u h 1 0 6,Hu a n n,Chn ia‘ 2 .Ch mity a d Ch mia gn e i l g e sr n e c lEn ie rngCo l e,Gu n i nv riy,Na nn 3 0 4,Gu n i e a gx ie st U n ig 5 0 0 a gx ,Chn ) ia
摘 要 : 采用富集培养 、 平板划线分离 、 明圈平板筛选 的方法 , 透 从长期堆放玉米芯的土壤 中分离 到9 株木 聚糖酶产生菌 , 然后采
用 自然选育的方法从这些菌株中筛选 出一株优 良木 聚糖酶菌株 , 用该菌株发酵产酶并对其 酶学性质进行 了初步研究. 结果表 明。 在温
度 2  ̄ 3 ℃ 、 H初 始值 5 0左 右 、 床转 速 l 0rri、 酵 4 产 的木 聚 糖 酶 酶 活较 高 , 聚 糖 酶 活达 到 l . 8U/ 8 0 p . 摇 5 / n 发 a 8 h所 木 36 mL; 酶促 反 应 的 较适 温 度为 5 ℃ ,H 值 为 5 3 右 # 酶 较 耐 热 , 度在 6 ℃下 ,2 ai 酶 活 仍 残 留 6 . 2 . 3 p .左 该 温 O 1 0r n后 O8

木聚糖酶

木聚糖酶

的来源
木聚糖酶在自然界分布广泛,可从动物、植物和微生物中获得。例如,海洋及陆地细菌、海洋藻类、真菌、 酵母菌、瘤胃和反刍动物细菌、蜗牛、甲壳动物、陆地植物组织和各种无脊椎动物中都有木聚糖酶存在。微生物 来源的木聚糖酶普遍存在于自然界中,且种类繁多,应用领域广泛,因此对微生物木聚糖酶的研究报道很多。日 前研究和应用得最多的是细菌和真菌来源的木聚糖酶,其中,细菌可以产生碱性和酸性木聚糖酶,而真菌只可产 生碱性木聚糖酶。真菌中以丝状真菌分泌的胞外酶最高。目前,木聚糖酶主要利用真菌和细菌等微生物进行发酵 生产 。
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木聚糖酶
存在于植物细胞壁中的异质多糖
01 产品特性
03 的组成
目录
02 产品活力 04 的来源
05 产品应用
07 贮存要求
目录
06 注意事项
木聚糖(xylan)是一种存在于植物细胞壁中的异质多糖,约占植物细胞干重的15%~35%,是植物半纤维素 (hemicellose)的主要成分。大多数木聚糖是一种结构复杂的、具有高度分枝的异质多糖,含有许多不同的取代 基。木聚糖的生物降解也因此需要一个复杂的酶系统,通过其中各种组分的相互协同作用来降解木聚糖。因此, 木聚糖酶是一组酶,而非一种酶。
每次开袋或开桶后,若未使用完,应扎紧袋口或拧紧桶盖,以免受潮或污染。对于酶粉尘敏感的人来说,吸 入酶粉尘可能会产生过敏反应。因此,建议使用固体酶制剂时,操作人员应穿工作服,带防尘面罩和手套,不要 让本品粉末溅入眼睛、口、鼻之中。
贮存要求
保质期 :在规定的贮存条件下,固态酶为12个月,液态酶为6个月。建议密封储藏于干燥、低温的环境中 (≤20℃),最好在冷藏条件下(4-8℃)储藏。应置于干燥、通风、阴凉处,避免高温或阳光直射防曝晒、雨 淋,禁止与有毒有害物质混运、混存。

饲用木聚糖酶的酶学性质研究

饲用木聚糖酶的酶学性质研究
固体 发 酵产 的木聚 糖酶 进行 酶 学性 质 的研 究 , 包括 最适 反 应 p H、 p H稳 定 性 、 最适 反 应 温度 、 热稳 定性 及 耐受 胃蛋 白酶胰 蛋 白酶 的能 力 等进 行 了测 定 , 以
酸 一氢氧 化钠 缓 冲液 )配 制木 聚糖 底 物 ( 周先碗 ,
2 . 5 3 . 0 3 . 5 4 . 0 4 . 5、 5 . 0 5. 5 6 0、 6 5 7. 0 7. 5、 8 . 0
9 . 0 ) 的缓 冲 液 , 混匀后 , 在 3 7 水浴保温 4 h , 冰水 浴冷 却后 按 国标测 定酶 活 。 以酶活最 高者 为 1 0 0 %。
2 . 3木 聚糖酶 的 最适反 应温 度
期 对 该木 聚糖 酶有 更 为深人 的认 识 , 对 该 木 聚糖 酶 的应 用有 一定 的指 导作 用 。
1材 料与 方 法 1 . 1 木 聚糖 酶 由本 实验 室 固体发 酵 获得 。
1 . 2试 剂
用 最适 p H 的缓 冲液 配置 溶 液 ,在 3 0 、 4 O 、 4 5 、
5 0 、 5 5 、 6 0 、 6 5和 7 0 %不 同的温 度 下反 应 , 按 国标 法 测定 酶 活 。以酶 活最高 的温 度为 最适 反应 温度 。
2 . 4木聚 糖酶 的热 稳 定性
燕 麦 木 聚糖 ( X 0 6 2 7 ) 、 胃蛋 白酶 ( P 7 0 0 0 ) 、 胰 酶 ( T 1 0 0 5 ) 均购 自 S i g m a公 司 。 D N S试 剂 参 见 G B / T
析纯 。
1 . 3酶 活 测 定 方 法
按 国标法 测定 酶活 。 以未处理 酶 的酶活 为 1 0 0 %。

M-26碱性木聚糖酶的分离纯化及酶学性质研究

M-26碱性木聚糖酶的分离纯化及酶学性质研究慕娟;问清江;李叶昕;党永【期刊名称】《微生物学杂志》【年(卷),期】2011(31)3【摘要】从Bacillus punilus M-26发酵液中分离纯化碱性木聚糖酶,进行酶学性质研究,同时制备工业用碱性木聚糖酶制剂.首先将M-26发酵液进行硫酸铵盐析,制备工业用碱性木聚糖酶干品;然后进行sephadexG-25层析脱盐和cellulose DE-52层析得以纯化.硫酸铵的饱和度50%,酶制亮的酶活可达9 000 IU/g,收率为85%;分离纯化使酶的比活为126.32 IU/mg蛋白,纯化倍数为19.89,酶的回收率12.83%;分子量约为20 ku;M-26碱性木聚糖酶的最适温度和pH分别是55℃和pH 8.0,具有一定的耐碱性;该酶无纤维素酶活性,Fe2+对其有激活作用;Mn2+、Zn2+、Fe2+、Cu2+对其具有抑制作用.短小芽胞杆菌M-26碱性木聚糖酶具有纸浆生物漂白应用前景.%An alkaline xylanase was purified from fermented broth of Bacillus pumilus M-26. Its enzymatic properties was studied, and prepared the enzymatic preparation for industrial used. The M-26 fermented broth was first salted-out with ammonium sulfate and purified from the broth to prepare dried product of industrial used of alkaline, then desalted with sephadexG-25 and cellulose DE-52 chromatography for the purification. The saturated concentration of ammonium sulfate was 50%. Xylanase activity of product was as high as 9 000 IU/g with recovery rate at 85%. The purification made the specific activity at 126.32 IU/mg protein, purification mutiple was 19.89 and activity recovery rate was 12.83% , andthe molecular mass was 20 ku. The optimal temperature and pH and 55 ℃ and 8.0 respectively and had a certain alkali resistance without the activity of cellulase. Fe2+ had the activation role on it. However,Mn2+ ,Zn2+ ,Fe3+ , Cu2+ inhibited it. The alkaline xylanase had the prospect in bio-bleaching application in pulp industry.【总页数】6页(P25-30)【作者】慕娟;问清江;李叶昕;党永【作者单位】陕西省微生物研究所,陕西西安710043;陕西省微生物研究所,陕西西安710043;陕西省微生物研究所,陕西西安710043;陕西省微生物研究所,陕西西安710043【正文语种】中文【中图分类】Q935【相关文献】1.金针菇菌糠中木聚糖酶的分离纯化及其酶学性质研究 [J], 杨云龙;黄彩梅;白植成;胡开辉2.碱性木聚糖酶在毕赤酵母的表达及酶学性质研究 [J], 熊科;杨玉焕;闫子祥;王晓玲;李秀婷3.绿色糖单孢菌木聚糖酶的分离纯化与酶学性质研究 [J], 王子元;王晓宇;谢响明4.Bacillus sp.LD912碱性木聚糖酶分离纯化及酶学性质研究 [J], 王克芬; 王兴吉; 伏圣秘; 张杰; 刘胜利; 刘文龙5.竹鼠肠道耐碱性木聚糖酶菌株的筛选及酶学性质研究 [J], 张耀;吉克赤作莫;冯治平;张献;杨丽娟因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

康宁木霉液态发酵产纤维素酶条件及部分酶性质的研究


2 粗 酶 ( P酶 ) . 7 E 的性 质 2 . 温 度 对 酶 活 的 影 响 ( 图 3 .1 7 见 )
, 一、

! } 呈
窿 霞
从表4可看 出, 产酶酶活 以 2 8℃为最高。 高和较 较 低温度对康 宁木霉 327 . 4菌种 产酶不利 。 7
由表 5可见,不 同发酵 时间对 产酶影 响较 大 。 康
当温度 超过 5 0℃时 。 酶活下 降的速度较快 。 27 p .3 H值对 酶活 的影 响( 图 5 . 见 ) 由图 5可 以看出 ,P酶 在 p F H值为 50时 , . 相对酶
2 摇床转速对 产酶酶活 的影 响( 图 2 . 6 见 ) 随着摇床 转速 的增加。 宁木霉 产纤维 素 酶酶 活 康

逝 霞
接 种量 ( %)
温度 ( ℃)
图 1 接 种量 对康 宁木 霉 3 7 4产 酶 酶 活 的影 响 .7 2
图 4 F P酶 的 热 稳 定性
从图 1 可知 。康 宁木霉 以 5 %接 种量对产 酶影 响
最佳。
图 4的结 果 表 明 。 酶 在 4 此 5℃以 下 时 比 较 稳 定 。
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表 3 起始 p 值对康 宁木霉 3 74 H . 7 产酶的影  ̄ Um ) 2 (/1
用 转 速 10r n比较 合 适 。 5 mi /
/一 、

、一


2 培养温度和 时间对 产酶酶活的影响( . 4 见表 4 表 5 、 )
温度( ) ℃
宁木霉 327 . 4培 养 时间从 2 ~ 4 7 4 14 h时。酶 活逐渐 增 大, 培养 1 4 h时酶活最 高。 4h以后, 1 4 酶活逐渐 降低 。

木聚糖酶活力特性研究

木聚糖酶活力特性研究郑翔鹏(福建省燕京惠泉啤酒股分)概况木聚糖酶分子只含一个亚基,分子量在8~30kD间的为碱性蛋白,分子量在30~145kD间的为酸性蛋白。

PI值为3~,稳固pH值为3~10,反映最适pH值在4~7之间,最适温度为40~60℃。

离子通过改变酶的构象阻碍木聚糖酶的稳固性,一样情形下,Ag+ (离子浓度1 mmol·L - 1 ,抑制酶活达100% ) 、Hg2 + (离子浓度1 mmol · L - 1 , 抑制酶活达7013% ) 、Cu2 + (离子浓度2. 00 mg·ml- 1 ,抑制酶活达25. 42% )等离子抑制木聚糖酶的活性,Mg2 + (离子浓度2. 00 mg·ml- 1 ,提高酶活达6% ) 、Mn2+ (离子浓度1 mmol·L - 1 ,提高酶活达24% )等离子那么能提高木聚糖酶的活性。

Ag+ 、Hg2 + 、Cu2 +等离子要紧通过改变酶分子中2SH基团的还原态或直接解决酶分子中的某些氨基酸残基,改变酶的构象来抑制木聚糖酶的活性, Mg2 + 、Zn2 +等那么通过阻碍酶与底物的结合及解离状态,提高酶的活性,其具体机制还有待进一步研究。

木聚糖酶的分子结构由功能结构域和连接区组成。

其中,功能结构域由催化结构域和纤维素结合结构域组成,纤维素结合结构域可改变酶对可溶或不溶底物的活力。

依照结构域的相似性,木聚糖酶可通过结构域的改组和随后结构域的修饰而进,许多木聚糖酶具有纤维素酶的活性。

木聚糖酶与木聚糖的结合利用离子间的静电作用。

木聚糖含有的4-O-甲基葡糖醛酸带负电,木聚糖酶在pH低于PI时带正电荷,易于结合,而在pH值高于PI时,那么不易结合。

其反映为典型的酸碱亲核水解反映。

木聚糖酶特性分析在对木聚糖酶的特性分析中,着重分析酶活力与温度、PH值、钙离子对酶活力的阻碍。

木聚糖酶活力分析关于木聚糖酶活力的分析,国标中没有相应的推荐方式。

木聚糖酶

• 用于果汁生产,因为果汁生产单单只加入 果胶酶是不够的,还需加入木聚糖酶分解 其中的阿拉伯木聚糖。 • 果汁和啤酒中含有一些多糖,影响其透明 度,木聚糖酶可以降解多糖,有利也啤酒 和果汁澄清。
改良口感、提高清爽度
木聚糖酶的添加 可以改变面团的质 地、结构、松软度 和保质期,使馒头 或者面包口感和质 量更好。
低热量、低糖度、改善肠道微环境
提高 内 源 消 化 酶 的 活 力
提高养分利 用率
随着生物工程各项技术突飞猛进的发 展,通过对大量性质各异的木聚糖酶, 尤其是在极端微生物中获得的具有极端 性质的木聚糖酶的研究和探索,有望使 木聚糖酶的结构与功能研究取得突破性 进展。仍可以预期,在微生物学、生物 化学、细胞生物学、分子生物学等学科 的协作下,技术更加成熟,使用更加有 效,效益更加明显的木聚糖酶将在食品、 饲料、酿造、医药及新能源等领域发挥 更大的作用。
木聚糖酶
木糖聚酶是一类以内切方式水解木糖分 子中β -1,4—木糖苷键的酶,其水解产物主 要是木二糖与木二糖以上的寡聚木糖,也有 少量阿拉伯糖。 木聚糖是植物细胞壁的主要成分之一,属 于非淀粉多糖,是由β -1,4—糖苷键连接而 成的木聚糖产物,通常以异质多糖形式存在 并与纤维素结合在一起。
木糖聚酶性质
• 真菌、细菌木聚糖内切酶的最适温度范围 是40℃—60℃,真菌木聚糖酶的耐热性比细 菌木糖酶差一些。 • 不同微生物体产生的D—木聚糖酶通常在 pH3~10范围内稳定,最是pH范围是4—7, 但真菌如曲霉菌和青霉菌所产生的pH范围 则在2—6的酸性范围呢。
木聚糖酶在食品工业ห้องสมุดไป่ตู้的应用
• 降低提取液黏度,降低生产成本
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№.2 Vo1.24 陕西科技大学学报 

JOURNAL OF SHAANXI UNIVERSITY OF SCIENCE&TECHNOLOGY Apr.2006 

・3l・ 

文章编号:1000--5811(2006)02—0031—03 

ENZYMATIC PR0PERTIES OF XYLANASE PRODUCED BY SUBMERGED CULTIVATIoN oF豫JCH0lDERM.A K0NINGII 

I u Deng—j un,XIAO Kai—j un。GUO Si—yuan (College of Light Industry and Food Science,South China University of Technology,Guangzhou 510640. China) 

Abstract:The xylanase produced by submerged cultivation of TrichodermⅡK0ningii has an optimally active at 65℃and pH 6.0.It is thermostable and the relative activity of xylanases remains above 8 7 0A in the range of 20"- ̄60℃.The relative activity of xylanases is stable and remains 85 in the pH range of 3.0~9.0.The ions K+,Ba +,Pb +,Fe ,Fe +,Al +, and 12 mmol/L Cu are inhibitors,while Ca ,Zn and 4 mmol/L Cu are stimu1ators of the enzyme activity. Key words:xylanase;enzyme activity;Trichoderma Koningii CLC Number:TS201.2 5 Document Code:A 

0 Introduction Xylan,the major renewable biomass,is formed by a main chaih of p-1,4 xylose rasidues and differ— ent substitute groups in the side chain.Due to its complex structure,the biodegradation of xylan re quires the synergistic action of several hydrolytic enzymes for efficient and complete breakdown.The 

most important xylanolytic enzymes are endo-f1,4一xylanase( 1,4-D-xylan xylanohydrolase,EC 3.2+ 1I 8)and fl,4一xylosidase(if1,4-D-xyloside xylohydrolase,EC 3.2.1_37) ”. Interest in xylan-degrading enzymes has greatly increased in the last years due to their potential bio technological applications,especially in the development of environmental friendly technologies in the paper and pulp industry.Xylanases are also used in food and food technology ~们.Xylanases are pro— 

duced by both prokaryotes and eucaryotes.There is different property for variant xylanases.And the 

property of xylanase is important for its biotechnological application. 

The aim of this study was to characterize xylanase produced by Trichoderma Koningii. 

1 Materials and Methods 1.1 Enzyme production Shake flask experiments were carried out in 250 mL Erlenmeyer flask with 7O mL of medium.The flasks were inoculated with from 2一day—old culture grown on birchwood xylan and incubated at 30℃with shaking at 12o r/min.The mycelium was removed by vacuum filtration and the filtrate was centrifuged at 4 000 r/rain for 1 0 rain at 4℃.The supernatant obtained was used as crude enzyme extract. 1.2 Enzymatic assays Xylanase activity was determined by incubating birchwood xylan(1.5 w/v)i n 1 00 mmol/L 

收稿日期:2005一l1—19 作者简介:陆登俊(1978一),女,广西南宁市人,在读博士生,研究方向;糖生物技术 基金项目 广东省科技攻关项目(2004B10201001),广州市科技攻关项目(2002Z3一E0321) 

维普资讯 http://www.cqvip.com ・ 32 - 陕西科技大学学撤 第24卷 .o)with an enzyme sample at 65 ̄C for 15 min.The reducing sugar released was measuredby the DNS method using xylose as standard .The xylanase ael ivity unit was defined as the enzyme amount that releases 1 mol of reducing sugar in 1 minute. Specific activity was expressed as ac— tivi ly unit per gram of protein. 1.3 Optimal temperature,pH and thermal stability For the determination of the optimum temperature,enzyme was assayed by performing a standard activity assay buffer,pH 6.0 in a temperature range from 2O~100 ̄C.In order to determine optimal pH,the enzymatic assay was carried out in universal buffer,at pH values from 3.O~10.0 at the optimal temDerature.Sodium citrate—phosphate buffer was used for pH range 4.O~7.0,Tris—HCI buffer for pH range 8.0h l0.0 in the experiments. The thermostability of the enzymes was determined by incubating enzyme solutions in absence of substrates at temperatures ranging from 20 ̄70 C. Samples were immediately cooled with ice. Residual 

activities were assayed under standard conditions. 1.4 Effect Of activity inhibitors Various meta1s ions at concentration ranging from 4~1 2 mmol/L were added to the standard enzy— 

matic reaction mixture in order to study their effect on xylanase activities. 2 Results and Discussion 2.1 Effect of temperature on xylanase activities Initia1 reaction rates for xylanases were determined at the temperatures range from 20 ̄100 ̄C. For the reaction time of 15 rain,the optimal temperature was 65℃(Fig.1).Enzyme activity was reduced below 3O C and above 7O。C.Xylanases activity was remained 65 residual activity at 70 ̄C.Drastic re— duction in enzyme activity was found at 80℃(32 residual activity). Utilization of enzymes in industrial processes often encounters the problem of thermal inactivation of the enzvme.Thermai stability studies were carried out by pre—incubating the enzymes for 60 min in the range of 20 ̄70℃.At pH 6.0,the xylanase retained 87%o activity at 60"C after 60 min,while retaining 76 at 65℃after 60 min exposure,only 12 activity at 70 ̄C after 6O min(Fig.2).It was clearly indi— cated from the resuIts that the suitable temperature range in industrial application for xylanase from Tri— choder7 口Koningii iS 20~60“C. 100 8O 6O 4O 20 O 20 30 40 5o 60 70 8o 90 100 t锄P啪tu坤/-c 

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